Fundao Universidade Federal do Vale do So Francisco - UNIVASF Campus Cincias Agrrias Colegiado Acadmico de Engenharia Agronmica - CEAGRO Disciplina:

Microbiologia Geral

RELATRIO DAS AULAS PRTICAS DE MICROBIOLOGIA GERAL

Iandra Soares Leal caro Fernandes de Sousa

Relatrio apresentado ao Curso de engenharia agronmica da Universidade Federal do vale do so Francisco, como requisito parcial para a aprovao na disciplina de Microbiologia Geral

Petrolina 2012

1. Introduo. A disciplina de microbiologia geral consiste no estudo de organismos microscpicos, sua relao com o ambiente e sua importncia para o mesmo. No intuito de enriquecer o conhecimento terico so realizadas aulas praticas nas quais so executados experimentos, principalmente com fungos e bactrias, onde possvel observar com maior profundidade seu comportamento microbiolgico. O estudo da microbiologia de grande importncia, uma vez que algum microorganismo tem sido objeto de estudo por muitos anos devido a sua grande diversidade, na indstria alimentcia a exemplo o Saccharomyces cerevisiae, consiste de um fungo utilizado na fabricao de pes convencionais a partir de um processo metablico chamado fermentao. Outro tipo de micro-organismo o Haemophilus influenzae uma das bactrias causadoras da pneumonia. (TORTORA, 2005). Para a realizao das aulas prticas importante o conhecimento das vidrarias bsicas e equipamentos, assim como as normas de uso geral de um laboratrio de microbiologia geral, afinal as condies de higiene e limpeza devem ser rigorosas para evitar possveis fontes de contaminaes, que constituam um risco em potencial para todos os envolvidos no trabalho e manuseio. (LINS et al, 2007). ... Aula prtica 1: procedimentos e cuidados em laboratrio de Microbiologia Geral. Utilizao de materiais e equipamentos bsicos de um laboratrio de Microbiologia. 1. Objetivos. Conhecer as vidrarias e equipamentos bsicos de um laboratrio de microbiologia, bem como aprender a manuse-lo corretamente. 2. Materiais e Mtodos a) Camara de fluxo laminar b) Autoclave c) Bico de Busen d) Alcool 70% e) gua destilada f) Liofilizador g) Incubadora ou BOD h) Balana analtica i) Incubadora shaker j) Capela k) Microondas l) Geladeira m) Freezer

3. Resultados e discusses A partir desta aula prtica, foi possvel obter conhecimentos sobre determinadas vidrarias e equipamentos, alm de locais apropriados para cada procedimento realizado no laboratrio, tais quais: a) Sala geral: nesta sala so encontradas, entre outros equipamentos, a incubadora shaker e a capela. b) Sala de sorologia: onde foi observado a cmara de fluxo laminar, o liofilizador e o bico de busen. c) Sala de inoculao: na qual so encontradas as balanas analticas, os refrigeradores, estufas incubadoras, ou BOD. d) Sala de lavagem: local onde possvel encontrar o autoclave, o microondas. Cada equipamento e vidraria observados possuem finalidades especificas dentro do laboratrio que podem ser destacadas a seguir: a) Cmara de fluxo laminar: consiste em uma cabine responsvel por criar uma rea de trabalho para manipulao de materiais estreis como meios de cultura esterilizados e amostras de matrias estreis, a fim de evitar qualquer tipo de contaminao. b) Liofilizador: um equipamento utilizado para desidratar a vcuo algum tipo de material. c) Bico de Busen: um aparelho que emite uma chama, cuja temperatura varia de acordo com a regulagem. Permite a realizao de anlises microbianas evitando a contaminao. d) Estufas incubadoras ou BOD: consiste de um equipamento que apresenta sistema de temperatura controlado e utilizada para auxiliar no crescimento e reproduo dos micro-organismos, uma vez que fornece a temperatura adequada a cada espcie microbiana. e) Capela: um local de manipulao de substancias consideradas nocivas ao ser humano, possuindo na sua parte superior um exaustor cuja sua funo eliminar para o ambiente o gs txico emitido pela substancia. f) Microondas e refrigeradores: utilizados para aquecer ou manter refrigerados determinados materiais. g) Autoclave: aparelho destinado esterilizao, pelo calor mido, de diversos materiais como meios de cultura que suportem temperaturas elevadas, gua de diluio e materiais contaminados que sero descartados. h) Incubadora shaker: possui a mesma funo da BOD, porm o material permanece em movimento. i) Balana analtica: aparelho utilizado para determinar massas em anlises qumicas bastante precisas.

