Departamento de Cincias Biolgicas

CURSO DE ENGENHARIA BIOTECNOLGICA

LIBERAO SUSTENTADA DE DICLOFENACO DE

POTSSIO UTILIZANDO BIOMEMBRANAS DE LTEX
NATURAL COMO SUPORTE

Monografia apresentada para

concluso do Curso de Bacharelado
em Engenharia Biotecnolgica

Aluno Paulo Augusto Marques Chagas

Orientador Rondinelli Donizetti Herculano

Assis, 2016
PREFCIO
Este Trabalho de concluso de curso tem como base o projeto de iniciao cientfica
Emprego das tcnicas de microscopia tica (UV-VIS) e por Infravermelho para a avaliao
da liberao do diclofenaco de potssio por biomembranas de ltex natural. A iniciao
cientfica foi realizada na Faculdade de Cincias e Letras da UNESP Universidade
Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho no Laboratrio de Fsica, Biofsica e Biomateriais,
sob a orientao do Prof. Dr. Rondinelli Donizetti Herculano, tendo como objetivo a anlise
da liberao controlada de frmaco - neste estudo, utilizou-se o diclofenaco de potssio. O
perodo de realizao do experimento ocorreu entre fevereiro a julho de 2012.
Este estudo foi desenvolvido como parte de um projeto pesquisa financiado pelo
Conselho

Nacional

de Pesquisa

e Desenvolvimento-CNPq/PIBIC,

PROPe/UNESP,

FUNDUNESP (Processo: 01/2012) e FAPESP (Processo: 2012/0019311). O projeto teve por

objetivo avaliar o potencial de liberao do diclofenaco de potssio utilizando-se uma
membrana de ltex de Hevea brasiliensis como carreador em um sistema de liberao
controlado, por meio de anlises espectrofotomtricas e fsicas. Este trabalho de Concluso
de Curso possui a formatao de acordo com as normas da Associao Brasileira de
Normas Tcnicas (ABNT).

AGRADECIMENTOS
Agradeo aos meus pais: Paulo Srgio Ribeiro Chagas e Sueli Imaculada. Irms:
Patrcia Marques Chagas, Poliana Marques Chagas, Pmela Marques Chagas e Penlope
Marques Chagas. Amigos: Pamela de Almeida Terni, Danillo Maciel, Heloisa Sorato, Patrcia
Aielo e Raphael Zanandra Moda. E agradeo os membros da banca avaliadora: Rondinelli
Donizetti Herculano, Gabriela Sterle, Vincius Simo.

SUMRIO
1. INTRODUO.................................................................................................................. 06
1.1 O ltex da seringueira Hevea brasiliensis............................................................06
1.2 Diclofenaco de potssio.......................................................................................08
2. OBJETIVOS...................................................................................................................... 08
3. MATERIAIS E MTODOS.................................................................................................09
3.1 Fabricao das membranas.................................................................................09
3.2 Espectroscopia ptica..........................................................................................10
3.3 Microscopia eletrnica de varredura....................................................................10
4. RESULTADOS E DISCUSSO.........................................................................................11
4.1 Anlise da liberao.............................................................................................11
5. CONCLUSO................................................................................................................... 14
6. REFERNCIAS................................................................................................................. 15

RESUMO
O diclofenaco de potssio um medicamento anti-inflamatrio no esteroidal,
analgsico e antipirtico (AINEs) que ajuda na reduo da inflamao e dor. Seu uso
clnico amplamente utilizado, mas alguns efeitos colaterais e seu curto tempo de meia
vida limitam seu uso. Membranas de ltex extrado da seringueira Hevea brasiliensis vem
sendo usadas devido a sua biocompatibilidade, estmulo natural angiognese e utilizao
como um sistema de liberao controlada (SLC). A agregao dos frmacos em SLC visa a
interao frmaco-membrana, para uma maior otimizao nos processos de cicatrizao
tecidual, garantindo tambm uma ao anti-inflamatria localizada, evitando algumas
complicaes plausveis desse processo. A longo prazo, um dos objetivos do projeto
inferir implicaes biolgicas a partir das propriedades das membranas de ltex agregadas
com frmacos. Testes in vivo utilizando a membrana de ltex natural mostraram trazer
nenhum tipo de rejeio ao hospedeiro, o que aumenta as chances de aplicao. O
comportamento do sistema de liberao controlada (SLC) foi estudado utilizando o
diclofenaco de potssio como frmaco. A escolha deste frmaco para o projeto de pesquisa
deve-se ao fato de este composto possuir propriedades antipirticas, analgsicas e antiinflamatrias. O comportamento da liberao foi observado retirando alquotas da soluo
onde a membrana se encontrava. A taxa de liberao do diclofenaco de potssio foi
monitorada e quantificada utilizando-se o mtodo de espectroscopia tica (UV-VIS). O
mtodo utilizado na preparao das membranas reprodutvel e a biomembrana de ltex
muito estvel. A biomembrana de ltex foi capaz de libertar 20% do diclofenaco de potssio
em 9 dias e atravs de uma equao bi-exponencial pode ajudar a prever a libertao do
frmaco. Este estudo apresentou um novo sistema transdrmico especfico para liberao
do frmaco diclofenaco de potssio.
Palavras-chave: membranas, ltex natural, diclofenaco de potssio, sistema de liberao
de frmacos, biomateriais.

