TCNICAS IMUNOLGICAS UTILIZADAS NO DIAGNSTICO DAS INFECES

INTRODUO O diagnstico de ce te!a de "# $ ocesso in%eccioso & a de#onst a'(o do $atgeno o" de se"s $ od"tos nos tecidos o" %)"idos *io)gicos do +os$edei o, -o &# ne# se#$ e isso & $oss./e)0 1"e $e)a a"s2ncia do agente in%eccioso0 1"e $e)a %a)ta de sensi*i)idade dos #&todos "ti)i!ados0 o" $o %a)+as t&cnicas o" $e)os )ongos $e .odos e3igidos $a a "#a es$osta do )a*o at io, Os #&todos i#"no)gicos di etos o" indi etos t2# sido a#$)a#ente "ti)i!ados $a a s"$ i as de%ici2ncias dos #&todos $a asito)gicos o" #ic o*io)gicos na $es1"isa de ant.genos0 antico $os o" i#"noco#$)e3os0 $e)a a$ide!0 si#$)icidade de e3ec"'(o0 $ossi*i)idade de a"to#a'(o e *ai3o c"sto o$e aciona), O con+eci#ento da a$)ica'(o dos testes so o)gicos e a inte $ eta'(o co eta dos es")tados o*tidos s(o %"nda#entais $a a c).nicos0 $ato)ogistas e )a*o ato istas o ienta e# se" t a*a)+o /isando o diagnstico co eto0 associando se#$ e os es")tados o*tidos 4s in/estiga'5es c).nicas e e$ide#io)gicas, Na $es1"isa de antico $os0 os testes so o)gicos t2# sido "ti)i!ados co# s"cesso co#o a"3i)ia es i#$o tantes no diagnstico indi/id"a) o" e# in1"& itos so oe$ide#io)gicos0 de/ido 4s s"as #6)ti$)as $ossi*i)idades de e#$ ego,

PRECIPITAO As t&cnicas de i#"no$ eci$ita'(o0 *aseadas na 1"anti%ica'(o de $ eci$itados %o #ados $e)a ea'(o ant.geno7antico $o0 co#e'a a# e# 89:;0 <"do)% = a"s0 e# >iena0 a)ato" a $ eci$ita'(o 1"e oco ia $e)a inte a'(o de ant.genos so)6/eis e se"s anti7so os co es$ondentes e0 e# 8:?@0 Aec++o)d0 na A)e#an+a0 a$ esento" se"s e3$e i#entos so* e i#"no$ eci$itados e# g&is, A 1"antidade de $ eci$itado %o #ado 1"ando0 a "#a concent a'(o constante de antico $o0 se /ai adicionando ant.geno & ca acte i!ada $o "#a c" /a $a a*)ica0 desc ita $o Beide)*e ge e =enda)) e# 8:C@, Essa 1"antidade de $ eci$itado de$ende de /D ios %ato es %.sico71".#icos e i#"no)gicos0 #as $ inci$a)#ente das concent a'5es e)ati/as do ant.geno e

do antico $o, E"ando as 1"antidades de ant.geno e de antico $o s(o e1"i/a)entes0 a $ eci$ita'(o & #D3i#a0 dec escendo 1"ando +D e3cesso de ant.geno o" de antico $o, - eci$itados FD %o #ados $ode# se disso)/e 1"ando e3$ostos a "# e3cesso de "# dos eagentes0 de/ido 4 e/e si*i)idade da )iga'(o ant.geno7antico $o, O %enG#eno de $ o!ona oco e 1"ando +D "# e3cesso de antico $o e $ode ca"sa "# e o de inte $ eta'(o dos es")tados0 sendo necessD io 1"e se %a'a "#a tit")a'(o do antico $o co# 1"antidades %i3as de ant.geno0 $a a e/ita tais e os,

Imunodifuso A di%"s(o de "#a s"*stHncia so)6/e) e# "# #eio %)"ido & "# $ ocesso $e)o 1"a) a s"*stHncia & t ans$o tada0 de "#a $a te $a a o"t a0 co#o es")tado do #o/i#ento #o)ec")a ao acaso, A di%"s(o $ode se e%et"ada e# #eio ge)i%icado0 1"e i#$ede a %o #a'(o de co entes0 $o di%e en'as de te#$e at" a, Se os $o os do ge) s(o conside a/e)#ente #aio es do 1"e o ta#an+o das $a t.c")as0 a di%"s(o se ea)i!a e# #eio %)"ido, E"ando os i#"no$ eci$itados s(o %o #ados no ge) Dga 0 o ta#an+o dos ag egados %ica #aio do 1"e o diH#et o dos $o os e e/ita7se a di%"s(o dos co#$)e3os de ant.geno7antico $o, As t&cnicas de i#"nodi%"s(o detecta# a ea'(o ant.geno7 antico $o at a/&s da %o #a'(o de "# $ eci$itado, A i#"nodi%"s(o $ode se si#$)es o" d"$)a, Na i#"nodi%"s(o si#$)es0 o" o ant.geno o" o antico $o $e #anece# %i3ados ao s"$o te e o o"t o se di%"nde0 at& +a/e a $ eci$ita'(o do co#$)e3o, Na i#"nodi%"s(o d"$)a0 tanto o ant.geno co#o o antico $o se #o/e#0 "# #e di e'(o ao o"t o0 at& +a/e a $ eci$ita'(o, E# a#*os os casos0 a di%"s(o $ode se )inea I"nidi#ensiona)J o" adia) I*idi#ensiona)J,

