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Cultura Homeoptica p. 16-18 jan-mar n 10 v. 4 2005

pesquisa

Utilizao de glicerina diluda e lcool 70% (P/P) como insumos inertes na preparao de isoterpicos a partir de culturas bacterianas puras
M. Graa Bachetti Vervloet 1; Clovis Aurlio Vervloet 2; Elaine Neves Gasperi 3 ; Ely Cardoso de Oliveira 4 ; Polyane Profylo 5

Resumo
Foram realizados testes para se verificar a viabilidade de utilizao da glicerina diluda e do lcool 70%(p/p) como insumos inertes na preparao de isoterpicos, a partir de culturas bacterianas puras de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Streptococcus beta hemoltico do grupo A. Os isoterpicos foram preparados pelo mtodo Hahnemanniano at a 12CH, partindo-se de suspenses das cepas em glicerina diluda, com turvao padronizada (Grau 3 da Escala de Mac Farland). As trs primeiras dinamizaes foram preparadas utilizando-se o mesmo insumo inerte da suspenso de partida. Para as subseqentes, utilizou-se o lcool 70%(p/p). Posteriormente os isoterpicos foram submetidos a testes de verificao da ao bactericida da glicerina diluda e do lcool 70%(p/p) sobre os microorganismos dinamizados, utilizando-se a tcnica de semeadura quantitativa. Em todas as amostras, os seguintes resultados foram observados: a) houve crescimento de incontveis nmeros de colnias nas duas primeiras dinamizaes; b) na terceira dinamizao este crescimento atingiu ndices aproximados a 3.000 UFC/ml; c) a partir da 4CH no foi observado crescimento bacteriano. O crescimento bacteriano nas trs primeiras dinamizaes revela a inocuidade da glicerina diluda frente s cepas dinamizadas. Por outro lado, o no crescimento a partir da 4CH mostra a ao bactericida do lcool 70%(p/p). A utilizao da glicerina diluda e do lcool 70%(p/p) nas rotinas de preparao de isoterpicos deve ser priorizada frente a outros insumos inertes no descritos na Farmacopia Homeoptica Brasileira.

Abstract
Tests were made to verify the viability of using diluted glycerin and alcohol 70% (p/p) as inert substances in the preparation of isotherapics, starting from pure bacterial cultures of Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Streptococcus beta hemolytic of A Group. The isotherapics were prepared by Hahnemannian method until 12 CH, starting from suspensions of the lineage in diluted glycerin, with standardized turbidity (Grade 3 on Mac Farland Scale). The first three dynamizations were prepared using the same inert substance of the starting suspension. In the following dynamization alcohol 70% (p/p) was used. After that the isotherapics were submitted to verification tests of diluted glycerin and alcohol 70% (p/p) bactericide action over the dynamized microorganism, using the technique of quantitative sowing. In all the samples, the following results were observed: a) there was growing of uncountable colonies in the first two dynamizations; b) in the third dynamization this growing reached indexes close to 3,000 UFC/ml; c) starting from 4 CH it was not observed bacterial growing. The bacterial growing in the first three dynamizations reveals the innocuity of diluted glycerin to the dynamized lineage. On the other hand, the non-growing from 4 CH shows the antibacterial action of alcohol 70% (p/p). The use of diluted glycerin and alcohol 70% (p/p) in the preparation routines of isotherapics must be prioritized to other inert substances unreported on Brazilian Homeopathic Pharmacopoeia

Introduo
O levantamento da literatura, realizado com o objetivo de reunir os registros sobre a preparao de isoterpicos, arrolou duas principais contribuies, at ento utilizadas pelos profissionais da rea. A primeira refere-se ao Mtodo Oficial Francs (7:93-106) que, em linhas gerais, prope a
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obteno de isoterpicos a partir do microorganismo lisado. Como uma segunda contribuio encontramos a Tcnica do Nosdio Vivo, proposta por COSTA (3:104-106), que preconiza a preparao de isoterpicos a partir da cultura no inativada, empregando o Soro Fisiolgico Isotnico como insumo inerte nas dinamizaes.