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1. INTRODUO
Sistemas de liberao de princpios ativos so importantes devido ao fato de que
raramente um frmaco agregado a soluo aquosa, ou numa forma convencional, consegue
atingir um alvo especfico no organismo em concentraes adequadas para provocar o
efeito teraputico esperado (HERCULANO, 2007). Isso pode ser facilmente entendido
quando verificamos que entre o local de administrao do frmaco e o rgo ou tecido alvo,
se estabelece inmeras dificuldades de naturezas diversas. Somente uma parte em dez mil
de um frmaco injetado intravenosamente alcana seu alvo final, isso quando o alvo est
localizado em stios profundos. A liberao controlada de frmacos um tpico importante
para vrias iniciativas em nanotecnologia devido ao possvel impacto para a sociedade, com
a criao de sistemas otimizados que garantam a liberao num stio especfico e a uma
taxa controlada. Dentre os vrios paradigmas de liberao controlada destaca-se o uso de
sistemas liberadores de drogas sustentados em materiais polimricos. Entretanto, existem
limitaes nos sistemas carreadores existentes. Como por exemplo, o tempo de reabsoro
do carreador. Desta forma, surge a necessidade da confeco de um sistema eficaz que
permita liberao de frmacos no stio do defeito por perodos prolongados de tempo com
uma dose apropriada. O ltex natural (LN) extrado da seringueira Hevea brasiliensis foi
utilizado como matriz para um novo sistema de liberao controlada (SLC) porque tem se
mostrado promissor em aplicaes biomdicas (MENDONA, 2009). A agregao de
diclofenaco de potssio nesse novo sistema (SLC) visa interao membrana-frmaco,
para uma maior otimizao nos processos de anti-inflamao localizada, evitando algumas
complicaes plausveis desse processo.

1.1 O ltex da seringueira Hevea brasiliensis

A seringueira Hevea brasiliensis uma rvore extensivamente cultivada no sudeste
da sia, no entanto nativa da bacia do rio Amazonas, no Brasil. A borracha natural (Figura
1) um material de elevado valor econmico para a indstria, principalmente a
automobilstica, devido a suas caractersticas fsicas, como elasticidade, plasticidade,
resistncia ao desgaste (frico) e propriedades de isolamento eltrico.

Figura 1: Corte para sangria da seringueira em meia espira e coleta do ltex.

O ltex extrado da seringueira Hevea brasiliensis tem se mostrado promissor em

aplicaes biomdicas. Membranas feitas deste material tm sido usadas como prteses e
enxertos mdicos devido a suas caractersticas de biocompatibilidade e estmulo natural a
angiognese (ERENO, 2010). O ltex da seringueira H. brasiliensis forma um sistema
coloidal polifsico e polidisperso. Depois de centrifugado, o ltex pode ser representado
como sendo formado por trs componentes fundamentais: hidrocarboneto isoprnico, soro e
frao de fundo.
Trabalhos recentes tm mostrado que o ltex natural um material biocompatvel
com inmeras aplicaes. Ele apresenta alta resistncia mecnica e apresenta baixo custo.
O trabalho de Alves et al mostrou que o ltex possui a propriedade de acelerar a
angiognese (Figura 2). Por essas razes o consideramos um excelente candidato como
matriz slida para o SLC ( ALVES, 2003).

Semtratamento

Com tratamento
Figura 2: Angiognese: Evidente aumento da vascularizao na regio tratada com a pelcula de
ltex.

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1.2 Diclofenaco de potssio
O diclofenaco de potssio (Figura 3) um anti-inflamatrio no esteride (AINE). Tal
grupo de substncias distingue-se pela ao anti-inflamatria, antipirtica e analgsica.
Como John Vane (SAMPAIO, 2010) esclareceu, em 1971, seu mecanismo de atuao
resume-se, basicamente, em inibir as enzimas ciclo-oxigenases cuja funo principal
catalisar a converso do cido araquidnico em prostaglandinas e tromboxanos,
substncias modulantes no processo inflamatrio.

