UNIVERSIDADE ESTADUAL DE GOIS UNIDADE DE CINCIAS EXATAS E TECNOLGICAS

CROMATOGRAFIA

JHONATA DE JESUS SILVA MNICA MINOMO

ANPOLIS NOVEMBRO 2009

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE GOIS UNIDADE DE CINCIAS EXATAS E TECNOLGICAS

CROMATOGRAFIA

JHONATA DE JESUS SILVA MNICA MINOMO

Relatrio apresentado na disciplina de Qumica Orgnica Experimental I do curso de Qumica Industrial da Universidade Estadual de Gois sob orientao da professora Luciana.

ANPOLIS NOVEMBRO 2009

1- INTRODUO
A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria. A interao dos componentes da mistura com estas duas fases influenciada por diferentes foras intermoleculares, incluindo inica, bipolar, apolar, e especficos efeitos de afinidade e solubilidade. A grande variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao. [1] A palavra cromatografia de origem grega, onde cromo significa cor e grafia significa escrita, ou seja, escrita em cores. Mas a cromatografia pode separar os componentes sem nenhum aparecimento de cor. [2] A partir da dcada de 30 diversos trabalhos na rea da cromatografia possibilitaram seu aperfeioamento e, em conjunto com avanos tecnolgicos, levaram-na a um alto grau de sofisticao, o qual resultou no seu grande potencial de aplicao em muitas reas. A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao de padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura. [1] As diferentes formas de cromatografia podem ser classificadas considerando-se diversos critrios: 1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico Em Coluna: Cromatografia Lquida Cromatografia Gasosa Cromatografia Supercrtica Planar: Centrfuga (Chromatotron) Cromatografia em Camada Delgada (CCD) Cromatografia em Papel (CP) 2. Classificao pela fase mvel empregada [3] Utilizao de Gs: [3] [3]

Cromatografia Gasosa (CG) Cromatografia Gasosa de Alta Resoluo (CGAR) Utilizao de Lquido: Cromatografia Lquida Clssica (CLC) Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) Utilizao de Gs Pressurizado Cromatografia Supercrtica (CSC) 3.Classificao Lquida Slida Quimicamente Ligadas 4. Classificao pelo modo de separao [3] Por adsoro Por partio Por troca inica Principais tcnicas cromatogrficas Cromatografia de adsoro O mais utilizado. Duas substncias ligadas por uma interface onde no ocorre solubilizao. A fase estacionria slida e a fase mvel pode ser lquida ou gasosa. Baseia-se nas atraes eletrostticas ou dipolares da superfcie da fase estacionria pelas molculas da substncia a separar. [3] Cromatografia de partio A fase estacionria lquida. Este processo baseado na diferente solubilidade dos componentes da mistura nas duas fases lquidas. [3] Cromatografia planar pela fase estacionria utilizada [3]

Na cromatografia planar, a fase estacionria suportada sobre uma placa plana ou nos poros de um papel. Nesse caso, a fase mvel desloca-se atravs da fase estacionria por ao da capilaridade ou sob a influncia da gravidade. til em separao de compostos polares. Encontrase bastante difundida devido sua facilidade experimental e ao seu baixo custo. [1] A cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio lquido-lquido, estando um deles fixado a um suporte slido. Baseia-se na diferena de solubilidade das substncias em questo entre duas fases imiscveis, sendo geralmente a gua um dos lquidos. O solvente saturado em gua e a partio se d devido presena de gua em celulose (papel de filtro). Este mtodo, embora menos eficiente que a CCD, muito til para a separao de compostos polares, sendo largamente usado em bioqumica. [1] A cromatografia em cama da delgada (CCD) uma tcnica de adsoro lquido-slido. Nesse caso, a separao se d pela diferena de afinidade dos compostos de uma mistura pela fase estacionria. [1] Por ser um mtodo simples, rpido, visual e econmico, a CCD a tcnica predominantemente escolhida para o acompanhamento de reaes orgnicas, sendo tambm muito utilizada para a purificao de substncias e para a identificao de fraes coletadas em cromatografia lquida clssica. [1] O parmetro mais importante a ser considerado em CCD o fator de reteno (R f), o qual a razo entre a distncia percorrida pela fase mvel. Os valores ideais para Rf esto entre 0,4 e 0,6. [1] A CCD pode ser usada tanto na escala analtica quanto na preparativa. Normalmente as placas utilizadas so de vidro, com espessura de 3 a 4 mm. [1] A slica gel a fase estacionaria mais utilizada. Para a preparao das placas, faz-se uma suspenso do adsorvente em gua, sendo a mesma depositada sobre a placa manualmente ou com o auxilio de espalhador. Aps a deposio deixa-se a placa secar a ar. A etapa final da preparao da placa a sua ativao. [1] As amostras a serem aplicadas por CCD devem ser aplicadas a aproximadamente 1 cm da base inferior da placa, com a ajuda de um capilar. [1] Aps a aplicao da amostra sobre a placa, a mesma deve ser introduzida numa cuba contendo a fase mvel adequada. [1]

