Microscopia de luz e

Eletrônica
Lucas Alexandre
Lídia Alvarenga
Lucas Coelho
Miguel Silvério
Matheus Machado
Marina
Paulo Henrique
 Microscópio de luz

 Os raios luminosos provenientes de

uma fonte qualquer, natural ou
artificial, são projetados no objeto
com ajuda de um espelho refletor
móvel e de uma pequena lente,
chamada condensador.
 Para ser ampliado, o objeto precisa
ser posto a uma distância do
instrumento pouco maior que a
distância focal da objetiva.
 A ampliação obtida é função das
distâncias focais dos dois sistemas
de lentes e da distância que os
separa.
 Microscópio Eletrônico

 Nesse aparelho, as amostras

são iluminadas por um feixe de
elétrons, focalizados por um campo
eletrostático ou eletromagnético.
 Os microscópios eletrônicos
produzem imagens detalhadas com
uma ampliação superior a 250.000
vezes.
 Ao mostrar imagens de objetos
infinitamente menores que os
observados ao microscópio óptico,
o microscópio eletrônico contribuiu
para o progresso do conhecimento
da estrutura da matéria e das
células.
Imagens:
Microscópio de Luz

Cortes superfície
Imagens: Microscópio eletrônico
 Microscópio de Luz - ML

Microscópio Eletrônico de Microscópio Eletrônico de

Transmissão - MET Varredura - MEV
ML:
 1.000x
 0,2 µm
MET:
 500.000x
 0,0002 µm
MEV:
 10 a 150.000x
 0,02 µm
Epitélio da mucosa
intestinal
MET MEV
 




 Filamento

 Canhão de elétrons
 Câmara
 Análise da imagem
 Filamento
 Canhão de elétrons

Lentes magnéticas
 Câmara
Câmara e porta-amostra
 Análise da imagem
Preparo do material

Fixação

Desidratação

Montagem nos Secagem ao

suportes - Stubs ponto crítico

Sputter coat
MEV
Protocolo

1- Fixar em solução de glutaraldeído e/ou paraformaldeído em tampão

cacodilato de sódio (ou fosfato) a 0,1M (animal) ou 0,05M (vegetal) em pH 7,2.
Tempo: 2 a 24 hs.

2- Lavar por 1-2 hs em vários banhos do tampão;

3- Pós-fixar em tetróxido de ósmio por 1 h ao abrigo da luz;

4- Lavar em 2 banhos de 15 min em tampão caco, ou água destilada;

5- Desidratar as peças, mantendo-as submergidas, em serie crescente de

etanol ou acetona (50%  70%  80%  95%  100%). Cada etapa
deve ser feita em dois banhos de 15 min cada;

6- Ponto crítico;

7- Montar as peças secas nos stubs;

8- Sputter coat para proceder a cobertura com ouro.