Universidade

de Aveiro
Ano 2009






Departamento de Biologia
Jos Manuel Neto
Santos

Utilizao de invertebrados bentnicos em
ecotoxicologia sedimentar








Universidade de
Aveiro
Ano 2008/ 2009
Departamento Biologia
Jos Manuel Neto
Santos

Utilizao de invertebrados bentnicos em
ecotoxicologia sedimentar

Dissertao apresentada Universidade de Aveiro para cumprimento
dos requisitos necessrios obteno do grau de Mestre em
Toxicologia e Ecotoxicologia, realizada sob a orientao cientfica do
Doutor Victor Quintino, Professor Auxiliar do Departamento de
Biologia da Universidade de Aveiro e da Doutora Rosa Freitas,
Investigadora Auxiliar do Laboratrio Associado CESAM da
Universidade de Aveiro.

















Dedico este trabalho minha mulher e ao meu filho, pelo tempo que de mim
renunciaram.

















O jri


Presidente
Professor Doutor Antnio Jos Arsenia Nogueira
Universidade de Aveiro


Vogal- Arguente Principal Doutora Susana Patrcia Mendes Loureiro
Universidade de Aveiro


Vogal- Orientador Professor Doutor Victor Manuel dos Santos Quintino
Universidade de Aveiro


Vogal- Co- Orientador Doutora Rosa de Ftima Lopes de Freitas
Universidade de Aveiro




















Agradecimentos

Quero deixar por escrito, o reconhecimento e o agradecimento sincero aos
meus Orientadores, Professor Doutor Victor Quintino e Doutora Rosa Freitas.

















palavras-chave

Anfpodes, Corophium, toxicidade sedimentar, ensaio agudo,
ensaio crnico




resumo


Os ensaios de ecotoxicologia sedimentar so uma ferramenta
importante para a avaliao dos ecossistemas marinhos e
estuarinos. A fauna bentnica ser das que primeiro se recente
com os excessos de poluio, devido ao seu habitat natural se
localizar no meio sedimentar, local ecologicamente bastante
frgil e que ao ser afectado, trar implicaes importantes a
todos os diferentes estratos que constituem o ecossistema.
Neste trabalho, realizada uma reviso bibliogrfica sobre
ensaios de ecotoxicologia sedimentar procurando dar nfase a
um dos seus principais intervenientes: os anfpodes, em
particular do gnero Corophium. Por outro lado, tentamos
traar uma panormica geral sobre a forma como esta questo
est a ser lidada por diferentes pases, com apresentao de
alguns casos de estudo de Portugal.



























keywords

Amphipods, Corophium , sediment toxicity, acute bioassay, cronic bioassay

abstract

Sediment ecotoxicological tests are an important bioassessment tool for
marine and estuarine ecosystems. The benthic fauna is often the first to
be affected by excesses pollution, the sedimentary habitat is ecologically
fragile and when affected, will bring important implications for all other
ecosystem strata. This work presents a literature review on the subject of
sediment ecotoxicological tests, with emphasis in one of its key players,
the amphipods, namely of the genus Corophium. The work gives an
overview on how this issue is being handled in different countries, and
presents case studies group relative to Portugal.


- 8 -
ndice
Pag.

1.Introduo____________________________________________________________9

2. Avaliao ecotoxicolgica dos sedimentos__________________________________11
2.1 A importncia da avaliao da qualidade dos sedimentos______________________11
2.2 Ensaios de toxicidade: organismos-teste___________________________________13
2.3 Ensaio agudo vs ensaio crnico _________________________________________17
2.4 Conceitos a ter na utilizao de ensaios de toxicidade________________________18
2.5 Uso simultneo de multiplos descritores da Qualidade Sedimentar)_____________21

3. Utilizao de anfpodes em ensaios de toxicidade nas ltimas duas dcadas________25

4. Concluso____________________________________________________________51

Bibliografia_____________________________________________________________53














- 9 -
1. Introduo

Nos ltimos anos, a qualidade dos ambientes marinhos, estuarinos e de guas
doces, tornou-se foco de ateno, havendo hoje em todo o mundo interesse na sua
conservao e na recuperao dos locais sujeitos a presses antropognicas. Esta recente
preocupao coincidiu com o facto de os sedimentos marinhos serem reconhecidos como
um dos maiores reservatrios de substncias txicas (entre outros, Chapman, 1995;
Chapman, 2004; Adams, 2005), o que levou ao desenvolvimento de diversos mtodos de
avaliao da sua qualidade. Pela bibliografia consultada podemos perceber que estes
mtodos tm-se revelado extremamente teis na avaliao dos nveis de contaminao e do
seu significado ecolgico nos diferentes ambientes aquticos, funcionando como
instrumentos importantes para a proteco e conservao dos ecossistemas e tambm da
sade pblica (Chapman, 1995; Silva et al., 2004; Castro et al., 2006; R et al., 2007). A
deteco de efeitos txicos a um nvel de organizao biolgica abaixo do organismo pode
servir como um sinal de alerta precoce para os potenciais efeitos nos nveis superiores. A
bioacumulao num elo inferior da cadeia alimentar, pode levar sua captao e a
possveis efeitos txicos que se podem manifestar em qualquer elo da cadeia at ao
consumidor final. Se se poder estabelecer uma relao entre um efeito ao nvel da
populao e a bioamplificao de contaminantes, ento ser de implementar uma aco
preventiva (Hellou et al., 2008).
Nos ecossistemas aquticos a macrofauna bentnica desempenha um importante
papel. Como principais consumidores secundrios, estes organismos representam um
importante elo de ligao entre os produtores primrios e os nveis trficos mais elevados
(Allaby, 1999). Constituem tambm uma importante fonte de alimento para peixes e
crustceos (Allaby, 1999) e podem melhorar a qualidade da gua uma vez que grande parte
dos organismos pertencentes macrofauna bentnica se alimenta por filtrao das
partculas em suspenso (Holand, 1990). As populaes bentnicas esto representadas em
diversos grupos taxonmicos que, de uma forma geral, se relacionam com todos os
aspectos do habitat aqutico, nomeadamente ao nvel das diferentes estratgias de
alimentao, dos modos reprodutivos, das suas caractersticas especficas de vida e da
tolerncia fisiolgica s condies ambientais. A maioria dos organismos bentnicos tm
mobilidade limitada no podendo desta forma evitar a presso ambiental a que podero
- 10 -
estar sujeitos. Como resultado, as respostas de algumas espcies servem como indicadores,
privilegiados, de mudanas na qualidade dos ambientes aquticos e, mais concretamente,
das alteraes introduzidas nos sedimentos onde residem (EPA, 1992).
Pelos motivos atrs referidos, vrios investigadores (Chapman et al., 1987; Defew
et al., 2002; Borja et al., 2003; Belan, 2003; Silva et al., 2004; Reiss e Krncks, 2005;
Bigot et al., 2006; Castro et al., 2006; Scarlett et al., 2007; Picone et al., 2008, entre outros)
tm utilizado invertebrados bentnicos em estudos cujo objectivo se centra na avaliao da
qualidade dos sedimentos nomeadamente no que diz respeito aos efeitos biolgicos e
ecolgicos associados ao seu grau de contaminao.
Pela bibliografia consultada, fcil perceber que os testes de toxidade sedimentar
efectuados em laboratrio constituem uma ferramenta importante que juntamente com
outras, como por exemplo a anlise qumica dos sedimentos ou a avaliao da estrutura da
comunidade bentnica autctone, contribuem para uma avaliao mais abrangente dos
problemas relacionados com o meio ambiente. Deste modo possvel atravs das amostra
sedimentares recolhidas, averiguar se houve alteraes e se essas alteraes se devem ou
no, presena de txicos nos sedimentos (Chapman, 2007).
objectivo do presente trabalho, fazer uma anlise sumria sobre a situao do
emprego da fauna bentnica, nomeadamente o uso de anfpodes, nos testes de avaliao do
estado do ambiente sedimentar.










- 11 -
2. Avaliao ecotoxicolgica dos sedimentos

2.1 A importncia da avaliao da qualidade dos sedimentos
A contaminao dos ecossistemas marinhos devida principalmente a actividades
antropognicas e particularmente significativa em ambientes costeiros (Power e
Chapman, 1992). Estes ltimos so afectados por inmeras fontes de perturbao, tais
como descargas de efluentes urbanos e industriais, contaminantes transportados por rios e
esturios e enxurradas sobre terrenos agrcolas. Deste modo a avaliao da qualidade dos
sedimentos uma componente importante na avaliao da qualidade dos ambientes
aquticos, uma vez que os sedimentos, geralmente, funcionam como um grande
reservatrio de contaminantes (Power et al., 1991; Lamberson et al., 1992; Chapman,
1995; Chapman, 2004; Adams, 2005), com concentraes muito superiores s existentes
na coluna de gua (Chapman, 1986). O acumular de compostos txicos, bem como um
aumento da matria orgnica nos sedimentos , frequentemente, traduzido em alteraes da
estrutura das comunidades da fauna bentnica (Pearson e Rosenberg, 1978; Quintino et al.,
1989; Silva et al., 2004; Castro et al., 2006).
Portugal, quer por legislao interna, quer por legislao comunitria, est obrigado
ao cumprimento de leis que visam a proteco e salvaguarda dos ambientes aquticos,
como exemplo o Decreto-Lei n 236/98 que Estabelece normas, critrios e objectivos de
qualidade com a finalidade de proteger o meio aqutico e melhorar a qualidade das guas
em funo dos seus principais usos.
Relativamente avaliao da qualidade dos sedimentos convm esclarecer
algumas definies comummente utilizadas, mas muitas vezes usadas de forma incorrecta.
Assim, definies atribudas a sedimentos de referncia e a valores iniciais dos sedimentos,
variam entre os programas de investigao e mesmo entre investigadores. Para evitar esta
confuso, a definio destes dois sedimentos precisa de ser claramente indicada para cada
estudo. Alguns investigadores utilizam estas definies indiferentemente, enquanto outros
definem sedimentos de referncia como o modelo ou os melhores valores para se proceder
comparao com outros sedimentos, enquanto que os valores iniciais dos sedimentos so
definidos como um sedimento histrico existente na rea e que se encontra isento de
influncias antropognicas. Apesar de estas duas definies no representarem o mesmo,
elas no se excluem mutuamente, um sedimento de referncia pode representar valores
- 12 -
iniciais do sedimento e estes, por sua vez, tambm podem ser usados como um sedimento
de referncia (Chapman et al., 2002).
Em avaliaes tpicas de sedimentos, nos testes de toxicidade feita a comparao
com o sedimento de referncia, ou com uma condio tida por referncia. Do ponto de
vista tcnico, um sedimento de referncia seria aquele no qual estariam ausentes todos os
produtos qumicos que poderiam causar problemas (ou seja, um sedimento no
contaminado, mas por outro lado, idntico ao que se quer testar). Isto permitiria uma
avaliao em relao ao ou aos produtos qumicos presente(s) no sedimento que
representavam um perigo efectivo. No entanto, tal situao ideal raramente existe em
condies naturais (Chapman et al., 2002). Avaliaes efectuadas com recurso ao
sedimento de referncia so, por definio, apenas estimativas do perigo, calculadas
tomando como base comparaes de dados estatsticos. Quando essas comparaes so
feitas, elas devero ser adequadas avaliao que se pretende realizar. Por exemplo, um
porto no deve ser comparado com uma rea protegida, a menos que se tenha tomado a
deciso de eliminar esse porto e tornar a rea protegida (Chapman et al., 2002).
Contudo, a extrapolao dos resultados dos testes para o ambiente e ao mesmo
tempo, a medio do sucesso ou o fracasso de decises de gesto, pode exigir a utilizao
de diferentes parmetros de avaliao, uma vez que o que est para ser protegido e o que
avaliado, muitas vezes diferente, devido essencialmente, a consideraes de carcter
prtico. Esses parmetros de avaliao so seleccionados numa fase inicial do problema
relativo a uma avaliao do risco ecolgico (EPA, 1992) e reflectem uma componente
ecolgica (por exemplo, espcies) ou uma funo a ser protegida e, quando adequado, so
expressos ao nvel da populao (Chapman et al., 2002).
Seria desejvel a existncia de um mecanismo que permitisse testar hipteses de
risco que relacionassem, de forma clara, a ligao existente entre o agente agressor e o
impacto negativo. Isto na maioria dos casos no fcil de fazer, mas uma das formas de se
obter sucesso neste tipo de abordagem, considerar como componente fundamental
formulao das hipteses, a identificao dos agentes agressores que representem risco
potencial (Chapman et al., 2002).
ainda importante referir que, se por um lado os dados fornecidos pela
comunidade bentnica residente juntamente com os dados sobre toxicidade de sedimentos
so essenciais para analisar dois critrios de causalidade fundamentais: (1) consistncia da
- 13 -
associao entre factor de impacto e efeito(s), e (2) gradiente (no tempo ou no espao) da
relao entre a dose e a concentrao (Chapman, 2007), por outro lado, a avaliao do
risco ecolgico (ERA), necessita de dar resposta a duas questes igualmente importantes,
em relao aos sedimentos:
- Quais so os agentes agressores presentes nos sedimentos que motivam preocupao, e se
eles representam situao de perigo para os receptores ecolgicos avaliados?
- Qual a probabilidade de estes agentes agressores afectarem negativamente esses
receptores ecolgicos?
Refira-se ainda que a bioacumulao de contaminantes nos tecidos dos organismos
em contacto com o sedimento tambm motivo de preocupao, tanto sob o ponto de vista
da sade humana como da componente ecolgica (Power e Chapman, 1992).
Posto isto, podemos afirmar que os parmetros do ensaio de toxicidade devem ser
ligados s hipteses de risco especfico que relacionam os factores de impacto a possveis
perigos, e os resultados desses testes devero ser interpretados no contexto da populao
ou da comunidade que estamos a tentar analisar e proteger.
Embora a significncia estatstica possa ter um papel de algum relevo, na avaliao
do risco de contaminantes existentes nos sedimentos, ela no deve servir de suporte directo
quantificao do risco ecolgico. Da que em matria de avaliao dos sedimentos, as
decises devam ser tomadas com base na magnitude e extenso dos impactos adversos
estabelecidos, previamente, nos parmetros de avaliao, e no apenas, na simples
observao dos resultados obtidos em testes de toxicidade (Chapman et al., 2002).

