UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPRITO SANTO

CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM GENTICA E MELHORAMENTO
DISCIPLINA DE GENTICA

MUTAO GNICA E
MECANISMOS DE REPARO
Aspectos Conceituais
e Rotas Metablicas

FLAVIA NICCIO
LINDOMAR MACHADO
MARESSA CORTELETE

Referncias principais
GRIFFITHS, A. J. F., S. R. WESSLER, R. C. LEWONTIN & S. B.
CARROLL. 2009. Introduo a Gentica. 9 Edio. Traduo: P. A.
Motta. Guanabara Koogan. Rio de Janeiro. Captulos 14
KLUG, W. S., M. R. CUMMINGS, C. A. SPENCER & M. A. PALLADINO.
2010. Conceitos de Gentica. 9 Edio. Traduo: M. R. BorgesOsrio & R. Fischer. ArtMed Editora. Porto Alegre.
Captulo 16

 Objetivos da Aula
Identificar a natureza molecular das mutaes;
Compreender como a radiao e as substncias
qumicas causam mutao;
Saber se mutaes induzidas so diferentes das
mutaes espontneas;
Identificar os processos e sistemas de reparo das
mutaes.

A variao gentica entre

indivduos fornece a matria
prima para a evoluo

 Panorama geral

Como surgiram as variantes

genticas?

 Panorama geral
Processos
gentica:

responsveis

pela

variao

Mutao
uma alterao na sequncia de DNA
a principal fonte de mudana evolutiva
Surgimento de novos alelos

Recombinao
o resultado de processos celulares que fazem com
que genes diferentes tornem-se agrupados em novas
combinaes

 Panorama geral
Processos
gentica:

responsveis

pela

variao

Mutao gnica
Recombinao
Rearranjos cromossmicos
Aberraes numricas
Aberraes estruturais
OBS: Atualmente, o termo mutao tem sido
utilizado quando da presena de alteraes
detectadas em nvel de genes individuais.
7

 Panorama geral
Mutao pode gerar alelos neutros ou com
valor adaptativo:
A maioria das mutaes so neutras
Muitas mutaes so letais ou sub letais
Pequena proporo favorvel
Aumento da variabilidade gentica.

 Panorama geral
Em regies gnicas ou regulatrias:
Podem alterar o fentipo
Geralmente so deletrias e recessivas
Podem ocasionar bloqueios em vias metablicas

 Classificao das mutaes

Quanto a Origem:
Espontneas
Induzidas

Quanto a Localizao:
Somticas
Germinativas

Quanto a Expresso Fenotpica:

Substituio silenciosa
Sentido trocado
Sem sentido

 Agentes mutagnicos
Fsicos: Radiao UV, Radiao ionizante
(raios X, raios g e raios csmicos)
Qumicos: Anlogos de bases, agentes
alquilantes

Caractersticas do processo
Quanto a localizao:
Mutao Somtica
Ocorre em qualquer clula do corpo, exceto as
germinativas

Mutao germinativa:
Em geral no afeta o indivduo, e sim sua prole e
possivelmente as prximas geraes

12

13

 Mutao gnica
Classes gerais:
Mutaes que afetam pares de bases nicos no
DNA
Mutaes que alteram o nmero de cpias de
uma pequena sequncia de repetio dentro de
um gene.

14

 Mutao gnica
Origens das mutaes:
Espontneas
Induzidas

Mutao espontnea: Surgem na ausncia

de
um
tratamento
com
mutgeno
conhecido;
Mutao
Induzida:
mutgenos.

Tratamento

com
15

 Mutao induzidas
Mais frequente que as mutaes
espontneas.
Chamada de mutagnese.
Mutgenos comuns:
Radiaes de alta energia;
Substncias qumicas.

16

 Mutao espontneas
Frequncia na qual ocorre baixa;
Surgem de erros na replicao do DNA,
leses espontneas, dentre outros.

17

 Taxas de mutao
As taxas de mutaes espontneas so extremamente
baixas em todos os organismos estudados;
Estas taxas variam consideravelmente dependendo do
organismo;
Na mesma espcie estas taxas variam de gene para
gene;
A taxa mdia de mutao espontnea de cerca de
10-5.

