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SUMMARY
CHARACTERIZATION OF BIOPOLYMERS PRODUCED BY Beijerinckia sp 7070 AT DIFFERENT CULTURE TIMES. Biopolymers are microbial
polysaccharides. The biopolymer produced by Beijerinckia sp 7070 has pseudoplastic behaviour and shows high viscosity at low
deformation rates, giving to polymer excellent suspension characteristics. The objective of this work was to characterize the biopolymer
produced at different culture times by Beijerinckia sp 7070 in relation to total production, production of short and long fiber polymers,
productivity, viscosity and chemical composition. The polymers produced in liquid YM medium were recovered at different culture times,
dried and weighted for determination of the production and productivity. Fiber type produced during the culture times was evaluated
microscopically. Apparent viscosities of the 1% (w/v) aqueous solutions were determined at 6, 12, 30 and 60rpm, at 250C, in a Brookfield
viscosimeter. Biopolymer composition was determined by comparative thin layer chromatography. The highest total biopolymer productions
was found at 30 and 72h, the highest productivity was at 48h and the highest viscosity was at 72h. The long fiber polymer showed a
tendency of becoming longer with time. The viscosity of long fiber polymer was higher than the short fiber one. All polymers showed the
same components (glucose, galactose, fucose and glucuronic acid) but at different concentrations.
Keywords: biopolymer; culture; viscosity; Beijerinckia sp.
1 INTRODUO
Atualmente h considervel interesse em polissacardeos obtidos pela ao de microrganismos. Estes polissacardeos, conhecidos como biopolmeros, so
obtidos por processos fermentativos. Possuem capacidade de formar solues viscosas e gis em meio
aquoso, mesmo quando aplicados em baixas concentraes. O monoesterato glicerol e a carboximetilcelulose so emulsificantes amplamente utilizados na
indstria de alimentos. Embora muito efetivos nas
suas funes, estes componentes esto perdendo gradualmente seu campo devido a maior conscientizao
dos consumidores em reduzir o uso de aditivos artificiais ou quimicamente sintetizados em alimentos. A
produo de emulsificantes atravs de cultivo micro1.
327
2 MATERIAIS E MTODOS
2.1 Microrganismo
Foi utilizada a bactria Beijerinckia sp 7070, que foi
isolada do solo de plantao de cana-de-acar na regio de Ribeiro Preto-SP, identificada e caracterizada
como produtora de biopolmero por VENDRUSCOLO [19].
2.2 Meios e condies de incubao
Durante o desenvolvimento do trabalho a cultura
foi mantida atravs de liofilizao em ampolas. Nesse
processo, a suspenso bacteriana com 1x1010 UFC de
Beijerinckia sp 7070 por mL acrescida de crioprotetor foi
conservada atravs da dessecao a presses sub-atmosfricas. Alm disso, repiques a cada trinta dias em
YM agar foram feitos [5]. As placas cultivadas com
328
que em 30 horas ocorreu um equilbrio entre a quantidade de fibras longas e curtas produzidas (no apresentou diferena estatstica).
14
3 RESULTADOS E DISCUSSO
3.1 Produo de biopolmero
A produo total de biopolmeros nos diferentes
tempos apresentada na Figura 1 mostrou que a maior
produo ocorreu em 30 e 72 horas. Os perodos de
aumento se devem, provavelmente a maior presena
de enzimas polimerizantes e os de declnio, de enzimas
hidrolticas.
18
16
12
10
g/L
8
6
4
2
0
16 18 20 24 28 30 32 34 36 48 72 96
Tem po (h)
fibra longa
fibra curta
14
12
g/L
10
8
6
4
2
0
16 18 20 24 28 30 32 34 36 48 72 96
Tempo (h)
FIGURA 1. Produo total (g/L) de biopolmero em g/L por
Beijerinckia sp 7070 em diferentes tempos de cultivo.
