UNIVERSIDADE FEDERAL DO VALE DO SO FRANCISCO GRADUAO EM CINCIAS FARMACUTICAS

Deteco de HBsAg por teste ELISA

Disciplina de Imunologia Cl nica Docen!e Respons"#el$ %&o'( Rod&igo Feliciano do Ca&mo

%e!&olina ) %E *+ , *- , .*/0

12R1ARA 3ENTURINI FERNANDES CAMI4A CAR3A45O DOS SANTOS DANIE4E O4I3EIRA SIMO FERNANDO 3ANRA6 SI43A RODRIGUES MANOE4 6OS7 DE 4IMA NETO

Deteco de HBsAg por teste ELISA

Rela!8&io de aula p&"!ica ap&esen!ado 9 disciplina de Imunologia Cl nica: do Cu&so de G&adua;<o em Ci=ncias Fa&mac=u!icas da Uni#e&sidade Fede&al do 3ale do S<o F&ancisco: como &e>uisi!o pa&cial pa&a o?!en;<o da no!a 'inal@

%e!&olina ) %E *+ , *- , .*/0

1 INTRODUO A in'ec;<o pelo # &us da Aepa!i!e 1 B351C D um impo&!an!e p&o?lema de saEde pE?lica em !odo o mundo: especialmen!e en!&e os pa ses em desen#ol#imen!o: e se !&a!a de uma doen;a ?em conAecida do pon!o de #is!a cl nico: la?o&a!o&ial e epidemiol8gico: sendo a nona causa de mo&!alidade no mundo B%IN5EIROF GEITOUNE: .**HF SOUTO e! al: .**/C@ O 351 D !&ansmi!ido po& !&ans'us<o de sangue e Aemode&i#ados: !&ansplan!e de 8&g<os: Aemodi"lise: alei!amen!o ma!e&no: con!amina;<o de agulAas: se&ingas e ma!e&iais in!&a#enosos: e po& #ia seIual: des!acandoJse o papel de 'luidos o&gKnicos: como o s=men e a sali#a B3A4ENTEF CO3ASF %ASSOS: .**LC@ O 351 pode causa& doen;a Aep"!ica aguda e c&Mnica@ Ap8s um pe& odo de incu?a;<o de ce&ca de 0L a /H* dias: os indi# duos in'ec!ados desen#ol#em >uad&o de Aepa!i!e aguda: na maio&ia das #eNes su?cl nica e anic!D&ica@ Apenas .*O e#oluem com ic!e& cia e em ce&ca de *:.O dos pacien!es: a doen;a assume ca&"!e& 'ulminan!e com al!a le!alidade@ Classicamen!e: admi!eJse >ue a in'ec;<o aguda pelo 351 e#olui pa&a a cu&a em P*O a PLO dos casos: e pa&a o es!ado de po&!ado& c&Mnico nos &es!an!es LO a /*O@ Me!ade desses po&!ado&es n<o ap&esen!a doen;a Aep"!ica: mas a ou!&a me!ade mos!&a sinais de a!i#idade in'lama!8&ia no ' gado: de #a&iada in!ensidade: po& mui!os anos: podendo desen#ol#e& ci&&ose Aep"!ica e,ou Aepa!oca&cinoma nas 'ases mais !a&dias da doen;a BFERREIRA: .***C@ O diagn8s!ico de >ual>ue& das 'o&mas cl nicas da Aepa!i!e 1 &ealiNaJse a!&a#Ds de !Dcnicas so&ol8gicas: sendo o p&incipal ma&cado& de in'ec;<o: o an! geno p&esen!e na supe&' cie do # &us conAecido como 51sAg BFERREIRA: .***C@ Esse ma&cado& encon!&aJse p&esen!e no sangue e em di#e&sos l >uidos co&po&ais como sali#a: sec&e;<o #aginal e l >uido seminal de po&!ado&es desse # &us: os >uais es!<o &elacionados di&e!amen!e com p&opaga;<o e pe&pe!ua;<o da in'ec;<o em popula;Qes Aumanas: e D de!ec!ado na a!ualidade #ia !Dcnicas imunoenNim"!icas BE4ISAC B1RASI4 e! al: .**-F FERREIRA: .***C@ O E4ISA Bdo ingl=s: EnNRme 4inSed Immuno So&?en! AssaRC pe&mi!e a de!ec;<o de an!ico&pos e an! genos espec 'icos no plasma e so&o sangu neo: sendo a &ea;<o desen#ol#ida: '&e>uen!emen!e: em mic&oplacas con!endo #"&ios po;os onde s<o deposi!ados os &eagen!es@ Os mD!odos se ?aseiam na iden!i'ica;<o de an!ico&pos ou an! genos po& an!ico&pos ma&cados com uma enNima: ge&almen!e a