2.2 Ensaios de toxicidade: organismos-teste
Os organismos bentnicos pertencentes endofauna vivem nos sedimentos que
podem variar da vasa areia e cascalhos, podendo habitar tanto em esturios como noutros
ambientes marinhos ou em gua doce (King et al., 2006). A maioria destes habitats alberga
um grande nmero de organismos bentnicos, incluindo aneldeos, moluscos e crustceos.
Todos estes organismos possuem mecanismos que lhes permitem enterrar-se nos
sedimentos (Allaby, 1999). A U. S. Environmental Preotection Agency (U. S. EPA) tem
mostrado que o maior potencial de impacto ambiental ocorre sobre o ambiente bentnico,
dado que os organismos bentnicos vivem enterrados no sedimento e por causa disso,
- 14 -
esto expostos aos contaminantes (associados ao sedimento) durante longos perodos de
tempo.
Devido ao facto de as comunidades bentnicas poderem ser afectadas estrutural e
funcionalmente pela qualidade do sedimento, geralmente de forma previsvel, a avaliao
da estrutura da comunidade bentnica, constitui um instrumento valioso para aferir da
qualidade dos sedimentos e dos seus efeitos sobre uma grande quantidade de componentes
biolgicos do ambiente marinho, estuarino e dos ecossistemas de gua doce.
A utilizao da fauna bentnica de forma sistemtica e coerente, com objectivo de
controlo, monitorizao e avaliao da qualidade dos sedimentos, tem j mais de 30 anos.
De facto diversos estudos tm demonstrado que os macroinvertebrados bentnicos, como
grupo, so muitas vezes o melhor instrumento de avaliao da qualidade dos sedimentos.
Historicamente, as comunidades bentnicas tm sido utilizadas como indicadores sensveis
e eficazes dos impactos da poluio sobre os ecossistemas marinhos e estuarinos. Alm
disso, estas comunidades tm-se revelado extremamente teis em estudos relativos
eficcia da gesto de ambientes aquticos. Adicionalmente, informaes sobre as
alteraes na populao bentnica e nos parmetros da comunidade devidas s
caractersticas dos sedimentos, podem ser usadas para distinguir variaes naturais de
mudanas devidas actividade humana (Holand, 1990). Existe uma base de dados
substancial sobre o tipo de respostas destes animais em relao a xenobiticos, nutrientes e
outras perturbaes fsico-qumicas (Burton, 1992). No entanto, e apesar do que atrs se
disse, h investigadores, tal como Moiseenko (Moiseenko et al., 2008), que entendem,
sobretudo quando se trata de poluio existente na gua, que os peixes em comparao
com os invertebrados so mais sensveis a um maior nmero de txicos e constituem um
bom teste prtico na avaliao do estado dos ecossistemas.
Nestes estudos de toxicidade sedimentar, dada preferncia a determinado tipo de
animais como por exemplo, os bivalves, os poliquetas e os anfpodes:
Os bivalves so um grupo extremamente bem sucedido e diversificado. So
animais exclusivamente aquticos que, tal como os anfpodes, podem ocorrer em
ambientes de salinidade diversa como gua salgada, doce ou salobra. A maioria das
espcies bentnica sendo que existem bivalves ssseis que se fixam ao substrato atravs
do bisso, uma segregao fibrosa, enquanto que outras espcies vivem enterradas nos
fundos arenosos. As espcies que vivem soltas, podem deslocar-se atravs de propulso
- 15 -
conseguida por expulso de gua sob presso (Allaby, 1999). Alguns investigadores
utilizam-nos em ecotoxicologia sedimentar, entre outros, Ruiz et al. (1994) e Quintino et
al. (2008).
Os poliquetas incluem cerca de 8.000 espcies aquticas. A grande maioria das
espcies tpica de ambiente marinho, mas algumas formas ocupam ambientes de gua
salobra. Os poliquetas distribuem-se desde a zona intertidal at profundidades que
ultrapassam os 5000 metros. A classe Polychaeta geralmente dividida em dois grupos:
Errantia e Sedentaria. Como o prprio nome indica, os poliquetas errantes tm vida livre
seja nadando na coluna de gua ou como organismos bentnicos mveis. A maioria das
espcies deste grupo predadora de pequenos invertebrados ou detritvora. Os poliquetas
sedentrios esto adaptados para viver permanentemente em tubos escavados no substrato
ou fixos a rochas. So na maioria dos casos organismos detritvoros ou filtradores (Allaby,
1999). So tambm usados pelos investigadores de ecotoxicologia sedimentar como o
caso, entre outros, de Belan (2003) e Quintino et al. (2008).
Os anfpodes possuem uma relevncia ecolgica bastante grande uma vez que se
trata de um dos principais componentes da biomassa e da diversidade, em ambientes
caracterizados por um leque de salinidades muito variadas (R, 1996). Eles so uma fonte
primria de alimento para peixes e outros animais que se alimentam tambm de vegetais e
de detritos (Allaby, 1999). Por outro lado, existe uma base de dados substancial sobre o
tipo de respostas destes animais em relao a diversas perturbaes fsico-qumicas
(ASTM, 2003).
De uma forma geral, as melhores espcies para avaliar a toxicidade dos sedimentos
devem fornecer uma indicao adequada dos perigos ligados aos agressores qumicos
existentes no sedimento. Os anfpodes so reconhecidos como a escolha mais acertada para
a avaliao de toxicidade de muitos sedimentos, e os resultados obtidos nos testes podem
ser correlacionados positivamente com alteraes nas comunidades bentnicas (Swartz et
al., 1994; Long et al., 2001; R et al., in press).
Poucos grupos taxonmicos cumprem todos os critrios necessrios para a
realizao de bioensaios com sedimentos (ver seco 2.4), no entanto, os anfpodes
revelaram-se extremamente teis no alcanar dos objectivos propostos para os diferentes
ensaios, sendo por isso, comummente utilizados em testes de toxicidade nos sedimentos
(Costa et al., 1996; R, 1996; Peters e Ahlf, 2005; King et al., 2006; Heuvel-Greve et al.,
- 16 -
2007; Melo e Nipper, 2007; Prato et al., 2008). So organismos abundantes, componentes
importantes das comunidades bentnicas estuarinas e marinhas, esto amplamente
distribudos, vivem em contacto directo com os sedimentos, so tolerantes a uma vasta
gama de diferentes variveis ambientais e so adequados para o manuseamento e cultura
em laboratrio (Casado-Martinez et al., 2007). No entanto, deve referir-se que a
sensibilidade de cada espcie aos sedimentos contaminados, depender do tipo de
comportamento que possui (escavador, tipo de alimentao e taxas de filtrao), do tipo de
exposio ao txico (dissolvido na gua vs no sedimento vs no alimento), fisiologia
orgnica (assimilao e efeitos txicos) e a fase da vida (juvenis vs adultos) (King et al.,
2006).
Os trabalhos de Prato e seus colaboradores (2008) realizados com anfipodes,
alertam para o facto de uma boa espcie a ser utilizada em ensaios de toxicidade, alm de
satisfazer os critrios necessrios investigao experimental, como ter um curto ciclo de
vida e ser sensvel aos contaminantes existentes nos sedimentos, deve tambm ser tolerante
em relao s variveis ambientais abiticas, como por exemplo a temperatura.
Dentro dos anfpodes, o gnero Corophium dos mais utilizados em ensaios de
toxicidade sedimentar. um animal relativamente pequeno, podendo alcanar
comprimentos mximos na ordem dos 12 mm (com excluso das antenas), atingindo a
maturidade sexual com comprimentos da ordem dos 5 mm (Percy, 1999). Por outro lado,
sabe-se atravs de estudos experimentais com Corophium, que a temperatura, a salinidade
e o tipo de sedimento afectam a sobrevivncia, a maturao sexual e o nmero de recm-
nascidos (R, 1996; Prato et al., 2008). Os estudos efectuados com este organismo
mostram que no s extremamente abundante e prolfico em numerosos tipos de meio
aquticos, como parece ser tambm uma das estruturas fundamentais para o funcionamento
sustentado de todo o ecossistema em que se insere (Percy, 1999). Corophium volutator
pertence a este gnero e um exemplo duma espcie utilizada em ensaios de toxicidade
para avaliao do sedimento, estando o seu uso generalizado e regulamentado, caso dos
EUA e Canada, mas tambm na Europa (SETAC Europe, 1993 e ISO 16712, 2005).
Em relao utilizao de anfipodes em testes de toxicidade sedimentar, ainda
importante referir que alguns autores salientam que o facto de se utilizarem animais
selvagens, colhidos directamente do leito sedimentar, pode estar ligado a vrios
inconvenientes importantes: os animais esto sujeitos flutuao e variabilidade sazonal
- 17 -
da populao (entre outros, R, 1996); devido contaminao existente no local de
amostragem pode ocorrer que o organismo-teste seja tolerante a determinado tipo de
contaminantes (Traunspurger e Drews, 1996). Da Peters e Ahlf (2005), entenderem que
para a execuo deste tipo de bioensaio se torna importante o cultivo destes organismos
sob condies padronizadas de laboratrio, mostrando ser possvel a cultura em laboratrio
de C. volutator. Note-se, no entanto, que j em 1996, R, no seu estudo sobre a cultura
laboratorial de C. multisetosum, defendia o mesmo.

2.3 Ensaio agudo vs ensaio crnico
Embora os ensaios de toxicidade no sejam considerados como indicadores
precisos dos efeitos ambientais so, em todo caso, considerados como o melhor mtodo
disponvel para integrar os vrios efeitos dos contaminantes (Long et al., 2001). Em termos
de durao do teste relativamente ao ciclo de vida das espcies em estudo, os ensaios
agudos so aqueles que abrangem um perodo de tempo relativamente mais curto, quando
comparados com os ensaios crnicos ou de ciclo de vida completo, pois so estes onde a
exposio ocorre durante a maior parte do ciclo de vida dos organismos, permitindo
mesmo que este se complete durante o tempo do ensaio.
A falta de protocolos para a exposio crnica e de ciclo de vida completo
(crescimento e reproduo) foi reconhecida durante os anos 90 (Lamberson et al., 1992),
em particular para o sistema estuarino (Chapman e Wang, 2001). por esta razo que no
surpreende que a maioria das avaliaes da toxicidade de sedimentos ou as primeiras
abordagens de avaliao de risco ecolgico nos sedimentos contaminados, ainda usem
respostas aliceradas essencialmente em testes de toxicidade aguda (Ingersoll et al., 1997;
Long et al., 2001).
Estudos recentes indicam que na abordagem de avaliao biolgica dos sedimentos,
onde se inclua uma fase inicial de anlise ecotoxicolgica exaustiva, no devemos confiar
exclusivamente no tipo de resposta aguda, embora esta seja obtida a partir de testes
laboratoriais com procedimentos mais simples e rpidos (Castro et al., 2006). De igual
forma, Scarlett et al. (2007), alertam para a necessidade de ter presente que o emprego
exclusivo de testes agudos, embora muito teis para a identificao de produtos qumicos
altamente txicos, no servem para testar eventos vitais tais como a reproduo e a muda,
durante os quais a sensibilidade aos txicos pode estar aumentada. Alm disso, os
- 18 -
sedimentos marinhos e estuarinos so mais susceptveis de conter contaminantes txicos
em quantidades moderadas, que podem no causar uma mortalidade aguda significativa,
mas influenciarem de forma muito substancial, por exemplo, o crescimento e a reproduo.
De facto, embora os ensaios agudos sejam uma ferramenta vlida e normalizada
(ISO, 2005), os ensaios crnicos so considerados mais sensveis s perturbaes induzidas
no sedimento e podem, assim, proporcionar um maior grau de proteco ambiental. Efeitos
subletais, como a reproduo ocorrida com baixas concentraes do contaminante, podem
tambm ser utilizados para prever efeitos mais subtis ao nvel da populao. Este facto
torna os ensaios crnicos ecologicamente mais relevantes sendo, ao mesmo tempo, uma
ferramenta til para a avaliao do risco em cenrios realistas de exposio ambiental
(Heuvel-Greve et al., 2007). Heuvel-Greve et al. (2007) por exemplo, demonstram que
com os parmetros crescimento e reproduo, o ensaio crnico que levaram a cabo,
incrementou 7 a 18 vezes a sensibilidade amnia e aos nitritos quando comparado com o
ensaio agudo padronizado (10-dias, mortalidade).
Actualmente, comeam a surgir testes onde a fronteira entre teste agudo e teste
crnico se encontra mais esbatida, podendo um teste agudo possuir caractersticas tpicas
de um teste crnico e vice-versa.