4. Concluso A partir desta aula pratica sobre procedimentos e cuidados em laboratrio de Microbiologia foi possvel concluir que h uma grande importncia em conhecer cada equipamento bsico do laboratrio e suas funes especificas, tornandose dessa forma o trabalho mais eficiente.

 importante destacar que existem cuidados que so cruciais par o bom funcionamento dos equipamentos e para a segurana de quem os manuseia, a exemplo no permanecer exposto irradiao da luz ultravioleta presente na cmara de fluxo laminar. Aula prtica 2: Preparo e aferio de solues. Pipetagem. Flambagem. Uso

de equipamentos do laboratrio: cmara de fluxo.

1. Objetivos:

Preparar e aferir solues. Desenvolver habilidade de manipular pipetas e alas de platina, bem como transferir microorganismos de um tubo de ensaio para o outro. Manusear adequadamente a cmara de fluxo. 2. Materiais e Mtodos a) b) c) d) e) f) g) h) i) Cmara de fluxo laminar Ala de platina Tubos de ensaio Grades Bico de Busen Pisseta NaCl Balana digital Vidrarias (Placas de Petri, pipetas, bureta, basto de vidro, provetas, becker, erlenmeyers, bales, etc.)

Para a aferio de solues e pipetagem foi preparada uma soluo de NaCl a 0,9%. Primeiramente foi colocado15g do sal em um Becker e pesado analiticamente para uma maior preciso, em seguida foi adicionado 40ml de gua destilada no Becker para a dissoluo parcial e facilitar a transferncia para o balo volumtricos de 1l. Com o auxilio da pisseta foi adicionado mais gua destilada at atingir o volume indicado pelo menisco. Foi agitado manualmente para sua total dissoluo, e em seguida, utilizando a bureta, foi transferido para um tubo de ensaio 25ml da soluo. A segunda parte da aula foi destinada utilizao da camara de fluxo e transferncia de um micro-organismo de um tubo de ensaio para um meio de cultura em outro tubo de ensaio. A principio, foi mostrado como se utiliza a camara de fluxo de acordo com os seguintes passos: 1. 2. 3. 4. 5. Ligar a camara de fluxo Esterelizar o interior da camara com lcool 70% Limpar as mos com lcool 70% Por as luvas e estereliz-las com lcool 70% Deixar secar o lcool das luvas e por o prprio a uma certa distancia do bico de busen 6. Ligar o bico de busen 7. Flambar a ala de platina at atingir a cor rubro 8. Pegar o tubo de ensaio cuidadosamente com o micro-organismo, retira-se o algodo e flamba a sua borda antes e aps a retirada do micro-organismo

9. Com o auxilio da ala de platina retira-se o micro-organismo para isol-lo em um meio de cultura adequado, flambando sua borda antes de ser fechado 10. Flamba-se ala de platina para matar os micro-organismo aderidos a ela. 3. Resultados e discusso A gua utilizada para a preparao de uma soluo de NaCl deve ser destilada para que a soluo esteja isenta de agentes contaminantes. Foi verificado que todas vidrarias e aparelhos utilizados para o preparo da soluo estavam devidamente esterilizados e protegidos com plsticos filme ou papel alumnio, evitando assim que a soluo fosse contaminada. Ao seguir os procedimentos indicados para a manipulao da cmara de fluxo, foi possvel realizar a simulao de transferncia de micro-organismos de um tubo de ensaio a outro, adequadamente. A utilizao o lcool 70% para esterilizao tanto da cmara de fluxo quanto das mos e das luvas, assim como o ato de flambar a ala de platina e os tubos de ensaio, permitem que no haja outros tipos de micro-organismos no ambiente de trabalho alm daqueles que se deseja estudar. ...

4. Concluso