FIGURA 3. Micrografias de polarizao (40X) dos biopolmeros de fibra longa em 30 horas (A) e em 72 horas (B) e de
fibra curta em 72 horas (C).
329
3.2 Produtividade
Como podemos observar na Figura 4, a produtividade dos polmeros de fibra longa permaneceu praticamente constante at 48 horas e, a partir da observou-se
um declnio devido ao maior intervalo de tempo entre
os cultivos. J a produtividade dos de fibra curta decresceu com o passar do tempo, pois estas foram sendo polimerizadas por enzimas especficas.
g/L.h
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
Tempo
(horas)
Tipo de fibra
16
18
20
24
28
30
32
16 18 20 24 28 30 32 34 36 48 72 96
Tempo (h)
produtividade longas
34
36
produtividade curtas
48
72
96
6rpm
12rpm
30rpm
60rpm
FL*
75
75
75
65
FC**
25
25
30
30
FL
25
37,5
40
37,5
FC
25
37,5
35
35
FL
50
37,5
40
37,5
FC
50
50
60
55
FL
50
62,5
60
55
FC
25
37,5
40
37,5
FL
75
87,5
85
75
FC
25
25
20
20
FL
75
87,5
90
82,5
FC
75
75
90
65
FL
150
150
135
115
FC
75
75
85
65
FL
150
150
140
120
FC
75
75
75
65
FL
100
100
100
90
FC
75
62,5
75
60
FL
325
312,5
250
200
FC
75
62,5
65
60
FL
600
525
390
287,5
FC
65
65
70
65
FL
425
387,5
305
235
FC
60
60
65
60
3.3 Viscosidade
330
450
400
Viscosidade
(mPa.s)
350
300
250
200
150
100
50
0
16
18
20
24
28
30
32
34
36
48
72
96
Tempo (h)
fibras longas
fibras curtas
A viscosidade aparente de solues aquosas de biopolmeros a 1%, medidas a 30rpm obtidas aps 72 horas de cultivo por VENDRUSCOLO [19] foi de 510mPa.s,
enquanto a encontrada nesse estudo do polmero de
fibra longa no mesmo perodo foi de 390mPa.s. No primeiro foi utilizado meio de crescimento de clulas e no
segundo no.
Em estudos anteriores, foi observado que a viscosidade de solues aquosas do polissacardeo produzido por bactrias do gnero Beijerinckia foi maior que a
de solues similares de xantana e a viscosidade foi
estvel a uma ampla faixa de temperaturas bem como
variao de pH de 3 a 12 [20].
Os biopolmeros de 16, 18, 20, 24, 28, 30, 32, 34 e
36 horas apresentaram comportamento newtoniano e
os de 48, 72 e 96 horas, comportamento pseudoplstico. Os obtidos aps 72 e 96 horas por VENDRUSCOLO
[19] tambm apresentaram comportamento pseudoplstico. Solues aquosas de outros biopolmeros, como a
xantana, tambm so altamente pseudoplsticas [16].
Em um estudo realizado por BUENO & GARCIACRUZ [1] com a bactria do gnero Pseudomonas, foi
verificada a influncia do tempo de cultivo em 24, 48 e
72 horas, utilizando-se dois caldos de fermentao diferentes. Em um caldo, a fonte de carbono utilizada foi
a glicose e no outro, a sacarose na concentrao de
2,0%. Os biopolmeros apresentaram comportamento
pseudoplstico e a maior viscosidade aparente obtida
foi tambm em 72 horas de cultivo. O meio contendo
sacarose produziu fluidos mais viscosos em 24 e 48
horas e o contendo glicose produziu fluidos mais viscosos somente aps 72 horas de cultivo.
Biopolmeros de alta massa molar geralmente apresentam uma srie de propriedades teis incluindo alta
viscosidade, e outras de particular interesse para indstria de alimentos devido a suas propriedades de
emulso estabilizante [14]. Alginatos bacterianos normalmente produzem solues altamente viscosas, em
que a viscosidade dependente da massa molar dos
polissacardeos [16].