 Taxas de mutao
espontnea em alguns
organismos
Organismo
Vrus, Bactrias,
Neurospora

Taxa de mutao
espontnea
10-8 (uma em 100
milhes de divises)

Milho, Drosophila,
Humanos

10-6 a 10-5 (entre uma em

1 milho a uma em
100 mil divises)

Camundongos

10-5 a 10-4 (entre uma

em 100 mil a uma em
10 mil divises)

 Mutao gnica
Mutao de ponto Alteraes de um par
de bases no DNA ou um pequeno nmero de
bases adjacentes.
Mau funcionamento do sistema replicativo;
Mau funcionamento do sistema de reparo
Interferncia qumica direta sobre uma das bases
do DNA

20

 Mutao de ponto
Principais tipos de mutao de ponto:
Substituio de bases
Adies ou delees de bases (chamadas de
mutao indel)

21

 Mutao de ponto
As Substituio de bases pode ser sub
dividida em dois subtipos:
por outra ou de uma pirimidina por outra
TransioTroca de uma purina
(A e G) (A e G)
(C e T)
(C e T)

Troca de uma purina por uma pirimidina ou vice-versa

Transverso
(A e G)
(C e T)

Podem alterar um aminocido, se por acaso ocorrerem

em uma sequncia codificadora de protena.
No genoma de um organismo eucarioto nem todas as sequencias codificam
protenas 99% do nosso genoma no codifica protenas!

22

 Mutao de ponto
Erros na replicao do
substituio de bases

DNA

por

Tautmeros
Mudana de uma forma tautomrica para
outra pode resultar
em mal pareamento
durante a replicao do DNA.
Alteraes na estrutura qumica das bases
(ceto-enol para Guanina e Timina e iminoamino para Citosina e Adenina);
23

Bases Tautomricas
Formas Ceto
Forma imino

Forma imino

Forma enol

Forma enol

24

Forma Enol
rara (timina)

Citosina

Forma-se ento o par

Timina-Guanina
Citosina

Forma Enol
rara (timina)
25

Forma enol
da guanina
(rara)

Adenina

Forma-se ento o par

Timina-guanina

Adenina

Forma enol da
guanina (rara)26

Forma
imino de
citosina

Timina

Forma-se ento o par

Citosina-Adenina

Timina

Forma
imino de
citosina

27

Guanina

Forma
imino de
Adenina

Forma-se ento o par

Citosina-Adenina

Forma
imino de

Guanina
28

 Formas Tautomricas
Provocam mutaes do tipo transio
(troca de uma purina por outra ou de uma
pirimidina por outra).
C.G

T.A

G.C
T.A

As formas tautomricas existem em

pequena quantidade, so raras, enquanto
as formas certo (A,G,C e T) so abundantes.
29

Formas Tautomricas
tautomricas no provocam
transverses, mas apenas transies.

Formas

Transverses so muito mais raras e

exigem, em algum ponto da duplicao do
DNA, que haja pareamentos purina-purina
ou pirimidina-pirimidina.
A.T
T.A

C.G
G.C
30

 Mutao de ponto
Erros na replicao
alterao da bases

do

DNA

por

Alguns mutgenos no so incorporados ao

DNA mas alteram a base, causando mal
pareamento especifico
Agentes alquilantes usados como mutgenos
Etilmetanosulfonato (EMS)
Nitrosoguardina (NG)
31

32

 Reparo
A funo de edio da DNA polimerase
reconhece muitos dos pareamentos errados
e os retira, reduzindo muito o nmero de
mutaes observado.

33

 Mutao de ponto
Principais tipos de mutao de ponto:
Substituio de bases
Adies ou delees de bases (chamadas de
mutao indel)

34

 Mutao de ponto Indel

Inseres e delees (indel)
Alteram a matriz de leitura, podem alterar uma protena
inteira pois ocorrendo a adio ou remoo de uma ou mais
bases, modifica a sequencia da molcula.

Sequencia original:

AUG UAU ACG UCU CAA UGA UCCA

Met

Tyr

Thr

Ser

Gln

Stop

Deleo de uma base:

AUG UAU CGU CUC AAU

Asp
Met
Tyr
Arg
Leu
Asn
Asp
GAU
Deleo de trs bases:

AUG UAU UCU CAA UGA UCCA

Met

Tyr

Ser

Gln

Stop

Sequencia original:

AUG UAU ACG UCU CAA UGA UCCA

Met

Tyr

Thr

Ser

Gln

Stop

Insero de uma base:

AUG UAU ACG AUC UCA AUG

Met
AUCTyrCAThr Ile Ser Met Met
Inseres ou delees de 3 bases,
ou mltiplos de 3 no alteram a
matriz de leitura

Exemplificando...
Sndrome do miado do gato (5P-);
Pacientes possuem choro tpico, hipotonia
muscular, microcefalia, pavilho das orelhas
dismrficos, mal formao dos membros..
Deleo do
brao curto do
cromossomo 5.

38

Hemoglobina S:
exemplo de
mutao

Hemcias normais

Hemcias com
anemia falciforme.

 Mutaes espontneas
Pareamentos errados durante a replicao
Entre timina e guanina
Entre citosina e adenina

Escorreges no molde
Problemas com regies repetitivas.