Faculdade de Farmcia e Bioqumica do Esprito Santo (FAFABES) Farmcia Homeoptica Renaissance - Vitria - ES Acadmico(a) - FAFABES Acadmico(a) - FAFABES Acadmico(a) - FAFABES

M.Graa Bachetti Vervloet, Clovis Aurlio Vervloet, Elaine Neves Gasperi, Ely Cardoso de Oliveira e Polyane Profylo
A aplicao do Mtodo Oficial Francs (7:93-106) exige o emprego de sofisticadas tcnicas e equipamentos, o que inviabiliza o seu uso na preparao de isoterpicos pelas Farmcias Homeopticas. A Tcnica do Nosdio Vivo proposta por COSTA (3:104-106) de fcil execuo, porm, a utilizao da cultura no inativada requer cuidados especiais do manipulador. Aliado a isso, o uso de soro fisiolgico isotnico nas dinamizaes gera polmica entre os especialistas da rea pois o mesmo no se constitui num insumo inerte descrito na literatura homeoptica (5:37). Por outro lado, a glicerina considerada um insumo inerte na homeopatia, no apresentando patogenesia significativa. Sua diluio na proporo de 1/1 com a gua destilada (glicerina diluda) insumo inerte preconizado pela Farmacopia Homeoptica Brasileira para o preparo dos organoterpicos por manter a integridade das clulas e tecidos. (5:37) O lcool 70%(p/p), por sua vez, empregado na microbiologia como agente bactericida face a sua ao de lise das clulas bacterianas. (2:149-170) A preparao dos isoterpicos na Farmcia Homeoptica, por seu turno, carece de sistematizao que demonstre consenso na realizao das tcnicas. Esse fato vem realar a importncia e a necessidade do desenvolvimento de estudos que tenham como alvo a padronizao de tcnicas que garantam a preparao e o uso seguro desses medicamentos. Baseado nos fatos expostos, o presente estudo tem como objetivo verificar a viabilidade do emprego da glicerina diluda e lcool 70%(p/p) na preparao de isoterpicos, a partir de culturas bacterianas puras. Esta prtica deve possibilitar o desenvolvimento da padronizao de rotinas empregadas nessas preparaes. Material e mtodos Numa primeira etapa foram selecionadas cepas puras de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Streptococcus beta hemoltico do grupo A, isoladas de materiais patolgicos provenientes de furnculos, impetigo, otites, amigdalites e infeces urinrias. A escolha dessas cepas foi atribuda ao fato de que isoterpicos preparados a partir desses microorganismos so amplamente empregados na medicina homeoptica. Os isoterpicos foram preparados segundo o mtodo Hahnemanniano (4:245), at a 12CH. Foram preparadas suspenses bacterianas, como ponto de partida para as dinamizaes, transferindo-se colnias das culturas puras para tubos contendo 10ml de glicerina diluda (5:37) estril, at turvao padronizada correspondente ao grau 3 da Escala de Mac Farland (3:104). As trs primeiras dinamizaes foram preparadas utilizando-se o mesmo insumo inerte da suspenso de partida. Para as subseqentes, at a 12CH, utilizou-se o lcool 70% (p/p) (4:245). A segunda etapa do experimento consistiu na realizao de testes de verificao da ao bactericida da glicerina diluda e do lcool 70%(p/p) sobre os microorganismos dinamizados. Os testes foram realizados atravs da tcnica de semeadura quantitativa, que permite determinar o nmero de Unidades Formadoras de Colnias (UFC) em cada ml das dinamizaes. Para tanto, inoculou-se 100 microlitros de cada dinamizao em placas contendo Agar Sangue, Agar EMB de Levine, Agar Citrimide e Agar Manitol Hipertnico, selecionados conforme os requerimentos nutricionais das cepas empregadas. Aps a semeadura, as placas foram incubadas em estufa bacteriolgica a temperatura entre 35 a 37 o C, por 24 a 48 hs. exceo das placas de Agar Sangue, que foram incubadas em microaerofilia, todas as demais foram incubadas em ambiente aerbio. A primeira leitura, baseada na contagem de U.F.C., foi realizada aps 24 horas de incubao. As culturas negativas foram reincubadas por mais 24 horas, quando uma segunda leitura foi realizada para a concluso dos resultados.