2.4 Conceitos a ter em conta na utilizao de ensaios de toxicidade
Vrios so os conceitos que devero ser tidos em considerao na preparao e
execuo do ensaio de toxicidade. Entre os mais relevantes esto os que dizem respeito
amostragem e armazenamento. Manter a integridade de uma amostra de sedimentos
durante a sua remoo, transporte, armazenamento e testes em laboratrio extremamente
difcil. Qualquer ruptura desse ambiente complica as interpretaes dos efeitos do
tratamento, factores causais e comparaes in situ (ASTM, 1990).
Trabalhos realizados por Melo e Nipper (2007), colocam em destaque a questo
relativa ao acondicionamento e utilizao das amostras de sedimento, pois diversos
factores, como por exemplo, a actividade bacteriana e a degradao de compostos
orgnicos podem alterar, substancialmente as condies originais da amostra,
influenciando assim, os resultados obtidos no estudo.
A manipulao de amostras, preservao e tcnicas de armazenamento, tm de ser
concebidas de forma a minimizar eventuais alteraes na composio da amostra, evitando
- 19 -
ou retardando os processos qumicos e/ou actividade biolgica e evitando a sua
contaminao. Deve ser recolhido suficiente volume de amostra para se poder fazer as
anlises necessrias, criando o respectivo stock de amostras para eventual anlise
posterior (por exemplo, para a repetio de ensaios).
As amostras devero preencher completamente o recipiente de armazenamento, no
permitindo a entrada de ar. Se a amostra for congelada, deve ser tida em considerao a
respectiva expanso. O sistema de marcao dos recipientes onde so colocadas as
amostras, deve ser testado antes de ser utilizado no campo, cuidando para que possa resistir
imerso, secagem e congelao sem se soltar ou tornar ilegvel (USEPA / USACE,
1991).
A escolha dos recipientes de amostra deve considerar o tipo de sedimento, tempo
de armazenamento, degradao qumica e de composio da amostra.
Dado que as primeiras horas so as mais crticas quanto a possveis alteraes na
amostra, as etapas de preservao devem ser iniciadas rapidamente, aps a colheita dos
sedimentos. A preservao, seja por meio de refrigerao, de congelao, ou adio de
produtos qumicos, deve ser realizada no campo, assim que possvel. Se as tcnicas de
preservao no poderem ser executadas no campo, as amostras devem ser conservadas de
forma a manterem a sua integridade (ASTM, 1990). Verificou-se que os sedimentos
podem ser armazenados a 4 C, sem alteraes significativas na toxicidade. A concluso
dos testes dever ocorrer idealmente dentro de um perodo de armazenamento
correspondente a duas semanas, mas o tempo de armazenamento vai depender das
caractersticas tanto dos sedimentos como dos contaminantes (ASTM, 1990).
O sedimento para as amostras de testes biolgicos deve ser crivado numa malha de
1mm, para remover todos os organismos vivos do sedimento antes do ensaio. Outros
elementos retidos, no crivo, juntamente com os organismos, tais como fragmentos de
conchas, cascalho, e detritos, devero ser registados e descartados evitando a presena de
organismos indgenas no sedimento teste. A abundncia de organismos teste ou
taxonomicamente semelhantes no sedimento a testar tornam a avaliao dos efeitos difcil
de interpretar. Alm disso a presena de organismos pode afectar negativamente a
sobrevivncia dos organismos teste (ASTM, 1990).
As amostras de sedimentos para uso em ensaios devem ser bem homogeneizadas
antes de as utilizar. A heterogeneidade dos sedimentos pode tornar por vezes difcil a
- 20 -
interpretao dos resultados laboratoriais, por grande variabilidade de respostas intra
sedimentos, ( R, 1996).
R (1996), refere ainda que de primordial interesse o conhecimento da
sensibilidade de adultos e jovens a variveis naturais como a temperatura, salinidade e teor
em finos do sedimento para que possam ser determinados os limites de tolerncia da
espcie para estes factores. Desta forma poder-se-o determinar as condies mais
apropriadas para a preparao e realizao dos ensaios de toxicidade.
Relativamente aos ensaios crnicos, R (1996) chama ateno para o facto de ser
importante salientar que, em ensaios de rotina de ciclo de vida completo, a experincia do
operador, quer na manuteno de culturas quer na manuteno e finalizao do ensaio, de
primordial importncia, pois pode reflectir-se nos resultados obtidos. Assim, enquanto que
a experincia do operador pouco determinar os resultados de toxicidade sedimentar
aguda, considera-se que os ensaios de ciclo de vida completo requerem experincia prvia,
antes de se obterem resultados reprodutveis e coerentes.
Esta autora refere ainda preocupaes relativas ao ensaio crnico, nomeadamente:
- os anfipodes recm-nascidos devem ser manipulados com muita ateno de maneira a
que sejam afectados o menos possvel;
- s devem ser inoculados os anfipodes que nadam com vigor e no apresentam qualquer
sinal de perturbao;
- antes de serem inoculados devem ser recontados para evitar erros de contagem;
- ao renovar a gua esta deve estar mesma temperatura que a do ensaio para evitar
choques trmicos;
- o alimento seco no deve acumular-se sobre o sedimento nem a camada de gua deve
estar com cor verde ou turva;
- a renovao de gua no deve fazer perturbaes no sedimento.
Tal como foi brevemente mencionado (seco 2.2), ao desenvolver um protocolo
para o bioensaio de sedimentos marinhos e estuarinos, bastante importante a escolha da
espcie-teste a utilizar. Para tal desejvel que a espcie que se vai utilizar possua uma
srie de propriedades, nomeadamente (ASTM, 2003; King et al., 2006):
(a) ampla tolerncia a diferentes graus de salinidade;
(b) alta sensibilidade ao comum dos contaminantes existentes nos sedimentos;
(c) alta taxa de sobrevivncia sob as condies de controlo;
- 21 -
(d) ocupao dos micro habitats no ou preferencialmente, abaixo do interface sedimentos-
gua, para assegurar a mxima exposio aos contaminantes existentes nos sedimentos;
(e) baixa sensibilidade para os sedimentos naturais variveis, tais como a dimenso das
partculas orgnicas e contedos, para permitir testar uma ampla variedade de tipos de
sedimento;
(f) ampla distribuio geogrfica para aumentar a amplitude de sua aplicao como um
teste que utiliza espcies animais;
(g) facilidade de recolha, tratamento e manuteno em laboratrio;
(h) importncia ecolgica nos sistemas estuarinos;
(i) capacidade de ser cultivada ou em alternativa que esteja disponvel no campo durante
todo o ano.
No obstante as limitaes e cuidados a ter na utilizao da macrofauna bentnica
em estudos de toxicologia sedimentar, as vantagens da utilizao de comunidades
bentnicas para determinar a qualidade sedimentar, esto directamente relacionadas com a
sua capacidade de fornecer uma base ecolgica para a avaliao da qualidade dos
sedimentos trata-se efectivamente, de uma avaliao fundamentada na experimentao
(Quintino et al., 1989; Costa et al., 1996; Castro et al., 2006).


2.5 Uso simultneo de mltiplos descritores de qualidade sedimentar
A avaliao do estado ecolgico dos sedimentos tende a ser muito especfica para
cada caso ou situao, exigindo contudo, a necessidade de serem criados procedimentos
genricos (Chapman et al., 2002), que possibilitem a uniformizao de critrios,
nomeadamente quanto ao uso e escolha da fauna bentnica que utilizada nessa
investigao.
O conceito de Trada da Qualidade Sedimentar (TQS), conforme originalmente
desenvolvido h cerca de 20 anos por Chapman, envolve trs componentes independentes:
qumica dos sedimentos (para determinar a contaminao qumica), toxicidade dos
sedimentos (bioensaios sedimentares para determinar a toxicidade), e estrutura da
comunidade bentnica (para determinar o estado da fauna residente presumivelmente mais
exposta aos contaminantes existentes no sedimento). As duas primeiras componentes
foram consistentemente includas em todos os exemplos conduzidas at data, no entanto
- 22 -
a ltima componente foi modificada para "alterao das comunidades residentes" e, em
alguns casos, foi mesmo substituda ou excluda. Noutros casos, componentes
suplementares foram adicionadas Trada da Qualidade Sedimentar (Chapman e Hollert,
2006).
Combinando informaes sobre a caracterizao fsica e qumica dos sedimentos,
da estrutura da comunidade bentnica e dos testes de toxicidade nos sedimentos, a TQS
fornece uma abordagem abrangente e holstica para avaliar a magnitude de uma resposta
biolgica. Em particular, a introduo de testes de toxicidade nos sedimentos, fornece mais
evidncias directas e conclusivas sobre os efeitos biolgicos dos contaminantes presentes
nos sedimentos e isto complementa e refora as informaes provenientes das
comunidades residentes e da contaminao existente nos sedimentos (Chapman, 1990;
1996).
Normalmente, a aplicao da TQS para avaliao dos efeitos associados presena
de contaminantes no sedimento, procura fazer a integrao das 3 componentes j citadas e
do melhor juzo profissional dado por especialistas.
Actualmente, no existe nenhum mtodo universalmente aceite para o tratamento e
interpretao dos dados referentes trada, nem existe uma classificao que tenha por
base uma abordagem com o o uso simultneo de mltiplos descritores de qualidade
sedimentar (Chapman et al., 2002; Long e Sloane, 2005; Wenning et al., 2005). Cada
estudo ou monitorizao usa uma abordagem desenvolvida atravs da prpria experincia
de cada investigador.
A mais valia da TQS reside na abordagem peso-das-evidncias que utiliza, e na
sua capacidade de discernir os efeitos toxicolgicos directos, das variaes naturais das
caractersticas do habitat (Chapman, 1996). Atravs desta abordagem, possvel deduzir
uma relao causal entre a contaminao qumica e as perturbaes ocorridas nas
comunidades locais. Assim, a TQS fornece um bom exemplo de um instrumento de
avaliao integrada que inclui os dados obtidos no campo. No entanto, para melhorar o
mtodo, as medidas de bioacumulao tm de ser levadas em considerao (Chapman e
Wang, 2000). Quer isto dizer, que a avaliao toxicolgica dos sedimentos dever ser
encarada numa perspectiva muito mais abrangente do que a inicialmente prevista por
Chapman aquando da criao da TQS. Idealmente, as abordagens ao problema e a
avaliao dos resultados, tero de ser efectuadas tendo por base que o estudo do ambiente
- 23 -
sedimentar, dar um contributo que ter de ser integrado num estudo mais alargado do
ecossistema.
A ttulo de exemplo sobre a forma como actua uma avaliao do tipo TQS, refira-
se o trabalho Silva et al. (2004) onde mostram, acerca de um dado local sada do Esturio
do Tejo, que o local foi consistentemente contaminado pelo elevado teor de HPA
(Hidrocarbonetos policiclicos aromticos), que pode ser a causa do empobrecimento da sua
comunidade bentnica e dos efeitos na sobrevivncia e desenvolvimento das larvas do
ourio-do-mar, bem como sobre a sobrevivncia e reproduo do teste com anfpodes. So
aqui evidenciados os principais agentes de perturbao que afectam este local: a existncia
de altas quantidades de HPA que provocam alteraes fsico-qumicas no ambiente (1
alterao da TQS); maus resultados nos testes de toxidade sedimentar traduzidos em maus
resultados nos parmetros sobrevivncia e desenvolvimento e reproduo dos animais
utilizados nos testes (2 alterao da TQS); empobrecimento na quantidade e qualidade da
fauna bentnica existente na zona (3 alterao da TQS) (Silva et al., 2004).
Embora existam normas gerais para interpretao e integrao dos dados da trada,
muitas vezes os especialistas divergem sobre a importncia dessas normas. A maior fonte
de incerteza est relacionada com o potencial de alterao da composio da comunidade
da endofauna poder ser afectado por factores fsicos e de habitat e a incapacidade de
distinguir essas alteraes dos efeitos provocados por contaminantes (Bay et al., 2007).
Vrios passos so recomendados para reduzir o grau de incerteza associado
integrao e interpretao dos dados da TQS. Em primeiro lugar, elementos-chave da
estratgia de avaliao, tais como o peso relativo de cada componente, a forma como
mltiplas componentes so combinadas (por exemplo atravs de classificaes ou de
enquadramentos lgicos), e os critrios para determinar a avaliao final, devero ser
estabelecidos durante a concepo do estudo. Em segundo lugar, a comparabilidade entre
os estudos pode ser melhorada fornecendo orientao sobre os mtodos especficos de
medio da qumica dos sedimentos (por exemplo, lista de analitos, limites de deteco,
como so usadas as directrizes de qualidade dos sedimentos), da toxicidade dos sedimentos
(por exemplo, mtodos de ensaio, limites de classificao da toxicidade), e estado da
comunidade bentnica (por exemplo, quais as mtricas ou ndices a utilizar, os critrios
para determinar os efeitos). Por fim, a incerteza na avaliao da qualidade dos sedimentos
- 24 -
pode ser reduzida atravs da melhoria da formao dos indivduos na interpretao dos
dados (Bay et al., 2007).
Recentemente, a bioamplificao (aumento da concentrao de alguns
contaminantes orgnicos atravs da cadeia alimentar), foi formalmente inserida como uma
componente primria adicional TQS, resultando efectivamente, numa Ttrada da
Qualidade dos Sedimentos (Grapentine et al., 2002; Chapman e Anderson, 2005). No
entanto, embora outros autores tenham sugerido que a TQS deva ser expandida para incluir
outros componentes, no houve qualquer anlise formal de como e por que razo, tal
expanso dever ocorrer (Chapman e Hollert, 2006).
Estes autores questionam-se sobre a possibilidade de esta se tornar numa Ttrada,
numa Pentada ou mesmo numa Hxada: No conceito da TQS, nunca houve a inteno de
a limitar a apenas trs componentes especficos. Pouco tempo aps o seu
desenvolvimento, Chapman (1986) realizou um estudo TQS no qual substituiu a anlise
histopatolgica executada em peixes do fundo, pela avaliao da composio da
comunidade da endofauna bentnica. Para Chapman (1989), a TQS, na sua essncia, uma
ferramenta que correlaciona componentes, no sendo, por si s, um instrumento de
sentena definitiva (Chapman e Hollert, 2006).
Uma componente adicional que no foi, tanto quanto sabemos, aplicada ou
proposta para a TQS, a determinao da diversidade gentica e de quaisquer alteraes
que possam ser relacionadas com os contaminantes existentes nos sedimentos. Chapman e
Hollert (2006), defendem que a diversidade gentica pode ser uma importante componente
relativa futura viabilidade das populaes.
Os dados referentes comunidade bentnica tm muitas limitaes, mas,
devidamente analisados, mantm-se como a componente de avaliao ecologicamente
mais relevante sobre possveis impactos na fauna. De facto, a mais convincente prova
relativa degradao induzida pela poluio, continua a ser fornecida pela incluso da
anlise da fauna bentnica na TQS (McPherson et al., 2008).





