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Biodegradao de Filmes Polimricos por Ao dos Fungos Talaromyces wortmannii e Phanerochaete crysosporyum
Eraldo de Jesus Arglo, Manuela Cristina Mota Lins, Maria de Los Angeles Perez Fernandez Palha, Yda Medeiros Bastos de Almeida, Maria Alice Gomes de Andrade Lima*
Universidade Federal de Pernambuco - Depto. de Eng. Qumica, Rua prof.Artur de S , s/n. Cidade Universitria- Recife - CEP: 50740-521. *E-mail: magal@ufpe.br

RESUMO Este trabalho avaliou a capacidade biodegradadora dos fungos Talaromyces wortmannii e Phanerochaete chrysosporium em trs filmes polimricos. As anlises da variao da perda de massa mostraram a ocorrncia do fenmeno da biodegradao, onde as amostras constitudas de PEBD (polietileno de baixa densidade) e a mistura de PEBD/amido sofreram uma biodegradao estatisticamente significativa aps trinta dias de incubao com o fungo Talaromyces wortmannii e aps sete dias com o fungo Phanerochaete chrysosporium. A completa degradao do biopolmero ocorreu aps 14 dias com a espcie Talaromyces wortmannii e aps sete dias com a espcie Phanerochaete chrysosporium. As anlises de espectroscopia mostraram que no ocorreu aumento dos grupos carbonila e vinila. Os resultados dos ensaios mecnicos com o polmero degradado pelo fungo Talaromyce wortmannii, mostraram que no houve modificao significativa na resistncia trao na ruptura para o PEBD/amido aps trinta dias de incubao. Foi observada a maior habilidade do fungo Phanerochaete chrysosporium na biodegradao dos materiais estudados . INTRODUO A elevada potencialidade do uso dos microrganismos, em especial dos fungos, apontados na literatura como agentes degradadores das mais diversas substncias, aliada cada vez mais ao emprego na biotecnologia, indicam esta classe de microrganismos para a biorremediao de reas contaminadas por resduos ecologicamente impactantes (URURARY, 1998). O sucesso de um programa de biorremediao de reas contaminadas depender, em parte, de um bom planejamento inicial sobre isolamento e da seleo de um microrganismo ou de um consrcio de microrganismos eficientes na degradao da molcula em estudo (MELO & AZEVEDO, 1997). Numerosas pesquisas na rea de meio ambiente vm sendo desenvolvidas com a finalidade de restringir o uso indiscriminado de determinados materiais poluentes ao meio ambiente. Uma das preocupaes dos ambientalistas e pesquisadores o uso em excesso de material plstico (ISHIGAKI, FUJITA & KAWAGOSHI, 1998). Devido ao fato de algumas aplicaes destes materiais serem de descartabilidade muito rpida, associado grande dificuldade de degradao no ambiente, eles tm despertado forte preocupao nos dias atuais (ALMEIDA et al., 2001). Nos aterros, acabam comprometendo a circulao de gases e lquidos, dificultando a degradao de outros materiais constituintes do lixo, retardando deste modo, a estabilizao das reas reservadas ao tratamento dos resduos (ALMEIDA et al., 2001). Entre as solues oferecidas para a diminuio do volume de plsticos descartados esto: a reciclagem, incinerao, incorporao de aditivos aos plsticos convencionais e obteno de novos materiais termoplsticos que sejam mais facilmente degradados quando descartados no meio ambiente (ALMEIDA et al., 2001). Esta soluo pode ser obtida atravs das seguintes vias:

