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MAD I Introduo ao curso de virologia

08/08/2005

Propriedades gerais dos vrus Os vrus talvez sejam os microorganismos mais comumente encontrados causando doenas infecciosas no homem. Os vrus so capazes de infectar qualquer ser vivo no planeta. Com relao ao tamanho, os vrus so medidos na ordem de grandeza de nanmetros. As bactrias so medidas em micrmeros (m)(10 m), os vrus so cerca de 1000 vezes menores que as bactrias, sendo medidos na ordem de grandeza de nanmeros (nm) (10 m).

Adicionar figura com o tamanho relativo dos vrus

Os vrus so totalmente dependentes do aparato metablico das clulas, sendo ento parasitas intracelulares obrigatrios, fato que determina uma limitao para o seu estudo. Os vrus podem se propagar apenas no interior uma clula, apresentando tambm a limitao de serem vistos apenas em microscopia eletrnica. Como caracterizar os vrus, diferenciando-os dos demais organismos unicelulares, tais como os fungos, bactrias e protozorios? Embora sejam muito simples, fungos, bactrias e protozorios so clulas e portanto independentes, ou seja, apresentam organelas e todo aparato metablico necessrio para sntese de energia, macromolculas e cido nucleico. A informao gentica sempre armazenada em molculas de DNA, e dentro da mesma clula encontramos tambm RNA. Os vrus no so clulas! Os vrus so totalmente dependentes do aparato enzimtico celular. Isto porque os vrus no apresentam nenhuma organela relacionada ao metabolismo tpico de uma clula, ou seja, nele no encontramos mitocndrias, complexo de golgi nem qualquer outra organela celular. Por isso eles so totalmente dependentes. Dentro de uma partcula viral vamos encontrar apenas um tipo de cido nuclico, ou seja, ou DNA ou RNA, o que levou a diviso dos vrus em

dois grandes grupos: um grupo de vrus cujo material gentico o DNA e um outro grupo que armazena informao gentica sob a forma de RNA. Os vrus apresentam duas fases que compreendem seu ciclo de vida: a fase extra celular, ou fase de transmisso e quando eles so encontrados dentro de uma clula teremos a fase reprodutiva. Fora das clulas, os vrus so to inertes, no possuindo a capacidade de se replicar de forma autnoma. Porm, quando dentro de uma clula susceptvel, temos um outro padro de comportamento, quando este passa a assumir a maquinaria de sntese da clula infectada. Uma molcula de cido nuclico pode ser infecciosa. Existem experimentos onde, artificialmente, possvel introduzir uma molcula de cido nuclico viral dentro de uma clula hospedeira, o que se chama transfectar uma clula. Uma vez introduzido apenas o material gentico do vrus em uma clula, este pode dar origem a partculas virais. Os vrus no so susceptveis aos antibiticos, como so as bactrias. Em resumo, se tivssemos que definir o que so os vrus, 3 conceitos no poderiam faltar: - So parasitas intracelulares obrigatrios; - Apresentam apenas um nico tipo de cido nuclico, ou seja, DNA ou RNA; So muito pequenos, sendo medidos na ordem de grandeza de nanmeros.

Morfologia dos virus Uma partcula viral tem uma estrutura muito simples. basicamente uma molcula de cido nuclico, envolvida por uma cpa protica, denominada capsdeo. Chamamos esta estrutura (genoma + capsdeo) de nuclecapsdeo. O capsdeo tem como funo proteger o genoma viral, circundando-o. Alm desta funo ele tambm desempenha, a partir de suas protenas, a funo de prover a ligao dos vrus s clulas alvo, bem como ser interagir com o sistema imune do hospedeiro. Alguns vrus apresentam uma estrutura mais externa ao capsdeo denominada envelope, que tem origem a partir da membrana da celula hospedeira sendo adquirido pelo mecanismo de brotamento (o que ser explicado na aula de multiplicao viral). No caso de vrus envelopados, a ligaao a celula hospedeira e interao com o sistema imune so intermediadas por glicoprotenas inseridas no envelope.

