Determinao de protena pelo mtodo de HARTREE Hartree, E. F.

, Determination of Protein: A Modification of the Lowry Method that Gives Linear Photometric Response. Analytical Biochemistry, 48, 422-427 (1972) A) Soluo A 2 g de tartarato duplo de sdio e potssio 100 g deNa2CO3 e dissolver em 500 mL de NaOH 1 N Dissolver em gua para 1000 mL B) Soluo B 2 g de tartarato duplo de sdio e potssio 1 g de CuSO4.5 H2O Adicionar 10 mL de NaOH 1 N C) Soluo C 1 mL de reagente de Folin Ciocareau 2 N Diluir em 15 mL de H2O Obs.: A soluo C deve ser preparada no momento da anlise e dever estar entre 0,15 e 0,18 N quando titulada a pH 10,0 com NaOH 1 N Se a acidez exceder 0,18 N ajustar o pH com NaOH A soluo A e B so utilizveis por 6 meses e devem ser armazenadas no escuro Linearidade: 15 a 110 mg Sensibilidade: 10 a 100 g/mL

Padres: soluo aquosa de BSA 100 g/mL (5mg 50 mL) Preparar 3 mL de cada diluio (20, 40, 60 e 80 g/mL) Diluio 20 g/mL 40 g/mL 60 g/mL 80 g/mL 100 g/mL Tcnica: 1 mL de amostra 0,9 mL de reagente A Banho maria 50C 10 minutos Resfriar temperatura ambiente 0,1 mL do reagente B Temperatura ambiente 10 minutos Padro 100 g/mL 600 L 1200 L 1800 L 2400 L 3000 L H2O 2400 L 1800 L 1200 L 600 L

3 mL do reagente C Agitar em vortex Banho maria 50C 10 minutos Resfriar temperatura ambiente Ler em 650 nm