- 25 -
3. Utilizao de anfpodes em ensaios de toxicidade nas ltimas
duas dcadas

Na Amrica do Norte, a equipa formada por Chapman e Long (1983), conclui nos
seus trabalhos, que os testes de toxicidade sedimentar so parte integrante dos estudos de
monitorizao de poluio marinha e devem ser usados simultaneamente com estudos
qumicos e ecolgicos como parte de um estudo mais completo. Percebendo que os
mtodos isolados apresentam certas limitaes, os testes de toxicidade sedimentar tm sido
utilizados dentro de avaliaes integradas, das quais se destaca a Trada da Qualidade de
Sedimento (TQS) (Chapman e Hollert, 2006) que consiste no uso sinptico de anlises
qumicas, testes de toxicidade e estudo da comunidade bentnica. Este mtodo integrado
tem sido usado com sucesso tendo obtido resultados muito consistentes (Quintino et al.,
2001; Silva et al., 2004; King et al., 2007; Melo e Nipper, 2007).
Com a difuso do uso dos testes de toxicidade sedimentar e da sua comprovada
utilidade, novos mtodos foram adaptados para diversas espcies. Hoje, os testes de
toxicidade de sedimento tm sido amplamente utilizados (entre outros, Bat e Raffaelli,
1998; Chapman et al., 2002; Peters e Ahlf, 2005; Castro et al., 2006; Heuvel-Greve et al.,
2007; King et al., 2007; R et al., 2007; Scarlett et al., 2007).
Bat, (2005) num artigo de reviso, d particular ateno utilizao de anfpodes
em bioensaios padronizados com o objectivo de avaliar a toxicidade existente em
sedimentos marinhos e estuarinos. Estes testes constituem uma forma conveniente de
avaliar no s a sensibilidade da comunidade bentnica, como tambm reflectem a
biodisponibilidade de um contaminante, o que por vezes difere bastante da sua quantidade
total determinada atravs de mtodos de anlise qumica. Para este autor, o emprego de
anfpodes revela-se particularmente til nas contaminaes por metais pesados, pois
possuem caractersticas prprias, como por exemplo: distribuio geogrfica alargada e
facilidade de cultivo em laboratrio, que constituem mais valias importantes quando se
pretende elaborar protocolos de bioensaios sedimentares.
A nvel mundial, organizaes como o American Society for Testing and Materials
(ASTM) e a International Organization for Standardization (ISO), fizeram o
reconhecimento do extraordinrio potencial dos anfpodes como organismos-teste, ao
- 26 -
recomendarem a sua incluso nos diferentes protocolos elaborados para bioensaios com
sedimentos marinhos e estuarinos (Bat, 2005; ISO, 2005; ASTM, 2008).
Neste captulo e com o objectivo de destacar o emprego de anfpodes na
toxicologia sedimentar, utilizamos uma amostra constituda por 33 trabalhos cientficos
que em comum tm o facto de utilizarem anfpodes durante a realizao das suas
experincias. Por outro lado, parece-nos igualmente importante e no esquecendo a
limitada dimenso da nossa amostra, estabelecer uma perspectiva de carcter globalizante
(nomeadamente, referenciando o contributo dado por investigadores de diferentes pases),
sobre o que se tem feito em matria de toxicidade sedimentar durante as duas ultimas
dcadas. A Tabela 1 surge com o objectivo de, relacionando vrios aspectos ligados
toxicologia sedimentar, se constituir como um elemento comparativo de acesso rpido a
dados relevantes presentes nestes estudos.
Daquilo que se tem feito ao longo das duas ltimas dcadas podemos comear por
destacar a situao na Amrica do Norte (nomeadamente Canad e EUA), onde notria a
importncia dos trabalhos realizados pelo canadiano P. Chapman que foi um dos principais
responsveis pelo desenvolvimento dos mtodos e anlises envolvidos nos estudos de
toxicidade sedimentar. Dele temos estudos que mostram, por exemplo, o uso da SQT na
avaliao dos impactos provocados pela poluio (Chapman, 1990); critrios para a
qualidade ambiental (Chapman, 1991), onde o autor aponta para a implementao de
medidas e de possveis solues tendentes a aumentarem a qualidade ambiental; o papel da
ecotoxicologia na avaliao do impacto ambiental (Chapman, 1993), a importncia dos
estudos de qualidade ambiental no dia-a-dia das sociedades (Chapman, 2006); estudos
especficos sobre a abordagem Peso das Evidncias para sedimentos e efluentes
(Chapman, 2006), onde o autor alerta para a necessidade do emprego de testes que avaliem
os impactos ao nvel das comunidades animais residentes, como forma de mais
eficazmente avaliar qual o real efeito provocado nos locais atingidos; introduo a novas
perspectivas no campo da ecotoxicologia do comportamento das espcies aquticas
(Chapman, 2007), onde nos fornecida uma viso dos caminhos futuros que a
ecotoxicologia poder traar.
Para a Amrica do Norte, esto ainda referenciados na Tabela 1, os estudos de
Hellou et al. (2008), no Canad, que utilizando C. volutator, estudaram a utilizao de um
mtodo qumico no letal na avaliao de sedimentos (baseado no estudo do
































































































































































































































-

2
7

-


T
a
b
e
l
a

1
.

D
e
s
c
r
i
t
o
r
e
s

e
c
o
t
o
x
i
c
o
l

g
i
c
o
s

e

c
a
r
a
c
t
e
r

s
t
i
c
a
s

d
o
s

e
n
s
a
i
o
s

s
e
d
i
m
e
n
t
a
r
e
s

c
o
n
s
u
l
t
a
d
o
s


L
e
g
e
n
d
a
:

S
e
d
-

S
e
d
i
m
e
n
t
o
;

H
D
-

H
o
r
a
s

d
i
a
;

H
N
-

H
o
r
a
s

n
o
i
t
e
;

A
-

e
n
s
a
i
o

a
g
u
d
o
;

C
-

e
n
s
a
i
o

c
r

n
i
c
o
;

(
D
e
s
c
r
i
t
o
r
e
s
:

I
-

I
m
o
b
i
l
i
z
a

o
;

M
-

M
o
r
t
a
l
i
d
a
d
e
;

C
-

c
r
e
s
c
i
m
e
n
t
o
;

R
-

r
e
p
r
o
d
u

o
;


E
-

e
m
e
r
g
i
r

d
o

s
e
d
i
m
e
n
t
o
;


C
e
-

c
a
p
a
c
i
d
a
d
e

d
e

s
e

e
n
t
e
r
r
a
r
;

B
-

b
i
o
a
c
u
m
u
l
a

o
;

C
t
o
-

c
o
m
p
o
r
t
a
m
e
n
t
o
)


E
s
p

c
i
e

T
i
p
o

t
e
s
t
e


D
u
r
a

o

t
e
s
t
e

T
e
m
p
.

C
S
e
d
.
/

g
u
a

S
a
l
i
n
i
-
d
a
d
e



F
o
t
o

p
e
r
i
o
d
o

p
H

Q
\
d
e

g
u
a

Q
\
d
e

s
e
d
i
/
t
o
N

p
l
i
c
a
s
N

i
n
d
i
v
.

C
o
l
o
c
a
d
o
D
e
s
c
r
i
t
o
r
e
s
D
a
t
a

A
u
t
o
r
(
e
s
)

C
.

v
o
l
u
t
a
t
o
r


C


4


s
e
m
a
n
a
s

1
7

1



s
e
d

1
5

1
6
H
D

8
H
N


8
.
1
1
0

c
m

2

c
m

3

2
0

M
;
C
;
R

2
0
0
7

H
e
u
v
e
l
-

G
r
e
v
e

e
t

a
l
.


C
.

o
r
i
e
n
t
a
l
e

A


9
6
h
-
L
C

5
0

1
6

g
u
a

3
6

1
2
4
H
D


5
0
0
m
l


2

2
0

M

2
0
0
8


L
e
r
a






e
t

a
l
.

C
.

v
o
l
u
t
a
t
o
r

A

1
0
-
d
i
a
s



L
C
5
0

1
5

0
.
1

s
e
d

3
3

1
2
H
D

1
2
H
N


1
.
5
L



8

c
m

5

3
0

M

2
0
0
8

M
a
y
o
r





e
t

a
l
.


C
.

o
r
i
e
n
t
a
l
e


A

9
6
h
-
L
C

5
0

-



1
0
-
d
i
a
s

1
6

g
u
a
+

s
e
d

3
5

2
4
H
D

8
.
0

0
.
1

5
0
0
m
l

2
0
0
m
l

3

-

4

2
0

-

2
5

M

2
0
0
8

P
i
c
o
n
e




e
t

a
l
.



C
.

v
o
l
u
t
a
t
o
r

A

M
F
B
-
4
8
h

m

t
o
d
o

a
u
t
o
m

t
i
-
c
o


1
5

1

B
i
o
-

b
a
n

+

g
u
a
+

s
e
d


1
2
H
D

1
2
H
N





8

C
t
o

2
0
0
6

K
i
r
k
p
a
t
r
i
c
k


e
t

a
l
.


C
.

v
o
l
u
t
a
t
o
r


A

C

1
0
-
d
i
a
s


2
8
-
d
i
a
s

1
5

2

s
e
d



7
.
5
a

8
.
5



2
0
0
m
l


M
;
C

2
0
0
7


A
l
l
e
n


e
t

a
l
.

































































































































































































































-

2
8

-


C
.

v
o
l
u
t
a
t
o
r


A


C

1
0
-
d
i
a
s


2
8
-
d
i
a
s

1
5

2

s
e
d

2
5

3

p
s
u

1
2
H
D

1
2
H
N

7
.
0
9
.
0

1
.
0
L

1
6
0
m
l
9

3
0

M
;
C
;
R

2
0
0
7
S
c
a
r
l
e
t
t



e
t

a
l
.


C
.
v
o
l
u
t
a
t
o
r

A

1
0
-
d
i
a
s


1
5

s
e
d

3
5

2
4
H
D


8
0
0
m
l

1
5
0
m
l
2

2
0

M

2
0
0
1


G
r
a
n
t

e






B
r
i
g
g
s



G
a
m
m
a
r
u
s

a
e
q
u
i
-
c
a
u
d
a

-

M
i
c
r
o
d
e
u
t
o
p
u
s

g
r
y
l
l
o
t
a
l
p
a

A

4
8
h

2
0

s
e
d


1
6
H
D

8
H
N


4
0
0
m
l


4

1
0

M

2
0
0
4
C
e
s
a
r


e
t

a
l
.


G
a
m
m
a
r
u
s

l
o
c
u
s
t
a

A

9
6
h
-
L
C

5
0



-

1
0
-
d
i
a
s

1
5

g
u
a
-

s
e
d

3
3

1
2
H
D

1
2
H
N



1
c
m

3

-

5

2
0

M

1
9
9
6
C
o
s
t
a



e
t

a
l
.

C
.

m
u
l
t
i
s
e
t
o
s
u
m

A

C

1
0
-
d
i
a
s

-

2
1
-
d
i
a
s

2
2


1
8

s
/
u





1

-

5

2
0

M
;
C
;
R

2
0
0
6
C
a
s
t
r
o


e
t

a
l
.


C
.

v
o
l
u
t
a
t
o
r



1
5



1
2
H
D

1
2
H
N


8
0
0
m
l

1
-
2
c
m

1
0
0

B

2
0
0
8
H
e
l
l
o
u



e
t

a
l
.



C
.

v
o
l
u
t
a
t
o
r

A

1
0
-
d
i
a
s

1
1

1

s
e
d

3
2

1
6
H
D

8
H
N



2
c
m

4

2
0

M
;
E
;
C
e

1
9
9
8
B
a
t




e



R
a
f
f
a
e
l
l
i





































































































































































































































-

2
9

-


A
m
p
e
l
i
s
c
a

b
r
e
v
i
c
o
r
-
n
i
s


A

1
0
-
d
i
a
s

1
8

1

s
e
d

3
5

s
/
u

l
u
z

n
a
t
u
r
a
l


1
.
0
L

3
c
m

3

2
0

M

2
0
0
7

C
a
s
a
d
o
-
M
a
r
t
i
n
e
z



e
t

a
l
.


C
.


i
n
s
i
d
i
o
s
u
m

A

1
0
-
d
i
a
s

-

9
6
h
-
L
C

1
0
;

1
5
;

2
0
;

2
5

g
u
a
-

s
e
d

3
6

1
2
H
D

1
2
H
N

7
.
8

0
.
3

8
0
0
m
l

2
c
m

4

-

5


2
0

-

2
5

M

2
0
0
8
P
r
a
t
o


e
t

a
l
.

C
.


i
n
s
i
d
i
o
s
u
m

A

1
0
-
d
i
a
s

1
5

s
e
d

3
0

2
4
H
D


8
0
0
m
l

2
0
0
m
l


2
0

M

2
0
0
7
G
u
e
r
r
a

e
t

a
l
.

C
.

m
u
l
t
i
s
e
t
o
s
u
m


A

9
6
h


-

1
0
-
d
i
a
s

2
0

-

1
5

-

2
2

g
u
a
-

s
e
d

1
8
-
2
0

s
/
u

-

9

s
/
u

1
4
H
D

1
0
H
N


8
0
0
m
l

2
0
0
m
l

3

5

-

2
5

M

2
0
0
7
R

e
t

a
l
.

T
i
b
u
r
o
n
e
l
l
a

v
i
s
c
a
n
a

A

4
8
h
L
C
5
0

-

1
0
-
d
i
a
s

2
5

g
u
a
-

s
e
d


3
4

2

p
p
t

2
4
H
D

7
.
9
a

8
.
5

7
5
0
m
l

2
c
m

3

1
5

-

2
0

M
;
E


2
0
0
7

M
e
l
o



e



N
i
p
p
e
r




C
.

m
u
l
t
i
s
e
t
o
s
u
m


A

C

1
0
-
d
i
a
s

-

2
1
-
d
i
a
s

1
5

-

2
2

s
e
d







2
0

M
;
C
;
R

2
0
0
4
S
i
l
v
a


e
t

a
l
.

T
i
b
u
r
o
n
e
l
l
a

v
i
s
c
a
n
a

A

4
8
h
-
L
C

5
0



2
5

g
u
a


2
4
H
D


3
5
0
m
l


3

-

5

1
0

M

2
0
0
3



























A
b
e
s
s
a



e


S
o
u
s
a
,



















































































































































































































































-

3
0

-


T
i
b
u
r
o
n
e
l
l
a

v
i
s
c
a
n
a

A

1
0
-
d
i
a
s

2
5

2

s
e
d


2
4
H
D


7
5
0
m
l

2
c
m

4

1
0

M

2
0
0
6
C
e
s
a
r


e
t

a
l
.


H
y
a
l
e
l
l
a

a
z
t
e
c
a

A

1
0
-
d
i
a
s






2
5
0
m
l

1
0
0
m
l

1
0

M

1
9
9
6
P
o
r
e
t
t
i



e
t

a
l
.


