Esterilizao do

Equipamento
DEQ 0524 Engenharia Bioqumica
Docncia Assistida: Cynthia Krzia C. Arajo
Docente: Prof. Dr. Everaldo Silvino dos Santos

Esterilizao Por que???

Penalidade econmica alta se faltar esterilidade;
Muitas fermentaes precisam estar absolutamente desprovidas de
organismos estranhos;

Vacinas precisam ter somente vrus inativados (mortos);

Em alguns processos biotecnolgicos industriais, a eliminao parcial da
populao microbiana dos equipamentos garante a qualidade que se deseja
no produto.

Esterilizao
Processo fsico ou qumico que destri ou inativa TODAS as formas de vida
presentes em um material (bactrias, fungos tanto em suas formas
vegetativas como esporuladas e vrus).

Possui significado absoluto, no existe parcialmente estril.

Esterilizao x Desinfeco
Processo menos rigoroso de eliminao de microrganismos, geralmente com
uso de agente qumico (desinfetante ou germicida).

No necessariamente elimina todos os microrganismos, sendo direcionada

aos mais prejudiciais.

Modo de ao dos agentes esterilizantes

Agentes fsicos calor seco, calor mido, radiao ultravioleta e ultra-som.
Agentes qumicos lquidos ou gases (hipoclorito, fenis, formaldedo, xido
de etileno, oznio, dixido de enxofre, etc).

Induzem, por diferentes mecanismos, a formao de substncias qumicas

letais no interior das clulas, levando morte do microrganismo.

Agentes Esterilizantes
CALOR MIDO
Temperatura
elevada

Alto grau de
umidade

Desnaturao
irreversvel de
protenas
Transferncia de calor rpido
aumento de temperatura

Esterilizao por vapor sob presso (autoclaves):

Aumento do nvel de hidratao no

Interior das clulas coagulao
das protenas

Agentes Esterilizantes
APLICAO DE CALOR MIDO
Reatores bioqumicos e tubulaes;
Processamento de produtos de fermentao bombas, filtros, centrfugas,
misturadores, separadores, etc.

Material de laboratrio autoclaves e fornos (calor seco)

Meios de cultura

Agentes Esterilizantes
CALOR SECO
Destruio dos microrganismos

oxidao de seus constituintes

qumicos

Transferncia de calor muito lenta e nvel de hidratao das clulas diminui

(proteo s protenas)

Dependncia da quantidade de gua na clula

Agentes Esterilizantes
CALOR SECO X CALOR MIDO

Calor mido favorece a desnaturao de protenas;

Esterilizao por calor seco mais lenta e menos eficaz;

Calor mido o agente de uso mais frequente;

Calor seco utilizado para materiais sensveis ao calor mido.

Agentes Esterilizantes
IRRADIAO POR LUZ ULTRAVIOLETA (UV)
Efeito letal proporcional dose de radiao aplicada
Regio do espectro de UV com ao esterilizante de 220 a 300 nm Regio
abitica (sem vida)

Fatores que podem influenciar na sensibilidade microbiana a UV pH,

estado fisiolgico das clulas e a constituio gentica

Agentes Esterilizantes
RADIAO IONIZANTE
Principais: alfa, beta, gama, raios X, prtons, eltrons e nutrons de alta
energia

Alvo principal: molcula de DNA

Morte celular resulta da formao de uma cadeia de ionizao em uma
poro significativa do DNA.

A sensibilidade dos diferentes organismos varia com o volume de DNA

Agentes Esterilizantes
XIDO DE ETILENO (EtO)
ter cclico que mata as clulas, agindo com agente alquilante
Gs inodoro, incolor, inflamvel e explosivo- Poderoso agente esterilizante
com ao bactericida, fungicida devido a sua capacidade de interferir na
sntese protica.

Reao de alquilao bloqueio dos grupos ativos das molculas

Agentes Esterilizantes
XIDO DE ETILENO (EtO) - Vantagens
Esteriliza materiais sem danific-los, promovendo um aumento da sua vida
til e proporcionando economia na reposio;

utilizado para materiais termossensveis;

Em muitas aplicaes substitui o calor seco ou vapor;
um gs altamente penetrante, com grande capacidade de difuso e
solubilidade.