A escolha da mvel constituda por um ou mais solventes. No entanto, uma vez que as fases estacionrias mais usadas so extremamente polares, no devem ser utilizados solventes pouco polares, que no removeriam os compostos do ponto de aplicao, nem solventes muito polares, capazes de arrastar os compostos da amostra at o topo da placa. Em vista disso, melhores resultados so obtidos com misturas de solventes, de modo a se obter uma polaridade mdia em relao polaridade dos componentes da amostra. [1] A linha de chegada da fase mvel deve ser marcada e a placa deve estar seca. Como a maioria dos compostos orgnicos incolor, faz-se necessrio a utilizao de um processo de revelao para que se possa analisar o resultado. [1] Cromatografia em coluna Esta tcnica muito utilizada para isolamento de produtos naturais e purificao de produtos de reaes qumicas. As fases estacionrias mais utilizadas so slica e alumina, entretanto esses adsorventes podem servir simplesmente como suporte para uma fase estacionria lquida. Fases estacionrias slidas levam a separao por adsoro e fases estacionrias lquidas por partio. [1] Esses suportes so acondicionados em tubos cilndricos geralmente de vidro, de dimetros variados, os quais possuem uma torneira em sua extremidade inferior. A principal etapa ao se utilizar essa tcnica o empacotamento, o qual, em outros fatores, definir a eficincia da separao. Enquanto a alumina empacotada em sua forma original, a slica deve s-lo na forma de suspenso. [1] A coluna adiciona-se uma pequena quantidade de solvente e deposita-se na sua extremidade inferior um chumao de algodo para impedir a passagem de partculas da fase estacionria. [1] Nunca se deve permitir que o nvel do solvente desa abaixo do nvel da adsorvente, o que poderia acarretar rachaduras, comprometendo a eficincia da coluna. [1] A escolha do eluente segue os princpios discutidos em CCD, mas neste caso ele pode ser mudado durante o processo cromatogrfico. Se, Poe exemplo, a amostra constituda por duas substncias, uma apolar e a outra polar, utiliza-se primeiramente um eluente apolar e em seguida um eluente polar. [1]

O volume das fraes a serem recolhidas funo da quantidade de amostra e do grau de dificuldade da separao. Para anlise das mesmas, recorre-se a alguma tcnica auxiliar, usualmente CCD. [1] Em vista de que geralmente algumas partculas da amostra permanecem irreversivelmente adsorvidas a fase estacionria, a cada separao necessrio de tratamento para recuperao do adsorvente. [1] 1.1 Objetivo

2- PARTE EXPERIMENTAL
2.1- Materiais utilizados Coluna cromatogrfica Slica 60 G Funil para lquidos Erlenmeyer de 125 ml Suporte universal Gral e pistilo de porcelona Placas cromatogrficas de slica G Tubo capilar Algodo Funil simples Bquer de 250 ml Bquer de 100 ml (2) Agarradores de coluna Cuba Pipetas de 1 e 5 ml Provetas de 10 e 50 ml Vidro relgio Papel filtro Esptulas Folhas de plantas Soluo de acetona

2.2- Reagentes utilizados ponto de fuso: ponto de ebulio: densidade: massa molar: solubilidade:

Soluo de hexano

ponto de fuso: ponto de ebulio: densidade: massa molar: solubilidade: Soluo de etanol ponto de fuso: ponto de ebulio: densidade: massa molar: solubilidade: Iodo metlico ponto de fuso: ponto de ebulio: densidade: massa molar: solubilidade: ter dietlico ponto de fuso: ponto de ebulio: densidade: massa molar: solubilidade: gua destilada ponto de fuso: 0C ponto de ebulio: 100C densidade: 1 g/cm3

