ESTUDO DO PERFIL ANTIINFLAMATRIO E ANALGSICO DO

COMPOSTO LASSBio 930

Tributino, J .L.M.
1,2
; Duarte, C.M.
1,3
; Lacerda, D.I.
1,2
; Fraga, C.A.M.
1
; Barreiro, E.J .
1
; Castro, N.G.
2
;Miranda, A.L.P
1
.
1
Laboratrio de Avaliao e Sntese de Substncias Bioativas (LASSBio)- Faculdade de Farmcia, UFRJ .
2
Departamento de
Farmacologia Bsica e Clnica, UFRJ .
3
Instituto de Qumica, UFRJ
www.farmacia.ufrj.br/lassbio
1. INTRODUO
Estudos prvios feitos no laboratrio
evidenciaram o composto LASSBio 294 (1) como um
importante prottipo de frmaco antiinflamatrio e
analgsico em diversos modelos in vivo e in vitro
(Miranda et al.2002). Tendo em vista esse perfil e
utilizando-se estratgias de hibridao molecular
realizou-se a sntese uma nova srie de derivados N-
acilidraznicos sulfonilamnicos (3) obtidos pela
hibridao molecular do composto LASSBio 294 com o
safrosulido (2), um importante composto
antiinflamatrio sintetizado em nosso laboratrio.
Aps a triagem farmacolgica inicial no modelo de
edema de pata de rato induzido por carragenina foi
selecionado o composto LASSBio 930 como o mais
promissor da srie.
Hibridao
Molecular
(3)
O
O
N
O
N Ar
H
NH
SO2
R
H
LASSBio 294
O
O
N
O
N
S
H H
(1)
LASSBio 930
O
O
N
S
R
H
O O
W
(2) Safrosulido
Hibridao
Molecular
(3)
O
O
N
O
N Ar
H
NH
SO2
R
H
(3)
O
O
N
O
N Ar
H
NH
SO2
R
H
LASSBio 294
O
O
N
O
N
S
H H
(1) LASSBio 294
O
O
N
O
N
S
H H
(1)
LASSBio 930 LASSBio 930
O
O
N
S
R
H
O O
W
(2) Safrosulido
O
O
N
S
R
H
O O
W
(2) Safrosulido (2) Safrosulido
2. OBJETIVOS
Avaliar o perfil analgsico e antiinflamatrio do
composto LASSBio 930 em modelos in vivo e in vivo com o
objetivo de elucidar o seu mecanismo de ao.
3. METODOLOGIAS
3.1.Edema de pata de rato induzido por carragenina
3.2. Edema de orelha induzido por AA e TPA em
camundongos
3.2.a) Edema de orelha induzido Por AA
Administrao
Por via oral
Administrao tpica
do AA diludo
em acetona
(500 g / orelha)
1 hora
Orelhas retiradas
e pesadas
1 hora
3.2.b) Edema de orelha induzido por TPA (ster de forbol)
Substncia
administrada por via
oral
1 hora 6 horas
Administrao
tpica de TPA
(2 g/orelha)
Orelhas
retiradas e
pesadas
ADM
(Ferreira, 1979)
0 1h 3h
SUBPLANTAR LEITURA
(Snchez & Moreno, 1999)
3.3. Ensaio de formalina em camundongos
Substncia adm.
por via oral
Administrao
subplamtar
de formalina 2,5%
(20l/pata)
1 hora
15 min 0 h
5 min
1 fase
5 min 30 min
2 fase
(Hundskaar &Hole, 1987)
3.4. Ensaio de hiperalgesia induzida por
carragenina em ratos (placa quente modificada)
3.5. Ensaio de contores abdominais induzidas
por cido actico em camundongos
3.6. Ensaio da placa quente em camundongos
3.7. Perfil inibitrio sobre a COX-1 em
sangue humano total
Substncias adm.
por via oral
Administrao
subplamtar
de carragenina 1%
1 hora
1 h
0 h 30 min 4h 2 h 3 h
Leituras
(Lavich et al., 2003).
Substncias adm.
por via oral
Administrao i.p.
de cido actico
0,1N
1 hora
0 h
10 min
10min 30 min
20 min
Contagemdas contores
(Coolier et al., 1968)
1 leitura controle
(aclimatao)
2 leitura controle
(administrao por
via oral)
30 min
60 min 0 h 30 min 120 min 90 min
Leituras
(Kuraishi et al., 1983)
Sangue
humano
coletado
sem
anticoagulant
e
Alquotas de
1ml de
sangue
+4L de
DMSO ou
composto
1 hora
Centrifu
gao
13000
RPM/1
5min
Soro
coletado e
congelado a
20 C
Dosagem
de TXB2
por EIA
(Patrignani et al., 1994)
3.8. Perfil inibitrio sobre a COX-2 em
sangue humano total
Alquotas de
1ml de
sangue
+4L de
DMSO ou
composto
Centrifu
gao
13000
RPM/5
min
Sangue
humano
coletado
comheparina
(10 UI/ml)
15 minutos
Soro
coletado e
congelado a
20 C
Dosagem
de PGE2
por EIA
LPS
(100 g/ml)
24 horas
(Patrignani et al., 1994)
4.RESULTADOS
4.1. Edema de pata de rato induzido por carragenina
4.2. Edema de orelha induzido por AA e TPA em
camundongos
Composto DE50 (mol/kg)
Calculado na 3
hora do edema
Efeito mximo
aproximado
(%de inibio)
Nimesulido 22,7 60
Celecoxib 87,5 35
LASSBio 930 99,1 55
G
o
m
a
5
%
N
im
e
s
u
lid
o
L
A
S
S
B
io
2
9
4
L
A
S
S
B
io
9
3
0
0
50
100
150
%
d
e
fo
r
m
a