R
h
e
p
o
x
y
n
i
u
s


a
b
r
o
n
i
u
s


-


C
.

v
o
l
u
t
a
t
o
r

-


B
a
t
h
y
p
o
r
e
i
a


s
a
r
s
i


A

1
0
-
d
i
a
s

1
5

1


-

1
4

1


-

1
0

1






2
c
m

6

1
0

-

2
0

M
;
E
;
I

1
9
9
2


v
a
n

d
e
n


H
u
r
k


e
t

a
l
.


G
r
a
n
d
i
d
i
e
r
e
l
l
a

j
a
p
o
n
i
c
a

A

9
6
h
-
L
C
5
0

2
0


3
0
p
s
u





3

3
0

M

2
0
0
5
L
e
e


e
t

a
l
.



M
a
n
d
i
b
u
l
o
p
h
o
x
u
s


m
a
i

-

H
a
u
s
t
o
r
i
o
i
d
e
s


i
n
d
i
v
i
s
u
s

-


H
a
u
s
t
o
r
i
o
i
d
e
s



k
o
r
e
a
n
u
s

-

M
o
n
o
c
o
r
o
p
h
i
u
m

a
c
h
e
r
u
s
i
c
u
m


A

1
0
-
d
i
a
s

2
0


3
0
p
s
u







3

2
0

M
;
E

2
0
0
5
L
e
e


e
t

a
l
.


H
y
a
l
e
l
l
a

a
z
t
e
c
a

A

1
0
-
d
i
a
s

2
0

2

s
e
d


1
6
H
D

8
H
N


1
6
0
m
l

7
0
g
r

3

1
0

M

2
0
0
0
R
i
d
d
i
c
k


e

D
u
n
n




































































































































































































































-

3
1

-



A
m
p
e
l
i
s
c
a

b
r
e
v
i
c
o
r
-
n
i
s

A

1
0
-
d
i
a
s

1
9

1

s
e
d


1
2
H
D

1
2
H
N


8
0
0
m
l

2
0
0
g
r

2
0

M

2
0
0
8

M
o
r
a
l
e
s
-
C
a
s
e
l
l
e
s


e
t

a
l
.

G
a
m
m
a
r
u
s

a
e
q
u
i
-
c
a
u
d
a

A

C

1
0
-
d
i
a
s

-

2
8
-
d
i
a
s

-

9
6
h

L
C
5
0

1
5

-

1
8

-

2
0

g
u
a
-

s
e
d


0

-

3

-

1
5

-

2
5

-

3
6

8
.
3
0
8
0
0
m
l

2
c
m

3

-

4

-

5

1
0

-

2
0

-

4
0

M
;
C

2
0
0
5

P
r
a
t
o


e



B
i
a
n
d
o
l
i
n
o


M
o
n
o
c
o
r
o
p
h
i
u
m

i
n
s
i
d
i
o
s
u
m

A

C

1
0
-
d
i
a
s

-

2
8
-
d
i
a
s

-

9
6
h

L
C
5
0

1
0

-

1
5

-

1
8

-

2
0

g
u
a
-

s
e
d


0

-

3

-

1
5

-

2
5

-

3
6
g
/
K
g


8
.
3

8
0
0
m
l

2
c
m

3

-
5


1
0

-

2
0

-

4
0

M

2
0
0
6

P
r
a
t
o



e



B
i
a
n
d
o
l
i
n
o



G
a
m
m
a
r
u
s

a
e
q
u
i
-
c
a
u
d
a


-

C
.

i
n
s
i
d
i
o
s
u
m

A

9
6
h

L
C
5
0

-

1
0
-
d
i
a
s

1
6

g
u
a
-

s
e
d


3
6

5
0
0
m
l

+

7
5
0
m
l

2
c
m

3

2
0

M

2
0
0
6

P
r
a
t
o

e
t

a
l
.

C
.

m
u
l
t
i
s
e
t
o
s
u
m

A

9
6
h

1
5

1

s
e
d

3
6

-

7
2

-

1
0
8
s
/
u

1
4
H
D

1
0
H
N


1
9
0
m
l

1
0
m
l

3

5

M

2
0
0
8
Q
u
i
n
t
i
n
o


e
t

a
l
.

































































































































































































































-

3
2

-



M
o
n
o
p
o
r
e
i
a

a
f

n
i
s

A

2
4
h

4
.
5

0
.
2

s
e
d

6
s
/
u

l
u
z

n
a
t
u
r
a
l



7
0
m
l

1
0

7
0

M

2
0
0
8
W
i
k
l
u
n
d

e
t

a
l
.



C
.

m
u
l
t
i
s
e
t
o
s
u
m

-

M
i
c
r
o
d
e
u
t
o
p
u
s

g
r
y
l
l
o
-
t
a
l
p
a

A

1
0
-
d
i
a
s

2
0

g
u
a
-

s
e
d


3
5

1
8
H
D

6
H
N


6
0
0
m
l

2
0
0
m
l


1
0

M

2
0
0
9

S
a
n
z
-
L

z
a
r
o



e

M
a
r

n



- 35 -
comportamento evidenciado pelos animais quando sujeitos a ambientes controlados,
constitudos por sedimentos de referncia aos quais se juntam, de forma calculada,
sedimentos da amostra a testar, proporcionando assim, a existncia de ambientes com
graus diferenciados de concentrao aos quais os animais reagem tambm de forma
diversa) e de Riddick e Dunn (2000), nos USA, que utilizaram a Hyalella azteca, na
avaliao de sedimentos de zonas hmidas ribeirinhas.
Relativamente Europa e para Portugal a tabela 1 destaca alguns trabalhos
desenvolvidos no incio da dcada de 90 na Universidade de Aveiro com C. multisetosum,
para fazer a avaliao ecotoxicolgica de sedimentos marinhos e estuarinos (R, 1996).
Estes trabalhos so mais tarde desenvolvidos com novos estudos da mesma equipa, onde se
mostra o elevado potencial do C. multisetosum para a utilizao em testes de toxicidade
aguda e crnica em meio estuarino (Quintino et al.; 2001; Silva et al., 2004; Castro et al.
2006; R et al., 2007; in press). Ainda para Portugal, referncia na Tabela 1 a Costa et al.
(1996) que usando Gammarus locusta avaliou o potencial de um novo teste para uso em
toxicologia.
No mbito dos trabalhos efectuados em Espanha, na tabela 1 destacam-se os
trabalhos desenvolvidos por Csar et al. (2004) com a utilizao dos anfpodes Gammarus
aequicauda e Microdeutopus gryllotalpa, na avaliao da toxicidade dos sedimentos na
zona costeira mediterrnea; por Casado-Martinez et al. (2007) na avaliao da
sensibilidade de anfpodes a dragados usando Ampelisca brevicornis; Morales-Caselles et
al. (2008), que usando a mesma espcie, fizeram a avaliao de sedimentos marinhos aps
um importante derrame de petrleo; por fim referenciado o trabalho de Sanz-Lzaro e
Marn (2009), onde so testadas, utilizando C. multisetosum e Microdeutopus gryllotalpa,
duas reas estuarinas europeias em relao contaminao com crude.
Os estudos realizados em Itlia indicam preponderncia para duas espcies de
anfpodes, C. orientale e C. insidiosum. O primeiro foi utilizado por Lera et al. (2008),
para verificar as variaes de sensibilidade ao txico de referncia CdCl2 e SDS, e por
Picone et al. (2008) que o utilizou para avaliar a sua sensibilidade a substncias puras. A
segunda espcie aparece nos estudos de Guerra et al. (2007) com o objectivo de verificar o
impacto das dragagens em zonas costeiras lagunares, e tambm nos de Prato et al. (2008),
que avaliam o efeito da temperatura nos testes agudos de toxicidade. Desta investigadora e
da sua colaborao com outros investigadores, encontramos ainda referenciados os
- 36 -
trabalhos com Gammarus aequicauda (Prato e Biandolino, 2005), com o objectivo de
avaliar o potencial da espcie para utilizao em testes de biotoxicidade; com
Monocorophium insidiosum (Prato e Biandolino , 2006), cujo objectivo foi o mesmo do
trabalho anterior; com Gammarus aequicauda e Corophium insidiosum (Prato et al., 2006)
cujo objectivo foi o de avaliar o potencial das duas espcies para testes de avaliao de
sedimentos.
Este conjunto de trabalhos mostra que nos pases do sul da Europa, as opes em
relao a espcies-teste tm sido diversificadas, enquanto que nos pases do norte da
Europa, a escolha foi mais uniforme. Esta informao resumida na Tabela 2 (pag. 35), a
qual fornece a relao entre as espcies de anfpode com os pases descritos ao longo da
nossa amostra. Esta situao poder ser explicada pelas indicaes fornecidas na norma
ISO 16712 (2005), que no seu anexo B, sugere critrios de escolha quanto ao tipo de
anfpode a utilizar em estudos de toxicidade aguda.
Pases como a Holanda, a Alemanha, a Inglaterra ou a Esccia, fazem uma escolha
clara no tipo de anfpode a utilizar: C. volutator (consta da lista do anexo B da norma ISO
16712, 2005). Neste panorama, a excepo acontece mais a norte com a Sucia, onde
Wiklund et al. (2008), utiliza o Monoporeia afnis com objectivo de fazer avaliao
comportamental em relao a uma espcie invasiva. Na Alemanha, Kirkpatrick, et al.
(2006), testavam a capacidade de C. volutator como biomonitor; na Holanda, Heuvel-
Greve et al. (2007), avaliam a eficcia da espcie num teste crnico; no Reino Unido, Hurk
et al. (1992), fazem uma comparao entre trs espcies de anfpodes em testes de
toxicidade, utilizando para alm de C. volutator, Rhepoxynius abronius e Bathyporeia
sarsi; Grant e Briggs (2001), procuraram avaliar as respostas da espcie a metais e
hidrocarbonetos; Scarlett et al. (2007), estudaram um mtodo para avaliar com a espcie a
toxicidade crnica de sedimentos marinhos e estuarinos; Allen et al. (2007), propem-se
testar a toxicidade de um composto qumico, o Ivermectin; Mayor et al. (2008), fazem uma
avaliao toxicolgica aos tratamentos no aquacultura e Bat e Raffaelli (1998), fazem uma
avaliao da toxicidade de sedimentos atravs de bioensaio com a mesma espcie.
Para outras zonas do globo terrestre, referenciado na tabela 1, a Amrica do Sul,
atravs do Brasil e a sia, atravs da Coreia Sul.

- 37 -



Tabela 2: Utilizao das espcies de anfpodes pelos pases da amostra

Pas
----------------
Espcie

H
o
l
a
n
d
a

I
t

l
i
a

U
K

A
l
e
m
a
n
h
a

E
s
p
a
n
h
a

P
o
r
t
u
g
a
l

C
a
n
a
d
a

E
s
c

c
i
a

B
r
a
s
i
l

C
o
r
e
i
a

U
S
A

S
u

c
i
a

C.volutator






C.orientale

C.multisetosum



C. insidiosum

Gammarus
aequicauda

Gammarus
locusta

Microdeutopus
gryllotalpa

Ampelisca
brevicornis

Tiburonella
viscana

Hyalella azteca

Rhepoxynius
abronius

Bathyporeia
sarsi

Grandidierella
japonica

Mandibulophoxus
mai

Haustorioides
indivisus

Haustorioides
koreanus

Monocorophium
acherusicum

Monocorophium
insidiosum

Monoporeia
afnis

Echinogammarus
meridionalis

- 38 -

18%
82%
Agudos
Cronicos


Figura 1 Dados sobre a percentagem de utilizao de Ensaios Agudos e Crnicos.
No Brasil, as primeiras pesquisas a respeito de toxicidade de sedimentos marinhos
foram realizadas por Nipper et al. (1990). Tal como na Europa do norte, tambm aqui
parece haver preferncia por determinado tipo de anfpode: Tiburonella viscana. A
comprov-lo temos trabalhos de Abessa e Sousa (2003), que avaliaram a sensibilidade do
anfpode ao dicromato de potssio, de Csar et al. (2006), que fizeram a avaliao dos
sedimentos provenientes dos esturios de Santos e S. Vicente de Melo e Nipper (2007),
que analisam a praticabilidade do uso da espcie em testes de toxicidade sedimentar.
Na Coreia do Sul, os trabalhos referenciados na Tabela 1, indicam Lee et al.
(2005), onde os investigadores estudam a espcie Grandidierella japonica em testes de
toxicidade aguda com metais pesados; Lee et al. (2005), realizam no mesmo ano um outro
trabalho para eleger, de entre 4 espcies de anfipodes- Mandibulophoxus mai,
Haustorioides indivisus, Haustorioides koreanus e Monocorophium acherusicum, os mais
indicados para serem utilizados em testes de toxicidade.

Apesar de vrios investigadores considerarem que o ensaio agudo menos sensvel
do que o ensaio crnico e como tal, menos susceptvel de promover a proteco do
ambiente (Castro et al., 2006; Heuvel-greve et al., 2007), a maioria dos trabalhos
referenciados na tabela 1 usaram ensaios agudos tal como o ilustrado na Figura 1.