Imunodifuso Simples em uma dimenso

O #&todo de O"din $a a a anD)ise 1"a)itati/a e 1"antitati/a dos siste#as de $ eci$ita'(o *aseia7se na di%"s(o si#$)es e# "#a di#ens(o, Nesta t&cnica0 o anti7so o & inco $o ado ao Dga 0 sendo essa #ist" a co)ocada e# "# t"*o at& %o #a "#a co)"na de C@7K@ ## de a)t" a, A$s a ge)i%ica'(o0 o ant.geno & co)ocado no to$o da co)"na, Os t"*os s(o se)ados0 $a a e/ita e/a$o a'(o0 e dei3ados a "#a te#$e at" a constante d" ante o $e .odo de o*se /a'(o0 1"e &0 e# ge a)0 de "#a se#ana, A %i# de ind"!i a di%"s(o do eagente e3te no no ge)0 s"a concent a'(o de/e se *e# #aio do 1"e a do eagente contido no ge),

Imunodifuso Radial Simples

Mancini int od"!i" "#a t&cnica de di%"s(o si#$)es $a a a dete #ina'(o 1"antitati/a de ant.genos, Neste #&todo0 o Dga & #ist" ado co# a di)"i'(o a$ o$ iada do antico $o es$ec.%ico $a a dete #inado ant.geno e a #ist" a & co)ocada e# $)aca de -et i o" )H#ina de /id o, E# )ocais a$ o$ iados do ge) s(o %eitos o i%.cios e# 1"e se co)oca# /o)"#es $ eciosos das so)"'5es de ant.geno a se e# testadas0 *e# co#o so)"'5es7$ad (o co# $e)o #enos t 2s concent a'5es con+ecidas do ant.geno, O s"$o te & inc"*ado e# cH#a a 6#ida at& 1"e oco a a di%"s(o IK9 a ;L +o asJ0 sendo ent(o dete #inada D ea do +a)o de $ eci$ita'(o %o #ado, -a a "#a dada concent a'(o de antico $o0 a D ea do +a)o %o #ado0 ao t& #ino da di%"s(o & di eta#ente $ o$o ciona) 4 concent a'(o do ant.geno, A sensi*i)idade do teste $ode /a ia co# a concent a'(o do anti7so o, U#a concent a'(o *ai3a de anti7so o a"#enta a sensi*i)idade0 #as n(o $e #ite a #edida de concent a'5es de ant.geno e# e3cesso, -o o"t o )ado0 "#a a)ta concent a'(o de anti7so o di#in"i a sensi*i)idade0 #as $e #ite a 1"anti%ica'(o de concent a'5es #aio es de ant.geno, -e)o #&todo de Fa+eM0 os +a)os de $ eci$ita'(o $ode# se #edidos antes do t& #ino da di%"s(o e0 neste caso0 o )oga it#o da concent a'(o do ant.geno & $ o$o ciona) ao diH#et o do +a)o, E#$ egando7se ant.genos7$ad (o di)".dos e# s& ie & $oss./e) const "i c" /as7$ad (o0 e as e1"a'5es 1"e desc e/e# tais c" /as $ode# se "ti)i!adas $a a a dete #ina'(o da concent a'(o de ant.geno co es$ondente a 1"a)1"e diH#et o, A sensi*i)idade destes #&todos /a ia de 8 a C NgO#) de ant.geno, U#a i#$o tante a$)ica'(o desta t&cnica & a 1"anti%ica'(o das concent a'5es de i#"nog)o*")inas s& icas,

Dupla Imunodifuso de Ouchte lon!

O #&todo *aseia7se na $ eci$ita'(o 1"e oco e na egi(o de e1"i/a)2ncia 1"ando o ant.geno e o antico $o se di%"nde# no Dga , O co#$)e3o ant.geno7 antico $o se a$ esenta so* a %o #a de )in+a o" a co de $ eci$ita'(o, A /e)ocidade de di%"s(o de cada s"*stHncia & egida $e)as )eis da di%"s(o e de$ende da concent a'(o e do ta#an+o da #o)&c")a0 do ta#an+o dos $o os do ge)0 da te#$e at" a0 da concent a'(o do Dga e de s"a $" e!a, O teste & ea)i!ado co)ocando7se "#a ca#ada de Dga e# )H#inas de /id o o" $)acas de -et i $ e/ia#ente eco*e tas co# "#a %ina ca#ada de Dga , A$s a ge)i%ica'(o0 s(o %eitos o i%.cios no Dga 0 de aco do co# o siste#a a se ana)isado, As so)"'5es contendo o ant.geno e o antico $o s(o co)ocadas nos o i%.cios do Dga 0 as $)acas o" )H#inas s(o inc"*adas e# cH#a a 6#ida co# /eda'(o a "#a te#$e at" a con/eniente e constante $o 89 a LK +o as, Cada )in+a e# "# es$ect o de $ eci$ita'(o co es$onde a "# $a de ant.geno7antico $o, A a"s2ncia do ant.geno o" do antico $o & indicada $e)a a"s2ncia da )in+a, Cada $ eci$itado %"nciona co#o "#a *a ei a $a a os

