SaBios: Rev. Sade e Biol., v.8, n.1, p.44-52, jan./abr.

, 2013 ISSN:1980-0002

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PERFIL FITOQUMICO E BIOLGICO DO EXTRATO HIDROALCOLICO DOS RIZOMAS DO GENGIBRE (Zingiber officinale Roscoe)
Marili Lira Rodrigues ; Rosane Krohling Lira
RESUMO
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Atualmente, o Paran aparece como o maior produtor nacional de gengibre. O rizoma do Zingiber officinale Roscoe, uma planta de alto potencial teraputico em diversas patologias, conhecido mundialmente por suas propriedades farmacolgicas e medicinais. O objetivo do presente trabalho foi determinar o perfil fitoqumico do rizoma do gengibre. A escolha da planta baseou-se na quimiossistamtica e etnofarmacologia de uso. Na prospeco fitoqumica apresentou como componentes qumicos apenas saponinas e taninos; quanto cromatografia, foi possvel identificar o composto qumico cineol. Os resultados obtidos so compatveis com os listados na literatura, pois a planta em questo apresenta 50% de sua composio de amido, 1 a 3% de leo essencial (d-canfeno, felandreno, zingibereno, cineol, citral, borneal, gingerol e sesquiterpenos) alm de acares, protenas, vitaminas do complexo B e vitamina C.

Palavras-chave: Zingiber officinale; prospeco fitoqumica; atividade antimicrobiana.

PHYTOCHEMISTRY AND HYDROALCOHOLIC PROFILE OF ORGANIC GINGER RHIZOME (Zingiber officinale Roscoe) ABSTRACT Currently, Paran appears as the main national producer of ginger. Zingiber officinale Roscoe rhizome is a plant with high therapeutic potential for several diseases and it is known worldwide due to its medicinal and pharmacological properties. The objective of this study was to determine the phytochemical profile of ginger rhizome using the methodology described by Matos (1997). The choice of the plant was based on its chemosystematics and ethnopharmacology use. A phytochemical screening revealed as chemicals only saponins and tannins; regarding to chromatography, it was possible to identify cineole. Results are consistent with those recorded in literature. Thus, ginger is composed by 50% of starch, 1% to 3% of essential oil (dcamphene, phellandrene, zingiberene, cineol, citral, borneal, gingerol and sesquiterpenes) sugars, proteins, B vitamins and vitamin C.

Keywords: Zingiber officinale; phytochemical; antimicrobial activity.

INTRODUO
O Zingiber officinale Roscoe uma das especiarias mais importantes e valorizadas ao redor do mundo, uma planta de alto potencial teraputico em diversas patologias. uma planta herbcea, da famlia das Zingiberacea, nativa da ndia, podendo alcanar at 1,20 m de altura, no apresenta razes, e sim, numerosos rizomas, dos quais so extrados elementos resinosos, bastante aromticos e de gosto picantes (1). No Brasil, o gengibre chegou menos de um sculo aps o descobrimento, por volta de 1500, onde naturalistas que visitavam o pas achavam que se tratava de uma planta nativa, pois, era comum encontr-la em estado silvestre. Hoje, o gengibre cultivado principalmente na faixa litornea do Esprito Santo, Santa Catarina, Paran e no sul de So Paulo, em razo das condies de clima e de solo mais adequadas (2). Este conhecido mundialmente por suas propriedades
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farmacolgicas e medicinais e amplamente comercializado em funo do seu emprego na medicina popular, sendo, portanto uma das mais antigas e populares plantas medicinais do mundo (3). Includo no grupo de especiarias, o gengibre representa atualmente o terceiro lugar das plantas medicinas, aromticas e condimentares mais produzidas no Paran (4), com isso, o Paran aparece como o maior produtor nacional de gengibre (5). Os extratos do gengibre tm sido utilizados por muitos sculos, pela medicina popular para curar e tratar diversas patologias (6). Os principais componentes do gengibre constituem-se de leos essenciais, mostrando a presena de 1 a 3%, composto principalmente por d-canfeno, felandreno, zingibereno, cineol, citral, borneal, gingerol e resina (7). O aroma caracterstico do gengibre se deve ao leo voltil composto principalmente de sesquiterpenos, alm disso, o gengibre contm mais de 50 % de

Acadmica do Curso de Farmcia da Faculdade Assis Gurgaz, Cascavel PR Biloga, Especialista em Biotecnologia pela Universidade Estadual do Oeste do Paran