- 39 -
A Tabela 1, mostra tambm algumas variveis abiticas, como a temperatura; a
salinidade, o fotoperodo, o pH, consideradas nos vrios ensaios. A propsito de algumas
destas variveis, como por exemplo a temperatura e a salinidade, R et al. (in press)
mostram ser primordial o seu conhecimento e a determinao dos limites de tolerncia da
espcie para estes factores, de forma a determinar as condies apropriadas em que os
ensaios de toxicidade devem ser realizados. Prato et al. (2008), mostram tambm a
importncia de um leque de temperaturas (10, 15, 20 e 25 C) na realizao dos ensaios
com C. insidiosum. Segundo os autores a temperatura um importante factor no controlo
do metabolismo dos anfpodes e pode tambm, interagir com a toxicidade provocada por
metais pesados, concluindo que o objectivo do trabalho da sua equipa, seria o de melhorar
a metodologia do ensaio, estabelecendo um possvel intervalo de temperatura ptima para
ser utilizado nos testes de toxicidade com esta espcie. Relativamente salinidade
pretende-se que as espcies-teste a utilizar nos ensaios de toxicidade de sedimentos,
possuam uma tolerncia alargada em relao a esta varivel, podendo desta forma, ser
utilizadas em experincias com graus de salinidade bastante diferentes.
O nmero de indivduos utilizado por rplica e a quantidade destas, foi tambm
includo na Tabela 1 para podermos inferir um procedimento padro em relao a estas
variveis. Pelos estudos consultados, podemos observar que a mdia do nmero de rplicas
aproxima-se das 5 por ensaio e a mdia do nmero de indivduos utilizado, rondou os 20
por rplica.
Os descritores ecotoxicolgicos utilizados nos trabalhos includos na nossa anlise,
foram os que se seguem: mortalidade; crescimento; reproduo; imobilizao; emergir do
sedimento; capacidade de escavador; bioacumulao; comportamento.
Com os trs descritores ecotoxicolgicos clssicos dos testes de toxicidade
sedimentar, mortalidade, crescimento e reproduo, podemos fazer logo a distino entre
teste agudo e teste crnico, pois no teste agudo apenas se procede avaliao do parmetro
da mortalidade (da a ideia de que se trata de um teste demasiado redutor em relao
obteno de resultados), ficando os dois restantes parmetros, crescimento e reproduo,
apenas acessveis nos testes crnicos. O ensaio crnico assim considerado por muitos
autores, como mais completo do que o ensaio agudo (Lamberson et al., 1992; R, 1996;
Chapman e Wang, 2001; Castro et al., 2006; Scarlett et al., 2007; Heuvel-Greve et al.,
2007).
- 40 -
A imobilizao, o emergir do sedimento e a capacidade de escavador, so
parmetros avaliados por observao directa do tipo de comportamento que os animais
manifestam perante determinadas situaes que ocorreram durante o teste a que foram
sujeitos (Hurk et al., 1992; Bat e Raffaelli, 1998; Lee et al., 2005). Os hbitos
comportamentais observados nestes animais, no se esgotam com os parmetros que
acabamos de referir, existindo outros que podem ser utilizados em testes de toxicidade,
como por exemplo, os referidos por Kirkpatrick et al. (2006), a propsito de um ensaio que
pretendia testar o comportamento de C. volutator em relao ao pesticida Bioban,
chegando a equipa deste autor, concluso que a espcie em causa parece ser apropriada
para este tipo de experincias de avaliao comportamental em testes de toxicidade
sedimentar.
Finalmente, resta-nos referir a Bioacumulao, outro dos descritores
ecotoxicolgicos utilizados que est relacionado com a medida da massa corporal, tal
como se encontra descrito no trabalho de Hellou et al. (2008).

Numa anlise mais detalhada sobre a Tabela 1, comeando pela escolha da espcie
que foi considerada nos diferentes estudos, pretendem os respectivos autores que esta seja
representativa da macrofauna bentnica uma vez que esta desempenha um importante
papel nos ecossistemas de guas doces, estuarinas e marinhas, nomeadamente ao nvel
trfico, nas interaces com outros animais presentes no ecossistema, mas tambm, no que
se relaciona com a qualidade da gua, (Allaby, 1999). Por outro lado, o facto da
macrofauna possuir mobilidade limitada, faz com que sejam indicadores privilegiados das
mudanas ocorridas no ambiente (entre outros EPA, 1992).
A opo pela ordem dos anfpodes, acontece no s pela sua relevncia ecolgica,
mas tambm porque existe uma base de dados substancial sobre o tipo de respostas destes
animais em relao a xenobiticos, nutrientes e outras perturbaes fsico-qumicas que
podem ocorrer nos sistemas aquticos (Burton, 1992).
O destaque dado ao gnero Corophium, surge porque para alm de satisfazer os
critrios necessrios investigao experimental em toxicologia sedimentar, alia muitas
das propriedades consideras desejveis, por exemplo: curto ciclo de vida; sensibilidade aos
contaminantes existentes nos sedimentos e tolerncia em relao s variveis ambientais
- 41 -
77%
23%
Corophium
Outros anfipodes


Figura 2 Dados comparativos sobre a utilizao do Corophium e de outros anfpodes, em ensaios de
toxicidade sedimentar.
abiticas, como por exemplo a temperatura e a salinidade (Burton, 1992). A preferncia
pelo gnero Corophium ilustrada na Figura 2.










Na Figura 3 est representada a percentagem de utilizao de determinado
anfpode, na nossa amostra constituda por 33 trabalhos. Desta Figura facilmente
conclumos que a espcie mais utilizada C. volutator seguido de C. multisetosum. Uma
- 42 -

Figura 3 Dados comparativos sobre a utilizao de diferentes
espcies de anfpodes, em ensaios de toxicidade sedimentar.
C.
volutator
29%
C.
orientale
6%
C. multisetosum
17% C. insidiosum
9%
Gammarus aequicauda
9%
Microdeutopus gryllotalpa
6%
Ampelisca brevicornis
6%
Tiburonella viscana
9%
Hyalella azteca
6%
Outros
3%
palavra para referir o parmetro Outros, que constitudo pelos anfpodes que apenas
foram referidos uma nica vez ao longo da nossa amostra, a saber: Rhepoxynius abronius;
Gammarus locusta; Bathyporeia sarsi; Grandidierella japonica; Mandibulophoxus mai;
Haustorioides indivisus; Haustorioides koreanus; Monocorophium acherusicum;
Monocorophium insidiosum; Monoporeia afnis; Echinogammarus meridionalis.



























- 43 -
Figura 4 Dados comparativos sobre a utilizao das diferentes espcies de
Corophium, em ensaios de toxicidade sedimentar.
C. volutator
47%
C. i nsidiosum
16%
C. multisetosum
26%
C. orientale
11%

Quanto s diferentes espcies de Corophium utilizadas, a Figura 4 d-nos uma
imagem da sua distribuio percentual pelo n de trabalhos consultados.

























A ttulo de exemplo apresentamos alguns trabalhos que nos do uma ideia mais
concreta sobre o estado actual do uso de C. multisetosum em testes de toxicidade
sedimentar em Portugal.
- 44 -

Gammarus chevreuxi - LC50 = 14.91% effluent [14.136; 15.723]
Effluent Concentration(%)
0
20
40
60
80
100
0 5 10 15 20 25 30
S
u
r
v
i
v
a
l

(
%
)
Corophium multisetosum - LC50 = 15.74% effluent [14.327; 17.292]
Daphnia magna - LC50 = 11.93% effluent [11.126; 12.789]


O desenvolvimento de ensaios ecotoxicolgicos em Portugal com o anfpode C.
multisetosum ilustrado nomeadamente, por trabalhos de Quintino et al. (2001) e R et al.
(2007) que abordam o uso de C. multisetosum em ensaios de toxicidade aguda, avaliando a
sua sensibilidade a efluentes resultantes da indstria da cortia e lixiviados de limalha de
ferro. A resposta da espcie analisada num ensaio agudo s com gua, e com sedimento
estuarino. Dada a grande tolerncia da espcie ao tipo de sedimento, nomeadamente ao teor
em finos, bem como salinidade da gua, foi tambm utilizado para avaliar a toxicidade
aguda de sedimentos recolhidos num canal da Ria de Aveiro.
Nos testes com efluentes, a sensibilidade de C. multisetosum foi afectada pelo
aumento da concentrao de ambos os efluentes em teste, traduzindo-se num aumento da
mortalidade. O anfpode foi mais sensvel aos lixiviados de limalha de ferro, como se pode
verificar pelo LC50 muito inferior ao obtido com o efluente da indstria da cortia (Figuras
5 e 6).





















S
o
b
r
e
v
i
v

n
c
i
a

(
%
)

Concentrao do efluente (%)
Figura 5 - Reduo de sobrevivncia de C. multisetosum, G. chevreuxi e D. magna quando
expostas a concentraes crescentes de efluente da industria da cortia . LC50 valores com
limite de confiana de 95%. Adaptado de R et al. (2007)
- 45 -

0
20
40
60
80
100
0 2 4 6 8 10 12 14
Effluent Concentration(%)
S
u
r
v
i
v
a
l

(
%
)

Sabellaria alveolata - LC50 = 2.27% effluent [1.261; 4.093]
Corophium multisetosum - LC50 = 1.56% effluent [0.940; 2.600]
Daphnia magna - LC50 = 0.75% effluent [0.691; 0.806]

Concentrao do efluente (%)
S
o
b
r
e
v
i
v

n
c
i
a

(
%
)

S
o
b
r
e
v
i
v

n
c
i
a

(
%
)























Quanto sobrevivncia de C. multisetosum quando exposto aos sedimentos teste,
obtidos na Ria de Aveiro, os ensaios decorreram a 15 e a 22 C. A sobrevivncia foi menor
nos locais 5, 7 e 8, a 22 C e no local 7 a 15 C. Estes locais so constitudos por vasa com
reduzido teor de oxignio e alto contedo orgnico (R et al., 2007) e coincidem
nomeadamente, com os locais nos quais a comunidade de macrofauna residente apresentou
os mais baixos valores de riqueza em espcies. Foi tambm nestes locais (5, 7 e 8) que um
ensaio de desenvolvimento larvar com Paracentrotus lividus apresentou a mortalidade
mais elevada e desenvolvimento anormal tambm mais elevado (Figura 7).


Figura 6 - Reduo de sobrevivncia de C. multisetosum, S. alveolata e D. magna
quando expostas a concentraes crescentes de lixiviados de limalha de ferro. LC50
valores com limite de confiana de 95%. Adaptado de R et al. (2007)
- 46 -
S
u
r
v
i
v
a
l
(
%
)

Corophium multisetosum
0
20
40
60
80
100
CS S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
Sediments
15C 22C
*
Survival 90%

Sedimentos
Sobrevivncia 90%
S
o
b
r
e
v
i
v

n
c
i
a

(
%
)




















Acima de tudo, os autores deste trabalho, defendem que C. multisetosum apresenta
vantagens relativamente aos outros organismos-teste por exemplo ao nvel da maior
capacidade de adaptao a diferentes salinidades, (R et al., in press) quando utilizado em
teste de toxicidade aguda, demonstrou um alto potencial para identificar em meio
estuarino, tanto a contaminao da gua como a contaminao do sedimento. Este estudo
mostrou assim, grande consistncia entre o resultado do ensaio com C. multisetosum e os
outros descritores do estado de afectao dos sedimentos superficiais (R et al., 2007)
A apresentao mais detalhada das condies de realizao dos ensaios de
toxicidade aguda, bem como a sensibilidade de C. multisetosum a variveis naturais
(granulometria do sedimento, salinidade) so mencionadas em R et al. (in press). O
estudo apresenta ainda questes relacionadas com a manuteno das culturas do anfpode,
bem como a resposta a um txico de referncia (Cloreto de Cdmio). Com a metodologia,
Figura 7 - C. multisetosum: sobrevivncia mdia ( desvio padro) nas dez amostras de
sedimentos teste e no controlo de qualidade (CS), a 15 C e 22 C (n = 3, para cada um
dos sedimentos). * Significncia estatstica quando comparado ao controle (p <0,05).
Adaptado de R et al. (2007)
- 47 -


Tabela 3. Cloreto de cdmio valores de LC50 (mgCd2 + / l) para C. multisetosum em
ensaio de 96 h em gua. Adaptado de R et al. (in press).



LC50 Bioassay conditions
(mgCd2+/L) Temperature; Salinity
0.71 15 1C; 18 1
0.47, 0.58 15 1C; 2 1
0.23, 0.25 18 1C; 2 1
0.27, 0.33 22 1C; 2 1
0.34 22 1C; 2 2
0.31 22 1C; 2 3

1- Ensaios realizados com anfpodes cultivados em laboratrio; 2- Ensaio realizado com anfpodes oriundos
de uma cultura laboratorial com dois anos ininterruptos; 3- Ensaio realizado em simultneo com o 2, com
anfpodes colhidos no campo.
mencionada, o trabalho apresenta ainda os resultados de uma exposio de C. multisetosum
a uma bateria de sedimentos recolhidos entre 1997 e 2006 sada do esturio Tejo.
Em relao ao comportamento do anfpode com o txico de referncia podemos
afirmar que os resultados revelam uma tendncia generalizada, para valores mais baixos de
LC50 medida que aumenta a temperatura, o que talvez signifique um relacionamento
directo entre aumento de metabolismo e a elevao da temperatura, como pode ser
observado na Tabela 3.


Quanto s variveis naturais, o estudo salienta a elevada tolerncia da espcie em
relao salinidade, com uma amplitude de valores que o privilegiam na sua utilizao em
testes de toxicidade em meio estuarino. Ainda assim, os autores no aconselham a
realizao de testes em situaes extremas de reduzida salinidade e temperatura elevada,
como pode ser comprovado pelos baixos valores de sobrevivncia evidenciados na Tabela
4 (R et al., in press)
J no tocante ao teor em finos na constituio do sedimento e apesar de C.
multisetosum apresentar tambm a uma grande tolerncia, o incremento da sensibilidade
na populao adulta em relao ao aumento da temperatura, recomenda baixas
Condies bioensaio
Temperatura; Salinidade
- 48 -

Mean amphipod survival (% sd)
15C 18C 22C
Seawater concentration (%)
Negative control 95.0 4.33 97.8 3.63 94.4 5.83
0.0 81.1 18.33 78.9 31.90 18.9 27.25
0.2 83.9 11.67 86.1 13.87 75.0 31.92
0.4 92.2 4.41 87.8 8.33 62.2 41.01
0.8 88.3 12.75 81.7 16.58 90.0 6.12
1.6 88.3 9.01 78.3 16.20 85.6 12.36
3.2 86.7 14.58 87.2 10.64 86.1 7.82
6.25 92.2 6.67 92.2 6.67 98.3 3.54
12.5 97.8 3.63 90.0 7.50 91.7 6.12
25.0 94.4 5.27 92.2 7.55 95.0 6.61
50.0 90.6 5.83 89.5 8.08 92.8 4.41
100.0 78.9 9.28 82.8 11.49 83.9 10.83
--------------------------------------------------------------------------------------------------------
Sediment fines content (%)
Control Sediment 93.3 4.08 94.2 4.92 91.7 5.16
2.1 94.2 5.85 95.0 4.47 95.8 4.92
3.8 89.2 9.70 92.5 2.74 92.5 5.24
7.5 89.2 4.92 86.7 9.83 94.2 2.04
14.5 95.8 5.85 90.8 5.85 85.8 8.61
27.3 91.7 5.16 90.8 5.85 83.3 8.76
56.5 81.7 10.33 88.3 5.16 67.5 12.14
77.8 85.8 8.01 91.7 2.58 86.7 4.08
97.0 85.8 8.01 83.3 2.58 83.3 11.25
Tabela 4. Percentagem de sobrevivncia mdia ( desvio padro) do C. multisetosum em exposio
aguda a uma gama de salinidades e de temperaturas em gua intersticial pobre em oxignio (n = 9,
para todos os tratamentos) e a sedimentos preparados com diferentes contedos em partculas finas a
diferentes temperaturas (n = 6 para todos os tratamentos). O controlo negativo corresponde a uma
concentrao 50% da gua do mar. O controle dos sedimentos representa 1,8% de contedo em
partculas finas, expresso como uma % do total de sedimentos, peso seco. Adaptado de R et al. (in
press)
temperaturas para os testes realizados com sedimentos de elevado teor em finos Tabela 4
(R et al., in press).

