2.3- Procedimento experimental

1) Cromatografia de Camada Delgada CCD a) Preparao das Placas Em um bquer com uma quantidade qualitativa de slica slida, foi dissolvida com gua destilada. Aps adicionou a slica nas placas de vidro com um auxilio de um basto de vidro foi executado um movimento vertical de ida e volta nas placas de vidro, depois as placas foram deixadas para secagem por duas horas. b) Preparao do extrato Pesou-se trs pimentes com colorao verde, amarelo e vermelho, aps os pimentes foram picados e cada pimento foi colocado em um bquer de 200 ml e adicionou-se 10 ml de soluo de acetona e 50 ml de soluo de hexano, posteriormente adicionou-se o material que continha cada pimento em um almofariz separadamente e triturou-se os pimentes por meio de um pistilo, posteriormente deixou-se o sistema uma hora em repouso e aps retirou-se os pimentes restando apenas a soluo de cada pimento. c) Aplicao da amostra na placa Utilizou-se trs capilares uma para cada soluo de pimento, e aplicou duas a trs pores da soluo de cada pimento na placa de slica preparada a 1 cm de uma das extremidades da placa em cada ponto colocado pelo capilar sobre a placa estava com uma distancia de 1 cm um do outro. Aps preparou-se o eluente adicionando em um bquer de 100 ml, com 9,5 ml de acetona e hexano, depois adicionou uma pequena quantidade do eluente preparado em um bquer de 100ml, e acrescentou a placa de slica com os pontos feitos referentes as solues dos pimentes e tampou o bquer com uma vidro relgio. Aps o eluente ter atingido cerca de 0,5cm do topo da placa, a mesma foi retirada. Aps colocou a placa em um bquer que continha iodo slido e tampou com vidro relgio, aps um certo tempo rapidamente retirou a placa do bquer e calculou o fator de reteno o Rf. 2) Cromatografia no Giz Primeiramente preparou-se o eluente, utilizando 7 ml de etanol e 7 ml H2O colocou-se em uma cuba. Aps por meio de um giz foi feita no mesmo 4 pontos a 1 cm de uma das extremidades do giz com as seguintes coloraes de canetas hidrogrficas: verde, azul, vermelha e marrom. Aps mergulhou a extremidade do giz com os pontos marcados em uma cuba com uma pequena quantidade de eluente, e tampou com um vidro relgio. Aps o eluente ter atingido cerca de 0,5cm do topo do giz, o mesmo foi retirado.

3) Cromatografia em papel Primeiramente preparou-se o eluente, utilizando 7 ml de etanol e 7 ml H2O e colocou-se em um bquer de 100 ml. Em dois papis filtro foram cortados em forma retangular e pingou trs cores em cada papel filtro a um 1 cm de uma das extremidades dos mesmos, as seguintes coloraes de caneta esferogrfica: roxo, preto, verde, rosa, vermelho e azul. Aps adicionou uma pequena quantidade do eluente em um bquer de 100 ml e adicionou os dois papis filtro com a extremidade com os pontos marcados no eluente, os papis filtro estavam com lados opostos um do outro e aps tampou-se com um vidro relgio o bquer. Posteriormente o eluente ter atingido cerca de 0,5 cm do topo dos papis filtro, os mesmos foram retirados. 4) Cromatografia em Coluna a) Preparao do extrato Primeiramente coletou-se uma certa quantidade de folhas de uma planta qualquer e foi colocada em um bquer de 250 ml aps foi transferida para um almofariz e adicionou-se qualitativamente uma certa quantidade de ter dietlico P.a e macerou-se a planta por meio de uma pistilo, aps foi feita filtrao simples. Na soluo filtrada adicionou qualitativamente slica slida formando uma farofa b) Preparao da coluna e separao dos constituientes Fixou-se a coluna em suporte universal por meio de sois agarradores. Adicionou na coluna slica slida e aps adicionou ter at descer por toda a slica. Posteriormente adicionou uma quantidade da farofa preparada e colocou por cima o algodo. A adio do ter continua, observando quando a slica esta rachando. Esperar a separao dos constituientes e assim que um constituinte escorreu pela coluna foi coletado com um tubo de ensaio, aps foi feita mais quatro separaes de constituientes da planta utilizada, com a adio contnua dos seguintes eluentes a cada separao adicionava-se um eluente especfico na seguinte seqncia: ter, ter/acetona, ter/acetona, acetona, anotou-se a colorao dos constituientes separados.

3- RESULTADOS E DISCUSSES
A seguir na tabela 01 esto presente os resultados referentes a CCD (cromatografia em camada delgada) em relao ao peso dos pimentes utilizados e abaixo da tabela esto descritas as observaes feitas durante o experimento da CCD: Tabela 01. Dados pesados referentes aos pimentes utilizados
Pimento amarelo verde vermelho Massa (g) 33,65 30,19 33,31

Durante a preparao dos extratos referentes aos pimentes de colorao amarelo, verde e vermelho observou que a adio da soluo da acetona e hexano foi devido ao fato destas reterem os constituintes dos pimentes, ficando presentes em soluo;

O eluente (solvente) utilizado nesta CCD sendo a mistura da soluo de hexano e acetona foi adsorvida pela slica presente na placa preparada para CCD, assim o eluente sobe pela placa e carrega consigo os compostos constituintes dos pimentes;

A placa de slica com o eluente presentes em um bquer de 100 ml foi tampada com um vidro relgio para que o eluente no evaporasse;