eagentes 1"e o %o #a# e i#$ede s"a di%"s(o a)&# do s.tio da $ eci$ita'(o, Essa *a ei a & i#"noes$ec.%ica e a di%"s(o de o"t os eagentes n(o & i#$edida0 a #enos 1"e a densidade dos ag egados $ o/o1"e "# o*stDc")o #ecHnico, O #&todo de O"c+te )onM $e #ite a co#$a a'(o de /D ios siste#as antig2nicos0 desde 1"e co)oca#os e# o i%.cios adFacentes cont a "# #es#o siste#a de antico $os0 %o #ando /D ios $ad 5es 1"e indica# a e3ist2ncia0 o" n(o0 de dete #inantes antig2nicos co#"ns, As )in+as %o #adas $ode# se co#$)eta#ente coa)escentes0 no caso de ant.genos co# os #es#os dete #inantes Iidentidade i#"no)gicaJP $ode# a$ esenta "# Qes$o (oR0 co#o no caso de ant.genos $a cia)#ente e)acionados Iidentidade $a cia)JP o" $ode# %o #a "#a inte se'(o0 indicando a a"s2ncia de e)a'(o ent e os ant.genos In(o7identidadeJ, E"ando os eagentes est(o e# 1"antidades *a)anceadas0 a )in+a de $ eci$ita'(o %o #ada te D a c" /at" a /o)tada $a a o o i%.cio 1"e cont&# a s"*stHncia de #aio $eso #o)ec")a 0 1"e se di%"nde #ais )enta#ente, O #&todo $ode se "ti)i!ado $a a a/a)ia'5es se#i1"antitati/as 1"ando se con+ece a es$eci%icidade das )in+as de $ eci$ita'(o0 co#o0 $o e3e#$)o0 na tit")a'(o de ant.genos o" de antico $os, -ode#7se ca acte i!a ant.genos de /D ios agentes in%ecciosos e#$ egando7se antico $os de es$eci%icidade e eati/idade con+ecidas, A %o #a'(o de "#a 6nica )in+a de $ eci$ita'(o dD ind.cios da $" e!a do ant.geno o" do antico $o0 $o &# de "# #odo #"ito $ eciso, O #&todo a$ esenta /D ias )i#ita'5es $ois e1"e 89 a LK +o as de di%"s(o $a a 1"e a ea'(o se $ ocesse0 n(o sendo 6ti) e# casos e# 1"e se necessita de "# #&todo D$ido de diagnstico, Ao #es#o te#$o0 a$ esenta "#a sensi*i)idade *ai3a e )i#ita7se 4 detec'(o de ea'5es ant.geno7antico $o e# 1"e +D %o #a'(o de $ eci$itados,

Elet oimunodifuso Nas t&cnicas de i#"nodi%"s(o0 o ant.geno e o antico $o ent a# e# contato e $ eci$ita# no Dga $o "# $ ocesso de di%"s(o, -o &#0 a /e)ocidade de $ eci$ita'(o $ode se #"ito a"#entada se a #ig a'(o %o di igida $o "# ca#$o e)&t ico0 co#o no caso da e)et oi#"nodi%"s(o, EstD t&cnica te# sido e#$ egada na detec'(o de ant.geno,

Elet oimunodifuso Dupla Unidimensional

O $ inc.$io *Dsico do #&todo & a e)et o%o ese do ant.geno e do antico $o si#")tanea#ente0 1"e #ig a# e# di e'5es o$ostas a $a ti dos o i%.cios se$a ados do ge)0 es")tando na $ eci$ita'(o e# "# $onto inte #ediD io ent e as s"as o igens, Este #&todo e1"e 1"e o ant.geno e o antico $o e# teste a$ esente# di%e entes #o*i)idades e)et o%o &ticas, O $B do ta#$(o de/e se esco)+ido a %i# de oti#i!a os e%eitos e)et oendos#ticos do antico $o $a a o catodo I$)o negati/oJ0 en1"anto o ant.geno se #o/e e# di e'(o do anodo I$)o $ositi/oJ,

Elet oimunodifuso Simples Unidimensional

Nesta t&cnica0 o anti7so o es$ec.%ico $a a o ant.geno o" ant.genos 1"e se 1"e 1"anti%ica & inco $o ado ao ge)0 1"e & co)ocado e# )H#ina de /id o n"#a $osi'(o %i3a de #odo 1"e o antico $o n(o #ig e, O #ate ia) contendo o ant.geno & co)ocado e# "# $e1"eno o i%.cio e & s"*#etido a "#a e)et o%o ese, O $ad (o de i#"no$ eci$ita'(o es")tante se asse#e)+a a "# %og"ete, Esse $ad (o oco e $o 1"e a $ eci$ita'(o se %o #a nas #a gens )ate ais dos )i#ites do ant.geno /ai $ eci$itando0 s"a concent a'(o di#in"i0 e as #a gens )ate ais con/e ge# $a a "#a $onta, A distHncia tota) de #ig a'(o do ant.geno $a a "#a dada concent a'(o de anti7so o & )inea #ente $ o$o ciona) 4 concent a'(o do ant.geno,

