Bioqumica

PRTICAS LIPDIOS

PRTICAS:

Solubilidade de Glicdios e Lipdios Saponificao Separao de cidos Graxos Livres Formao de Sabes Insolveis Determinao do ndice de Iodo(Teste de Hubl) Determinao Colorimtrica dos Triglicerdios Determinao Colorimtrica do Colesterol

Teste de solubilidade de glicdios e lipdios

TUBOS
1 2

H2O DEST
1 mL 1 mL

CLOROFRMIO
-----

LCOOL
-----

GLICOSE
200 mg ---

LEO SOJA
--2 gotas

3
4 5 6

---------

1 mL
1 mL -----

----1 mL 1 mL

200 mg
--200 mg ---

--2 gotas --2 gotas

TESTE DE SAPONIFICAO
0,5 g de gordura animal
10 mL de soluo alcolica de KOH a 3% banho-maia fervente por 5 ou 6 minutos Esfriar 10 mL de gua destilada.

agitar

Separao de cidos Graxos Livres

Tcnica:
8 gotas de HCl [conc]

5 minutos

3mL de soluo de sabo

Separao de cidos Graxos Livres

Princpio:

R-COO-K+ + HCl[conc.]

R-COOH + KCl

Formao de Sabes Insolveis

Tcnica:
5gotas de CaCl2 a 10% TUBO 1: 2mL da soluo de sabo

5gotas de MgSO4 a 10%

TUBO 2: 2mL da soluo de sabo

Formao de Sabes Insolveis

Princpio:
2R-COO-K+ + CaCl2 2R-COO-K+ + MgSO4 (R-COO-)2Ca + 2KCl (R-COO-)2Mg + K2SO4

Determinao do ndice de Iodo ou Teste de Hubl

Introduo

cidos Graxos saturados e insaturados Gorduras slidas e lquidas

ndice de Iodo: quantidade de Iodo, em gramas,

necessria para saturar 100 gramas de gordura.

Determinao do ndice de Iodo ou Teste de Hubl

Princpio:
R1-CHI-CHI-(CH2)n-COOH

R1-CH=CH-(CH2)n-COOH + I2

Obs: O Reativo de Hubl constitudo por uma

soluo alcolica de Iodo e cloreto de Mercrio II.

Determinao do ndice de Iodo ou Teste de Hubl

Tcnica:
TUBO 1: TUBO 2 TUBO 3

1gota de Reativo de Hubl

1gota de Reativo de Hubl

1gota de Reativo de Hubl

2mL de Clorofrmio

2mL de Clorofrmio 1 gota de leo de coco

2mL de Clorofrmio 1 gota de leo de soja

Determinao Colorimtrica dos Triglicerdeos

Mtodo: Enzimtico Colorimtrico com Fator

Clareante de Lipdeos

Princpio:
Triglicerdeos Glicerol + ATP
lipases

Glicerol + 3 c. Graxos Glicerol-3-P + ADP

glicerol quinase

Glicerol-3-P + O2 glicerol-3-P oxidase Fosfato de + H 2 O2 Diidroxiacetona H2O2 + 4-Aminoantipirina + 4-Clorofenol peroxidase HCl + 4H2O + Quinoneimina

Determinao Colorimtrica dos Triglicerdeos

Tcnica:
TUBO TESTE (T): TUBO PADRO (P):

TUBO BRANCO (B):

3mL de Reativo de Cor

3mL de Reativo de Cor 0,03mL de Soro Sanguneo

3mL de Reativo de Cor 0,03mL do Padro

Obs: Homogeneizar e incubar por 10 minutos a 37C

Determinao Colorimtrica dos Triglicerdeos

Clculo:
Concentrao = leitura de T x Concentrao do de leitura de P Padro (CP) Triglicerdeos (CT) Obs: CP = 200mg/100mL CT = 150mg/100mL (valor normal)

Determinao Colorimtrica do Colesterol

Mtodo: Teste Enzimtico Colorimtrico Princpio:

Colesterol esterificado + H2O Colesterol + O2
colesterol esterase colesterol oxidase

Colesterol + c. Graxo Colesten -4- ona + H2O2

peroxidase

2H2O2 + 1aminofenazona + fenol

quinonimina + 4H2O

Determinao Colorimtrica do Colesterol

Tcnica:
TUBO TESTE (T): TUBO PADRO (P):

TUBO BRANCO (B):

3mL de Reativo de Cor

3mL de Reativo de Cor 0,03mL de Soro Sanguneo

3mL de Reativo de Cor 0,03mL do Padro

Obs: Homogeneizar e incubar por 10 minutos a 37C

Determinao Colorimtrica do Colesterol

Clculo:
Concentrao = leitura de T x Concentrao do de leitura de P Padro (CP) Colesterol (CT) Obs: CP = 200mg/100mL CT = 200mg/100mL (valor normal)