Figura 3: Estrutura Molecular do Diclofenaco de Potssio.

O diclofenaco de potssio rapidamente absorvido aps administrao oral e

parenteral. Aps a absoro, ele se liga s protenas plasmticas em uma proporo de
99,7%. A meia-vida de eliminao de 1 a 2 horas, e a droga tende a se acumular no
liquido sinovial, sendo excretado atravs da urina.

2. OBJETIVOS
O presente estudo tem como objetivo avaliar se a membrana de ltex natural, em
associao ao frmaco diclofenaco de potssio, cria uma interao entre o frmaco e a
membrana com uma liberao controlada, possibilitando a utilizao em curativos. Com tal
preceito, os objetivos do trabalho so:

Avaliar a interao do diclofenaco de potssio em membranas de ltex natural;

Avaliar a liberao do diclofenaco de potssio associado membrana;

Avaliar a capacidade das membranas como carreadora de frmaco;

Aumentar a eficcia e rapidez dos tratamentos, bem como evitar a perda dos frmacos
e efeitos colaterais;

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3. MATERIAIS E MTODOS
3.1 Fabricao das membranas
Utilizou-se o ltex, para a realizao deste projeto, retirado de seringueiras
cultivadas da Fazenda Experimental da ESALQ-USP, Piracicaba/SP. Mantido em fase
lquida atravs da adio da amnia corrigindo a acidez, por volta do pH igual a 10. Aps
adio da amnia, o material foi centrifugado a 8000g onde houve a separao de protenas
alergnicas contidas no ltex natural. O frmaco, diclofenaco de potssio, foi obtido atravs
de manipulao feita pela Callithea - Farmrcia de Manipulao, localizada na cidade de
Assis, SP. As membranas de ltex natural com diclofenaco (Figura 4) foram fabricadas
depositando 3mL de ltex natural acrescidos de 3mL de soluo de diclofenaco de potssio
(3mgmL1). Essas membranas foram preparadas despejando a soluo ltex com
diclofenaco em um placa de ao inoxidvel com 5,00 0,05 cm de dimetro e 234,40 5,00
m de espessura. Sua secagem foi realizada em temperatura ambiente por dois dias, at
sua completa polimerizao. Aps a incorporao, as membranas com o frmacos foram
colocadas em 300 mL de soluo aquosa, das quais, alquotas foram coletadas durante um
intervalo que variou de 0 a 350 horas.

Figura 4: Forma (a); Espessura de 234,40 5,00 m (b); Elasticidade (c); Flexibilidade da pelcula de
ltex natural (d);

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3.2 Espectroscopia ptica
A caracterizao por espectroscopia ptica (UV-VIS), foi realizada no Laboratrio de
Fitoterpicos do Departamento de Engenharia Biotecnolgica da Faculdade de Cincias e
Letras de Assis/UNESP, utilizando aparelho LGS53, BEL Photonics (Figura 5). Alquotas da
triplicata foram retiradas e analisadas em diferentes intervalos de tempo, de 0 a 350 horas.
Aps coleta dos dados, as informaes foram compiladas e discutidas utilizando o software
de estatstica OriginPro 8 SR4, da OriginLab Corporation.

Figura 5 Equipamento de espectroscopia tica empregado.

3.3 Microscopia eletrnica de varredura

O Microscpio eletrnico de varredura, MEV (Scanning Electron Microscope, SEM)
um equipamento verstil que permite a obteno de informaes estruturais e qumicas de
amostras diversas. Um feixe fino de eltrons de alta energia incide na superfcie da amostra,
na qual, ocorrendo uma interao, parte do feixe refletida e coletada por um detector que
converte este sinal em imagem de BSE - imagem de eltrons retroespalhados - nesta
interao a amostra emite eltrons produzindo a chamada imagem de ES (eltrons
secundrios) (TATA,1980). Esta tcnica importante para a observao da distribuio dos
poros nas membranas de ltex natural, alm da incorporao do frmaco membrana. O
teste MEV-EDS foi realizado no Laboratrio Multiusurio de Caracterizao Qumica do
Departamento de Qumica da Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras da Ribeiro
Preto/USP, Ribeiro Preto, So Paulo. Foram enviadas 3 amostras para anlise: uma
membrana de ltex, uma membrana de ltex com soluo de diclofenaco de potssio
3mg/mL e uma cpsula de diclofenaco de potssio de 100mg.