Legislao Brasileira
(Portaria n 482/99 e resoluo n 30/06 da ANVISA).
Estabelece condies mnimas de instalao e operao de processos de
esterilizao a EtO que em resumo so:

Dispor de reas e processos adequados quanto ao risco de exploso do gs;

Dispor de sistemas de tratamento dos resduos do gs de forma a no poluir o ar ou o
sistema de esgotos;
Dispor de sistemas de ventilao e Aerao alm de EPIs adequados quanto aos riscos
biolgicos do gs;
Limite de Tolerncia para Exposio de funcionrios:
1ppm ou 1,8mg/m3 ( 8 horas por dia)
5ppm ou 9 mg/m3 (15 minutos por dia)

Esterilizao de reatores por calor mido

Vapor obtido em caldeiras e distribudo por dutos de ao galvanizado ou ao inoxidvel,

isolados termicamente.
Considerado estril (altas temperaturas e presses nas caldeiras).
Esterilizao de reatores vazios:
Injeo de vapor no interior e expulso do ar presente;
Fechar reator e injetar vapor at T e P adequadas (121C e 1 atm);
Novas injees s para manter T e P;
Fechar a entrada de vapor e injetar ar esterilizado para evitar que o resfriamento e a
condensao do vapor presente no interior gere vcuo;
Aps resfriamento e estabilizao da presso interna, o meio de cultura esterilizado
externamente pode ser carregado.

Esterilizao de reatores por calor mido

Esterilizao de reatores com meio de cultura:
Agitao mnima deve ser fornecida ao meio de cultura durante todo o
processo.

1 etapa: Circula-se vapor pela serpentina ou camisa at que o meio atinja 96

a 97 C, sendo que a cabea do tanque deve receber vapor fluente para
expulsar o ar do interior; Vapor fluente tambm deve ser usado para
esterilizar vlvulas, filtros e tubulaes de entrada e sada do reator;

Esterilizao de reatores por calor mido

Esterilizao de reatores com meio de cultura:
2 etapa: Injetar vapor diretamente no meio de cultura at 100 C . Fechar
reator e injetar vapor at T e P adequadas (121 C e 1 atm) e corta-se a
injeo direta de vapor controlando T e P atravs da serpentina 20 a 40
min (reator em bom estado)

3 etapa: Para o resfriamento, circular gua fria nas serpentinas at 100 C e

injetar ar esterilizado para evitar formao de vcuo pela condensao do
vapor

Esterilizao de reatores por calor mido

Esterilizao de reatores com meio de cultura:
2 etapa: Injetar vapor diretamente no meio de cultura at 100 C . Fechar
reator e injetar vapor at T e P adequadas (121 C e 1 atm) e corta-se a
injeo direta de vapor controlando T e P atravs da serpentina 20 a 40
min (reator em bom estado)

3 etapa: Para o resfriamento, circular gua fria nas serpentinas at 100 C e

injetar ar esterilizado para evitar formao de vcuo pela condensao do
vapor

Esterilizao de reatores por calor mido

Esterilizao em autoclaves:
Reatores de at 30 L,
Vidrarias,
Meio de cultura

Esterilizao de reatores por calor mido

Esterilizao em autoclaves:
Erlenmeyers com meio de cultura, pipetas, tubos de ensaio, etc, so
esterilizados por 15 a 30 min.

Reatores 40 min a 1 h (no so agitados durante a esterilizao e o seu

centro demora para atingir a temperatura adequada)

Esterilizao de reatores por calor mido

Reator de 10 L

Esterilizao de reatores por calor mido

Esterilizao em autoclaves:
Etapa de resfriamento:

Somente abrir a autoclave aps a temperatura chegar prxima do ambiente,

j que uma despressurizao brusca pode provocar danos aos sensores
colocados no interior dos reatores.

Esterilizao de reatores por calor mido

Linha de exausto de gases com filtro esterilizante adequado;
Linhas de inoculao, amostragem e esgotamento devem tambm ser
esterilizadas pela passagem de vapor saturado.