o
d
o
e
d
e
m
a
4.3. Ensaio de formalina em camundongos
4.5. Ensaio de contores abdominais induzidas por
cido actico em camundongos
4.6. Ensaio da placa quente em camundongos
0 25 50 75 100 125 150
0
5
10
15
Goma 5%
Morfina (30mg/kg)
LASSBio 930(300mol/kg)
*
*
* *
Tempo (min)
L
a
t

n
c
ia
(
s
)
4.7. Atividade inibitria sobre a COX-1 em sangue
humano total
Composto IC
50
(M)
Nimesulido 72,2
Celecoxib 48,3
LASSBio 294 63,0
LASSBio 930 2,9
FAPERJ , FUJ B e PRONEX
7. AGRADECIMENTOS
4.8. Atividade inibitria sobre a COX-2 em sangue
humano total
N
im
e
0
,1
N
im
e
1
N
im
e
1
0
N
im
e
1
0
0
N
im
e
5
0
0
C
e
le
0
,0
0
1
C
e
le
0
,0
1
C
e
le
1
C
e
le
1
0
C
e
le
1
0
0
C
e
le
5
0
0
L
B
9
3
0
0
,0
0
1
L
B
9
3
0
0
,0
1
L
B
9
3
0
0
,1
L
B
9
3
0
1
L
B
9
3
0
1
0
L
B
9
3
0
1
0
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
%
d
e
in
ib
i

o
r
e
la
t
iv
a
a
o
c
o
n
t
r
o
le
Edema temporal do composto LASSBio 930. *p<0,05 teste t de student comparado ao
controle de goma 5%, n=8 por grupo.Compostos administrados por via oral.
Valores de DE50 calculados pela inibio do edema na terceira hora
0 1 2 3 4 5
0
100
200
300
400
500
600
Goma5%
Nimesulido (100mol/kg)
LASSBio 930(300mol/kg)
*
*
*
*
*
* *
Tempo (h)
V
a
r
ia

o
d
e
v
o
lu
m
e
(
L
)
G
o
m
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5
%
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e
s
u
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o

L
A
S
S
B
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2
9
4
L
A
S
S
B
io
9
3
0

