Contagem de coliformes totais, Enterobacterias por petrifilm

1 MEIOS DE CULTURA

termotolerantes,

E.coli

Placas de Petrifilm para a contagem de Coliformes totais e E. coli Placas de Petrifilm para a contagem de Coliformes totais e Termotolerantes Placas de Petrifilm para a contagem de Enterobacterias Soluo salina peptonada 0,1%

2 2.1

PROCEDIMENTOS Inoculao Na cmara de fluxo laminar coloque a placa Petrifilm EC ou CC sobre a superfcie

nivelada e plana. Levante o filme superior e com a pipeta perpendicular dispense 1 mL da diluio selecionada no centro do filme inferior. Solte o filme superior sobre a amostra. Coloque o difusor plstico com o lado plano para baixo no centro da placa. Pressione delicadamente o centro do difusor para distribuir a amostra uniformemente. Espalhe o inculo sobre toda a rea de crescimento da placa Petrifilm antes do gel se formar. No arraste o difusor sobre o filme. Remova o difusor e deixe a placa em repouso durante, pelo menos, um minuto para permitir a formao do gel. 2.2 Incubao Incubar em estufa as placas na posio horizontal com o lado transparente para cima em pilhas que no ultrapassem 20 placas. Incubar as placas Petrifilm de Coliformes Totais por 24 h 2h a 35 C 1C., Incubar as placas Petrifilm de E. coli por 24 h 2h a 35 C 1C. Incubar as placas Petrifilm de Coliformes Termotolerantes por 24 h 2h a 44 C 1C. Para essa incubao necessria a umidificao da estufa. Incubar as placas Petrifilm de Enterobacterias por 24 h 2h a 35 C 1C.,

LEITURA As placas Petrifilm podem ser contadas usando um contador de colnias. No enumere as colnias presentes na espuma, pois elas no esto sob a ao dos

agentes de seletividade do meio, nem as bolhas de ar artificiais que podem estar presentes. A interpretao das colnias na placa Petrifilm varia de acordo com o mtodo.

A AOAC Official Methods (998.08, 991.14, 986.33 e 989.10) enumera colnias azuis a vermelha azuladas associadas ao gs formado, independente de tamanho ou intensidade de cor, como E. coli confirmada. Colnias azuis sem gs no so consideradas E. coli. Outras colnias de coliformes so vermelhas e esto associadas ao gs formado (dentro do dimetro de uma colnia). Colnias no associadas ao gs (uma distncia maior que uma colnia de dimetro entre a colnia e a bolha de gs) no so consideradas coliformes. A contagem de coliformes totais consiste da somatria das colnias vermelhas e azuis associadas ao gs em 24h. Se a qualquer hora, dentro do perodo de incubao de um mtodo validado, aparecer uma colnia azul associada ao gs, ela uma E. coli confirmada. A rea de crescimento circular de aproximadamente 20 cm. Em placas que contenham mais de 150 colnias, as contagens podem ser estimadas, contando-se o nmero de colnias em um ou mais quadrados representativos e determinando-se o nmero mdio por quadrado. Multiplique o nmero mdio por 20 para determinar a contagem estimada por placas Quando presentes em grandes quantidades, as placas Petrifilm EC podem apresentar uma ou mais das seguintes caractersticas: uma intensificao da cor do gel com colnias muito pequenas e indistintas e muitas bolhas de gs. Altas concentraes de E. coli podero tornar a rea de crescimento azulada, enquanto altas concentraes de coliformes (no E. coli) podero tornar a rea de crescimento vermelha escura. Quando isto ocorrer, registre os resultados como > 100/cm2. Se necessrio s colnias podem ser isoladas para identificao futura. Levantar o filme superior e retirar trs colnias do gel, repicar em Caldo EC para identificao de coliformes termotolerantes. Para contagem de enterobacterias, contar todas as que so visualizadas como colnias vermelhas circundadas por halos amarelos. 4 BIBLIOGRAFIA CONSULTADA

Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL , 17 th Edition, 2002. AOAC Official Method 998.08 Confirmed Escherichia coli Counts in Poultry, meats, and Seafood- Dry Rehydratable Film Method Petrifilm E.coli/Coliform Count Plate. Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL, 17 th Edition, 2002. AOAC Official Method 991.14 Coliform and Escherichia coli Counts in Foods-Dry Rehydrate Film (Petrifilm E.coli Count Plate and Petrifilm Coliform Count Plate) Methods. c 17. p. 22. Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL, 17 th Edition, 2002. AOAC Official Method 989.10 Bacterial and coliform counts in dairy products -Dry Rehydrate Film (Petrifilm Coliform Count Plate) Methods. c 17. p. 18