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fitoqumicos, atraindo o interesse de muitos pesquisadores, onde se encontram muitas publicaes referenciando o mesmo. A coleta do rizoma da planta em questo foi realizada no comrcio local da cidade de Cascavel-PR, no perodo de julho a agosto do ano de 2010, coletando toda a quantidade necessria de amostra de uma s vez, para a realizao de todas as pesquisas necessrias. PREPARO DO EXTRATO O preparo do extrato foi baseado no principio de turbolizao, seguida de macerao esttica com solvente hidroalcolico (etanol 70 C) na proporo de 1:4 em relao planta, por um perodo de sete dias, utilizando-se do rizoma fresco (alcoolatura). Aps o perodo de macerao, foi realizada a filtragem do extrato com descarte dos resduos slidos formados. PROSPECO FITOQUMICA (Screnning) A prospeco fitoqumica foi realizada para a elucidao dos constituintes qumicos presentes na planta pesquisada. Posteriormente, para a identificao de antraquinonas foram realizadas a reao de Borntrager da forma de antraquinonas livres (genina livre) e tambm na forma heterosdica (O-heterosdeos). J para saponinas, foi utilizada como parmetro a determinao do ndice de espuma, analisando o aparecimento de espuma persistente (8). Na determinao dos compostos flavonides, vrias reaes de caracterizao foram realizadas, tais como a reao com tricloreto de alumnio, reao de Shinoda, reao de Pew e a reao com cloreto frrico. Na anlise de determinao dos constituintes alcalides, foram utilizados dos reagentes gerais de alcalides (RGA) sendo estes Dragendorff, Mayer e Sonnenschein. Para a pesquisa de taninos, foram utilizadas vrias reaes com diferentes reagentes, tais como reao com sais de chumbo (acetato), reaes com sais de cobre (acetato), reao com protenas (gelatina) e reao com sais de ferro (cloreto frrico) (8). DETERMINAO DE SUBSTNCIAS EXTRAVEIS A determinao de substncias extraveis foi realizada a partir de cpsulas de porcelana dessecada e tarada colocada em estufa at peso constante (21).

amido (8). O leo essencial responde pelo aroma e ao antimicrobiana que s aparece no rizoma fresco, citam-se ainda outros constituintes com acares, protenas, vitaminas do complexo B e vitamina C (9). Os polifenis fazem parte da composio de muitas plantas e so considerados fatores antinutricionais de grande importncia. So substncias quimicamente muito ativas e que podem reagir, reversvel ou irreversivelmente, com protenas, prejudicando a digestibilidade e a biodisponibilidade da lisina e de outros aminocidos essenciais. As substncias fenlicas mais encontradas em plantas so: cidos fenlicos, flavonides e taninos (10). H milnios os vegetais tm sido utilizados pelos seres humanos no tratamento de doenas, porm, apenas recentemente as plantas tornaram-se objeto de estudos cientfico no que se referem s suas variadas propriedades medicinais, inclusive quanto sua atividade antibacteriana ou antifngica (11). Atualmente crescente o interesse por compostos antibacterianos de origem natural, uma vez que, grande parte dos microorganismos tende a desenvolver resistncia aos antibiticos rotineiramente utilizados na clnica, por uso excessivo ou at inadequado. Assim, faz - se necessrio o desenvolvimento de novos estudos em uma busca constante de novos princpios ativos contra bactrias e fungos amplamente conhecidos (12). Embora o desenvolvimento da resistncia seja um fenmeno espontneo, as drogas atuam como seletores de amostras resistentes. A falncia das terapias vigentes tem motivado a pesquisa de novas drogas que combatam estes microorganismos resistentes (11). Assim, o objetivo desse trabalho foi realizar anlises fitoqumicas, identificao de compostos majoritrios, avaliao da atividade antimicrobiana, doseamento de polifenis e teste de identificao do extrato hidroalcolico do rizoma do Zingiber officinale.

MATERIAL E MTODOS
MATERIAL BOTNICO A escolha da planta baseou-se na quimiossistamtica e etnofarmacologia de uso, sendo esta uma planta com muitos estudos

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CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA Para a realizao do perfil cromatogrfico foi utilizada a cromatografia em camada delgada com o extrato hidroalcolico do Zingiber officinale, sendo empregada como fase mvel os reagentes tolueno e acetato de etila nas propores 93:7, como tambm hexano e acetato de etila nas propores 90:10, tendo como fase estacionria placas de alumnio e slica gel (MERCK), e como soluo reveladora empregou-se vanilina sulfrica, seguido de aquecimento a 110C por 5 -10 minutos (13,14). DOSEAMENTO DE POLIFENIS Para a realizao do doseamento de polifenis, foi utilizada como metodologia a descrita pelo Instituto Adolfo Lutz, adaptada, empregou-se o extrato hidroalcolico do Zingiber officinale, reagente de Folin-Dennis, e soluo saturada de carbonato de sdio, realizando a leitura da soluo em espectrofotmetro 760nm, e como soluo padro foi utilizado o cido glico (15). DETERMINAO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA A determinao da atividade antimicrobiana foi realizada, com o mtodo de difuso em gar, em triplicata, sendo testadas linhagens bacterianas Gram positivas (Staphylococcus aureus) e negativas (Pseudomonas aeruginosas). Para isso, foi utilizado meio de cultura gar Mueller Hinton