Manuteno peridica: limpeza e eventual substituio de todas as vlvulas

que tenham contato direto com o reator ou com linhas esterilizadas (ar,
inculo, amostragem, exausto, descarga, etc)

Verificao de vazamentos na serpentina: gua circulando sob presso por 24

h aparecimento de gua no interior do reator

Esterilizao e desinfeco por agentes

qumicos Germicidas qumicos
Utilizados quando equipamentos de operaes unitrias ou componentes de
uma instalao industrial no admitem esterilizao pelo vapor de gua
saturado;

Agem a temperatura ambiente;

Precisam de tempos maiores de contato;
Capacidade ligada fortemente s propriedades fsicas do material a ser tratado
(plstico ou metlico, liso ou rugoso, porosidade) e s caractersticas qumicas
do ambiente;

Esterilizao e desinfeco por agentes

qumicos
Ciclo de desinfeco /esterilizao qumica de um equipamento:
1) Desmontagem do equipamento (se for o caso);

2) Limpeza dos componentes, removendo-se todo o tipo de resduos de meio

de cultura, biomassa e produtos usando detergentes (se necessrio);
3) Lavagem dos componentes com gua para remoo de detergentes
utilizados;
4) Montagem do equipamento e introduo da soluo aquosa do germicida,
propiciando o tempo de exposio preestabelecido para a ao germicida
requerida;

Esterilizao e desinfeco por agentes

qumicos
Ciclo de desinfeco /esterilizao qumica de um equipamento:
5) Drenagem da soluo germicida do sistema;

6) Remoo dos resduos de germicida atravs de circulao cuidadosa de gua

ou outro fluido estril.

Esterilizao e desinfeco por agentes

qumicos
Condies de tempo de esterilizao:
Agente qumico utilizado

Depende
Das caractersticas da populao microbiana
remanescente (tipo e nmero de microrganismo)

Esterilizao e desinfeco por agentes gasosos

No o mtodo de escolha em indstrias de fermentao para esterilizao
de equipamentos (muito rara);

Assepsia de salas e laboratrios comumente realizada com vapores de

formaldedo;

Os mais importantes: xido de etileno, xido de propileno, formaldedo e

betapropriolactona.

Esterilizao e desinfeco por agentes gasosos

xido de Etileno usado em itens hospitalares, artigos plsticos de
laboratrio etc. dentro de cmaras especiais semelhantes a autoclaves;

xido de propileno esterilizao de alimentos;

Vapores de formaldedo e betapropiolactona desinfeco de cmaras, salas
e ambientes onde assepsia desejvel.
A resistncia de bactrias vegetativas e esporuladas, vrus e fungos aos mtodos de
esterilizao por gases bastante varivel, e depende do agente utilizado, sua
concentrao, umidade relativa do ambiente e temperatura do processo.

Controle de contaminaes microbianas em

processos fermentativos
Esterilizao no h grau - /no estril;
Desinfeco industrial implica que o material deve ser tratado, a fim de

eliminar ou reduzir a carga microbiana patognica, mas no implica que

todos os microrganismos viveis tenham sido inativados;

Problema do contaminante:
1) Desviar a transformao das matrias primas fermentescveis para outras
substncias que no o produto desejado;
2) Destruir por decomposio o produto final, ou atravs de enzimas
indesejveis, ou pela modificao das condies ambientais.

Controle de contaminaes microbianas em

processos fermentativos
Fermentao - contaminao indesejvel!!

Operao de fermentao contnua - mais fcil de haver contaminao que

na descontnua;

Alternativas para o processo

Utilizar microrganismos fermentadores que crescem em temperaturas prejudiciais
aos contaminantes: Lactocobacillus delbrueckii que cresce entre 45C e 50C;

Trabalhar com microrganismos que suportem elevadas presses osmticas

impedindo desta forma que contaminantes cresam;

Introduo de grandes quantidades de inculo para proteger indiretamente de

contaminantes pela lei de antagonismo (diminuio de pH rapidamente tornando o

meio no propcio para o crescimento do contaminante - ex. fermentao ctrica
com baixa de pH a 2 2,5).

Referncias

Schmidell W, Lima UA, Aquarone E, Borzani W. Biotecnologia Industrial Engenharia bioqumica. Volume II, So Paulo, Ed. Edgard Blcher LTDA,
2001. Captulo 3