A"#UTINAO A ea'(o de ag)"tina'(o ca acte i!a7se $e)a %o #a'(o de ag egados /is./eis co#o es")tado da inte a'(o de antico $os es$ec.%icos e $a t.c")as inso)6/eis 1"e cont2# dete #inantes antig2nicos e# s"a s"$e %.cie, A ag)"tina'(o $ode oco e tanto co# $a t.c")as 1"e a$ esenta# dete #inantes antig2nicos nat" ais e# s"a s"$e %.cie I+e#Dcias0 *act& ias0 $ oto!oD ios0 etc,J co#o co# $a t.c")as ine tes I$a t.c")as de )Dte30 $o)iesti eno0 *entonita0 etc,J0 o" #es#o co# c&)")as antigenica#ente n(o e)acionadas I+e#Dcias0 *act& iasJ 4s 1"ais se adso /e# o" se %i3a# ant.genos so)6/eis, No $ i#ei o caso0 a ea'(o & dita ag)"tina'(o di eta0 e no seg"ndo0 ag)"tina'(o indi eta o" $assi/a, As ea'5es de ag)"tina'(o s(o #"ito e#$ egadas $a a o diagnstico )a*o ato ia) de doen'as ca"sadas $o /. "s0 *act& ias0 $ oto!oD ios e %"ngos0

doen'as a"to7i#"nes0 na detec'(o de +o #Hnios0 na ti$age# de g "$os sang".neos dos siste#as AAO e <+0 etc, Os testes de ag)"tina'(o $ode# se ea)i!ados e# t"*os o" $)acas, Se o so o $oss"i "# e)e/ado t.t")o de antico $os ag)"tinantes0 $ode7se o*se /a o %enG#eno de $ o!ona0 o*tendo7se %a)sos es")tados negati/os, Esse e%eito & e)i#inado e#$ egando7se di)"i'5es se iadas do so o,

Teste de A$lutina%o Di eta Na ea'(o de ag)"tina'(o di eta "ti)i!a#7se $a t.c")as antig2nicas inso)6/eis e# s"a %o #a .nteg a o" % ag#entada, Be#Dcias0 *act& ias0 %"ngos0 $ oto!oD ios $ode# se ag)"tinados di eta#ente $o antico $o, Os testes $a a detecta antico $os es$ec.%icos s(o ea)i!ados e#$ egando7se di)"i'5es e# s& ie do antico $o0 % ente a "#a 1"antidade constante de ant.geno, A$s "# $e .odo de inc"*a'(o0 a ag)"tina'(o se co#$)eta e o es")tado & ge a)#ente e3$ esso co#o o t.t")o do anti7so o0 isto &0 a #D3i#a di)"i'(o e# 1"e oco e a ag)"tina'(o,

Teste de Ini&i%o de 'ema$lutina%o Di eta

A ini*i'(o da +e#ag)"tina'(o di eta & *aseada na ca$acidade 1"e ce tos ant.genos /i ais t2# de0 es$ontanea#ente0 ag)"tina e# ce tos ti$os de +e#Dcias, Os antico $os0 se $ esentes na a#ost a0 e/este# as $a t.c")as /i ais0 es")tando na ini*i'(o da ag)"tina'(o0 indicando "# teste $ositi/o $a a a $ esen'a de antico $os, Estes testes n(o disting"e# ent e IgG e IgM, Este #&todo & "sado $a a detecta antico $os cont a o /. "s da "*&o)a0 sa a#$o0 in%)"en!a e ce tos ente o/. "s,

Teste de A$lutina%o Passi(a ou indi eta -a a o teste de ag)"tina'(o $assi/a0 as +e#Dcias e as $a t.c")as ine tes I)Dte30 *entonita0 Qse$+a oseR0 )e/ed" as0 etc,J $ode# se sensi*i)i!adas $o adso '(o $assi/a0 de/ida ao contato di eto co# os ant.genos so)6/eis0 $o adso '(o /ia agentes 1".#icos0 co#o Dcido tHnico0 c)o eto de c o#o e $o conF"ga'(o do ant.geno0 $o #eio de )iga'5es 1".#icas co/a)entes0 %o necendo eagentes estD/eis, De/ido 4 g ande di/e sidade de ant.genos 1"e $ode# se )iga 4s c&)")as o" $a t.c")as0 a a$)ica'(o dos testes de ag)"tina'(o $assi/a & #"ito /a iada,