O genoma viral O genoma viral pode apresentar diferentes conformaes. Os vrus DNA, em sua maioria, apresentam o genoma na forma de uma fita dupla pareada, enquanto que a maioria dos vrus RNA possui o genoma na forma de uma fita simples. importante lembrar que os vrus so nicos com relao a duas propriedades: a capacidade de armazenar informao gentica na forma de RNA e, que esta molcula se apresenta normalmente como uma fita nica, no pareada. Quanto a segmentao da molcula de cido nuclico, na maioria dos vrus DNA o genoma se apresenta na forma no segmentada, enquanto que alguns vrus RNA (p.ex. vrus influenza, rotavirus) apresentam um genoma segmentado. Neste caso, cada segmento corresponde a um gene, codificando ento uma nica protena. Qual seria o tipo de vantagem de um vrus, ao assumir uma conformao segmentada? Quando uma mesma clula apresentar-se infectada por, dois subtipos do vrus influenza, por exemplo, poderemos ter, a troca de segmentos genticos. Desta maneira temos um significativo aumento na variabilidade gentica do vrus, explicando o motivo pelo qual, de tempos em tempos, podem ocorrer pandemias causadas pelo surgimento de novos subtipos deste virus. Com relao conformao espacial, o genoma viral pode se apresentar de forma linear ou circular. Quanto a polaridade, no caso do material gentico se apresentar sob a forma de uma dupla fita, teremos uma fita com orientao 3- 5 e outra fita com orientao 5- 3. Sendo assim, temos uma fita com uma polaridade positiva e a outra com uma polaridade negativa. Os vrus RNA, que em sua maioria so de fita simples, so divididos em dois grupos: aqueles de polaridade positiva e os de polaridade negativa. No caso dos vrus RNA de polaridade positiva, o genoma funciona diretamente como RNA mensageiro, sem por isso chamado de infeccioso, isto porque o RNA viral apresenta a mesma orientao do RNA mensageiro da clula hospedeira, podendo ser diretamente traduzido em protenas aps ser liberado no citoplasma da clula hospedeira. Existe um outro grupo de vrus cujo genoma RNA tem uma orientao inversa quela observada no RNA mensageiro. Isto significa que este RNA precisa ser transcrito em RNA mensageiro para depois poder ser traduzido em protenas. Por isto ele dito de polaridade negativa, ou seja, sua seqncia de nucleotdeos inversa quela do RNA mensageiro. Todos os virus com genoma RNA de polaridade negativa trazem associado ao genoma a enzima RNA polimerase RNA dependente, uma vez que a clula no possui esta enzima.

Com relao variabilidade, os vrus RNA apresentam uma taxa de mutao maior do que os vrus DNA, pelo fato da enzima RNA polimerase no apresentar um sistema para correo de erros (como a enzima DNA polimerase possui). Como exemplos de vrus RNA temos o vrus HIV e o o vrus da hepatite C, que, devido a sua grande capacidade de mutao, so de difcil combate pelo sistema imune. Quanto ao tamanho do genoma, os vrus DNA apresentam uma margem relativa a capacidade codificante maior em comparao aos vrus RNA. Vrus DNA podem apresentar um genoma desde 3.2 kpb (ou 3.200 pares de bases, p.ex. vrus da hepatite B) at cerca de 200 kpb (como p.ex. os poxvirus e herpesvirus). Normalmente, cada gene compreende 1000 pares de bases, sendo assim,os genomas virais DNA podem produzir de 4 a cerca de 200 protenas. Por outro lado, o genoma dos vrus RNA normalmente no ultrapassa 17 kpb (17.000 pares de bases). Adicionar figura com as conformaes do cido nucleico viral

O capsdeo viral O genoma viral encontra-se envolvido por uma estrutura protica denominada capsdeo. O capsdeo formado pela reunio de subunidades chamadas de capsmeros e a maneira espacial como estes capsmeros so auto-agrupados no momento da montagem dentro da clula hospedeira determina a simetria da partcula viral. Podem ser observados dois tipos principais de simetrias: icosadrica e helicoidal. Estas conformaes espaciais do capsdeo so aquelas que conferem a maior estabilidade e um menor gasto de energia. Um terceiro grupo de vrus apresenta uma simetria chamada de complexa, sem uma forma definida (p.ex poxvirus). A simetria icosadrica representada por uma estrutura proteica de 20 faces, sendo cada uma delas, um tringulo eqiltero (p. ex. vrus da hepatite A, poliovirus) Na simetria helicoidal, os capsmeros se renem na forma de uma escada em caracol. Neste modelo, os degraus da escada seriam os capsmeros e no meio desta encontramos o genoma. Sendo assim, os capsmeros se renem em torno do genoma, formando uma estrutura em forma de hlice. Todos os vrus com simetria helicoidal so envelopados, ao passo que nem todos os vrus de simetria icosadrica o so. Adicionar figura com as simetrias do capsdeo viral

