Universidade de So Paulo/IPT/Instituto Butantan Programa Interunidades em Biotecnologia

Gentica do Schistosoma mansoni

Disciplina: Gentica Bsica Aluno: Alex Issamu Kanno

Maio, 2009

1. Introduo

A esquistossomose uma doena parasitria que afeta cerca de 200 milhes de pessoas em todo o mundo, mas principalmente na frica subsaariana. endmica em mais de 70 pases e as estimativas mais atuais da Organizao Mundial de Sade sugerem que cerca de 700 milhes de pessoas vivam em reas consideradas de risco. H registros dos parasitas em mmias egpcias datadas a mais de 3 mil anos. Os principais agentes etiolgicos so o Schistosoma mansoni, o S.haematobium e o S. japonicum (W.H.O., 2008). No Brasil, segundo as investigaes do Ministrio da Sade, 5.43% da populao brasileira apresentou positividade para a doena em 2002, o que a caracteriza como um grave problema de sade pblica (Coura e Amaral, 2004). No Brasil o principal agente causador da esquistossomose o S. mansoni. O ciclo de vida do parasita mostra que seus ovos so liberados pelas fezes do hospedeiro humano que atingem as guas e eclodem, transformandose em miracdeos. Estes miracdeos infectam principalmente os caramujos da espcie Biomphalaria glabrata, o hospedeiro intermedirio. No caramujo, desenvolvem-se para cercrias, que quando liberadas nas guas, conseguem penetrar a pele e mucosa de humanos, transformando-se em esquistossmulos. Depois da invaso, os esquistossmulos entram na corrente sangnea venosa atingindo os pulmes e o corao. Ao chegarem, atravs da circulao, no fgado, maturam em machos e fmeas, que se reproduziro e seguiro para as veias mesentricas, onde liberaro milhares de ovos. Estes ovos migram para o lmen intestinal sendo liberados nas fezes (Mahmoud, 2001). Este complexo ciclo de vida, obviamente deve possuir intrincados mecanismos epigenticos para durante, em menos de 2 meses, desenvolverse desta maneira, infectando dois hospedeiros distintos e passando das formas livre para a parasitria. A esquistossomose ou bilharzase uma doena que segue os sintomas de acordo com a progresso do parasita no hospedeiro durante o ciclo. Com a penetrao das cercarias que geralmente assintomtica, pode ocorrer

eritema, prurido e dermatite. Depois da disseminao pelo sangue, atingindo pulmes e fgado, acompanham febre, mal estar, cefalia, dor abdominal, diarria sanguinolenta, hepatoesplenomegalia (W.H.O., 2008) Os recentes avanos na biologia molecular do parasita atravs dos projetos de genoma (El-Sayed, 2004; Haas, 2007), transcriptoma (VerjovskiAlmeida, 2003) e proteoma (Braschi e Borges, 2006; Braschi e Curwen, 2006; Ashton, 2001) forneceram ampla gama de informaes a respeito da biologia do organismo.

2. Genmica e regulao gnica

O genoma haplide do S. mansoni composto por cerca de 2,7 x 108 pares de base. Estudos em gradiente de cloreto de csio e desnaturao trmica mostram que a maior parte (66%) so adeninas e timinas. Cerca de 60% do genoma consiste em DNA altamente ou moderadamente repetitivo e somente 30% sendo no-repetitivo de cpia nica. Este material gentico dividido, de forma diplide, em 8 pares de cromossomos, sendo um sexual. O verme adulto fmea heterogamtico (ZW) e o verme adulto macho homogamtico (ZZ). O DNA mitocondrial do esquistossomo ainda no encontra-se caracterizado, mas indica haver alto grau polimrfico (Mahmoud. 2001). A organizao do contedo na forma compactada, dos genomas eucariotos, incluindo o S. mansoni, sugere mecanismos regulatrios na expresso gnica de acetilao e metilao das lisinas principalmente a K4 das histonas principalmente H3. Apesar de que em S. mansoni foram identificadas somente seqncias parciais para as histonas H3 e H4, concebvel afirmar que h similaridade, sendo protenas bastante conservadas. De fato, algumas protenas envolvidas neste processo j so conhecidas, como a SmPRMT1 (chromatin remodeling and protein arginine methyltransferase 1), a HAT (histone acetyl transferase) SmGCN5. (Fantapp, 2007) Outro mecanismo de regulao transcricional dado por coativadores, onde a CREB (cyclic AMP regulatory element-binding protein) reconhece e se