Teste de 'ema$lutina%o Passi(a

A /e i%ica'(o de AoMden0 e# 8:@80 de 1"e $ ote.nas $odia# se adso /idas a +e#Dcias t atadas co# Dcido tHnico e 1"e essas c&)")as $odia# se ag)"tinadas $o antico $os es$ec.%icos $ossi*i)ito" o e#$ ego dos #&todos de ag)"tina'(o $a a a detec'(o de antico $os cont a /D ias s"*stHncias, Be#Dcias est(o ent e os #e)+o es s"$o tes de ant.genos $a a os testes de ag)"tina'(o0 $ois +D "#a s& ie de ant.genos 1"e $ode se )igada 4 s"a s"$e %.cie $a a %o nece "# siste#a indicado sens./e) na detec'(o de antico $os, A)&# disso0 os testes e# $)aca $e #ite# 1"e a dete #ina'(o do $onto %ina) da ea'(o seFa %eita di eta#ente, Be#Dcias $oss"e# "#a s"$e %.cie co#$)e3a0 o 1"e %aci)ita a )iga'(o de #"itos ant.genos e0 % e1Sente#ente0 aca eta a $ esen'a de antico $os +ete %i)os no so o de #"itos ani#ais, Tais antico $os de/e# se e#o/idos antes da e3ec"'(o do teste, Ant.genos $o)issaca .deos $ onta#ente ade e# a +e#Dcias0 en1"anto ant.genos $ ot&icos e1"e e# $ &7t ata#ento co# Dcido tHnico o" c)o eto de c o#o, O teste e# $)aca "ti)i!a $e1"enas 1"antidades de eagentes e & conside ado $ositi/o 1"ando se /e i%ica a %o #a'(o de ta$ete co* indo o %"ndo da ca/idade da $)aca e# Q>R0 e negati/o 1"ando as +e#Dcias sedi#enta# %o #ando "# Q*ot(oR co#$acto, O t.t")o da a#ost a testada se D a #D3i#a di)"i'(o e# 1"e ainda se o*se /a a %o #a'(o do ta$ete, O teste detecta antico $os das c)asses IgG e IgM e0 e#*o a os antico $os IgM seFa# ;@? /e!es #ais e%icientes na ag)"tina'(o 1"e os IgG0 a 1"antidade de ant.geno necessD ia $a a se o*te a #D3i#a eati/idade co# IgM & #"ito #aio do 1"e a necessD ia $a a a #D3i#a eati/idade co# IgG, E#$ egando7 se +e#Dcias sensi*i)i!adas co# ant.genos $ ot&icos0 1"ando ade1"ada#ente $ad oni!ado0 o teste detecta antico $os e# n./eis de concent a'(o de ?0?8 NgO#), BD /D ios siste#as co#e ciais $a a a $es1"isa de antico $os 1"e "ti)i!a# esta t&cnica0 ent e e)es0 os siste#as de Trypanossoma cruzi, Treponema pallidum, Toxoplasma gondii,etc,

Teste de Ini&i%o de 'ema$lutina%o Passi(a

O teste de ini*i'(o de +e#ag)"tina'(o $assi/a & sens./e) e es$ec.%ico na detec'(o de $e1"enas 1"antidades de ant.genos so)6/eis0 +a$tenos o" antico $os 1"e co#$ete# co# a s"*stHncia +o#)oga co# 1"e a +e#Dcia %oi sensi*i)i!ada, O $ inc.$io do teste *aseia7se na co#$eti'(o0 $e)os s.tios de co#*ina'(o do antico $o0 ent e o ant.geno %i3ado 4 +e#Dcia e o ant.geno so)6/e) o" o +a$teno, O g a" de ini*i'(o e)aciona7se co# a 1"antidade do ant.geno

$ esente na a#ost a e0 ta#*&# co# a a%inidade $e)os s.tios de co#*ina'(o do antico $o, Este #&todo e1"e $e1"enas 1"antidades de eagentes0 detecta ant.geno na o de# de ?08 a 8? NgO#)0 a$ esenta es$eci%icidade e)e/ada e $ode se e#$ egado e# siste#as e# 1"e ant.genos so)6/eis ainda n(o %o a# o*tidos, Te# sido e#$ egado na detec'(o de ant.geno na +e$atite e na +e#o%i)ia,

Teste de A$lutina%o do #)te*

-a t.c")as de )Dte3 s(o es%e as de $o)iesti eno 1"e $ode# se "ti)i!adas co#o s"$o tes na adso '(o de $ ote.na so)6/e) e ant.genos $o)issaca .dicos0 %"ncionando co#o siste#a indicado da ea'(o ant.geno7antico $o, O teste $ode se e#$ egado na $es1"isa de ant.genos o" de antico $os, A a$)ica'(o #ais co#"# & na detec'(o do %ato e"#atide 0 1"e & antico $o da c)asse IgM $enta#& ico di igido cont a IgG, Adso /endo IgG $assi/a#ente Ds $a t.c")as do )Dte30 +a/e D a e3$osi'(o dos dete #inantes de IgG 1"e eage# co# o %ato e"#atide0 es")tando e# ag)"tina'(o, Este #&todo & #ais sens./e) e #enos es$ec.%ico 1"e a +e#ag)"tina'(o $assi/a $a a a detec'(o de %ato e"#atide, O %ato e"#atide de/e se "# a"to7antico $o 4 $o '(o Fc de IgG ag egada o" a)te ada0 oco endo doen'as a"to7i#"nes0 e# $ ocesso ag"dos o" c Gnicos0 e# doen'as e"#Dticas0 e# doen'as in%ecciosas0 degene ati/as0 etc,,Ta#*&# & e#$ egada na $es1"isa da $ ote.na C 1"e a$a ece no so o de $acientes na %ase ag"da de /D ias in%ec'5es0 co#o esta%i)occica o" est e$toccica0 %e* e e"#Dtica0 etc,