obteno de plsticos fotodegradveis (EVANS & SIKDAR, 1991); incorporao de materiais biodegradveis aos plsticos (o principal material usado para esse fim o amido); obteno de novos materiais que possuam propriedades termoplsticas e caractersticas de desempenho semelhante aos plsticos convencionais, mas que so mais facilmente degradados pela ao de microrganismos no meio ambiente (plsticos biodegradveis). O conhecimento de novas espcies de fungos biodegradadores de filmes polimricos, de grande importncia, constituindo-se uma alternativa vivel para a diminuio de rejeitos. MATERIAL E MTODOS 1. MICRORGANISMOS Uma linhagem da espcie Phanerochaete chrysosporium proveniente de coleo de cultura da Universidade Federal do Rio de Janeiro, uma linhagem selvagem da espcie Talaromyces wortmannii isolada do solo do Aterro da Muribeca (Jaboato dos Guararapes - PE) e uma linhagem da bactria Zoogloea sp. isolada na Estao Experimental de Cana de Acar/Diviso de Indstria/UFRPE. 2. PREPARAO DA SUSPENSO DE ESPOROS As culturas foram manipuladas com ala de transplante e os esporos foram introduzidos em tubos de ensaio contendo 10mL de soluo de Tween 80 (0,01%) esterilizada . Os esporos foram contados em cmara de Neubauer e as suspenses ajustadas para 106 esporos/mL. 3. PREPARAO DOS FILMES POLIMRICOS 3.1. Biopolmero: Foi obtido atravs da fermentao de mosto de melao com 15 Brix e pH=5, utilizando-se Zoogloea sp. O mosto foi inoculado com a cultura do gnero Zoogolea sp. em erlenmeyers contendo 100 mL de meio e mantidos sem agitao temperatura ambiente. Utilizou-se como inculo 10% em volume de um cultivo crescido temperatura ambiente por 72 horas. Os filmes formados nos erlenmeyers foram removidos aps 15 dias de fermentao. Para sua secagem, foi utilizada uma estufa a 56 C durante 24 horas. Posteriormente foram esterilizados a 120 C por 20 min. 3.2. PEBD e Mistura PEBD/Amido: Neste trabalho foram utilizados filmes de PEBD e mistura de PEBD/amido na proporo de 80%/20% (m/m) sendo misturados por fuso na cmara de mistura do remetro modelo HAAKE 90 nas seguintes condies: temperatura de controle-140 C; torque mximo-50 Nm; velocidade de rotor-50 rpm; tempo total de mistura-10 min. As resinas de PEBD (puro) e da mistura de PEBD/amido processadas no remetro foram trituradas no triturador do tipo eixo motor. A resina triturada de PEBD/amido foi ento colocada durante 1 hora em estufa a 100C para diminuio da umidade sendo em seguida prensadas em uma prensa hidrulica. 4. TESTE DA ATIVIDADE BIODEGRADADORA EM FILMES POLIMRICOS Os microrganismos isolados foram testados quanto sua capacidade em biodegradar filmes polimricos segundo a metodologia desenvolvida por LEE et al.(1991). 4.1. VARIAO DE MASSA Antes da inoculao e aps, por perodos variveis, as amostras foram pesadas em balana analtica. 4.2.ESPECTROSCOPIA NO INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIERFTIR

Os filmes de PEBD puro e PEBD/amido, antes e aps a inoculao das culturas, foram analisados diretamente sem que houvesse nenhum tipo de preparao, as amostras apenas foram desinfetadas. As anlises foram feitas em Espectrofotmetro AVATAR 360 de marca NICOLET, numa faixa de 400 cm-1 a 4000 cm-1 com resoluo de 2 cm-1 . Para quantificar a evoluo dos grupos carbonila e vinila utilizou-se as razes entre as reas de absorbncia apresentadas abaixo: IC = rea de absorbncia correspondente ao pico de 1720 cm-1/ rea de absorbncia correspondente ao pico de 2030 cm-1 IV = rea de absorbncia correspondente ao pico de 910 cm-1/ rea de absorbncia correspondente ao pico de 2030 cm-1. 4.3. ENSAIOS MECNICOS Os ensaios mecnicos foram conduzidos em mquina universal de ensaio da marca INSTRON modelo 4464 seguindo a norma ISO 37. A partir desta anlise determinou-se a resistncia ruptura, alongamento e mdulo de elasticidade. RESULTADOS E DISCUSSO As amostras foram analisadas em triplicata, tendo sido empregado o teste t de Student para avaliar diferenas estatisticamente significativas nas suas propriedades (MILLER & MILLER, 1984). 1. Anlise de Variao de Massa Os filmes constitudos de PEBD puro e da mistura de PEBD/amido sofreram alteraes significativas em suas massas aps 30 dias de incubao com o fungo Talaromyces wortmannii (MILLER & MILLER, 1984). Com o fungo Phanerochaete chrysosporium ocorreu uma degradao estatisticamente significativa em torno de 95% de confiana, aps sete dias. Os resultados do percentual das perdas de massa das amostras podem ser observados nas Figuras 1 e 2. Para a mistura PEBD/amido, a perda de massa pode ser atribuda inicialmente remoo e degradao do amido, e em segundo lugar degradao gradual e lenta do PEBD. Estes resultados so concordantes com o trabalho de ARVANITOYANNIS et al. (1998). De acordo com os autores, a degradao de misturas PEBD/amido est relacionada acessibilidade dos microrganismos ao amido. Embora vrios fatores influenciem na capacidade do microrganismo em atacar o amido, como o nmero, mobilidade e taxa de reproduo, em geral a cintica de degradao da mistura obedece a trs fases: 1- as cadeias amorfas do amido, facilmente acessveis aos microrganismos, normalmente esto localizadas prximas superfcie. A penetrao dos microrganismos para o interior da mistura PEBD/amido pode ser explicada pela teoria da percolao; 2- invaso dos microrganismos, persistindo ainda cadeias de amido que no sofreram o ataque dos mesmos; 3- a degradao aproxima-se do estgio final, diminuindo a quantidade de microrganismos devido escassez de nutrientes. Uma grande rea superficial gerada pela remoo do amido a partir da mistura aumenta o processo de degradao qumica, que por sua vez favorece a biodegradao. Na Figura 3, est apresentando a variao da massa dos filmes de PEBD/amido inoculados com o fungo Phanerochaete chrysosporium ao longo de 30 dias, onde se observa que os filmes estudados sofreram uma biodegradao gradativa durante o tempo de exposio. Analisando ainda esta figura, pode-se sugerir que o consumo do substrato est associado ao metabolismo do fungo, o que pode ser estimado pela perda de massa. O mesmo foi observado por MANZUR et al. (1997) que estudaram o crescimento da espcie Phanerochaete chrysosporium em mistura de PEBD/bagao de cana. Neste trabalho a perda de massa foi atribuda ao consumo do bagao de cana pelo microrganismo. Da mesma forma, podemos