(16,17). As placas foram preparadas e semeadas a partir de suspenses bacterianas desenvolvidas em BHI (Brain Heart Infusion) por 24 horas, diludas e padronizadas na escala 0,5 de MacFarland que corresponde a 8 aproximadamente a 1,5 x 10 UFC/mL (18,19). A seguir, discos de papel de filtro (esterilizados) impregnados com o extrato hidroalcolico previamente preparado (10 L) dos rizomas do Zingiber officinale foram colocados sobre a superfcie dos meios de cultura inoculados. Aps incubao por 24 horas a 37C, foram observados os halos de inibio das amostras bacterianas e fngicas, e determinada a atividade antibacteriana do extrato pela medida do halo inibitrio formado ao redor dos discos. Utilizaram-se como controles positivos antibiticos padres, sendo a tetraciclina C para S. aureus e micacina (30g) para P. aeruginosa (20).

RESULTADOS E DISCUSSO
Os resultados obtidos com os mtodos da abordagem fitoqumica clssica, para a deteco dos constituintes qumicos do extrato hidroalcolico do rizoma do Zingiber officinale forneceu os resultados apresentados Tabela 1.

Tabela 1. Resultados da prospeco fitoqumica do extrato hidroalcolico do Zingiber officinale Teste Resultado da Pesquisa Antraquinonas Genina Livre O-heterosdeos Saponinas ndice de espuma Flavonides Teste com Tricloreto de Al Teste de Shinoda (Mg) Teste de Pew Teste de Cloreto Frrico Taninos Reao com protena (gelatina) Reao com sais de chumbo +
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Continuao da Tabela 1...

Reao com sais de cobre Reao com sais de ferro Alcalides Alcalides Pesquisa direta RGA Dragendorff RGA Sonnenschein RGA Mayer Alcalides Pesquisa confirmatria RGA Dragendorff RGA Sonnenschein RGA Mayer

+ -

(-) ausncia da substncia; (+) presena das substncias (em baixas concentraes)

Na presente pesquisa, no houve indcios da presena de antraquinonas tanto na forma livre quanto na forma ligadas s molculas de acar (heterosdica) e segundo a literatura, as mesmas no citam a presena deste composto no rizoma do Zingiber officinale (5,7,9). Observou-se um resultado para o ndice de espuma positivo, gerando a ocorrncia de espuma persistente, porm em baixa concentrao, e segundo Lima (22), o extrato do rizoma do Zingiber officinale, possui em sua composio qumica saponinas, composto este responsvel pela formao da espuma. Na prospeco fitoqumica, no houve vestgios da presena de flavonides em todos os testes de caracterizao, e segundo diversos autores pesquisados, este resultado confirmado pelos mesmos, portanto no citam a presena deste composto no rizoma do Zingiber officinale (4,7,9). O resultado foi duvidoso para taninos, havendo indicativos da presena deste composto, porm, resultado no conclusivo j que nenhuma das literaturas consultadas citam a presena destes, onde houve a formao de turvao leve nas reaes com sais de chumbo e de cobre, no confirmado pelos resultados dos ensaios com as reaes de gelatina e com sais de ferro (3,7,9). Na pesquisa de alcaloides, todos os testes resultaram em reaes negativas, no

ocorrendo a formao de turvao, precipitao ou colorao, confirmando a negatividade da presena deste composto na planta em pesquisa. O teor percentual extrativo na determinao do contedo das substncias extraveis foi de 1,03% (p/v), favorecidos pela baixa concentrao de princpios ativos presentes no extrato do Zingiber officinale e tambm pelo fato do leo essencial, o seu principal componente qumico, volatilizar-se nas altas temperaturas da estufa e ao longo perodo de tempo. Os resultados obtidos na prospeco fitoqumica so compatveis com os listados na literatura, pois a planta em questo apresenta 50% de sua composio de amido, 1 a 3% de leo essencial (d-canfeno, felandreno, zingibereno, cineol, citral, borneal, gingerol e sesquiterpenos) (7,8), alm de acares, protenas, vitaminas do complexo B e vitamina C (9). Os resultados do perfil cromatogrfico do extrato hidroalcolico do Zingiber officinale, foram avaliados atravs da cromatografia em camada delgada, utilizando-se como fase mvel os reagentes tolueno e acetato de etila, na qual verificou-se o aparecimento de mancha azulada, semelhante ao leo essencial cineol e com o mesmo Rf= 0,42 (Figura 1 - imagem da direita). Tambm se pode verificar a presena de dois outros compostos, nos quais apresentaram Rf de 0,61 e 0,87 com colorao rsea e azulada
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respectivamente, porm, estes compostos no foram identificados em nenhuma das literaturas consultadas (20,21,22). Devido o Zingiber officinale apresentar em sua composio qumica principalmente leo essencial de 1 a 3%, como d-canfeno, felandreno, zingibereno, cineol, citral, borneal e gingerol (7), pode-se dizer que os compostos encontrados e no identificados a partir do

perfil cromatogrfico representam alguns destes diversos leos presentes no mesmo. Na realizao da corrida cromatogrfica com a fase mvel hexano e acetato de etila (Figura 1), no foi observado corrida, podendo-se visualizar que os compostos permaneceram retidos na placa de slica gel, podendo ser explicado devido diferena de polaridade dos solventes.