Envelope O envelope uma estrutura originria da clula hospedeira. Na verdade, o envelope a prpria membrana da clula hospedeira. Desta forma a estrutura qumica do envelope semelhante estrutura da membrana da clula hospedeira na qual o vrus foi gerado. A membrana plasmtica se caracteriza por ser uma bicamada fosfolipdica com protenas incrustadas. Porm, no caso do envelope do vrus, a bicamada fosfolipdica, est associada a protenas codificadas pelo prprio vrus. Uma protena no glicosilada, chamada de protena matriz, forma uma camada na superfcie interna do envelope. Alm disso, encontramos projetadas na superfcie do envelope, inmeras glicoprotenas denomadas de espculas. Como exemplos de glicoprotenas de superfcie, podemos citar a GP 120 do HIV e a Hemaglutinina do vrus influenza. Em relao resistncia ao ambiente e a passagem pelo trato gastrointestinal, os vrus envelopados apresentam-se mais lbeis que os no envelopados, tendo em vista a constituio fosfolipdica do envelope. Sendo assim, o envelope est diretamente associado forma de transmisso do vrus, de forma que os vrus de transmisso entrica, por exemplo, tais como aqueles que causam diarria e que so transmitidos pela via oral e fecal, todos, sem exceo, no so envelopados. Caso fossem envelopados, eles seriam rapidamente destrudos, no s pelo ambiente, como tambm pela passagem no trato gastro-intestinal. No entanto, os vrus que entram no organismo pela mucosa respiratria ou pela mucosa do trato genital, so geralmente envelopados. Isto porque sua transmisso no requer a permanncia do vrus no ambiente. No caso da gripe a transmisso se d diretamente de pessoa a pessoa.

Taxonomia viral Existe um Comit Internacional de Taxonomia Viral (ICTV), que estabelece normas para classificao dos vrus. Segundo estes critrios, os vrus so classficados de acordo com caractersticas morfolgicas e genticas dentro das chamadas famlias virais (terminao viridae), que podem ser divididas em subfamlias (terminao virinae), que por sua vez so divididas em gneros, que recebem a terminao virus. Em virologia no existe espcie, ou seja, o binmio de Lineu, no adotado. Sendo assim os vrus so chamados pelo nome, ou seja, vrus da poliomielite ou vrus da raiva. A palavra vrus vem no incio ou no fim do nome. Adicionar tabela com as principais familias virais

Multiplicao viral
O ciclo de multiplicao viral compreende 3 fases: 1. Iniciao Adsoro; Penetrao Descapsidao

2. Expresso do genoma viral Sntese de protenas Replicao do cido nucleico

3. Montagem das partculas virais e sada da clula hospedeira

Adsoro A adsoro um processo mediado por receptores que se encontram tanto na superfcie do vrus quanto da clula alvo. um tipo de ligao altamente especfica, seguindo o modelo chave e fechadura. O vrus somente se ligar a uma clula que apresente receptores apropriados. Como exemplo, o vrus HIV apresenta um receptor de superfcie denominado GP 120. Este receptor se liga especificamente a receptores CD4 +. Sendo assim a adsoro intermediada por uma ligao altamente especfica determinando: a relao entre o vrus e sua clula alvo, a susceptibilidade e a patogenia de uma determinada infeco.

Penetrao Vencida a etapa da adsoro, o vrus vai encontrar a segunda barreira para seu processo de multiplicao que atravessar a membrana plasmtica da clula alvo. A esta etapa damos o nome de penetrao.

Fuso Os vrus envelopados normalmente penetram na clula pelo mecanismo de fuso. No momento em que a partcula viral se liga aos receptores na clula alvo, ocorre o processo da fuso, ou seja, o envelope do vrus que tem uma constituio fosfolipdica, vai se fusionar com a membrana plasmtica da clula hospedeira, sendo este processo intermediado por uma protena viral com atividade fusionante (protena F). Aps a fuso, o nucleocapsdeo viral lanado no citoplasma da clula hospedeira. Vrus que penetram na clula por fuso provem uma alterao morfolgica (chamada de efeito citoptico, ou CPE) chamada de sinccio, que so clulas gigantes multinucleadas. Isto porque, aps fuso do envelope viral com a membrana, protenas virais ficam nela integradas. Um dos resultados a promoo da fuso entre as membranas celulares das clulas circunvizinhas promovida pela protena F. Alm disso, receptores virais, agora parte da membrana, podem tambm se adsorver a receptores de clulas vizinhas. A formao dos sinccios extremamente benfica para o vrus, representando na verdade um mecanismo de escape do sistema imune, pois acaba por facilitar a passagem do virus de uma clula para outra sem que ele saia para o meio extra-celular.

Endocitose Vrus no envelopados entram na clula por meio de um mecanismo prexistente denominado endocitose. Aps a adsoro da partcula viral na membrana plasmtica, esta membrana sofre uma invaginao, com a conseqente formao de um vacolo, seguido da fuso com lisossomas e formao do vacolo digestivo e a liberao do genoma viral no citoplasma. Alguns vrus envelopados podem penetrar por meio da endocitose (p.ex. vrus influenza), porm a fuso vai ocorrer com a membrana do vacolo e no com a membrana citoplasmtica. Inserir figura com os mecanismos de entrada na clula Descapsidao O terceiro evento da fase de iniciao descapsidao, que representa a perda do capsdeo viral com consequente liberao do cido nucleico. Esta etapa pode ser processada por enzimas virais ou enzimas celulares. Existem drogas antivirais (p.ex amantadina) que atuam impedindo o

processo de descapsidao. Aps a etapa de liberao do capsdeo temos as etapas de expresso e replicao do genoma viral.

