IDENTIFICAO DE BACTRIAS

Importncia:
- Diagnstico de microrganismos patognicos
- Estudos ecolgicos
- Desenvolvimento de produtos biotecnolgicos.
Diferentes espcies podem apresentar morfologia e metabolismo idnticos. Assim, a identifica!o
re"uer a observa!o de um con#unto comple$o de caracter%sticas:
&. Morfologia celular: dimens'es, forma, arran#os, comportamento tintorial, estruturas e
mobilidade.
(. Caractersticas culturais: formas de crescimento das col)nias em diferentes meios *meio
em placas, meio inclinado, meio l%"uido, gelatina+, odor.
,. Ecologia: -.bitat, provenincia, condi'es ambientais, patogenicidade, -ospedeiros,
resistncia.
/. Ge!tica: se"0ncia de genes espec%ficos, varia'es transitrias e permanentes.
1. Fisiologia: e$igncias nutritivas, fontes de carbono e nitrognio, fatores de crescimento.
As informa'es devem ser associadas umas 2s outras e comparadas com as informa'es do
Maual "e Berge# 3 obra referncia oficial da ta$onomia de bactrias.
4rocedimentos para observar e$press'es fenot%picas:
&. 5eio l%"uido: observar o aspecto das culturas antes de utili6ar nas demais inocula'es.
(. 4reparar lmina a fresco: observar motilidade.
,. 4reparar lmina corada: observar rea!o de 7ram, forma, arran#os e estruturas.
/. Inocular placas com .gar-nutriente em estrias cru6adas: observar morfologia das col)nias
1. Inocular meio com .gar-amido: observar a -idrlise do amido com algumas gotas de
solu!o de iodo
8. Inocular meio inclinado em lin-a reta: observar formas de crescimento
9. Inocular meio com gelatina: verificar atividade proteol%tica
4reenc-er a fic-a da p.gina 89 do livro 5icrobiologia 5anual de Aulas 4r.ticas
:ulture ;eaction Description :ulture ;eaction Description
Escherichia coli
Esta bactria forma
col)nias de taman-o
mdio com margens
regulares e eleva!o
conve$a
Klebsiella
pneumoniae
Esta bactria
forma col)nias
ligeiramente
<midas e
viscosas,
circulares.
conve$as, com
margens lisas.
Serratia
marcescens
:ol)nias s!o
vermel-ar e
circulares coom
margem inteira
Pseudomonas
fluorescens
:ol)nias
circulares,
conve$as e com
margens lisas.
Chromobacterium
violaceum
:ol)nias circulares,
conve$as com
margem inteira, e
apresentam-se ro$as
na maioria dos
meios
Micrococcus
luteus
:ol)nias
puntiformes,
conve$as com
margens lisas,
com cor
amarelada na
maioria dos
meios.
Enterococcus
faecalis
:ol)nias
puntiformes,
conve$as, com
margens lisas. =
taman-o muito
redu6ido devido ao
metabolismo
ineficiente dessa
bactria. Ela pode
levar ,-/ dias para
alcanar um
taman-o apreci.vel.
Lactobacillus
plantarum
:ol)nias
puntiformes,
conve$as, com
margens lisas. . =
taman-o redu6ido
devido ao
metabolismo
ineficiente, "ue
pode levar ,-/
dias para atingir
um taman-o
apreci.vel.
Bacillus subtilis
:ol)nias s!o largas,
porm menos "ue as
de B. cereus. As
margens s!o
onduladas, com
forma circular e uma
eleva!o ac-atada.
Bacillus cereus
:ol)nias, largas,
irregulares e
ac-atadas com
margens
onduladas.
Bacillus polymyxa
:ol)nias largas,
irregulares e
ac-atadas com
margens onduladas.
Staphyloccocus
epidermidis
:ol)nias, largas,
irregulares e
ac-atadas com
margens
onduladas.
E$emplos de v.rios tipos de morfologia das col)nias
Descri'es das diferentes formas das col)nias em placas
- >ma das placas ou tubos poder. ser utili6ada para fa6er a rea!o da catalase.
:ulture ;eaction Description :ulture ;eaction Description
Escherichia coli
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Klebsiella
pneumoniae
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Serratia
marcescens
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Pseudomonas
fluorescens
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Chromobacterium
violaceum
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Micrococcus
luteus
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Enterococcus
faecalis
=bserve a
ausncia de
bol-as. Esta
bactria usa
pero$idase para
eliminar ?(=(, uma
en6ima "ue n!o
libera o$ignio.
Lactobacillus
plantarum
=bserve a
ausncia de
bol-as. Esta
bactria usa
pero$idase para
eliminar ?(=(, uma
en6ima "ue n!o
libera o$ignio.