-10
-5
0
5
10
15
20
25
30
35
%
d
e
f
o
r
m
a

o
d
o
e
d
e
m
a
*
*
A) B)
Grafico A- Edema de orelha induzido por AA. Grfico B - Edema de orelha induzido por TPA.
*p<0,05 teste t de student comparado ao controle de goma. Compostos administrados a 300
mol/kg por via oral. n=10 a 15 animais por grupo.
*p<0,05 teste t de student comparado ao controle de goma 5%. N=10
animais por grupo.
Primeira fase
Goma 5% Nimesulido LASSBio 930
0
25
50
75
300 mol/kg v.o.
T
e
m
p
o
(
s
)
Segunda Fase
Goma 5% Nimesulido LASSBio 930
0
50
100
150
200
*
*
58,5
48,7
300mol/kgv.o.
T
e
m
p
o
(
s
)
0 1 2 3 4 5
0
1
2
3
4
5
6
7
Controle(Goma5%)
Nimesulido (100mol/kg)
LASSBio930(300mol/kg)
*
*
*
*
*
*
* *
Tempo (h)
V
a
r
ia

o
d
a
la
t

n
c
ia
(
s
)
*p<0,05 teste t de student comparado ao controle de goma 5%. N=10
animais por grupo. Compostos administrados por via oral.
Goma 5% Nimesulido LASSBio 930
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
* *
N

m
e
r
o
d
e
c
o
n
t
o
r

e
s
*p<0,05 teste t de student comparado ao controle de goma 5%. N=10 animais por
grupo. Compostos administrados por via oral na dose de 300 mol/kg
*p<0,05 teste t de student comparado ao controle de goma 5%. n=10 animais por
grupo. Compostos administrados por via oral.
n=3 para cada concentrao
5.DISCUSSO E CONCLUSES
6. BIBLIOGRAFIA
1. MIRANDA, A.L.P.,LIMA P.C., TRIBUTINO, J.L.M., et al. (2002) Abstracts du 6
me
Congrs Annuel de la Socit Franaise de Pharmacologie, P296; Rennes, Frana.
2. FERREIRA, S.H. (1979) J. Pharm. Pharmacol. 31, 648-648.
3. SANCHS, T, Moreno, J.(1999) Prostaglandins Other Lip. Mediat. 57, 119-131.
4. HUNSKAAR, S., BERGE, O, HOLE, K. (1987) Pain 30, 103-114.
5. LAVICH, T et al. Eur J. of pharmacol, 462:185, 2003
6. COOLIER, H. O. J., DINNEN, L. C., SCHNEIDER, C. (1968) Br. J. Pharmacol
Chemo. , 32: 285-310.
7. KURAISHI,Y,et al. (1983) Brain Research 273: 245
8. PATRIGNANI, P.; PANARA, M. R.; GRECO, A. (1994) J. Pharmacol. Exp. Ther. 271,
1705-1712.
O Composto LASSBio 930 apresentou um importante perfil antiinflamatrio in vivo
inibindo o edema de pata de rato induzido por carragenina. A inibio mxima foi
observada na terceira hora, com valor de IC50 de 99,1 mol/kg. No foi observado
irritao gstrica para este composto at a dose de 600 mol/kg;
O composto LASSBio 930 inibiu o edema de orelha induzido por cido
araquidnico em 65% e a fase inflamatria do ensaio de formalina em 65% e 48,7%,
respectivamente, indicando uma ao inibitria deste composto na cascata do
cido araquidnico.
Apresentou importante perfil antihiperalgsico, sendo capaz de inibir a
hiperalgesia induzida por carragenina com inibio mxima de 81,2% na quarta
hora do ensaio.
Inibiu os contores abdominais induzidas por cido actico em 70,7% no sendo
capaz de aumentar o tempo de latncia dos animais na placa quente.
Inibiu a produo de TXB
2
em sangue humano total coagulado espontaneamente
com IC
50
de 2,9 M , tambm sendo capaz de inibir a produo de PGE
2
em sangue
humano total em aproximadamente 70% a 100 M. Estes resultados demonstram
um perfil inibitrio do composto LASSBio 930 sobre as isoformas de cicloxigenase
o que explicaria os efeitos antiinflamatrios e analgsicos observados nos ensaios
in vivo.
Os resultados obtidos no presente trabalham caracterizam o composto LASSBio
930 como um importante prottipo de frmaco antiinflamatrio e analgsico, sendo
esta atividade aparentemente mediada pela inibio das isoformas de COX.
3.3. Ensaio de hiperalgesia induzida por carragenina em
ratos (placa quente modificada)