ENSAIOS #+TICOS

Teste de ,i*a%o do Complemento A )iga'(o ant.geno7antico $o $ o#o/e a %ia'(o do co#$)e#ento0 c"Fo cons"#o0 in/it o0 $ode se e#$ egado $a a detecta a $ esen'a de antico $os0 ant.genos o" a#*os, O teste "ti)i!a "# siste#a +o#og2neo In(o & $ eciso a se$a a'(o ent e %asesJ e & ea)i!ado e# d"as eta$as, Na $ i#ei a eta$a0 o ant.geno & inc"*ado0 na %ase %)"ida0 na $ esen'a de "#a 1"antidade de%inida de co#$)e#ento, Se o ant.geno e o antico $o co es$ondentes esti/e e# $ esentes0 a cascata do co#$)e#ento se D ati/ada $e)a /ia c)Dssica e +a/e D cons"#o de co#$)e#ento, Na seg"nda eta$a0 adiciona7se o siste#a indicado da ea'(o 1"e consiste e# +e#Dcias de ca nei o sensi*i)i!adas co# +e#o)isina

Iantico $o anti7+e#Dcias de ca nei o o*tido e# coe)+osJ, A #edida da ati/idade +e#o).tica do co#$)e#ento no siste#a indicado $e #ite dete #ina a $ esen'a o" n(o de ant.geno o" antico $o na #ist" a inicia) e s"a 1"antidade, A ati/idade +e#o).tica e#anescente $ode se 1"anti%icada e#$ egando7se di)"i'5es se iadas da a#ost a a se ana)isada, Tanto o antico $o co#o o ant.geno de/e# se destit".dos de a'(o antico#$)e#enta 0 o" seFa0 n(o $ode# ati/a o co#$)e#ento se$a ada#ente, O co#$)e#ento de/e se o*tido de so o de co*aia e co)+ido e estocado de #anei a a$ o$ iada $a a $ ese /a'(o da ati/idade +e#o).tica, Antico $os +"#anos IgM0 IgG80 IgGL e IgGC %i3a# co#$)e#ento $e)a /ia di eta0 en1"anto o IgA %i3a co#$)e#ento $e)a /ia a)te nati/a, O teste $ode se 1"a)itati/o o" 1"antitati/o, O #&todo 1"a)itati/o *aseia7se na tit")a'(o do co#$)e#ento esid"a) 1"e n(o %oi cons"#ido $e)a ea'(o ant.geno7antico $o co# o siste#a indicado , Esse #&todo0 e#*o a sens./e)0 & #"ito )a*o ioso $a a %ins diagnsticos, O #&todo 1"antitati/o $oss"i #"itas /a ia'5es t&cnicas0 ent e as 1"ais o #ic o#&todo0 1"e $e #ite e/e)a 1"antidades #.ni#as de co#$)e#ento %i3ado, At"a)#ente0 e#*o a +aFa testes *e# #ais sens./eis0 ainda & "ti)i!ado na so o)ogia da doen'a de C+agas0 da s.%i)is e de /D ios /. "s0 icTettsias e %"ngos, A$ esenta a /antage# de $ode se e#$ egado $a a di%e entes siste#as se# #"da os $a H#et os do teste0 $o &# & co#$)e3o e t a*a)+oso,

TESTE DE I-UNO,#UORESC.NCIA O teste de i#"no%)"o esc2ncia & "# dos #ais "ti)i!ados no diagnsticos de )a*o at io $a a a $es1"isa de antico $os e cada /e! #ais co# antico $os #onoc)onais $a a a $es1"isa de #ic o ganis#os e se"s co#$onentes e# es$&ci#es c).nicas, Aaseia7se na ca$acidade das #o)&c")as de antico $o se )iga e# co/a)ente#ente a %)"o oc o#os se# $e de s"a eati/idade es$ec.%ica co# o ant.geno, Teste de Imunofluo esc/ncia Di eta O teste de i#"no%)"o esc2ncia di eta & e#$ egado na $es1"isa e na )oca)i!a'(o de ant.genos e# c&)")as o" tecidos at a/&s de "# antico $o es$ec.%ico #a cado co# %)"o oc o#o IconF"gadoJ, O conF"gado se %i3a ao ant.geno0 %o #ando "# i#"noco#$)e3o estD/e), O antico $o n(o )igado & e#o/ido $o )a/agens e o $ e$a ado & o*se /ado e# #ic osc$io de %)"o esc2ncia, O teste te# sido "ti)i!ado $a a a $es1"isa de Chlamydia trachomatis, Treponema pallidum, Legionnella sp, Escherichia coli, est e$tococos U7 +e#o).tico do g "$o A e /D ios /. "s0 co# os do +e $es si#$)es ti$o 8 e L0 o