Bacillus subtilis
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Bacillus cereus
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Bacillus polymxya
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
Staphylococcus
epidermidis
=bserve a
forma!o de
bol-as.
:atalase positiva
@este para presena de catalase
Caractersticas fisiol$gicas % &ro'as (io)u*icas
=s microrganismos reali6am variadas atividades bio"u%micas utili6ando nutrientes do ambiente "ue
os rodeia Essas rea'es "ue ocorrem dentro ou fora das clulas s!o catalisadas por en6imas.
7eralmente, o metabolismo origina produtos finais cu#a detec!o pode au$iliar na identifica!o.
+tili,a-.o "e fotes "e car(oo/
&ro'as fer*etati'as *7licose, lactose, sacarose, manose, $ilose, sorbitol etc.+
>m determinado carboidrato pode ser fermentado originando diferentes produtos finais, o "ue
depende do microrganismo envolvido. Isso pode gerar g.s *"ue pode ser detectado pela presena
de bol-as no tubo de Dur-am+ e .cidos orgnicos *"ue pode ser detectado pela mudana de cor do
indicador+.
5esmo com uma rea!o negativa, o microrganismo pode ter utili6ado outros nutrientes do meio de
cultura do teste, como a peptona. As leituras devem ser feitas em no m.$imo (/ -, pois podem
ocorrer rea'es alcalinas sobre outros substratos.
>tili6am-se meios b.sicos *p? 9,(+ e o indicador Andrade para .cidos.
0M 10er*el2o "e Metila3
@este "ue avalia se as bactrias fermentam a glicose pela via .cida mista, com a produ!o de
v.rios .cidos *.cido frmico, l.tico, actico+, o "ue prova o abai$amento do p? a menos /,/, "ue
o limite de viragem do indicador de p?. Embora todas as enterobactrias fermentem glicose, alguns
microrganismos, durante a fase final de incuba!o, convertem esses .cidos a produtos n!o .cidos
como o etanol e a aceto%na, resultando num p? mais elevado *p? 8+. = indicador de p? o
vermel-o de metila "ue em p? abai$o de /,/ vermel-o e acima de 8 amarelo. Adicionar / gotas
e rolar gentilmente entre a palma das m!os.
0& 10oges &ros4auer3
?. bactrias "ue utili6am a fermenta!o butilenogliclica. Aermentam a glicose produ6indo acetil-
metil-carbinol *aceto%na+, butilenoglicol e pe"uenas "uantidades de .cidos. Buando C=? */ gotas
do Darrit II+ adicionado, e na presena de =( atmosfrico, a aceto%na o$idada a diacetil. A adi!o
de alfa-naftol *&E gotas do Darrit I+ nesta rea!o catalisa a produ!o de um anel vermel-o ti#olo,
aps &E-&1 minutos. Adicionar primeiro o Barrit ! depois o Barrit e a"itar o tubo para expor ao
oxi"#nio.
5i"r$lise "o a*i"o
= amido um polissacar%deo de elevado peso molecular. 4ara ser transportado para o interior da
clula e ser utili6ado, necess.rio, primeiro, "ue ele se#a "uebrado em unidades menores. A
-abilidade para -idrolisar esse pol%mero depende da produ!o e secre!o de v.rias amilases. A
"uebra do amido detectada utili6ando-se culturas em .gar amido "ue s!o cobertas com uma
solu!o de iodo *, a / mF por placa+. = iodo reage com o amido para formar um comple$o a6ul
escuro. As col)nias "ue podem -idrolisar o amido apresentar!o uma 6ona clara a seu redor.
Citrato
Este teste determina se a bactria capa6 de utili6ar o citrato de sdio como <nica fonte de
carbono para o metabolismo e crescimento. Deve ser utili6ado o meio :itrato de Gimmons,
contendo citrato de sdio, fosfato de am)nia e a6ul de bromotimol. :om a facilidade do transporte
de citrato pela citrato-permease -. a sua utili6a!o pela citrase, com produ!o de -idr$ido de
am)nia "ue eleva o p?, fa6endo com "ue a rea!o se torne a6ul. Hesse teste, utili6am-se tubos
com meio inclinado para a cultura ter mais acesso ao o$ignio, "ue necess.rio para utili6a!o do
citrato. = :=( produ6ido reage com o sdio do citrato formando carbonatos de rea!o alcalina.
Maloato 1teste FM3
Essa prova determina a capacidade de uma bactria de utili6ar malonato como <nica fonte de
carbono, alcalini6ando o meio. = malonato liga-se competitivamente 2 desidrogenase succ%nica,
impedindo sua a!o catal%tica sobre o .cido succ%nico com interrup!o do :iclo de Crebs, tirando da
bactria sua principal fonte de energia e impedindo a forma!o de outros intermedi.rios
necess.rios ao metabolismo.