Modificaes qumicas espontneas

Perda de purinas
Perda do grupo amino

Mais frequentes
Depurinao
Desaminao
Danos oxidativos

Perda do Grupo Amino

Leses espontneas
Se a citosina perder o grupo amino, esta se
transforma numa uracila, que se pareia
com a adenina, provocando uma transio
CG-TA

A uracila posteriormente
transformada em timina por
mecanismos de reparo

Leses espontneas

Xeroderma Pigmentoso;

44

Mutao induzida
Substituio de uma base;
Anlogos de bases
Formas tautomricas raras

Alterao de base
Agentes intercalantes.

Bases danificadas
Mal pareamento especfico devido a radiao;

Mutaes Induzidas
Substituio de uma base;
Anlogos de bases

Se pareia com a
adenina

Br

Mutao AT GC

Br

Forma enol

Se pareia com
a guanina
Citosina

Mutaes Induzidas
Agentes intercalantes
Brometo
de
Etdeo
manipulao de DNA

laboratrio

de

Modificam a estrutura da dupla hlice

provocando inseres e delees durante a
replicao

Tambm podem intercalar-se em DNA unifilamentar (que est

sendo replicado, por exemplo) formando alas e provocando
delees erros na matriz de leitura.

Mutaes Induzidas
Bases danificadas devido a radiao;
Formao de dmeros (em geral duas timinas)
A maquinaria da replicao reconhece o dmero e
coloca duas adeninas na fita complementar

 Consequncias das
mutaes
Formao de novos alelos
Sndrome de Down, trissomia do cromossomo
21.

 Tipos de mutao em nvel

molecular
1. Mutao silenciosa sem efeitos no
fentipo (cdigo gentico degenerado)
UUU UUC
Phe

Phe

CGU CGC
Arg
Arg

 Tipos de mutao em nvel

molecular
2. Mutao de sentido trocado troca o aa a
ser adicionado

3. Mutao sem sentido produz um cdon de

parada no meio da sequncia.

 Revisando...
Deleo

 Revisando...
Insero

 Revisando...
Sentido Trocado

 Revisando...
Sem Sentido

Imagine...

O que pode acontecer se a mutao

ocorrer no anti-cdon de um t-RNA...

58

 Preveno de Erros
Neutralizao de compostos potencialmente
danosos ao DNA
Detoxicao de radicais superxido (superxido
dismutase)

Radicais
superxido

Superxido
dismutase

Perxido de
hidrognio

Catalase

gua

59

 Existem muitas ameaas fidelidade de

replicao do DNA
Taxa de erro inerente replicao
Leses espontneas
Mutgenos ambientais
As clulas desenvolveram sistemas enzimticos que
reparam o DNA
Defeitos nos mecanismos de reparo podem ser
associados a diversas doenas.

60

 Mecanismos de reparo
Um mutante sobrevive quando sua troca gentica
no prejudicial ou, mais raramente, benfica.

A
maioria
das
mutaes,
contudo,
so
desvantajosas impedindo a sobrevida celular.

Mecanismos de reparo revertem os efeitos de

processos mutagnicos artificiais ou naturais sob o
DNA.

 Mecanismos de reparo
Muitos dos danos sofridos pelo DNA podem ser
reparados porque a informao gentica
preservada em ambas as fitas da dupla-hlice.

A informao perdida em uma fita pode ser

recuperada atravs da fita complementar

 Mecanismos de reparo
Reparo do pareamento errado:
Bases incorretas so encontradas, retiradas e
substitudas pela base correta complementar.
(DNA polimerase e outras enzimas que avaliam o
DNA em busca de pareamentos incorretos)
Depende de metilao da fita me
Em geral, depois que o DNA duplicado, as fitas so metiladas.
Com isso, o DNA recm replicado no metilado, permitindo que os
sistemas de reparo reconheam a fita velha e a nova, reparando
apenas a nova.
63

64

 Mecanismos de reparo
Reparo direto:
Se uma base for modificada de alguma maneira
desaminao, por exemplo, este mecanismo
reintroduz o grupo faltante para refazer o
pareamento correto

65

 Mecanismos de reparo
Pela exciso de base
Reparo se uma uracila encontrada, retirada e
substituda por uma timina
Desaminao da citosina leva formao de uma uracila que transformada
em timina mutao!

66

Reparao do DNA
Reparao por exciso
de base
Etapas de reparo
1. Hidrlise da ligao glicosdica
entre uracil e as molculas de
desoxirribose pela enzima uracilDNA-glicosilase
2. Liberao da base nitrogenada
errnea (formao do stio AP)
3. Exciso da cadeia em regies
adjacentes base perdida pela
enzima AP endonuclease
4. Insero de citosina no local
mutado
pela
enzima
DNA-

Reparao do DNA
Reparo por exciso de nucleotdeos
Um dos mais importantes e gerais mecanismos de
reparo (REN)
Se h quebra do nucleotdeo, ou a formao de
dmeros, um ou vrios nucleotdeos podem ser
retirados e corrigidos

68

Reparao do DNA
Reparao por Exciso de Nucleotdeo
1. Reconhecimento da leso
2.(REN)
Inciso da fita lesada em ambos os lados da leso
3. Exciso do seguimento contendo a leso
4. Sntese do novo seguimento de DNA e Ligao

69

Reparao do DNA
REN: Sistema Uvr (E. coli)

70

 Sistema SOS
Dano de
uma ou mais
bases

No h
pareamento
especfico

Alguns
agentes
mutagnicos dependem
do sistema SOS para
provocar
mutaes.
Sozinhos s conseguem
danar uma ou mais
bases!

