TRANSFERNCIA DE GENES EM BACTRIAS

SEXO BACTERIANO
Bactrias podem trocar ou transferir DNA entre elas por trs diferentes vias. Em todos os
casos, as clulas que fornecem o DNA so chamadas de DOADORAS e as que recebem so
denominadas RECEPTORAS. O DNA do doador incorporado ao DNA do receptor por
recombinao. Se a recombinao envolver um alelo diferente daquele presente no gene do
receptor, o genoma e o fentipo do segundo sero alterados. As trs formas de transferncia de
DNA entre bactrias so: (1) TRANSFORMAO, (2) CONJUGAO e (3)
TRANSDUO.
TRANSFORMAO
O fenmeno da transformao envolve um processo no qual o DNA (de uma clula
doadora) livre no meio tomado por uma segunda (receptora), resultando em alteraes
genotpicas nessa. Para a clula conseguir captar o DNA necessrio que a mesma encontre-se
em estado de competncia clcio-dependente. O DNA adere-se face externa da membrana
celular bacteriana, quando ento, DNA binding proteins e endonucleases clivam esse DNA em
fragmentos de 6.000 8.000 bp. Algumas exonucleases clivam as pontes de hidrognio
estabelecidas entre os pares de base e separam as duas metades da dupla fita, para que somente
uma entre na clula. Uma vez no citoplasma, o DNA aliengena ligado s DNA binding proteins
(que evitam a digesto pelas DNAses) encontra o cromossomo da clula receptora ou um
plasmdeo e ocorre a recombinao em stios de homologia. Esse fenmeno pode ser observado
em organismos gram-positivos e em gram-negativos.
TRANSDUO
O segundo meio de transferir DNA entre organismos envolve a mediao de vrus. Como
voc sabe, vrus bacterianos so chamados de bacterifagos, ou simplesmente fagos, pela
maioria dos microbiologistas.
Dois cientistas, F. Twort e F. d'Herrelle, descobriram os bacterifagos
independentemente, em 1915 e 1917. O termo fago significa que come.
Os fagos podem ser detectados de duas maneiras:
b
b a
Clula receptora competente
B A
Fragmento de
DNA da clula
receptora
A
b a A
a
Transformao em bactrias
1. Em gar, formam buracos na camada confluente de bactrias, conhecidos como
placas que podem variar de 1 a 3mm em dimetro, dependendo do fago e das condies de
cultivo. Em condies padronizadas, o dimetro das placas uma caracterstica definida por cada
fago.
2. Em culturas lquidas, a adio de fagos geralmente causa um desaparecimento das
formas viveis de bactrias em poucos minutos.
Um observador mais atento poderia questionar quanto ao emprego desses fagos na
teraputica de infeces bacterianas. Porem, tal procedimento ineficiente, uma vez que a
resposta do sistema imune acaba por inativar o fago. Outro fator que inviabiliza tal utilizao a
elevada especificidade que eles apresentam em relao as bactrias-alvo que iro atacar e
destruir. Tal especificidade fez dos fagos ferramentas teis na identificao de espcies
bacterianas que causam infeces, uma vez que a fonte da infeco foi determinada.
A capacidade dos fagos de carrear DNA entre bactrias foi descoberta em 1952.
Pesquisadores que estudavam a conjugao observaram que mesmo quando interpunham uma
membrana que evitava o contato fsico entre elas, ocorria transferncia de genes e como essa
transferncia no era evitada por DNAses, tal fenmeno no poderia ser transformao. Foi
proposto ento que esse DNA estaria protegido contra a ao da enzima. Mais tarde, foi
descoberto que bacterifagos infectando uma das linhagens podia transferir segmentos do cido
nucleico para a outra linhagem. O capsdeo protico que envolve o DNA viral (e os segmentos
do bacteriano) prevenia a digesto enzimtica. Esse processo de transferncia de DNA mediado
por fagos foi ento denominado transduo.
A transduo ocorre da seguinte maneira:
1. Um fago infecta uma bactria susceptvel injetando seu DNA.
2. O DNA fgico induz a clula hospedeira a converter todo seu metabolismo para a sntese
de novos fagos.
3. Finalmente, ao trmino do ciclo ltico do fago, vrios componentes das partculas virais,
no citoplasma, so montados e a clula lisada, liberando novos fagos infectivos.