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4. RESULTADOS E DISCUSSO
4.1 Anlise da liberao
Durante 350 horas, foi observado o comportamento das membranas de diclofenaco
de potssio em soluo. As primeiras alquotas da soluo (onde se encontra a membrana)
foram retiradas nas primeiras 5 horas de exposio da membrana com a soluo em
intervalos de 15 em 15 minutos. As outras alquotas foram retiradas em intervalos de vinte
quatro horas durante 15 dias.
O grfico 1 mostra a leitura de espectroscopia ptica na qual tem-se a absorbncia
pelo comprimento de onda. Para calcular a quantidade de frmaco liberado ao longo do
experimento, uma curva de calibrao foi realizada, onde uma soluo aquosa do frmaco
com concentrao conhecida foi analisada por espectroscopia UV-VIS. O grfico 2 mostra
essa curva de calibrao, na qual as absorbncias foram medidas para vrias
concentraes de diclofenaco, variando entre 0,012 a 0,031 mg/mL. A curva de calibrao
permite relacionar a absorbncia com a concentrao do frmaco. Cada concentrao do
medicamento (pontos) foram feitos em triplicata, onde o erro estimado foi menor que 5%. O
comprimento adotado para a realizao do teste de liberao foi de 261nm. Diferentes
comprimentos de onda foram encontrados na reviso bibliogrfica, porm, vale ressaltar que
cada instrumento de anlise possui suas peculiaridades e desvios. Aps a definio do
comprimento de onda, o teste de liberao foi iniciado.

Absorbncia (u.a.)

Absorbncia mxima em 261nm

Comprimento de onda (nm)

Grfico 1 - Absorbncia pelo comprimento de onda. Note que absorbncia mxima em 261nm.

Absorbncia (u.a.)

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Concentrao (mg/mL)
Grfico 2 - Intensidade da absorbncia em funo da concentrao de diclofenaco de potssio em
soluo.

No estudo presente, o ponto de saturao acontece aps 216 horas. Ao analisar a

figura 8, conclui-se que ocorre um rpido pico de liberao, o que corresponde ao
diclofenaco prximo superfcie da membrana. Portanto, o processo de liberao mais

(mg/mL)

Concentrao

lenta seria associado difuso lenta do diclofenaco ao longo da matriz da membrana.

Tempo (horas)
Grfico 3 - Curva de liberao do diclofenaco de potssio em funo do tempo. Observe que a
concentrao de diclofenaco de potssio atinge o pico aps aproximadamente 216 horas.

Por meio da anlise das curvas de liberao de diferentes membranas encontradas

em estudos de mesmo escopo de Herculano et al possvel perceber um padro. Os
dados experimentais no grfico 3 foram plotados utilizando uma funo bi exponencial (A)

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y(t) = y0 + A1et/1 + A2et/2, na qual y(t) a quantidade de diclofenaco de potssio na
membrana LN em um determinado tempo t; y0 o contedo inicial de diclofenaco, A1 e A2
so constantes, iguais a 0,036 e 0055, respectivamente, e os tempos caractersticos so
1 = 7,0669 horas e 2 = 64,6034 horas. Observa-se que a liberao do diclofenaco de
potssio obedece uma funo bi exponencial, na qual a liberao mais rpida ocorre
devido a presena do frmaco adsorvido na superfcie da membrana, enquanto que a
liberao mais lenta ocorre pelo fato do frmaco estar presente em regies mais internas
da membrana (bulk). Ao integrar a curva at 216 h, a quantidade total de liberao do
diclofenaco pela membrana nos 300 mL de soluo aquosa foi de 20% ou 1,8 mg. A
incapacidade de liberar a maior quantidade do frmaco se d, possivelmente, pela
densidade dos poros. As imagens obtidas atravs da tcnica de MEV-EDS mostram a
morfologia da superfcie da membrana de NRL (Figura 6). Entretanto, possvel observar
a adsoro do frmaco membrana, espalhado pela superfcie em clusters.

(a)

(b)

Figura 6 - Micrografia MEV de (a) diclofenaco de potssio em p e (b) membrana NRL + diclofenaco
de potssio. Observa-se que o diclofenaco de potssio est presente na matriz NRL.

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5. CONCLUSO
Foi demonstrado que o diclofenaco pode ser incorporado em membranas de ltex
natural. Neste estudo, comprovou-se que o ltex pode, tambm, ser usado como carreador
do diclofenaco de potssio, liberando este por at 9 dias. Foi observado que 20% do
contedo inicial de diclofenaco de potssio dentro da membrana NRL foi liberado em
aproximadamente 216 horas. O MEV-EDS e o comportamento de liberao indicaram que o
diclofenaco pode permanecer prximo da superfcie e no interior da membrana. O
medicamento encontrado na poro interna da membrana torna-a, assim, um material
promissor para liberao de medicamentos em aplicaes in vivo.

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6. REFERNCIAS
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