R et al. (in press) apresentam ainda os resultados de uma exposio aguda a
sedimentos naturais, do esturio do Tejo. Os autores chamam a ateno para o facto de, no
perodo do estudo, haver diferenas significativas de valores de descritores ambientais e
biolgicos nos intervalos: 1997 a 2000 e 2001 a 2006. Estes dois intervalos de tempo so
separados pelo Inverno de 2000-2001, particularmente rigoroso em matria de cheias e
tempestades costeiras, que teriam originado alteraes importantes no sedimento
superficial, sobretudo ao nvel do tamanho das partculas e da concentrao de
Concentrao gua do mar (%)
Controlo negativo
Contedo em finos do sedimento (%)
Controlo sedimento
Sobrevivncia mdia anfpode (% sd)
- 49 -
Tabela 5. ndices de macrofauna bentnica, sedimentos de compostos orgnicos e
descritores de toxicidade aguda estudados no local 19, no perodo 1997-2006. Valores
mdios com desvio padro para os perodos antes e depois da cheia. Adaptado de R et
al. (in press)



Descriptor Before (1997-2000) After (2001-2006)
Mean s.d. Mean s.d.
S (0.1 m2) 17.1 3.94 25.2 4.39
PAH compounds (ng.g-1) 1175.75 664.752 34.20 187.966
PCB congeners (ng.g-1) 7.62 3.664 5.58 1.521
Acute mortality (%) 17.0 4.32 7.5 3.04

Depois
Mdia
Antes
Mdia
Mortalidade aguda (%)
Descritor
componentes orgnicos, o que pode ser constatado na Tabela 5, onde evidente a
diminuio de PAHs e de PCBs, o aumento da riqueza em espcies (S), bem como a
diminuio da mortalidade de C. multisetosum nos testes de toxicidade aguda.



Os resultados obtidos por R et al. (in press), mostram a viabilidade do C.
multisetosum como organismo-teste em estudos de toxicidade sedimentar. Segundo os
autores, os sedimentos estuarinos podem variar consideravelmente em relao a factores
como salinidade, teor em finos e temperatura. A forma mais razovel de proceder para
determinar a toxicidade e a biodisponibilidade dos contaminantes dos sedimentos
estuarinos, ser testar os sedimentos tal e qual se encontram, utilizando nos testes, animais
com grande capacidade de tolerncia s mais variadas condies proporcionadas pelos
esturios, sobretudo no que se relaciona com a salinidade e o teor em finos. Com um teste
especificamente concebido para as condies existentes nos esturios, o C. multisetosum
constitui inquestionavelmente, uma boa opo para a bioavaliao dos sedimentos que a
se encontram.
Uma nota final para justificar a opo por exemplos de ensaio do tipo agudo
realizados na Universidade de Aveiro. Tal tem apenas que ver com o facto de termos
ficado um pouco mais familiarizados com este procedimento durante o perodo em que
decorreu este mestrado. No entanto, pelo que ficou escrito ao longo deste trabalho, parece-
nos essencial referir o papel importante dos ensaios crnicos, fundamentais a todo processo
de investigao em ecotoxicologia sedimentar, e que so tambm realizados por
- 50 -
investigadores desta Universidade, como ocaso dos levados a cabo pela equipa do
Professor Quintino (Quintino et al., 2001; Silva et al., 2004; Castro et al., 2006, entre
outros).
























- 51 -
4. Concluso

Vrios estudos tm mostrado que a utilizao de invertebrados bentnicos em
ecotoxicologia sedimentar hoje aceite como uma das formas mais eficazes na avaliao
ecotoxicolgica de sedimentos marinhos, estuarinos e fluviais (R et al., in press).
Nos ensaios tanto agudos como crnicos, os crustceos anfpodes, tm recebido a
preferncia de muitos investigadores j que renem boas qualidades para a execuo
desses ensaios. Qualidades como a tolerncia a diferentes graus de salinidade, a
sensibilidade a contaminantes existentes nos sedimentos, a ocupao de micro habitats
ideais, a ampla distribuio geogrfica, entre outros, fazem deste animais uma das opes
mais utilizadas por investigadores de todo o mundo (Chapman, 2007; Prato e Biandolino,
2005; Sanz-Lzaro e Marn, 2009, entre outros). No seio dos crustceos anfpodes,
espcies do gnero Corophium, surgem muito referenciadas quer na Amrica do Norte
quer na Europa do Norte e do Sul, incluindo o Mediterrneo (amostragem da Tabela 1).
A avaliao ecotoxicolgica dos sedimentos, ser melhor realizada por abordagens
do tipo peso-das-evidncias, combinando descritores ambientais mltiplos, fsico-
qumicos, ecotoxicolgicos, caractersticas prprias do local e das comunidades residentes,
incluindo parmetros do habitat e ciclos de vida das espcies relevantes (Schmitt-Jansen et
al., 2007). No entanto, devemos ter conscincia de que dificilmente haver avaliaes
tcnicas de elevada qualidade, da maioria dos milhares de substncias e da maioria dos
tipos de ecossistemas e espcies existentes no mundo, mas os modelos de estudo
combinando mltiplos descritores, podem ajudar a uma compreenso geral dos efeitos
txicos e dos processos relevantes que podem ocorrer, permitindo assim, fazer uma melhor
previso. necessria uma abordagem integrada baseada em protocolos de ensaios
laboratoriais, experimentao e acompanhamento no terreno, incluindo sistemas de alerta
precoce e modelos de simulao em computador (Chapman, 2007; Schmitt-Jansen et al.,
2007).
Num futuro prximo, um maior conhecimento sobre os indicadores subletais
(biomarcadores) e da relao entre os efeitos agudos e crnicos, devero permitir a
existncia de testes com exposies temporais relativamente mais curtas, para a deteco
dos agentes stressores, por exemplo, horas ou alguns dias, podendo ser utilizados com
fiabilidade na previso de efeitos crnicos. Actualmente, as exposies crnicas (que so
- 52 -
bastante mais demoradas no tempo) representam uma componente chave na avaliao da
sade dos ecossistemas (Burton, 1992).
Por outro lado, e reavaliando o que ficou escrito neste trabalho, parece-nos
preocupante a crise econmica e financeira que levou ao eclodir de uma recesso mundial,
pois esta tender a agravar, num futuro prximo, o esforo necessrio para a prossecuo
dos projectos de investigao no campo da ecotoxicologia sedimentar, o que a acontecer,
comprometer irremediavelmente, uma boa parte das medidas necessrias
sustentabilidade dos recursos hdricos. Convenhamos pois, e em ltima anlise, que esta
ideia da sustentabilidade dos recursos hdricos (elevada categoria de maior desafio da
humanidade para este sculo), constituiu o fio condutor, subliminar, presente elaborao
deste trabalho.
Por ltimo, gostaramos que esta monografia pudesse ser entendida como mais um
contributo para o conhecimento e divulgao de uma rea to delicada e complexa, mas ao
mesmo tempo cada vez mais essencial, como o da avaliao ecotoxicolgica.





- 53 -
Bibliografia
Abessaa, D.M.S., Sousa E. C.P.M., 2003. Sensitivity of the Amphipod Tiburonella
viscana (Platyischnopidae) to K2Cr2O7. Brazilian Archives of Biology and Tecnology,
46(1): 53-55.

Adams, S.M., 2005. Assessing cause and eect of multiple stressors on marine
systems. Marine Pollution Bulletin, 51: 649657.

Allaby, M., 1999. A Dictionary of Zoology, 2nd edition, published in 1999 by Oxford
University Press. Kline Science Library Reference QL9 C66X.

Allen, Y.T., Thain, J.E., Haworth, S., Barry, J., 2007. Development and application of
longterm sublethal whole sediment tests with Arenicola marina and Corophium
volutator using Ivermectin as the test compound. Environmental Pollution, 146: 92-99.

ASTM, 1990. Standard guide for colledion, storage, characterization, and manipulation
of sediments for toxicological testing. American Society of Testing and Materials.
Designation E 1391-90.

ASTM, 2003. Standard test method for measuring the toxicity of sediment-associated
contaminants with estuarine and marine invertebrates. ASTM Designation: E 1367-03.
American Society for Testing and Materials, Philadelphia.

Bat, L., Raffaelli, D., 1998. Sediment toxicity testing: a bioassay approach using the
amphipod Corophium volutator and the polychaete Arenicola marina. Journal of
Experimental Marine Biology and Ecology, 226: 217239.

Bat, L., 2005. A Review of Sediment Toxicity Bioassays Using the Amphipods and
Polychaetes. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, 5: 119-139.

Bay, S.M., Jirik A., Stanford, A., 2003. Interlaboratory Variability Of Amphipod
Sediment Toxicity Tests In A Cooperative Regional Monitoring Program.
Environmental Monitoring and Assessment, 81: 257268.

Bay, S., Berry, W., Chapman, P.M., Fairey, R., Gries, T., Long, E,. MacDonald, D.,
Weisberg S.B., 2007. Evaluating Consistency of Best Professional Judgment in the
Application of a Multiple Lines of Evidence Sediment Quality Triad. Integrated
Environmental Assessment and Management, 3 (4): 491497.

Belan, T.A., 2003. Marine environmental quality assessment using polychaete
taxocene characteristics in Vancouver Harbour. Marine Environmental Research, 57:
89101.

Bigot, L., Conand, C., Amouroux, J.M., Frouin P., Bruggemann, H., Grmare, A.,
2006. Eects of industrial outfalls on tropical macrobenthic sediment communities in
Reunion Island (Southwest Indian Ocean). Marine Pollution Bulletin, 52: 865880.

- 54 -
Borja, A., Muxika, I., Franco, J., 2003. The application of a Marine Biotic Index to
dierent impact sources aecting softbottom benthic communities along European
coasts. Marine Pollution Bulletin, 46: 835845.

Burton, G.A.Jr., 1992. Sediment Toxicity Assessment. Lewis Publishers. Boca Raton,
457 p.

Casado-Martinez, M.C., Forja, J.M., DelValls, T.A., 2007. Direct comparison of
amphipod sensitivities to dredged sediments from Spanish ports. Chemosphere, 68:
677685.

Castro, H., Ramalheira, F., Quintino, V., Rodrigues, A.M., 2006. Amphipod acute and
chronic sediment toxicity assessment in estuarine environmental monitoring: An
example from Ria de Aveiro, NW Portugal. Marine Pollution Bulletin, 53: 9199.

Cesar, A., Marn-Guirao, L., Vita, R., Marn, A., 2004. Sensitivity of Mediterranean
amphipods and sea urchins to reference toxicants. Scientia Marina, 28: 407417.

Cesar, A., Pereira, C.D.S., Santos, A.R., Abessa, D.M.S., Fernndez, N., Choueri1,
R.B., DelValls, T.A., 2006. Ecotoxicological Assessment Of Sediments From The
Santos And So Vicente Estuarine System Brazil. Brazilian Journal Of
Oceanography, 54 (1): 55-63.

Chapman, P.M. e Long, E.R., 1983. The use of bioassays as part of a comprehensive
approach to marine pollution assessment. Marine Pollution Bulletin, 14 (3): 81-84.

Chapman, P.M., 1986. Sediment quality criteria from the sediment quality triad: an
example. Environmental Toxicology and Chemistry, 5: 957964.

Chapman, P.M., Dexter R.N., Long E.R., 1987. Synoptic measures of sediment
contamination, toxicity and infaunal community composition (the Sediment Quality
Triad) in San FranciscoBay. Marine Ecology Progress Series, 37: 75-96.

Chapman, P.M., 1990. The sediment Quality Triad Aproach to Determining Pollution-
Induced Degradation. The Science of the Total Environment. 97 (98): 815-825.

Chapman, P.M., 1991. Environmental quality criteria- what type should we be
developing? Environmental Science & Technology, 25 (8).

Chapman, P.M., 1993. The role of ecotoxicology in environmental impact assessment.
The environmental professional, 139-144.

Chapman, P.M., 1995. Ecotoxicology and Pollution-Key Issues. Marine Pollution
Bulletin, 31 (4-12): 167-177.

Chapman, P.M., 1996. Presentation and interpretation of Sediment Quality Triad data.
Ecotoxicology, 5: 327339.

- 55 -
Chapman, P.M., e Wang, F.Y., 2000. Issues in ecological risk assessment of inorganic
metals and metalloids. Human and Ecological Risk Assessment, 6: 965988.

Chapman, P.M., Wang, F., 2001. Assessing sediment contamination in estuaries.
Environmental Toxicology and Chemistry, 20 (1): 322.

Chapman, P.M., Ho, K.T., Munns Jr., W.R., Solomon, K., Weinstein M.P., 2002.
Issues in sediment toxicity and ecological risk assessment. Marine Pollution Bulletin,
44: 271278.

Chapman, P.M., 2004. Indirect eects of contaminants. Marine Pollution Bulletin, 48:
411412.

Chapman, P.M., Anderson, J., 2005. A Decision-Making Framework for Sediment
Contamination. Integrated Environmental Assessment and Management, 1 (3): 163
173.