pe&oIidase: de manei&a >ue es!a enNima age so?&e um su?s!&a!o c&omog=nico e a &ea;<o 'aN com >ue es!e mude de co&@ EIis!em #"&ias manei&as BmD!odosC de se p&ocessa& o ensaio imunoenNim"!ico: sendo uma delas o mD!odo de sandu cAe: ou cap!u&a: indicado pa&a iden!i'ica;<o de an! genos: no >ual es!e an! geno 'ica en!&e dois an!ico&pos: um p&e#iamen!e p&eso 9 placa e um conec!ado a enNima &espons"#el pela con#e&s<o do su?s!&a!o c&om8geno BTUA4IMUNE: .*/0C@

OB!ETIVOS

"1 O#$et%&o ger'( De!ec!a& an! genos do # &us 513 B51sAgC em amos!&as de so&o u!iliNando o Si! 1ioelisaU@ "1 O#$et%&os espec)*%cos RealiNa& o p&ocesso &e'e&en!e ao !es!e E4ISA !ipo sandu cAeF Calcula& os #alo&es u!iliNados pa&a o con!&ole de >ualidade e a #alida;<o do !es!eF Calcula& os &esul!ados das amos!&asF In!e&p&e!a& os &esul!ados o?!idos na &ealiNa;<o do !es!e@

+ ,ETODOLO-IA

+"1 ,'ter%'%s E%IVS BWaleco: lu#as: !ouca: 8culosCF %ipe!as au!om"!icasF %on!ei&asF Amos!&as de so&oF 4ei!o& de mic&oplacas de E4ISAF Xi! 1ioelisaU 51sAg -@*F Incu?ado&aF C&onMme!&oF 2gua des!iladaF +" Et'p's do proced%.e/to /@ DiluiuJse a solu;<o de la#agem do Si!: &esul!ando em um #olume co&&esponden!e a la#agem de H po;os du&an!e !odo o p&ocesso@ -L* Y4 po& po;o Z + la#agens [ ./** Y4 Z H po;os [ /+H** Y4 !o!al \ .* m4 Dilui;<o de /$/* J . m4 de solu;<o ] /H m4 de "gua des!ilada .@ DiluiuJse o conWugado concen!&ado segundo as ins!&u;Qes da !a?ela / do manual do Si! pa&a a p&epa&a;<o de H po;os@
Ta?ela /@ Es>uema de dilui;<o do conWugado

Ti&as &e>ue&idas Diluen!e do conWugado m4 ConWugado concen!&ado Y4 -@ Cons!&uiuJse o mapa da placa de !&a?alAo@

/ /:* .*

Ta?ela .@ Mapa da placa

1&anco Con!&ole Nega!i#o Con!&ole Nega!i#o Con!&ole Nega!i#o Con!&ole %osi!i#o Amos!&a / Amos!&a . Amos!&a 0@ %ipe!ouJse /** Y4 da solu;<o de Con!&ole Nega!i#o BCNC nos po;os &e'e&en!es ao CN: /** Y4 da solu;<o de Con!&ole %osi!i#o BC%C no po;o co&&esponden!e ao C% e /** Y4 de cada amos!&a de so&o em seus &espec!i#os po;os@ L@ A placa 'oi co?e&!a com o adesi#o p&esen!e no Si! e le#ada 9 incu?ado&a du&an!e /A 9 -^(C@ +@ Ap8s sai& da incu?ado&a: os po;os u!iliNados 'o&am la#ados manualmen!e #eNes com -L* Y4 da solu;<o de la#agem e secados ap&op&iadamen!e@ ^@ AdicionouJse /** Y4 da solu;<o dilu da do conWugado an!ico&po,pe&oIidase 9 !odos os po;os com eIce;<o do ?&anco@ H@ A placa 'oi !ampada com um no#o adesi#o no#amen!e e incu?ada du&an!e -* minu!os 9 -^(C@ P@ Du&an!e os El!imos LJ/* minu!os des!a incu?a;<o: p&epa&ouJse a solu;<o de su?s!&a!oJc&om8geno segundo a !a?ela . do manual do Si!@
Ta?ela -@ Es>uema de dilui;<o do su?s!&a!oJc&omDgeno