Figura 1. Perfil Cromatogrfico do Extrato hidroalcolico dos rizomas do Zingiber officinale a partir de duas fases mveis. Imagem da esquerda - fase mvel hexano e acetato de etila; Imagem da direita tolueno e acetato de etila. Fonte: Foto tirada no Laboratrio de Bioqumica da FAG, 2011.

Segundo Martins et al., (13) em pesquisa realizada de perfil cromatogrfico em uma espcie da famlia Zingiberaceae, a mesma pertencente da planta em estudo, constatou-se a presena do leo essencial cineol, no qual apresentou o mesmo fator de reteno obtido no presente estudo. A Figura 1 apresenta os valores de absorbncia e as respectivas concentraes de polifenis utilizada na preparao da curva analtica do extrato hidroalcolico do Zingiber

officinale. A curva analtica apresentou um coeficiente de correlao de 0,9538, sendo esta a correlao entre a concentrao e a absorbncia, no encontrado a 100%, devido a uma srie de erros, como erros sistemticos, padres e reagentes inadequados. A equao da reta tambm pode ser obtida, calculando a concentrao de polifenis na amostra em estudo, sendo que o reagente Folin-Dennis na presena de fenis gera uma colorao azul, que pode ser quantificada em espectrofotmetro, sendo esta proporcional a
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do rizoma do Zingiber officinale, que deve-se a presena de taninos na extrato em estudo, porm em baixas concentraes, como determinado na prospeco fitoqumica.

concentrao de cido glico, o padro utilizado nas anlises. No entanto, nas condies de teste (ensaio) o valor encontrado para polifenis foi de 0,15mg % por mL de extrato hidroalcolico

Grafico 1. Curva analtica de polifenis, concentrao (g/mL) x absorbncia (nm).

O halo apresentado na Figura 2 corresponde ao controle positivo sobre a linhagem bacteriana de Pseudomonas aeruginosa, no qual se obteve um halo de inibio igual a 18 mm, sendo esta bactria sensvel ao antibitico testado. A Farmacopeia Brasileira IV (22) estabelece padres para a interpretao dos halos de inibio, sendo que para o antibitico amicacina (30 g), utilizado como controle positivo para Pseudomonas aeruginosa,

expressa que halos menores que 14 mm como resistentes (R), entre 15 - 16 mm como intermedirio (I) e acima de 17 mm como sensvel (S) ao antibitico. E para a tetraciclina (30 g) utilizada como padro para Staphylococcus aureus expressa halos menores que 14 mm como resistentes (R), entre 15 - 18 mm como intermedirio (I) e acima de 19 mm como sensvel (S) ao antibitico.

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Figura 2 - Atividade antimicrobiana do extrato hidroalcolico do Zingiber officinale sobre a linhagem bacteriana de Pseudomonas aeruginosa.. Fonte: Foto tirada no Laboratrio de Microbiologia FAG, 2011. majoritariamente officinale. no rizoma do Zingiber

CONCLUSO
Por meio deste estudo foi possvel a deteco de saponinas e taninos no extrato hidroalcolico do Zingiber officinale, alm destes compostos, foram detectados a presena de polifenis atravs do doseamento em espectrofotmetro, porm em pequenas concentraes. Por meio da tcnica de difuso em gar em discos nota-se a necessidade de mais pesquisas a serem realizadas sobre a ao antimicrobiana de Zingiber officinale. Utilizando-se da tcnica de cromatografia em camada delgada, identificou-se a presena do composto cineol, um leo essencial, componente qumico este presente

Os resultados obtidos so compatveis com os listados na literatura, pois a planta em questo apresenta 50% de sua composio de amido, 1 a 3% de leo essencial (d-canfeno, felandreno, zingibereno, cineol, citral, borneal, gingerol e sesquiterpenos), alm de acares, protenas, vitaminas do complexo B e vitamina C.

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Marili Lira Rodrigues; Rosane Krohling Lira Endereo para correspondncia: Rua Margarida 504 Centro 85420-000 - Corbelia, PR E-mail: rosanek20@hotmail.com Recebido em 25/04/2011 Revisado em 02/10/2011 Aceito em 21/09/2012

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