Bloqueio na
replicao

Insero de
bases
inespecficas

Mutao

71

 Enzimas de correo de erro

Algumas bases incorretamente pareadas escapam
da correo realizada pela DNA-polimerase

Remoo de bases mal pareadas

Qual das fitas contm o erro?
Qual das bases a errada?

Um dos mais importantes e gerais mecanismos de

reparo (REN) enzima de correo de erro

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 Enzimas de correo de erro

ETAPAS
1. Reconhecimento da leso
2. Inciso da fita lesada em ambos os lados da leso e a alguma
distncia desta
3. Exciso do segmento (oligonucleotdeo) contendo a leso
4. Sntese de um novo segmento de DNA utilizando a fita nodanificada como molde
5. Ligao
sinal que direciona o sistema de exciso
exclusivamente para a fita recm-sintetizada

sequncias GATC prximas ao erro

do

erro
73

Reparao do DNA
1. Enzima de correo de erro liga-se
sequncia GATC no modificada e ao
par de bases mal pareadas da
mesma fita de DNA.
2. Enzima de correo de erro remove
o segmento de DNA que inclui o erro
da fita que contm a sequncia
GATC no metilada.
3. DNA-polimerase preenche a fenda,
substituindo a base mal pareada
pela correta.
Modificaes na adenina da sequncia GATC por
74
metilases faro com que a enzima de correo no mais

 Reparo sujeito ao erro

Existem ocasies em que o dano no DNA
to extremo que no h maneira de os
mecanismos celulares de reparo corrigirem
de forma precisa o erro
Perda completa de um par de bases

Qual base deve ser inserida no local lesado?

75

 Reparo sujeito ao erro

Sistema de Reparo Sujeito ao Erro
Qualquer uma das bases inserida no local
lesado a fim de garantir a continuidade do
processo replicativo

Possvel indutor mutagnico (3/4

75%)
Ainda assim, mais vantajoso para a clula a
incorporao de uma base errada do que no
replicar mais.
76

Reparao do DNA
Reparao de Bases Malpareadas
N6-Metiladenina (GATC)
Padro de
metilao
Replicao
Diviso Celular
Metiltransferase de
Manuteno

Metilao
77

Reparao do DNA
Reparao de Bases Malpareadas:
Sistema Mut
1.MutS pb malpareado
2.Reconhece stio do erro
3.MutL se liga a MutS
4.Deslizamento at GATC
(ATP)
5.MutH Reconhece GATC
6.Cliva: GATC at o
malpareamento
7.Remoo da fita clivada
(SSB)
8.Sntese e ligao da nova
fita
78

Reparao do DNA
Sistema de Reparao por Resgate
1.Dano impede a replicao
2.Cpias com lacuna no stio lesado
3.Resgata-se a sequncia da fita
normal
4.A lacuna da fita lesada
preenchida
5.A lacuna da fita normal
repolimerizada

79

Revisando....

80

Qual a natureza molecular

das mutaes?
Uma grande proporo das mutaes
de mudanas, adies, ou perdas de
uma ou um pequeno numero de bases
na sequencia genica.
Tais mudanas podem causar uma
alterao de aminocidos (mutao de
sentido trocado) ou produzir um novo
cdon de fim (mutaes sem sentido).
As adies ou perdas podem causar
mudanas de matriz de leitura.
81

Como alguns tipos de

radiao e substncias
qumicas causam mutao?
Agindo e alterando quimicamente o
DNA. As mudanas comuns so
substituies de bases, alteraes de
base, ou dano s bases.

82

 As mutaes induzidas so
diferentes das mutaes
espontneas?
As mutaes espontneas so quase
completamente produtos de erros feitos
por enzimas celulares. Pode resultar dai
um amplo espectro de mudanas.
Alguns mutagenos tambm podem
produzir
um
largo
espectro
de
mudanas, mas muitas produzem uma
preponderncia de algum tipo tal como
substituies de transio G-C para A-T.
83

 Uma clula pode reparar as

mutaes?
Sim. Alguns sistemas de reparo so
muito eficientes em restaurar a
sequencia original.
Outros so propensos a erro: eles
convertem o evento qumico original
em uma mutao permanente.

84