Durante o processo de montagem, alguns erros ocasionais ocorrem e grandes
segmentos de DNA bacteriano acabam por se incorporar no genoma do novo
fago, em detrimento de pores do DNA do prprio vrus. Esses novos fagos so
denominados fagos defectivos.
abc ... ... xyz
abc .. ... xyz
abc
hij
xyz
Infeco fgica
Replicao viral
incubao
lise
(999/1000) (1/1000)
Transduo em bactrias
Contudo, esses fagos defectivos ainda apresentam a capacidade de injetar seu
DNA numa segunda bactria. Uma vez que esses fagos, quase que exclusivamente, apresentam
DNA somente da primeira bactria, a infeco propriamente dita no ocorre.
A recombinao pode ocorrer entre os segmentos de DNA da primeira clula e o
DNA da nova clula, sendo que alguns alelos carreados pelo fago defectivo podem tornar-se
incorporados no novo genoma, com alterao do seu gentipo.
Pergunta: Se esse evento to raro, como podemos detectar a ocorrncia?
Resposta: Isso pode vai depender do nmero de fagos e clulas empregados. Uma
suspenso stock de fagos pode conter 10
10
partculas fgicas por mililitro e uma cultura
bacteriana 2 x 10
9
clulas por mililitro. Ento, se considerarmos que pode ocorrer 1 transduo a
cada 1000 infeces, tem-se que 2 em at 10
8
infeces podem incorrer numa transduo.
CONJUGAO
PLASMDEOS
Antes de se discutir o mecanismo de troca de DNA por conjugao, necessria a
compreenso do que so plasmdeos. Plasmdeos so melhor entendidos, se os considerarmos
como sendo mini-cromossomos que so compostos de DNA disposto em molculas circulares
que variam em extenso, mas cuja maioria contm entre 1.000 e 25.000 pares de base, contra os
4.000.000 bp do genoma cromossmico. Esses segmentos replicam-se de forma autnoma, e
comumente, so encontradas vrias cpias em uma nica clula. Ainda, uma clula pode albergar
diferentes plasmdeos ou conter nenhum.
Plasmdeos geralmente carregam genes que no so essenciais para a sobrevivncia da
clula, exceto em circunstncias especiais. Por exemplo, muitos plasmdeos carream genes para
resistncia antibitico, e quando esses plasmdeos esto presentes em uma clula, essa se
torna no afetada por determinados antibiticos, mas se o plasmdeo e seu(s) gene(s) de
resistncia so perdidos (cura plasmidial), a clula hospedeira torna-se sensvel a um(s) dado(s)
antibitico(s). Alguns plasmdeos carregam genes de resistncia vrios antibiticos, fazendo
deles patgenos muito perigosos. Em outro caso, plasmdeos denominados plasmdeos de
virulncia, carregam genes de virulncia que aumentam a possibilidade da clula bacteriana em
causar doenas. Isso , uma bactria portando um plasmdeo com genes de virulncia capaz de
causar uma determinada doena, mas quando esse plasmdeo perdido, a mesma bactria torna-
se incapaz de promover aquela patologia. Um bom exemplo de doena provocada por genes de
virulncia presentes em plasmdeos a Sndrome Urmico-Hemoltica provocada pela cepa
O157:H7 de Escherichia coli que desenvolve-se em alimentos crneos e que quando ingerida
induz a um quadro de falncia de mltiplos rgos.
Outros plasmdeos carregam genes que protegem a clula bacteriana portadora contra a
ao de substncias deletrias como mercrio e cobre, ou ainda, carregam genes que tornam
possvel a metabolizao de substratos no usuais como gasolina.
Uma questo naturalmente nos advm. Qual o papel desses plasmdeos no esquema
evolucionrio? A explicao corrente de que plasmdeos constituem um conjunto adicional
de alelos que aumentam efetivamente a diversidade gnica de uma populao bacteriana. Cabe
lembrar que o genoma de procariotos carrega somente informao para 1.000 5.000 genes e
que uma maior variedade aumentam as chances de sobrevivncia de uma bactria num meio
adverso.
amp
R
operon lac
ori
str
R
Esquema de um plasmdeo F
operon de
transferncia
formao do
F pillus
transferncia do
DNA
Tra a
Tra b
Tra c
Tra d
CONJUGAO
A descoberta da conjugao, a habilidade das clulas bacterianas em transferir DNA
por contato fsico, como forma de troca de material gentico, no incio da dcada de 1950,
surpreendeu alguns cientistas devido sua similaridade antropomrfica de troca de genes. Desde
sua descoberta, a troca conjugacional de DNA em bactrias tem sido documentada e mostrada
como sendo a forma mais comum e promscua. Inicialmente, acreditava-se que a conjugao
fosse ocorreria somente entre bactrias de mesma espcie ou entre espcies muito relacionadas,
mas a observao mais apurada mostrou que a conjugao ocorre tambm entre espcies no
relacionadas.