sugerir que a perda de massa, atingida nos experimentos com PEBD/amido foi devido ao consumo do amido. 0,012 0,010 0,008 0,006 0,004 0,002 0,000 Variao de Massa (%M) 0,01

0,0009 PEBD puro PEBD/amido

Figura 1. Variao mdia da massa para os filmes de PEBD puro e PEBD/amido inoculados com o fungo Talaromyces wortmannii e incubados durante o perodo de 30 dias. 0,016 0,014 0,012 0,010 0,008 0,006 0,004 0,002 0,000 Variao de Massa (%M) 7 dias 14 dias
0,0067 0,0069 0,0046

0,015

PEBD puro

PEBD/amido

Figura 2. Variao mdia da massa para os filmes de PEBD puro e PEBD/amido inoculados com o fungo Phanerochaete chrysosporium e incubados durante o perodo de 7 e 14 dias. 0,025 0,023 0,020 0,017 0,015 0,015 0,010 0,005 0,005 0,000 7 14 21 30 Tempo (dias) Figura 3. Variao mdia da massa para os filmes de PEBD/amido inoculados com o fungo Phanerochaete chrysosporium e incubados durante o perodo de 30 dias. Fazendo-se uma comparao da variao da massa das amostras de PEBD/amido incubadas durante um perodo de 30 dias com o fungo Talaromyces wortmannii e com o fungo Phanerochaete chrysosporium ( Figuras 1 e 3 ), foi possvel concluir que a variao de massa sofrida nas amostras inoculadas com o fungo Phanerochaete chrysosporium corresponde a cerca de duas vezes o valor obtido pelo fungo Talaromyces wortmannii, sugerindo a maior habilidade para a biodegradao pelo fungo Phanerochaete chrysosporium. Variao de massa (%M)

2. Espectroscopia no Infravermelho com Transformada de Fourier FTIR O processo degradativo em mistura de PEBD/amido na presena de fungos pode provocar o aparecimento de uma variedade de compostos carbonilados, incluindo steres, aldedos e cidos carboxlicos (1650 cm-1 1860 cm-1). O aparecimento destes grupos indicativo da formao de vrios produtos de oxidao durante a biodegradao do filme. Pode tambm ser observada a presena de lcoois primrios e secundrios pelo aumento da intensidade de absoro entre 900 cm-1 1200 cm-1. Os resultados obtidos, apresentados na Figura 4, confirmam em parte os trabalhos realizados por ORHAN & BUYUKGUNGOR (2000) e WEILAND et al. (1995). Os autores estudaram a degradao de misturas PEBD/amido em solos inoculados com a espcie Phanerochaete chrysosporium. Neste trabalho os pesquisadores observaram um aumento da absoro na faixa de 900 cm-1 - 1200 cm-1 que foi correlacionado ao aparecimento de lcoois. Os espectros de FTIR para a mistura de PEBD/amido, deste trabalho no permitiram a observao de bandas correspondentes aos lcoois .
8