cito#ega)o/. "s0 os da in%)"en!a ti$o A e A0 os da $a ain%)"en!a 80L e C0 o da /a ice)a7!oste e o adeno/. "s, Teste de Imunofluo esc/ncia Indi eta A sensi*i)idade dos testes de i#"no%)"o esc2ncia & )i#itada ao n./e) de %)"o esc2ncia detectD/e) $e)o o)+o +"#anoP $o isso0 o teste de i#"no%)"o esc2ncia indi eta te# sido e#$ egado $a a a#$)i%ica o sina) e a"#enta a sensi*i)idade, -ode se e#$ egado na $es1"isa de ant.genos o" de antico $os, V Pa a a Pes0uisa de Ant1$enos Consiste na inc"*a'(o da c&)")a o" tecido e# 1"e se 1"e $es1"isa o ant.geno co# o antico $o es$ec.%ico o*tido e# ani#a) con+ecido o" #onoc)ona)0 )e/ando a %o #a'(o de "# i#"noco#$)e3o, A$s a )a/age#0 a $ e$a a'(o & inc"*ada co# "# conF"gado de antii#"nog)o*")ina $ od"!ida e# o"t a es$&cie de ani#a), V Pa a a Pes0uisa de Antico pos Ant.genos $ad oni!ados s(o %i3ados a )H#inas de /id o, O so o do $aciente & di)".do0 co)ocado so* e o ant.geno e inc"*ado $a a $e #iti a %o #a'(o do co#$)e3o ant.geno7antico $o, A$s )a/agens0 a $ e$a a'(o & inc"*ada co# o conF"gado %)"o escente e0 se +o"/e antico $o no so o0 o conF"gado eage co# o antico $o es$ec.%ico $a a o ant.geno, T2CNICAS CO- -ARCADORES RADIOATI3OS Radioimunoensaio O adioi#"noensaio & "# dos #&todos #ais sens./eis $a a a anD)ise 1"antitati/a das ea'5es ant.geno7antico $o0 $e #itindo #edidas D$idas e $ ecisasP #es#o e# $ e$a a'5es n(o $" i%icadas0 a$ esenta )i#ia de detec'(o da o de# de nanog a#as o" $icog a#as, Co# )i#ita'5es destaca#7se o c"sto do teste0 a /ida #&dia dos eagentes e o isco o$e aciona), O adioi#"noensaio $ode se "ti)i!ado $a a 1"anti%ica +o #Gnios0 d ogas0 #a cado es t"#o ais0 a)& genos e antico $os e ant.genos e# doen'as $a asitD ias, BD #"itas /a ia'5es0 #as o $ inc.$io & o #es#oW a 1"antidade de eagente #a cado Iant.geno o" antico $oJ 1"anti%ica o ant.geno o" antico $o n(o7#a cado na a#ost a, V Radioimunoensaio Di eto No adioi#"noensaio di eto0 "#a 1"antidade %i3a e )i#itada de antico $o & )igada a "# s"$o te s)ido, Adiciona7se "#a 1"antidade %i3a e $e1"ena de ant.geno #a cado0 #ist" ada co# "#a a#ost a e# teste o" co# as so)"'5es $ad (o 1"e cont2# concent a'5es con+ecidas do ant.geno n(o7#a cado, A$s "# $e .odo de inc"*a'(o0 e#o/e7se o ant.geno n(o )igado e %a!7se a #edida da adioati/idade da %ase s)ida, A $a ti da es$osta o*tida0 a concent a'(o do ant.geno e# teste & esti#ada $o inte $o)a'(o na c" /a, V Radioimunoensaio de competi%o

No adioi#"noensaio de co#$eti'(o0 "#a 1"antidade %i3a do ant.geno & i#o*i)i!ada e# "# s"$o te s)ido, Adiciona7se "#a 1"antidade %i3a de antico $o #a cado es$ec.%ico0 #ist" ada co# a a#ost a e# teste o" "#a s& ie de so)"'5es $ad (o co# concent a'5es /a iadas do ant.geno so)6/e), A$s "# $e .odo de inc"*a'(o0 o antico $o #a cado 1"e n(o se )igo" 4 %ase s)ida e o ant.geno so)6/e) s(o e#o/idos $o )a/age# e %a!7se a #edida da adioati/idade da %ase s)ida, A $a ti da es$osta o*tida0 a concent a'(o do ant.geno e# teste & esti#ada $o inte $o)a'(o na c" /a, V Radioimunoensaio de captu a No adioi#"noensaio de ca$t" a0 "#a 1"antidade %i3a de antico $o & i#o*i)i!ada e# "# s"$o te, A so)"'(o teste0 co# 1"antidade descon+ecida de ant.geno0 o" as so)"'5es $ad (o0 co# concent a'5es con+ecidas do ant.geno s(o adicionadas, A$s a inc"*a'(o0 e#o/e7se o ant.geno n(o7)igado e adiciona#7se antico $os #a cados es$ec.%icos $a a o ant.geno0 co# s.tio de )iga'(o di%e ente do s.tio do antico $o de %ase s)ida, O antico $o #a cado n(o7)igado & e#o/ido $o )a/age# e %a!7se a #edida da adioati/idade da %ase s)ida, A $a ti da es$osta o*tida0 a concent a'(o do ant.geno e# teste & esti#ada $o inte $o)a'(o na c" /a, T2CNICAS I-UNOEN4I-5TICAS As t&cnicas i#"noen!i#Dticas s(o *aseadas na "ti)i!a'(o de ant.genos o" antico $os #a cados co# en!i#as e $e #ite# a detec'(o0 tit")a'(o e 1"anti%ica'(o de s"*stancias de inte esse *io)gico, Imunope o*idase As t&cnicas $a a )oca)i!a'(o de constit"intes ce)")a es seg"e# o #es#o $ inc.$io da i#"no%)"o esc2ncia0 co# a di%e en'a de 1"e0 e# /e! do %)"o oc o#o0 e#$ ega7se a en!i#a0 1"e te# #aio ca$acidade de a#$)i%ica'(o, A en!i#a con/e te o co#$onente c o#geno Is"*st atoXdoado de +id og2niosJ e# $ od"to inso)6/e) 1"e $ eci$ita no s.tio da ea'(o, Esses $ eci$itados $ode# se /is./eis ao #ic osc$io e)et Gnico, En6imaimunoensaio O en!i#ai#"noensaio & "# #&todo 1"antitati/o e# 1"e a ea'(o ant.geno7 antico $o & #onito ada $o #edida da ati/idade en!i#Dtica, Dese#$en+a "# $a$e) #"ito i#$o tante no )a*o at io c).nico0 $ois0 a)&# da e)e/ada sensi*i)idade co#$a D/e) 4 do adioi#"noensaio0 a$ esenta /antagens de "ti)i!a eagentes estD/eis0 esta )i/ e das e3ig2ncias de t a*a)+a co# adioisto$os e $ode se ada$tado tanto a testes si#$)es co#o 4 a"to#a'(o so%isticada, U#a ca acte .stica co#"# ent e adioi#"noensaio e en!i#ai#"noensaio & 1"e a#*os #ede#0 di eta#ente0 a inte a'(o ent e o ant.geno e o antico $o0