As condies bsicas para a conjugao so:
Clulas doadoras devem carrear ao menos um nico plasmdeo que contenha um
grupo de genes que possibilite a conjugao. Esses plasmdeos so conhecidos como
plasmdeos sexuais ou de fertilidade e clulas que os possuem so chamadas de
clulas macho ou F+, ao passo que aquelas que perdem ou no possuem tal
Regio de
integrao ao
cromossomo
amp
R
operon lac
ori
str
R
Esquema de um plasmdeo Hfr
operon de
transferncia
formao do
F pillus
transferncia do
DNA
Tra a
Tra b
Tra c
Tra d
plasmdeo passam a ser chamadas de clulas fmeas ou F-. Os genes contidos nesses
plasmdeos so responsveis pela sntese de pili proteicos especiais longos, finos e
tubulares, em cujas extremidades livres possuem receptores que ligam-se firmemente
ligantes moleculares nas paredes de clulas F-.
Aps a unio de duas clulas com reao sexual oposta atravs desses pili, essas
tornam-se unidas por meio de uma ponte conjugativa que passa a permitir a
continuidade do contedo citoplasmtico nessas duas clulas.
Uma enzima especial cliva uma das fitas do DNA do doador F+ em um nico stio e
uma recm-sintetizada fita de DNA passa atravs da ponte conjugativa para o interior
da clula receptora F-. Essa fita convertida numa forma de fita dupla que esta apta a
sofrer permuta com regies de homologia no DNA da clula F-, por recombinao. A
forma mais comum de conjugao envolve a transferncia de plasmdeos, de uma
clula para outra, e se o plasmdeo transferido for um plasmdeo de fertilidade, a
clula F- torna-se uma F+ que imediatamente comea a combinar-se com outras
clulas F-. Alguns plasmdeos F+ conseguem incorporar-se no DNA genmico da
clula receptora transformando essa numa clula Hfr (high frequency
recombination).
SUPERBACTRIAS
A transferncia conjugativa de plasmdeos de resistncia a antibiticos entre bactrias
um dos maiores problemas encontrados hoje, no que tange a teraputica de infeces. No caso de
alguns patgenos, temos atualmente apenas um antibitico eficaz (Vancomicina) reservado ao
uso contra eles e contra outros resistentes a quase todos antibiticos existentes. Isso , essas
SUPERBACTRIAS contm plasmdeos carreando genes de resistncia contra todos
antibiticos disponveis. Alguns dos maiores focos the transferncia desses plasmdeos so os
hospitais. Esse um excepcional exemplo de evolution-in-action. Uma vez que pessoas
infectadas com patgenos so concentradas em hospitais, e que todas as formas de antibiticos
so extensivamente usadas para tratas essas infeces, as chances de que um plasmdeo contendo
genes para a resistncia a antibiticos seja selecionado e transferido para outras bactrias so
relativamente altas. Mais, a possibilidade de uma bactria receber um desses plasmdeos e j ter
outros plasmdeos com genes de resistncia contra outros antibiticos estatisticamente alta.
Outras atividades, como alimentar o gado com antibiticos para aumentar a produo de carne
ou para aumentar seu tempo de preservao no comrcio contribuem para a seleo e
subsequente disperso desses plasmdeos de resistncia.
Conjugao em bactrias
clula doadora (f +)
3
clula receptora (f -)
5
conjugao envolvendo clula F+
clula doadora (Hfr)
3
clula receptora (f -)
5
conjugao envolvendo clula Hfr
OBJETIVO DA AULA:
Apresentar ao aluno de Odontologia os conceitos bsicos de transferncia de genes entre
bactrias e a importncia desse fenmeno, quando o mesmo envolve genes de importncia
mdica.
QUESTES:
1. Explique, detalhadamente, como as DNA binding proteins, endonucleases e exonucleases
participam da transformao bacteriana.
2. O que voc entende por sexo bacteriano?
3. O que um fago defectivo e como o mesmo pode transferir genes bacterianos?
4. Como os tbulos de pilina transferem segmentos de DNA?
5 Explique o que uma clula Hfr, uma clula F+ e uma clula F-, do ponto de vista da
recombinao
QUESTO EXTRA:
Explique o que voc entende por recombinao recproca e recombinao no-recproca