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Tabela 1
NMERO DE UFC/ml NAS DINAMIZAES Dinamizaes Susp. Partida 1CH 2CH 3CH 4CH 5CH 6CH 7CH 8CH 9CH 10CH 11CH 12CH UFC/ml 3.000.000.000 30.000.000 300.000 3.000 30 0,3 0,003 0,00003 0,0000003 0,000000003 0,00000000003 0,0000000000003 0,000000000000003

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Resultado e discusso
Os resultados apresentados na Tabela 2 demostram que o crescimento bacteriano das duas primeiras dinamizaes foi incontvel, enquanto que o da terceira dinamizao atingiu ndices aproximados a 3.000 UFC/ml. Esse fato leva constatao de que o crescimento bacteriano nas culturas das trs primeiras dinamizaes foi compatvel com o nmero de UFC/ml em cada uma das dinamizaes (Tabela 1). A variao do crescimento entre as cepas nas culturas da terceira dinamizao (Tabela 2) atribuda ao fato de que a turvao da suspenso de partida, padronizada pela Escala de Mac Farland (2:930-931), realizada atravs da observao visual, o que impossibilita a determinao precisa do nmero de UFC presentes. A Tabela 2 revela ainda que a glicerina diluda no impediu o crescimento bacteriano, o que vem comprovar sua inocuidade frente aos microorganismos dinamizados. O lcool 70%(p/p) apresentou eficaz ao bactericida sobre os microorganismos dinamizados, uma vez que no foi constatado crescimento bacteriano a partir da 4CH (Tabela 2).

Concluses
Os resultados obtidos permitem fundamentar as seguintes concluses: A glicerina diluda, insumo inerte descrito na Farmacopia Homeoptica Brasileira, manteve clulas bacterianas ntegras nas trs primeiras dinamizaes, permitindo a extrao da energia medicamentosa dos microorganismos vivos, conforme recomenda COSTA (3:260). O emprego do lcool 70%(p/p) como insumo inerte revelou ao bactericida sobre os microorganismos dinamizados, uma vez que no foi constatado crescimento bacteriano a partir da 4CH, considerando que nesta dinamizaes ainda ocorre a presena de U.F.C. conforme Tabela 1. A utilizao da glicerina diluda e do lcool 70%(p/p), nas rotinas de preparao de isoterpicos, devem ser priorizados frente a outros insumos inertes no descritos na Farmacopia Homeoptica Brasileira. Os resultados apresentados so preliminares. A continuidade desta linha de pesquisa deve possibilitar a obteno de novos resultados que possam corroborar a eficcia desses insumos inertes na preparao de isoterpicos.

Tabela 2 : Crescimento das diferentes cepas presentes nas dinamizaes Hahnemannianas (CH), em UFC/ml
Insumo Inerte: Cepas Bacterianas Glicerina Diluda
2CH Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. 3CH 2800 2600 3050 3100 2400 3500

lcool a 70 % (p/p)
4CH 0 0 0 0 0 0 5CH 0 0 0 0 0 0 6CH 0 0 0 0 0 0 7CH 0 0 0 0 0 0 8CH 0 0 0 0 0 0 9CH 0 0 0 0 0 0 10CH 0 0 0 0 0 0 11CH 0 0 0 0 0 0 12CH 0 0 0 0 0 0

1CH Escherichia coli Inc. Klebsiella pneumoniae Inc. Proteus vulgaris Inc. Pseudomonas aeruginosa Inc. Staphylococcus aureus Inc. Steptococcus beta Hemoltico do grupo A Inc.

Bibliografia
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