No estudo de SHEPHERD et al. [14] nove organismos testados produziram emulsificantes extracelulares
to bons quanto os controles positivos goma arbica e
carboximetilcelulose. Entre estes est o biopolmero
produzido pela Beijerinckia indica ss. lacticogenes. Este
conhecido como indicam e um polissacardeo com
propriedades lipoflicas [18]. O biopolmero indicam
deve sua propriedade lipoflica combinao de aspectos estruturais que incluem uma cadeia linear altamente acetilada (15-20%) e ao alto contedo de desoxi
ramnose.
Uma srie de texturas de gel pode ser produzida
atravs do controle do nvel de acetilao do polmero
[7]. Para os polissacardeos da famlia das gelanas, a
viscosidade intrnseca como uma funo da fora inica
depende da sua estrutura e da presena ou ausncia
de grupos acetil. A energia do gel depende dos ctions
presentes. DONER & DOUDS [4] demonstraram a importncia da forma dos sais deste polissacardeo nas
suas propriedades de gelatinizao e esta seria claramente afetada pelas condies de crescimento utilizadas para sua produo e pelos procedimentos utilizados no processo ps-cultivo.
As propriedades reolgicas do biopolmero devem
ser estveis durante mudanas na temperatura, pH e
fora inica. O conhecimento sobre as propriedades dos
biopolmeros, principalmente a viscosidade e o comportamento reolgico so importantes para futuras aplicaes industriais, refletem sua estrutura qumica primria e servem para predizer em quais produtos podem
ser utilizados [13].
3.4 Anlise cromatogrfica
A Figura 6 apresenta o resultado da anlise cromatogrfica dos biopolmeros hidrolisados em diferentes
tempos de cultivo.
Produtos da hidrlise
da glucose
Fucose
Glucose
Galactose
Ac. glucurnico
Ac. galacturnico
P2 16L c 18L c 20L c 24L c 28L c 30L c P1
Produtos da hidrlise
da glucose
Fucose
Glucose
Galactose
Ac. glucurnico
Ac. galacturnico
P1 P2 32L c 34L c 36L c 48L c 72L c 96L c
331
camada delgada comparativa. No entanto, estes mtodos so os mais simples e econmicos, indicados quando o volume e freqncia de anlises no justificam o
emprego de mtodos instrumentais complexos, como a
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE).
Os resultados da anlise cromatogrfica mostraram que os biopolmeros que continham aparentemente maior teor de fucose e galactose foram tambm os
mais viscosos.
4 CONCLUSES
As maiores produes totais de biopolmero ocorreram em 30 e 72 horas. Isso se deve, provavelmente, maior presena de enzimas polimerizantes
nestes perodos. A produo de polmeros de fibra longa aumentou com o tempo e a de fibra curta diminuiu, possivelmente pela ao de enzimas
que foram polimerizando esses fragmentos. Em
30 horas ocorreu um equilbrio entre a quantidade de fibras longas e curtas produzidas. As fibras
dos polmeros de fibras longas tornaram-se ainda
mais longas com o tempo.
A maior produtividade encontrada foi aps 48 horas de cultivo. A produtividade dos polmeros de
fibra longa permaneceu praticamente constante e
a dos de fibra curta decresceu com o passar do tempo.
5 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
[1] BUENO, S.M.; GARCIA-CRUZ, C.H. Influncia do tempo
de fermentao e presena de sais na reologia do caldo
de fermentao de uma bactria do gnero Pseudomonas
isolada do solo. XVII Congresso Brasileiro de Cincia
e Tecnologia de Alimentos, Fortaleza, CE, 8-10 de
agosto de 2000.
[2] COOKE, A.A.; PERCIVAL, E. Structural investigation
of the extracellular polysaccharides elaborated by
Beijerinckia mobilis. Carbohydrate Research, v. 43,
p. 117-132, 1975.
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