Expresso do genoma viral

Transcrio do genoma viral e sntese de protenas Independentemente do genoma do vrus, seja ele DNA ou RNA, a clula s comea a trabalhar para o vrus no momento em que produzido um RNA mensageiro. Sendo assim, o evento central da expresso do genoma viral e da sntese protica, a sntese do RNA mensageiro. Os vrus DNA no encontram grandes problemas para transcrever o seu RNA mensageiro, podendo utilizar RNA polimerases celulares para esta finalidade. Os vrus RNA realizam um processo que a clula hospedeira no reconhece, ou sejam, precisam transcrever RNA a partir de uma molcula de RNA. Sendo assim, vamos encontrar 3 estratgias de transcrio do RNA mensageiro por parte dos vrus RNA: No caso dos vrus com genoma RNA com polaridade positiva, ele j funciona como RNA mensageiro, podendo ser diretamente lido e traduzido em protenas; Com relao aos vrus RNA fita simples de polaridade negativa, tem uma orientao inversa daquela do RNA mensageiro da clula. Sendo assim ele necessita ser inicialmente transcrito em RNA mensageiro para em seguida ser traduzido em protena. Quem realiza esta etapa uma enzima viral. Os retrovirus, contam com a ao da transcriptase reversa, uma enzima viral que converte o RNA em DNA.

Inserir figura com os mecanismos de transcrio do genoma viral As protenas virais produzidas so, em termos funcionais, pertencentes a duas classes. Temas as chamadas protenas no estruturais ou iniciais. Estas protenas apresentam funo enzimtica e so utilizadas na replicao do cido nucleico. Dentre elas temos as enzimas DNA polimerase, a RNA polimerase, proteases, integrases, dentre outras. Em seguida temos a produo das protenas denominadas estruturais, que so chamadas de protenas tardias. Estas vo compor a estrutura da

partcula viral, tais como as protenas associadas ao envelope e ao capsdeo. Replicao do genoma A replicao do genoma depende do tipo do cido nucleico viral. O processo replicativo dos vrus DNA semelhante ao de nossas clulas. Temos uma replicao semi-conservativa. Porm os vrus RNA, na sua maioria so simples fita, logo, no podem lanar mo da teoria semiconservativa. No processo de replicao de um vrus RNA simples fita vamos ter a formao de uma fita intermediria, tal qual um espelho, que vai ser utilizado como um molde. A fita replicativa intermediria complementar a fita original e pode ser utilizado como molde para a sntese de uma fita idntica a original. O processo de replicao semelhante ao processo de transcrio, pois a formao do replicativo intermedirio tanto pode ser utilizada na sntese de cadeias filhas como ser traduzido em protenas. Um potente indutor para a sntese de interferon, a presena na clula de RNA fita dupla. Sendo assim, os interferons so especialmente induzidos nas infeces virais.

Montagem e sada da clula hospedeira

A montagem das partculas virais um evento ligado s subunidades do capsdeos, os capsmeros. No momento em que os capsmeros, que so o resultado da juno de at 4 protenas, so produzidos, aps um processo de auto-agrupamento, os capsdeo virais. O genoma posteriormente introduzido no interior do capsdeo. A sada do vrus, assim como a entrada, pode ocorrer a partir de 2 processos. O processo de sada vai depender tambm da presena ou no do envelope. Vrus no envelopados saem normalmente da clula hospedeira por lise celular. Este processo decorrente no somente do acmulo de partculas virais dentro da clula, como tambm pela ao de protenas virais que param o processo de sintese proteica celular assim como promovem a fragilidade da membrana citoplasmtica. Como exemplo de um vrus citoltico, temos o vrus da poliomielite. Os vrus envelopados, desenvolveram um mecanismo mais elaborado para sua sada da clula, chamado de brotamento, mecanismo pelo qual

estes vrus adquirem o envelope. Aps montagem dos nucleocapsdeos virais, estes se direcionam a regies da membrana modificadas pela insero de glicoprotenas virais (revestidas internamente pela protena matriz). A partcula viral sai da celula carreando um pedao da membrana, j contendo protenas codificadas pelo vrus.

Inserir figura com o mecanismo de brotamento. Conhecendo os mecanismos de replicao viral, possvel desenvolver antivirais. Os mecanismos de ataque aos vrus so difceis de serem desenvolvidos pois a multiplicao viral est diretamente associada clula hospedeira. Desta forma, atacar um vrus significa necessariamente destruir as clulas hospedeiras. Por isso mais difcil atacar uma infeco viral do que as demais infeces provocadas por outros micrbios.

Inserir figura ilustrado do ciclo de multiplicao viral como um todo

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