Ti&as &e>ue&idas Tamp<o su?s!&a!o m4 C&om8geno BTM1C Y4

/ /:* .*

/*@ Ap8s o !D&mino dos -* minu!os: os po;os u!iliNados na placa 'o&am la#ados no#amen!e com -L* Y4 de solu;<o de la#agem du&an!e - #eNes &epe!idas@ Em seguida: os po;os 'o&am secados de#idamen!e@ //@ AdicionouJse /** Y4 do su?s!&a!oJc&om8geno e espe&ouJse -* minu!os@ /.@ Ap8s o !D&mino dos -* minu!os: 'oi adicionado a cada po;o /** Y4 da solu;<o de pa&ada B"cido sul'E&ico /NC@ /-@ A placa 'oi lida em espec!&o'o!Mme!&o em comp&imen!o de onda de 0L* nm@

0 RESULTADOS E DISCUSS1ES Com a lei!u&a em espec!&o'o!Mme!&o: o?!i#e&amJse os seguin!es #alo&es de a?so&?Kncia de cada po;o u!iliNado na placa de E4ISA BTa?ela 0C@
Ta?ela 0@ 3alo&es de a?so&?Kncia do !es!e E4ISA

,'p' d' p('c' 1&anco Con!&ole Nega!i#o Con!&ole Nega!i#o Con!&ole Nega!i#o Con!&ole %osi!i#o Amos!&a / Amos!&a . Amos!&a -

A#sor#2/c%' *:*.^ nm *:*00 nm *:*.H nm *:/.P nm .:*+^ nm *:*^* nm *:*** nm *:*^* nm

Segundo o manual do Si!: pa&a a #alida;<o do !es!e: o #alo& de a?so&?Kncia o?!ido pa&a o po;o 1&anco de#e se& igual ou in'e&io& a *:/** nm@ Nosso !es!e 'oi #alidado nes!e 'a!o& W" >ue o #alo& do 1&anco 'oi igual a *: *.^ nm@ Ou!&o c&i!D&io pa&a #alida;<o do !es!e D a mDdia do Con!&ole Nega!i#o BCNIC: >ue se d" pela soma das a?so&?Kncias do CN seguida da di#is<o pelo nEme&o de 'a!o&es en#ol#idos na soma@ 4ogo: o?!i#emos$ CNI [ *:*00 ] *:*.H ] *:/.P [ *:*+^ Cada um dos #alo&es de CN indi#iduais o?!idos de#e se& igual ou maio& >ue *:L #eNes o CNI e igual ou in'e&io& a /:L #eNes o CNI pa&a >ue o !es!e seWa #"lido@ 4ogo: os #alo&es de CN de#em es!a& en!&e es!es #alo&es$ *:L I *:*+^ [ *:*--L /:L I *:*+^ [ *:/**L 4ogo: concluiJse >ue dois dos #alo&es de CN B*:*.+ e *:/.P nmC n<o se encon!&am den!&o do es!a?elecido pelo 'a?&ican!e e: segundo es!e: o !es!e de#e&ia se& &epe!ido po&>ue es!" in#alidado e os #alo&es o?!idos n<o podem ge&a& dados con'i"#eis pa&a a ela?o&a;<o de um laudo &e'e&en!e 9s amos!&as analisadas@ En!&e!an!o: se o !es!e passasse nes!e c&i!D&io: passa& amos pa&a o p&8Iimo &e>uisi!o: no >ual a mDdia dos #alo&es de a?so&?Kncia dos con!&oles nega!i#os BCNIC de#e se& meno& >ue *:/.* depois de su?!&ai& o ?&anco@ %o&!an!o: com a eIclus<o dos CN inap&op&iados: o CNI 'ica igual 9 *:*00@ Tuando su?!&a do o #alo& do ?&anco:

!emos *:*/^ >ue D um nEme&o meno& >ue *:/.*: aca!ando: en!<o: o p&DJ es!a?elecido pelo manual@ %a&a a #alida;<o do Con!&ole %osi!i#o BC%C: es!e de#e se& igual ou supe&io& a *:^** ap8s a su?!&a;<o do ?&anco@ Como pMde se& o?se&#ado: o #alo& do C% se encon!&a den!&o do pad&<o e o !es!e n<o pode se& in#alidado segundo somen!e es!e c&i!D&io@ Ap8s o !es!e se& #alidado: &ealiNaJse o c"lculo dos &esul!ados: no >ual a p&esen;a ou aus=ncia de 51sAg nas amos!&as analisadas se de!e&mina&" &elacionandoJse o #alo& da a?so&?Kncia de cada amos!&a com o #alo& cut-off calculado pela '8&mula$ 3alo& cut-off [ CNI ] *:*0* 3alo& cut-off [ *:*00 ] *:*0* [ *:*H0 A &ela;<o >ue se >ue es!a?elece en!&e as a?so&?Kncias das amos!&as e o cutoff D a seguin!e$ %osi!i#o$ &ela;<o a?so&?Kncia,cut-off _ /:* Nega!i#o$ &ela;<o a?so&?Kncia,cut-off ` *:P Du#idoso$ &ela;<o a?so&?Kncia,cut-off _ *:P ` /:* Amos!&a / [ *:*^*,*:*H0 [ *:HAmos!&a . [ *:***,*:*H0 [ *:** Amos!&a - [ *:*^*,*:*H0 [ *:H4ogo: se o !es!e n<o !i#esse sido in#alidado pelos #alo&es de CN: pode& amos conclui& >ue !odas as amos!&as e&am nega!i#as e n<o !e&ia an! geno do # &us 513 p&esen!e em nenAuma delas@

3 CONCLUSO Conside&ando os &esul!ados de a?so&?Kncia o?!idos pela lei!u&a em espec!&o'o!Mme!&o e os c"lculos de #alida;<o p&econiNados pelo 'a?&ican!e no manual do !es!e u!iliNado: podemos conclui& >ue o eIame &ealiNado na aula p&"!ica da disciplina de Imunologia Cl nica 'oi in#alidado e pa&a a o?!en;<o de &esul!ados 'idedignos o mesmo de#e&ia se& &epe!ido@ Os valores puderam ser extrapolados quando se desconsiderou o processo de validao do Controle Negativo, entretanto estes valores no apresentam

significado clnico, pois no seguem todos os requisitos estabelecidos pelo fabricante do teste.

REFER4NCIAS BIBLIO-R5FICAS 1RASI4: 4@ M@ e! al@ %&e#al=ncia de ma&cado&es pa&a o # &us da Aepa!i!e 1 em con!a!os domicilia&es no Es!ado do AmaNonas@ Re&%st' d' Soc%ed'de Br's%(e%r' de ,ed%c%/' Trop%c'(: #@ L: n@ -+: se!Jou!: .**-@ FERREIRA: M@ S@ Diagn8s!ico e !&a!amen!o da Aepa!i!e 1@ Re&%st' d' Soc%ed'de Br's%(e%r' de ,ed%c%/' Trop%c'(: #@ 0: n@ --: WulJago: .***@ %IN5EIRO: 6@F GEITOUNE: R@ C@ G@ 5epa!i!e 1$ conAecimen!o e medidas de ?iossegu&an;a e a saEde do !&a?alAado& de en'e&magem@ Esco(' A//' Ner6 Re&%st' de E/*er.'ge.: #F .: n@ /.: .**H@

TUA4IMUNE@ I.7/oe/s'%o e/8%.9t%co" Dispon #el em$ `A!!ps$,,aaa@>ualimune@com@?&,si!e,indeI@pAp,mnula?o&a!o&io,mnu!ecnicas,elisaJ imunoensaioenNima!icob@ Acesso em$ - ma&@ .*/0@ SOUTO: F@ 6@ D@ e! al@ %&e#al=ncia e 'a!o&es associados a ma&cado&es do # &us da Aepa!i!e 1 em popula;<o &u&al do 1&asil cen!&al@ Re&%st' :'/'.er%c'/' de S'(7d :;#(%c': #@ +: n@ /*: .**/@ 3A4ENTE: 3@ 1@F CO3AS: D@ T@F %ASSOS: A@ D@ C@ Ma&cado&es so&ol8gicos das Aepa!i!es 1 e C em doado&es de sangue do 5emocen!&o de Ri?ei&<o %&e!o: S%@ Re&%st' d' Soc%ed'de Br's%(e%r' de ,ed%c%/' Trop%c'( : #@ +: n@ -H: no#JdeN: .**L@