Incuba-se a ,1-,9
=
: durante (/-/I -oras. Indicador a6ul de bromotimol.
+tili,a-.o "e fotes "e itrog6io/
Feilalaia 7 desamina!o 1teste FM3
?. bactrias "ue produ6em en6imas "ue removem o grupo amina da fenilalanina presente no meio,
originando o .cido fenilpir<vico, "ue reage com o cloreto frrico *&EJ+ adicionado ao meio,
formando uma cor verde.
=bs: :omo se utili6a o mesmo ensaio para o malonato, necess.rio acidificar o meio com ?:l, "ue
passa para amarelo, antes de adicionar o cloreto frrico.
8isia 7 descarbo$ila!o
Algumas bactrias possuem a lisina descarbo$ilase *FD:+ "ue atua sobre a por!o carbo$ila dos
amino.cidos, com forma!o de aminas, de rea!o alcalina *por e$. cadaverina+, e :=(. A rea!o
ocorre preferencialmente em condi'es anaerbias e ligeiramente .cidas, mas inicialmente ocorre a
utili6a!o da glicose do meio para enri"uecimento da cultura e acidifica!o do meio.
= meio contm o indicador bromocresol p<rpura. Has etapas iniciais de incuba!o, o tubo torna-se
amarelo devido 2 fermenta!o da glicose. Ge o amino.cido descarbo$ilado o meio retorna 2 cor
173 193
p<rpura. A rea!o se processa em anaerobiose, podendo-se cobrir o meio com leo mineral para
agili6ar o processo.
I"ol
= indol produ6ido pela a!o da triptofanase sobre o triptofano e$istente no meio de cultura,
ocorrendo, tambm, a produ!o de .cido pir<vico e am)nia. = indol pode ser detectado pela
forma!o de um anel rosa *pin$+ na parte superior do tubo, aps a adi!o de p-
dimetilaminoben6alde%do *reativo de Erlic-+.

&ro"u-.o "e 5:S 1*eio SIM3
Algumas bactrias s!o capa6es de degradar compostos contendo en$ofre *como o tiossulfato de
sdio e a ciste%na das peptonas+, atravs da tiossulfato redutase, produ6indo ?(G "ue incolor.
Este reage com o ferro *indicador+ formando um precipitado preto *sulfeto ferroso+. 4ara "ue esta
rea!o ocorra necess.rio "ue o meio este#a .cido.
+r!ia
?. bactrias "ue possuem a en6ima urease "ue garante a capacidade de degradar a uria
presente no meio liberando am)nia, :=( e ?(=. A am)nia reage formando carbonato de am)nia
"ue alcalini6a o meio. = indicador de p? o vermel-o de fenol "ue em meio alcalino toma a
colora!o magenta. >ma colora!o meio rosa suficiente para considerar a rea!o positiva.
Re"u-.o "e Nitratos
5uitas bactrias s!o capa6es de redu6ir nitratos a nitritos, ocorrendo mais rapidamente em
condi'es anaerbias *condi!o em "ue o nitrato substitui o o$ignio como aceptor final de
eltrons+. Adicionando-se algumas gotas dos reativos de 7riess-Ilosva, o nitrito evidenciado
atravs da forma!o de um composto avermel-ado.
Motili"a"e
A motilidade observada atravs do aspecto do meio, isso decorre pelo do fato de o meio ser semi-
slido o "ue permite o crescimento bacteriano no interior do meio, por todo o tubo. Ge a motilidade
positiva o aspecto do meio ser. turvo en"uanto "ue motilidade negativa o crescimento s ser.
observado na 6ona da picada. Aica mais f.cil de observar a motilidade pondo os tubos contra uma
fol-a de papel pautado, se conseguir observar as lin-as atravs do tubo motilidade negativa.
Escherichia coli
Esta bactria altamente
mvel e provocar. turbide6
no meio.
Klebsiella pneumoniae
Esta bactria n!o
mvel e formar. somente
uma lin-a de
crescimento.
&ro'as IM0iC *Indol, Kermel-o de Metila, 0oges-4rosLauer, Citrato+
Esta srie de "uatro provas #. vistas anteriormente permite diferenciar os ;rici;ais gru;os de
Enterobacteriaceae:
7rupo I: Escherichia! Ed%ardsiella! Citrobacter! Salmonella! Shi"ella
7rupo II: Klebsiella! Enterobacter! &afnia! Serratia
7rupo III: Proteus
7rupo IK: 'ersinia