n(o de$endendo de "# seg"ndo %enG#eno co#o $ eci$ita'(o0 ag)"tina'(o o" %i3a'(o de co#$)e#ento, O en!i#ai#"noensaio %oi c)assi%icado e# dois ti$osW +o#og2neo e +ete og2neo, Nos ensaios +o#og2neos n(o & necessD ia a se$a a'(o ent e os co#$)e3os ant.geno7antico $o e o ant.geno eOo" o antico $o )i/ es0 $ois a inte a'(o ant.geno7antico $o #od")a a ati/idade da en!i#a, Nos ensaios +ete og2neos0 a se$a a'(o & necessD ia0 $ois a ati/idade da en!i#a n(o & a)te ada $e)a ea'(o ant.geno7antico $o, Os ensaios +o#og2neos s(o #ais "ti)i!ados $a a a detec'(o de +a$tenos e os +ete og2neos $a a a detec'(o de #o)&c")as #aio es, E#ISA 7En6!me8lin9ed Immunoso &ent Assa!: Esse teste %oi desen/o)/ido co#o "#a a)te nati/a ao adioi#"noensaio $a a a detec'(o de ant.genos e antico $os, O se" $ inc.$io *Dsico & a i#o*i)i!a'(o de "# dos eagentes e# "#a %ase s)ida0 en1"anto o"t o eagente $ode se )igado a "#a en!i#a0 co# $ ese /a'(o tanto da ati/idade en!i#Dtica co#o da i#"no)gica do antico $o, O teste detecta 1"antidades e3t e#a#ente $e1"enas de ant.genos o" antico $os0 $odendo te e)e/ada $ ecis(o se os eagentes e os $a H#et os do ensaio %o e# *e# $ad oni!ados, Es$ecia) aten'(o de/e se dada a %ase s)ida0 c"Fas $ o$ iedades $ode# /a ia de aco do co# a co#$osi'(o, O g a" de $" e!a do ant.geno o" do antico $o da %ase s)ida & #"ito i#$o tante0 $ois 1"a)1"e #ate ia) +ete )ogo co#$eti D $e)o es$a'o na $)aca, O o*Feti/o do ensaio & a 1"anti%ica'(o o" /e i%ica'(o da $ esen'a de "# ant.geno o" antico $o S#,IA 7Su&st ate8#a&elled ,luo escent Immunoassa!: -ode se "ti)i!ado $a a detecta eagentes de a)to e *ai3o $eso #o)ec")a , Foi desen/o)/ido $e)a A#es Co#$anM o% Mi)es La*o ato ies, No ensaio0 "# s"*st ato %)"o og2nico da U7ga)actosidase & )igado co/a)ente#ente a "# ant.geno $ ot&ico o" +a$teno, Se o antico $o es$ec.%ico eage co# ant.geno0 a en!i#a U7ga)actosidase n(o c)i/a o s"*st ato0 $o i#$edi#ento est& ico, Se a a#ost a ti/e ant.geno0 este se )iga D ao antico $o e o s"*st ato )igado ao ant.geno %ica D )i/ e e eagi D co# a en!i#a $a a %o #a o $ od"to %)"o escente, O g a" de %)"o esc2ncia & $ o$o ciona) 4 1"antidade de ant.geno na a#ost a,

;i&lio$ afia<
Fe ei a0 A, Yatte P Z/i)a0 Sand a L,M, Diagnstico La*o ato ia) ,8::[0 edito a G"ana*a a =oogan0 <io de \anei o 7 <\,