PRTICA 7 DILUIES E CULTIVO EM MEIO SLIDO

Micro-organismos vivem em populaes normalmente muito abundantes Micro-organismos vivem em comunidades normalmente muito complexas.

Objetivos: 1. Evidenciar a presena de microorganismos presentes em amostras de gua. 2. Observar a tcnica de diluies e cultivo em meio slido. 3. Quantificar o nmero de unidades formadoras de colnias pelo mtodo das diluies.

Microoganismos so capazes de colonizar muitos tipos de hbitat: - gua - solo - ar - instalaes - outros organismos Para identificar os micro-organismos presentes em uma amostra necessrio isol-los em meio de cultivo. Quando as populaes e comunidades so muito abundantes pode ser necessrio diluir o estoque inicial e semear alquotas.
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CONTAGEM DE MICRORGANISMOS CONTAGEM EM PLACAS o principal mtodo de contagem de clulas viveis - Amostras com alta concentrao microbiana: usar o mtodo das diluies seriadas. - Amostras com baixa concentrao microbiana: usar o mtodo da filtrao. - O mtodo permite estimar o nmero de UNIDADES FORMADORAS DE COLNIAS (UFC).

CONTAGEM DE MICRORGANISMOS CONTAGEM EM PLACAS Mtodo das diluies seriadas. - O nmero de UFC obtido multiplicando o nmero de colnias que cresceram na placa pelo fator de diluio, dividido pelo volume de amostra plaqueado. UFC = no. de colnias * fator de diluio / volume plaqueado. - O mtodo exige que o nmero que as placas contenham um nmero significativo de colnias no mnimo 20-30 e no mximo 200-300 colnias.
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PROCEDIMENTOS

PROCEDIMENTOS

Inocular 1,0 ml em cada placa

PROCEDIMENTOS

RESULTADOS ESPERADOS

Espalhamento da alquota com ala de vidro Incubar por 48 horas a 35 0,5 0C

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RESULTADOS ESPERADOS

CONTAGEM DE MICRORGANISMOS CONTAGEM EM PLACAS Exemplo com as diluies aplicadas na aula prtica: - Se no tubo 2 foram contadas 28 colnias, ento: UFC = no. de colnias * fator de diluio / volume plaqueado UFC = 28 * 5,0*102 / 0,2 = 5,0*102 = 5000 UFC/ml da amostra original.

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Portaria MS n. 518/2004
NORMA DE QUALIDADE DA GUA PARA CONSUMO HUMANO

PREPARAO DOS FRASCOS DE COLETA Esterilizao

Recipientes de vidro neutro:

CAPTULO II DAS DEFINIES Art. 4 Para os fins a que se destina esta Norma, so adotadas as seguintes definies: IX. contagem de bactrias heterotrficas - determinao da densidade de bactrias que so capazes de produzir unidades formadoras de colnias (UFC), na presena de compostos orgnicos contidos em meio de cultura apropriada, sob condies pr-estabelecidas de incubao: 35,0, 0,5oC por 48 horas;

- Esterilizar em estufa 170 180 oC durante duas horas Recipientes de plstico autoclavvel: - Autoclavar a 121oC a 0,1 MPa (1 atm) durante 15 a 30 min.

CAPTULO IV DO PADRO DE POTABILIDADE Art.11. A gua potvel deve estar em conformidade com o padro microbiolgico conforme Tabela 1, a seguir: 7 Em 20% das amostras mensais para anlise de coliformes totais nos sistemas de distribuio, deve ser efetuada a contagem de bactrias heterotrficas e, uma vez excedidas 500 unidades formadoras de colnia (UFC) por ml, devem ser providenciadas imediata recoleta, inspeo local e, se constatada irregularidade, outras providncias cabveis.

Antes da autoclavagem, ao colocar os frascos na autoclave e necessrio afrouxar as tampas para evitar a ruptura dos frascos e permitir a entrada circulao de ar. Logo apos a retirada da autoclave, fechar os frascos.

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Coleta de Amostra para Anlises Microbiolgicas em gua Tratada (Torneira)

Coleta de Amostra para Anlises Microbiolgicas em gua Tratada (Torneira)

Procedimento (Resoluo ANA 724-2011)

(Para cada 120mL de amostra, EDTA 0,1mL de soluo 3% e tiossulfato de sdio 0,1mL de soluo 10%).

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Coleta de Amostra para Anlises Microbiolgicas em gua Tratada (Torneira)

Procedimento (Resoluo ANA 724-2011)

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Controle de Qualidade na Amostragem Duplicata de campo

RELATRIO (em grupos) - meio de cultura - procedimentos de coleta - tamanho da amostra - procedimentos de manipulao - incubao (tempo, temperatura, umidade) - mtodo de contagem - resultados - referncias sobre o mtodo: vantagens, desvantagens, adequao.

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A identificao de microoganismos presentes em amostras contaminadas em geral envolve as seguintes etapas: - Caracterizao morfolgica de colnias isoladas sobre meio de cultivo slido. - Caracterizao citolgica de clulas isoladas mediante observao microscpica. - Caracterizao bioqumica de cada um dos microorganismos.

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