Chapman, P.M., Hollert, H., 2006. Should the Sediment Quality Triad Become a
Tetrad, a Pentad, or Possibly even a Hexad? Journal of Soils and Sediments, 6 (1): 4
8.

Chapman, P.M., 2006. Science, politics and ideologyThe Victoria (BC, Canada)
sewage issue. Marine Pollution Bulletin, 52: 719721.

Chapman, P., 2006. Determining when contamination is pollution Weight of
evidence determinations for sediments and effluents. Environment International, 33:
492 501.

Chapman, P.M., 2007. Do not disregard the benthos in sediment quality assessments!
Marine Pollution Bulletin, 54: 633635.

Chapman, P.M., 2007. Introduction to Perspectives: Aquatic Behavioral
EcotoxicologyComing of Age. Human and Ecological Risk Assessment, 13: 478
480.

Costa, F.O. Correia, A.D., Costa, M.H., 1996. Acute Marine Sediment Toxicity: A
Potential New Test with the Amphipod Gammarus locusta. Ecotoxicology and
Environmental Safety, 40: 8-87.

Defew, E.C., Paterson, D.M., Hagerthey, S.E., 2002. The use of natural
microphytobenthic assemblages as laboratory model systems. Marine Ecology Progress
Series, 237: 1525.

EPA 823-R-92-006 September 1992 Sediment Classification Methods Compendium.

Grant, A., Briggs A.D., 2001. Toxicity of sediments from around a North Sea oil
platform: are metals or hydrocarbons responsible for ecological impacts? Marine
Environmental Research, 53: 95116.
- 56 -
Grapentine, L., Anderson J., Boyd D., Burton G.A., De Barros, C., Johnson, G.,
Marvin, C., Milani, D., Painter, S., Pascoe, T., Reynoldson, T., Richman, L., Solomon,
K., Chapman, P.M., 2002. A decision-making framework for sediment assessment
developed for the Great Lakes. Human and Ecological Risk Assessment, 8: 1641-1655.

Guerra, R., Pasteris, A., Ponti, M., Fabbri, D., Bruzzi, L., 2007. Impact of dredging in a
shallow coastal lagoon: Microtox Basic Solid-Phase Test, trace metals and
Corophium bioassay. Environment International, 33: 469473.

Hellou, J., Cheeseman, K., Desnoyers, E., Johnston, D., Jouvenelle, M., Leonard, J.,
Robertson, S., Walker, P., 2008. A non-lethal chemically based approach to investigate
the quality of harbour sediments. Science of the Total Environment, 389: 178 187.

Heuvel-Greve, M. van den, Postma, J., Jol, J., Kooman, H., Dubbeldam, M., Schipper,
C., Kater, B., 2007. A chronic bioassay with the estuarine amphipod Corophium
volutator: Test method description and confounding factors. Chemosphere, 66: 1301
1309.

Holland, A.F., 1990. Environmental monitoring and assessment program, near coastal
program plan for 1990: Estuaries. Environmental Research Laboratory, U.S.
Environmental Protection Agency.

Hurk, P. van den, Chapman, P.M., Roddie, B., Swartz, R.C., 1992. A comparison of
North American and West European infaunal amphipod species in a toxicity test on
North Sea sediments. Marine Ecology Progress Series, 91: 237-243.

Ingersoll, C.G., Dillon, T., Biddinger, G.R., 1997. Ecological risk assessment of
contaminated sediments. Society of Environmental Toxicology and Chemistry,
Pensacola, USA, p. 389.

ISO 16712: 2005(E). Water quality Determination of acute toxicity of marine or
estuarine sediment to amphipods.

King, C.K., Gale, S.A., Hyne, R.V., Stauber, J.L., Simpson, S.L., Hickey, C.W., 2006.
Sensitivities of Australian and New Zealand amphipods to copper and zinc in waters
and metal-spiked sediments. Chemosphere, 63: 14661476.

Kirkpatrick, A.J., Gerhardt, A., Dick, J.T.A., McKenna, M., Berges, J.A., 2006. Use of
the multispecies freshwater biomonitor to assess behavioural changes of Corophium
volutator (Pallas, 1766) (Crustacea, Amphipoda) in response to toxicant exposure in
sediment. Ecotoxicology and Environmental Safety, 64: 298303.

Lamberson, J.O., DeWitt, T.H., Swartz, R.C., 1992. Assessment of sediment toxicity to
marine benthos. In: Burton, GA (Ed.). Sediment toxicity assessment. Lewis Publishers,
Inc., Chelsea, 183-211.

- 57 -
Lee, J.-S., Lee, K.-T., Park, G.-S., 2005. Acute Toxicity of Heavy Metals, Tributyltin,
Ammonia and Polycyclic Aromatic Hydrocarbons to Benthic Amphipod
Grandidierella japonica. Ocean Science Journal, 40 (2): 61-66.

Lee, J.-K., Lee, K.-T., Kim, D.-H., Kim, C.-K., Lee, J.-H., Park, K.-H., Park, G.-S.,
2005. Application of Indigenous Benthic Amphipods as Sediment Toxicity Testing
Organisms. Ocean Science Journal, 40 (1).

Lera, S., Macchia, S., Dentone, L., Pellegrini, D., 2008. Variations in sensitivity of two
populations of Corophium Orientale (Crustacea: Amphipoda) towards cadmium and
sodium laurylsulphate. Comparison of two populations of Corophium Orientale.
Environmental Monitoring and Assessment, 136: 121127.

Long, E.R., Hong, C.B., Severn, C.G., 2001. Relationships between acute sediment
toxicity in laboratory tests and abundance and diversity of benthic infauna in marine
sediments: a review. Environmental Toxicology and Chemistry, 20: 4660.

Long, E.R., Sloane, G.M., 2005. Development and use of assessment techniques for
coastal sediments. In: Bortone SA, editor. Estuarine indicators. Boca Raton (FL): CRC.
6378.

Mayor, D.J., Solan, M., Martinez, I., Murray, L., McMillan, H., Paton, G.I., Killham,
K., 2008. Acute toxicity of some treatments commonly used by the salmonid
aquaculture industry to Corophium volutator and Hediste diversicolor: Whole sediment
bioassay tests. Aquaculture, 285: 102108.

McPherson, C., Chapman, P.M., deBruyn, A.M.H., Cooper, L., 2008. The importance
of benthos in weight of evidence sediment assessments A case study. Science of the
Total Environment, 394: 252264.

Melo, S.L.R., Nipper, M., 2007. Sediment toxicity tests using the burrowing amphipod
Tiburonella viscana (Amphipoda: Platyischnopidae). Ecotoxicology and
Environmental Safety, 66: 412420.

Moiseenko, T.I., Gashkina, N.A., Sharova, Yu.N., Kudryavtseva, L.P., 2008.
Ecotoxicological assessment of water quality and ecosystem health: A case study of the
Volga River. Ecotoxicology and Environmental Safety, 71 (3): 837-850

Morales-Caselles, C., Kalman, J., Micaelo, C., Ferreira, A.M., Vale, C., Riba, I.,
DelValls, T., 2008. Sediment contamination, bioavailability and toxicity of sediments
affected by an acute oil spill: four years after the sinking of the tanker Prestige (2002).
Chemosphere, 71: 1207-1213.

Nipper, M.G., Badar-Pedroso, C., Jos, V.F., Prperi, V.A., 1990, Marine bioassays
and their application in coastal management and biological monitoring. 2. Simpsio da
Costa Sul e Sudeste Brasileira-Estrutura, Funo e Manejo, guas de Lindia. 1: 160-
170.

- 58 -
Pearson, T.H., Rosenberg, R., 1978. Macrobenthique succession in relation to organic
enrichment and pollution of the marine environment. Oceanography and Marine
Biology Annual Revue, 16: 229311.

Percy, J. A., 1999. Sea Pen Communications, Fundy Issues #13, Spring 1999.

Peters, C., Ahlf W., 2005. Reproduction of the estuarine and marine amphipod
Corophium volutator (Pallas) in laboratory for toxicity testing. Chemosphere, 59: 525
536.

Picone, M., Bergamin, M., Alessandra, A.N., Noventa, S., Delaney, E., Barbanti, A.,
Ghirardini, A.V., 2008. Evaluation of Corophium orientale as bioindicator for Venice
Lagoon: Sensitivity assessment and toxicity-score proposal. Ecotoxicology and
Environmental Safety, 70: 174184.

Power, E.A., Chapman, P.M., 1992. Assessing sediment quality. In: Burton, G.A.
(Ed.), Sediment Toxicity Assessment. Lewis Publishers, Chelsea, Michigan, 117.

Power, E.A., Munkittrick, K.R., Chapman, P.M., 1991. An ecological impact
assessment framework for decision-making related to sediment quality. In: Mayes,
M.A., Barron, M.G. (Eds.), Aquatic Toxicity and Risk Assessment, Fourteenth
Volume, ASTM STP 1124. American Society for Testing and Materials, 4864.

Prato, E., Biandolino, F., 2005. Gammarus aequicauda (Crustacea: Amphipoda): A
potential test species in marine sediment toxicity assessment. Aquatic Ecosystem
Health & Management, 8(4): 475482.

Prato, E., Biandolino, F., 2006. Monocorophium insidiosum (Crustacea, Amphipoda)
as a Candidate Species in Sediment Toxicity Testing. Bulletin of Environmental
Contamination and Toxicology, 77: 18.

Prato, E., Di Leo, A., Biandolino, F., Cardellicchio, N., 2006. Sediment Toxicity Tests
Using Two Species of Marine Amphipods: Gammarus aequicauda and Corophium
insidiosum. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology, 76: 629636.

Prato, E., Scardicchio C., Biandolino F., 2008. Effects of temperature on the acute
toxicity of cadmium to Corophium Insidiosum. Environmental Monitoring and
Assessment, 136: 161166.

Quintino, V., Rodrigues A.M., Gentil, F., 1989. Assessment of macrozoobenthic
communities in the lagoon of Obidos, western coast of Portugal. Scientia Marina, 53:
645654.

Quintino, V., Rodrigues, A.M., R, A., Pestana, M.P., Silva, S., Castro, H., 2001.
Sediment alterations in response to marine outfall operation off Lisbon, Portugal: a
sediment quality Triad study. Journal of Coastal Research, 34: 535549 (special issue).

- 59 -
Quintino, V., Rodrigues, A.M., Freitas, R., R, A., 2008. Experimental biological
effects assessment associated with on-shore brine discharge from the creation of gas
storage caverns. Estuarine, Coastal and Shelf Science, 79: 525532.

R, A., 1996. Estudo da utilizao de Corophium multisetosum (Amphipoda:
Corophiidae) na avaliao ecotoxicolgica de sedimentos estuarinos e marinhos. 1996,
MSc thesis, Universidade de Aveiro, Portugal.

Re, A., Quintino, V., Rodrigues, A.M., 2007. Acute toxicity testing with the European
estuarine amphipod Corophium multisetosum. Hydrobiologia, 587: 8999.

R, A., Freitas, R., Sampaio, L., Rodrigues, A. M., Quintino, V., 2009. Estuarine
sediment acute toxicity testing with the European amphipod Corophium multisetosum
Stock, 1952. Chemosphere, in press.

Reiss, H., Kroncke, I., 2005. Seasonal variability of benthic indices: An approach to
test the applicability of dierent indices for ecosystem quality assessment. Marine
Pollution Bulletin, 50: 14901499.

Riddick, M., Dunn, S., 2000. Sediment Assessment in a Wetland Restoration Project.
Chowan College, North Carolina Phi.

Ruiz, J.M., Bryan, G., Gibbs, P.E., 1994. Bioassaying the toxicity of tributyltin-
(TBT)-polluted sediment to spat of the bivalve Scrobicularia plana . Marine Ecology
Progress Series, 113: 119-130.

Sanz-Lzaro, C., Marn, A., 2009. A manipulative eld experiment to evaluate an
integrative methodology for assessing sediment pollution in estuarine ecosystems.
Science of The Total Environment, 407 (11): 3510-3517.

Scarlett, A., Rowland, S.J., Canty, M., Smith, E.L., Galloway, T.S., 2007. Method for
assessing the chronic toxicity of marine and estuarine sediment-associated
contaminants using the amphipod Corophium volutator. Marine Environmental
Research, 63: 457470.

SETAC Europe, 1993. Guidance document on sediment toxicity assessment for
freshwater and marine environments. In: Hill, I.R., Matthiessen, P., Heinbach, F.
(Eds.), Workshop on Sediment Toxicity Assessment, Netherlands, Setac-Europe.

Silva, S., R, A., Pestana, P., Rodrigues, A.M., Quintino, V., 2004. Sediment
disturbance o the Tagus Estuary, Western Portugal: chronic contamination, sewage
outfall operation and runo events. Marine Pollution Bulletin, 49: 154162.

Schmitt-Jansen, M., Veit, U., Dudel, G., Altenburger, R., 2007. An ecological
perspective in aquatic ecotoxicology: Approaches and challenges. Basic and Applied
Ecology, 9 (4).

- 60 -
Swartz, R.C., Cole, .A., Lamberson, J.O., Ferraro, S.P., Schults, D.W., DeBen, W.A.,
Lee, H.I., Ozretich, R.J., 1994. Sediment toxicity, contamination and amphipod
abundance at a DDT and dieldrin contaminated site in San Francisco Bay.
Environmental Toxicology and Chemistry, 13: 949962.

Traunspurger, W., Drews, C., 1996. Toxicity analysis of freshwater and marine
sediments with meio- and macrobenthic organisms: a review. Hydrobiologia, 328:
215261.

USEPA/USACE. 1991. Evaluation of dredged material proposed for ocean disposal-
testing manual. U.S. Environmental Protection Agency and U.S. Army Corps of
Engineers.

Wenning, R., Batley, G., Ingersoll, C., Moore, M., 2005. Use of sediment quality
guidelines and related tools for the assessment of contaminated sediments. Pensacola
(FL): Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC). 815 p.

Wiklund, A-K E., Vilhelmsson, S., Wiklund, S. J., Eklund, B., 2008. Contaminants and
habitat choice in the Baltic Sea: Behavioural experiments with the native species,
Monoporeia afnis, and the invasive genus, Marenzelleria. Estuarine, Coastal and
Shelf Science, 81 (2): 238-246.