liga ao motivo CRE (cyclic AMP response element), presente nos genes ativados pelo AMP cclico. A CREB-binding protein (CBP) liga-se CREB fosforilada e ativa a transcrio dos genes controlados por este sistema. Estas so protenas regulatrias altamente conservadas e o S. mansoni apresenta duas isoformas, SmCBP1 e SmCBP2. Estas protenas, numa anlise de expresso diferencial dentro do ciclo de vida, mostra seus valores mais elevados na fase de miracdio, indicando a complexidade do sistema epigentico do parasito (Fantapp, 2007). O pouco que se sabe a respeito do controle da expresso gnica de S. mansoni, mostra que ela semelhante aos princpios gerais da regulao em eucariotos, pois as seqncias anteriores aos genes estruturais, possivelmente os promotores, apresentam homologia significativa com as seqncias de outros organismos eucariotos, com sistemas de induo e represso sob os diferentes aspectos ambientais, estresse e condies nutricionais (Carvalho, 2008). A estrutura de poucos genes, at agora, foi descrita. Os genes no contm ou contm poucos introns, que varia muito com relao ao tamanho de at 30 pares de base at vrias kilobases. H seqncias promotoras (TATA Box, CAAT Box) e poliadenilao. Este tamanho dos introns menor do que o mnimo predito para acomodar a maquinaria intrnica, que seria de 50pb j foi tambm descrito em Caenorhabditis elegans e Onchocerca volvulus. A anlise da regio 5 flanqueadora ao gene estrutural mostra a presena de vrias seqncias consenso, que serviriam como alvo de protenas reguladoras (Mahmoud. 2001). Estudos funcionais com microarray demonstram a existncia de vrios grupos de genes diferencialmente expressos durante o ciclo de vida do parasita (Dillon, 2006), com diversos genes sendo especficos de cada estgio, sendo regulados a nvel transcricional e ps-transcricional. H ainda diferenas epigenticas tanto de vermes S. mansoni adultos machos e fmeas no que se refere ao sexo do hospedeiro humano (Waisberg, 2008). A determinao funcional dos genes a principal busca na elucidao dos diversos mecanismos fisiolgicos do parasita, o que poderia fornecer as bases

para o desenvolvimento de estratgias vacinas profilticas ou alvos de drogas teraputicas (Carvalho, 2008). O perfil de expresso gnico em cercrias indica genes relacionados do metabolismo e regulao gnica com sua motilidade na gua e tranformao em esquistossmulos. Ao passo que durante os ciclos no hospedeiro humano, a regulao gnica se direciona para mecanismos de evaso ao sistema imune, modulando a expresso de antgenos de superfcie, como o caso da hsp70 e Sm16 entre outras (Carvalho, 2008).

3. Gentica da relao parasita-hospedeiro intermedirio

H variaes quanto a susceptibilidade infeco de Biomphalaria glabrata entre as diferentes regies geogrficas. Experimentos cruzando a linhagem susceptvel de Porto Rico e a linhagem resistente da Bahia, apresenta taxas de infeco 0-17% em F1, 3-58% em F2 e 0-82% em F3. Estudos posteriores mostram que o carter de resistncia de segregao mendeliana e dominante (Carvalho, 2008). Porm fatores genticos do parasita tambm influenciam na

infectividade, onde os caramujos resistentes a cepa de Santa Lcia so susceptveis a cepa de Porto Rico (Carvalho, 2008). Uma anlise comparativa quanto a gentes diferencialmente expressos entre os caramujos resistentes e susceptveis a infeco, mostra a expresso elevada de dois transcritos (mRNAs) nos resistentes. Um destes fragmentos, depois de seqenciado, mostrou homologia com o citocromo cyp450. O citocromo P450S faz parte de uma grande famlia de protenas envolvidas no metabolismo oxidativo de cidos graxos, prostaglandinas e vitaminas. O outro fragmento 2008) Um futuro mapeamento gentico da interao S. mansoni B. glabrata poder identificar as regies e seqncias do carter que confere resistncia depois de seqenciado mostrou homologia com uma metaloprotease, uma transcriptase reversa e uma beta-integrina (Carvalho,

infeco. Por uma estratgia de gentica reversa chegar-se-ia at a menor seqncias nucleotdica que confira o carter e ento dar-se-ia a identificao de suas seqncias codificantes (Carvalho, 2008).