P E B D 3 0 d ia s T a la r o m y c e s w o r tm a n n ii
6

A b s o r b n c ia

2030 cm-1
2

1720 cm-1

910 cm-1

0
2 4 0 0 2 0 0 0 1 6 0 0 1 2 0 0
-1

8 0 0

4 0 0

N m ero s d e o nd a (cm

Figura 4. Espectro do PEBD puro inoculado com o fungo Talaromyces wortmannii e incubado por 30 dias. A interpretao do teor de vinila das amostras de PEBD/amido inoculadas com o fungo Talaromyces wortmannii e tambm com o fungo Phanerochaete chrysosporium foram dificultadas, pois, no foi possvel encontrar uma resoluo ntida da banda de absorbncia correspondente a este grupo nestas amostras. Na anlise dos resultados obtidos pelo FTIR, no ocorreu nenhuma mudana significativa nas propriedades qumicas (IC e IV) das amostras do PEBD puro e do PEBD/amido inoculadas com as espcies Talaromyces wortmannii e Phanerochaete chrysosporium. Alguns fatores que podem ter contribudo para a no variao das propriedades qumicas, foi o curto perodo de exposio das amostras ao fungo e a ausncia de um nmero elevado de reaes foto-oxidativas as quais so geradoras de grupos como carbonilas e vinilas entre outros. 3.6. Anlises Mecnicas A resistncia trao (RT), o mdulo de elasticidade (E) e o alongamento ( max) foram as propriedades mecnicas determinadas em filmes de PEBD puro e de PEBD/amido inoculadas com o fungo Talaromyces wortmannii. As curvas tpicas de resistncia trao, mdulo de elasticidade e alongamento obtidos durante os ensaios mecnicos para as formulaes contendo PEBD puro, PEBD/amido 80%/20% (m/m) durante todo o perodo, so apresentadas nas Figuras 5, 6, e 7 respectivamente. A incorporao do amido, de uma maneira geral, reduziu os valores de resistncia trao e alongamento, quando comparados com os valores obtidos para

o PEBD puro. Fisicamente, a incorporao do amido na matriz de PEBD enfraquece as foras de London entre as camadas de PEBD diminuindo o alongamento. Durante o processo, os filmes de PEBD/amido e do PEBD puro, no sofreram mudanas estatisticamente significativas em suas propriedades mecnicas. Como a alterao na massa foi pequena, no se produz alterao significativa nas propriedades mecnicas analisadas. Os resultados reportados representam valores mdios obtidos utilizando-se quatro corpos de prova para cada tipo de amostra.
14

PEBD/Amido PEBD

12

PEBD

Mdulo a 300%

10

PEBD Amido

10

15

20

25

30

Tempo (dias)

Figura 5. Mdulo a 300% e seus desvios padro dos filmes de PEBD/amido e PEBD puro inoculados com o fungo Talaromyces wortmannii.
(M P a ) P E B D P E B D / A m id o

tra o

2 5

PEBD

2 0

R e s is t n c ia

1 5

PEBD Amido

1 0

5 0 5 1 0 15 2 0 2 5 30

T e m p o (d ia s )

Figura 6. Resistncia trao na ruptura e seus desvios padro em funo do tempo para os filmes de PEBD/amido e PEBD puro inoculados com o fungo Talaromyces wortmannii.
P E B D P E B D / A m id o

(% ) A lo n g a m e n to

8 0 0 7 6 0 7 2 0 6 8 0 6 4 0 6 0 0

PEBD

PEBD Amido

1 0

1 5

2 0

2 5

3 0

T e m p o ( d ia s )

Figura 7. Alongamento e seus desvios padro em funo do tempo dos filmes de PEBD/amido e PEBD puro inoculados com o fungo Talaromyces wortmannii.

ORHAN & BUYUKGUNGOR (2000), observaram uma diminuio do percentual de alongamento em filmes de PEBD/amido onde a degradao iniciou-se a partir do primeiro ms. No nosso trabalho, as mudanas no foram observadas devido ao curto perodo de incubao. CONCLUSES As amostras constitudas de PEBD e a mistura de PEBD/amido sofreram uma biodegradao estatisticamente significativa aps um perodo de trinta dias de incubao para o fungo Talaromyces wortmannii e aps 7 dias para o fungo Phanerochaete chrysosporium. Por sua vez, as amostras do biopolmero sofreram biodegradao completa aps 14 dias com o fungo Talaromyces wortmannii e aps 7 dias com o fungo Phanerochaete chrysosporium. Os espectros obtidos nas anlises de FTIR mostraram o aparecimento de grupos carbonila provenientes do processo de biodegradao. Atravs dos dados obtidos nos ensaios mecnicos, nota-se que no ocorreu nenhuma modificao significativa das propriedades mecnicas dos filmes de PEBD puro e PEBD/amido inoculados com o fungo Talaromyces wortmannii. O fungo Phanerochaete chrysosporium apresentou nas condies desenvolvidas nos experimentos deste trabalho uma maior capacidade biodegradadora para os filmes estudados que o fungo Talaromyces wortmannii. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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