A adio da placa de slica em um bquer contendo iodo slido para que ficasse mais visvel a formao dos pontos;

Na figura 01 abaixo pode-se observar os pontos que se formaram durante o experimento sobre a placa de slica

Figura 01. Placa de slica referente a CCD dos pimentes de colorao vermelha, verde e amarela

Pela figura 01 nota-se que cada ponto referente a colorao de cada pimento

representa um de seus compostos constituintes, no total h dois constituintes de cada pimento estudado. Tambm pode-se verificar o clculo do fator de reteno de cada pimento pelas equaes abaixo, a equao 01 referente ao clculo do fator de reteno dos pimentes de colorao verde e amarela, j a equao 02 referente ao clculo do fator de reteno do pimento de colorao vermelha: (01)
Ft X1 Y

(02)
Ft X2 Y

Dado que: Y: a distancia percorrida pelo eluente X1: a distancia percorrida pelos pontos amarelos e verdes X2: a distancia percorrida pelo ponto vermelho Os resultados referentes ao clculo de reteno dos pimentes pode-se observar pela tabela 02 abaixo:

Tabela 02. Valores referentes ao clculo do fator de reteno dos pimentes

Fator de reteno (Ft) 0,42 0,42 0,33 Pimento verde amarelo vermelho

Pela tabela 02 abaixo pode-se observar que as amostras referentes aos pimentes de colorao verde e amarelo apresentaram o mesmo valor de fator de reteno j o pimento vermelho apresentou um valor menor, considerando que o fator de reteno est entres valores de 0 1, o seu valor o quanto mais prximo de um, indica o quanto do composto constituinte foi separado do eluente, ento percebe-se que os compostos constituintes dos pimentes de colorao verde e amarelo separaram com maior intensidade do eluente que o pimento de colorao vermelha; A seguir esto presentes as observaes referentes a cromatografia em papel: O eluente (solvente) usado nesta cromatografia em papel foi mistura da soluo de etanol e H2O que foi adsorvida pelos papis filtro, assim o eluente sobe e carrega consigo os compostos constituintes das canetas esferogrficas; Os papis filtro com o eluente presentes em um bquer de 100 ml foram tampados com um vidro relgio para que o eluente no evaporasse; Abaixo na figura 02 pode-se notar os pontos formados referentes as canetas esferogrficas de colorao em cada papel filtro um continha os pontos com a colorao roxa, azul e preto e no outro com a colorao verde, rosa e vermelho;

Figura 02. Papis filtro referente aos pontos feitos pelas canetas esferogrficas de colorao: verde, rosa, vermelho, roxa, azul e preto.

Pela figura 02 acima percebeu-se que ocorreu no papel filtro n 01 a separao dos constituintes das seguintes cores secundrias: a cor verde em azul e amarelo, a cor vermelha em amarelo e rosa, j a cor rosa uma cor primria, no mudou a colorao. Em relao ao papel filtro n 02 ocorreu a separao dos constituintes das seguintes cores secundrias: a cor roxa em rosa, azul e rosa novamente, a cor preta em azul e amarelo, j a cor azul uma cor primria, no mudou a colorao;

Pela figura 02 pode-se observar que durante o experimento em que as coloraes constituintes das cores que subiram mais com o eluente so mais polares devido ao fato dos papis filtro que so constitudos de celulose e o eluente utilizado tambm so polares, considerando a cor secundria: roxa, foi a que subiu mais com o eluente sendo a mais polar;

Em relao a cromatografia em giz foram feitas as seguintes observaes:

O eluente utilizado nesta cromatografia de giz foi uma mistura de soluo de etanol mais gua destilada, este eluente foi adsorvido pelo giz, carregando consigo os constituintes das coloraes das canetas hidrogrficas de colorao: verde, azul, vermelho e marrom.

Pela figura 03 abaixo pode-se verificar os pontos formados no giz referentes as coloraes das canetas hidrogrficas Figura 03. Pontos formados no giz referentes as coloraes das canetas hidrogrficas com as coloraes; verde, azul, vermelho e marrom.

Pela figura 03 percebeu-se que ocorreu a separao dos constituintes das cores secundrias referentes as coloraes das canetas hidrogrficas utilizadas no experimento, a cor marrom apresentou em sua constituio as cores azul, roxa e alaranjado, a cor verde

4- CONCLUSO

5- REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

http://www.google.com.br/search?q=cromatografia&ie=utf-8&oe=utf8&aq=t&rls=org.mozilla:pt-BR:official&client=firefox-a [1] acessado no dia 13/11/09 as 23:13 http://www.setor1.com.br/analises/cromatografia/in_tro.htm [2] acessado no dia 14/11/09 as 23:17 http://pt.wikipedia.org/wiki/Cromatografia [3] acessado no dia 14/11/09 as 23:19