4. Resistncia infeco, desenvolvimento da doena e gentica

Avaliaes epidemiolgicas quanto imunologia da infeco e reinfeco revelam uma resposta imunolgica, por parte do hospedeiro, potencialmente protetora. Altos nveis de IgE e uma resposta tipicamente Th2 esto associadas a indivduos resistentes reinfeco. A susceptibilidade infeco relaciona-se com uma modulao negativa para resposta celular e altos nveis de IgG4 (Mahmoud. 2001). Os estudos epidemiolgicos mostram que os nveis de reinfeco medido pela quantidade de ovos nas fezes aps tratamento quimioterpico, em reas endmicas, so muito mais acentuados nos indivduos entre 0-20 anos, atingindo um pico nos indivduos com 10 anos de idade e caindo vertiginosamente ao redor dos 20 anos de idade e se mantm nestes nveis basais at os 60 anos de idade (Mahmoud. 2001). Essa queda acentuada e pontual na susceptibilidade reinfeco coincide com a puberdade e isso sugere uma relao entre as mudanas fisiolgicas comuns nessa idade com a sensibilidade do hospedeiro. As alteraes hormonais so as principais alteraes que ocorrem ao redor desta idade e estudos em modelos animais e indivduos infectados mostram resultados conflitantes (Mahmoud. 2001). Os estudos que envolvem a susceptibilidade de humanos infeco pelo esquistossomo, mostram que alguns indivduos aparentam ser predispostos a uma rpida e severa infeco. A sensibilidade humana para infeco ao Schistosoma mansoni controlada pelo lcus denominado SM1, no cromossomo 5 entre q31-q33. Essa regio codifica citocinas, como IL-4, IL5, IL-13 e CSF, que regulam o desenvolvimento de linfcitos T auxiliares. Vale ressaltar que essa regio 5q31-q33 tambm est envolvida no controle da parasitemia por Plasmodium falciparum. (Virmondes-Rodrigues, 1999). Estes

achados possibilitam formular a hiptese de que estas citocinas possam contribuir para a diferena entre susceptibilidade infeco pelos indivduos. Alguns alelos do MHC tanto de classe I quanto de classe II esto ligados de alguma maneira, vrias formas de doenas induzidas pelo parasita. Indivduos com HLA B5 possuem grande risco de desenvolver fibrose periportal e/ou hepatoesplenomegalia quando infectados por S. mansoni. A manifestao hetapoesplnica induzida pela esquistossomose est associada ao gentipo HLA-DR3 e a presena do gentipo HLA-DQ aparentemente protege contra a doena (Mahmoud. 2001). O envolvimento do contedo gentico do hospedeiro quanto infeco pelo Schistosoma tambm descrito em outras patologias parasitrias como nas infeces por Ascaris lumbricoides (Quinnell, 2003).

5. Consideraes finais

O parasita encontra no homem seu habitat h mais de 500 anos, coevoluindo e desenvolvendo mecanismos epigenticos complexos de acordo com o ciclo de vida. A esquistossomose a segunda doena parasitria mais estudada, depois da malria. Este esforo tem se traduzido em cada vez mais informaes que podem ajudar no controle da doena nas reas endmicas. Porm, na prtica, pouco tem se traduzido em real benefcio populao que somente ser alcanado com esforo conjunto da comunidade cientfica ou ento deixaremos este legado para o futuro assim como as antigas mmias egpcias.

6. Referncias Bibliogrficas Ashton, P. D., R. S. Curwen e R. A. Wilson. Linking proteome and genome: how to identify parasite proteins. Trends Parasitol, v.17, n.4, Apr, p.198-202. 2001 Bethony, J.M. and Quinnell, R.J. Genetic epidemiology schistosomiasis in Brazil. Acta Tropica, v.108, p.166-174. 2008 of human

Braschi, S., W. C. Borges e R. A. Wilson. Proteomic analysis of the schistosome tegument and its surface membranes. Mem Inst Oswaldo Cruz, v.101 Suppl 1, Sep, p.205-12. 2006. Braschi, S., R. S. Curwen, P. D. Ashton, S. Verjovski-Almeida e A. Wilson. The tegument surface membranes of the human blood parasite Schistosoma mansoni: a proteomic analysis after differential extraction. Proteomics, v.6, n.5, Mar, p.1471-82. 2006. Carvalho, O,S. Schistosoma mansoni Esquistossomose multidisciplinar. Editora Fiocruz, 2008. Rio de Janeiro, RJ. uma viso

Coura, J. R. e R. S. Amaral. Epidemiological and control aspects of schistosomiasis in Brazilian endemic areas. Mem Inst Oswaldo Cruz, v.99, n.5 Suppl 1, p.13-9. 2004. Dillon, G.P. et. al. Microarray analysis identifies genes preferentially expressed in the lung schistosomulum of Schistosoma mansoni. International Journal for Parasitology v.36 p.1-8. 2006 El-Sayed, N. M., D. Bartholomeu, A. Ivens, D. A. Johnston e P. T. Loverde. Advances in schistosome genomics. Trends Parasitol, v.20, n.4, Apr, p.154-7. 2004. Fantapp, M.R et. al. Control of transcription in Schistosoma mansoni: Chromatin remodeling and other regulatory elements. Acta Tropica v.108. p.186-193. 2008 Haas, B. J., M. Berriman, H. Hirai, G. G. Cerqueira, P. T. Loverde e N. M. ElSayed. Schistosoma mansoni genome: closing in on a final gene set. Exp Parasitol, v.117, n.3, Nov, p.225-8. 2007. Mahmoud, A.A.F. Schistosomiasis. In: Pasvol, G.; Hoffman, S.L. Tropical Medicine Science and Practice v.3. London: Imperial College Press, 2001. Matsuo, K., R. Yamaguchi, A. Yamazaki, H. Tasaka, K. Terasaka, M. Totsuka, K. Kobayashi, H. Yukitake e T. Yamada. Establishment of a foreign antigen secretion system in mycobacteria. Infect Immun, v.58, n.12, Dec, p.4049-54. 1990. Verjovski-Almeida, S., R. Demarco, E. A. Martins, P. E. Guimaraes, E. P. Ojopi,

A. C. Paquola, J. P. Piazza, M. Y. Nishiyama, Jr., J. P. Kitajima, R. E. Adamson, P. D. Ashton, M. F. Bonaldo, P. S. Coulson, G. P. Dillon, L. P. Farias, S. P. Gregorio, P. L. Ho, R. A. Leite, L. C. Malaquias, R. C. Marques, P. A. Miyasato, A. L. Nascimento, F. P. Ohlweiler, E. M. Reis, M. A. Ribeiro, R. G. Sa, G. C. Stukart, M. B. Soares, C. Gargioni, T. Kawano, V. Rodrigues, A. M. Madeira, R. A. Wilson, C. F. Menck, J. C. Setubal, L. C. Leite e E. Dias-Neto. Transcriptome analysis of the acoelomate human parasite Schistosoma mansoni. Nat Genet, v.35, n.2, Oct, p.148-57. 2003. Virmondes-Rodrigues, Jr. et al. Genetic control of schistosome infections by the LM1 locus of 5q31-q33 region is linked to differentiation ot type 2 helper T lymphocytes. Infection and Immunity, vol.67, n.09, Sep, p.4689-4692, 2009. Waisberg, M. et al. Schistosoma mansoni: microarray analysis of gene expression induced by host sex. Experimental parasitology v.120, p.357-363. 2008. W.H.O. World Health Organization. Schistosomiasis Fact Sheet. Available from Parasitic Disease Information. Reviewed in February 26, 2008. Available in: http://www.cdc.gov/Ncidod/dpd/parasites/schistosomiasis/factsht_schistosomias is.htm