BIOENSAIOS DE TOXICIDADE AGUDA COM DICLOFENACO DE SDIO EM CERIODAPHNIA SILVESTRII.

BIOASSAY OF ACUTE TOXICITY WITH DICLOFENAC SODIUM IN CERIODAPHNIA SILVESTRII

Keila da Silva Machado, Alessandro Minillo, Maressa Pomaro Casali, Luiz Orlando Pinto Ramiro Filho, Maurcio Augusto Leite, Campus de Ilha Solteira Faculdade de Engenharia de Ilha Solteira Cincias
Biolgicas k_silva28@yahoo.com.br Palavras chaves: bioensaios; ceriodaphnia silvestrii; frmacos. Keywords: bioassay; ceriodaphnia silvestrii; pharmaceutical.

1.INTRODUO A evoluo humana trouxe, de maneira direta e indireta, uma enorme gama de agentes poluentes aos cursos naturais de gua, inclusive parcela deste recurso subterrnea. Dentre esses poluentes esto os frmacos, que designam qualquer droga que seja utilizada para fins medicinais e que persistem no meio ambiente. Varias quantidades de frmacos tem sido encontradas no meio e, a rota mais significante de entrada desses no meio ambiente aqutico so as estaes de tratamentos de esgotos. Consequentemente, a reduzida eficincia no tratamento do esgoto sanitrio dos grandes centros urbanos representa uma das principais vias de contaminao dos corpos hdricos por estes compostos farmacolgicos. Um ponto crtico na avaliao do impacto ambiental dos compostos farmacolgicos sobre os ambientes aquticos saber quais os nveis em que essas substncias exeram efeitos adversos nos seres vivos. Segundo Suchara (2007), a presena de frmacos residuais no meio ambiente pode apresentar efeitos adversos em organismos aquticos e terrestres, ocorrendo em qualquer nvel da hierarquia biolgica, tais como clula, rgo, organismo, populao e ecossistema. Em termos de peculiaridade, os frmacos possuem uma srie de agravantes, em razo de sua elevada persistncia no meio aqutico. Mesmos aqueles que possuem meia-vida curta so passiveis de contaminao devido a sua introduo contnua no ambiente. O uso de ensaios ecotoxicolgicos representa uma ferramenta essencial para um diagnstico do grau de impacto de determinado agente estressor e seus efeitos sobre os ecossistemas terrestres e/ou aquticos. O uso desses ensaios prev identificar e avaliar a variabilidade das respostas dos agentes txicos entre as diferentes espcies, indicar a toxicidade comparativa e detectar os nveis de contaminaes (aguda e/ou crnicas). A avaliao dos efeitos sobre os componentes biolgicos, por meio do biomonitoramento e testes de toxicidade, representa uma forma mais efetiva para predizer ou detectar impactos diversos, pois enquanto as anlises qumicas identificam e quantificam alguns dos poluentes presentes, os bioensaios avaliam o efeito global destes sobre os sistemas biticos. Nesse contexto a possibilidade do biomonitoramento consorciado ao uso das tcnicas da ecotoxicologia tornam-se essnciais para o estudo dos efeitos causados pelos agentes xenobiticos (frmacos) no ambiente, bem como no monitoramento de corpos d gua.

2.FUNDAMENTAO TEORICA E OBJETIVO 2.1.Fundamentao Terica A ocorrncia de frmacos residuais no meio ambiente pode apresentar efeitos adversos em organismos aquticos e terrestres (Bila; Dezotti, 2003). Pouco conhecido sobre o destino e o

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comportamento dessas substncias no ambiente aqutico, assim como no est claro quais organismos so afetados e em qual grau ( Jorgensen et al., 2000). 2.2.Objetivo O presente trabalho tem como objetivo avaliar a toxicidade aguda do composto farmacolgico diclofenaco de sdio em neonatos do microcrustceo Ceriodaphnia silvestrii (cladocera).

3.METODOLOGIA 3.1.Testes ecotoxicolgicos agudos Para os bioensaios foi preparada uma soluo estoque de diclofenaco de sdio com concentrao de 10.0000 g.L-1. Os organismos-teste (Ceriodaphnia silvestrii) foram expostos a seis concentraes crescentes de 3,12 ; 6,25; 12,50; 25; 50 e 100 mg.L-1, alm do controle mantido com meio de cultivo. Paralelamente aos testes das amostras, foi realizado o ensaio controle, visando avaliar a sensibilidade do lote testado de organismos nas condies do ensaio realizado. Para cada concentrao foram testadas 4 rplicas, com 5 organismos por unidade experimental, com durao de 48 horas, efetuando-se a contagem dos organismos mortos aps esse perodo. Os testes foram realizados no escuro, sendo os organismos mantidos sem alimentao, temperatura de 25 20C. Como critrio de mortalidade foi utilizado a imobilidade dos neonatos durante aproximadamente 10 segundos. Para o clculo estatstico da CL50-48h foi usado o programa Trimmed Spearman-Karber (Hamilton et al., 1977).

3.2.Manuteno dos organismos testes Os organismos-teste utilizados nos ensaios foram cultivados em bqueres contendo 2 litros de gua de manuteno e 60 organismos de mesma idade, sendo as culturas mantidas em incubadora com controle de temperatura (25 2oC) e luz (12 horas) (ABNT, 2005). Como alimento para a Ceriodaphnia silvestrii, foi utilizada a alga Pseudokirchneriella subcaptata, na concentrao de 105 clulas mL-1, fornecida diariamente. As trocas de gua foram realizadas periodicamente (trs vezes por semana), separando-se as fmeas adultas ovadas, descartando-se os organismos jovens (neonatos). 3.3.Teste de sensibilidade Para o controle das condies fisiolgicas de clones da espcie utilizada no ensaio de toxicidade foram realizados testes de sensibilidade com uma substncia de referncia, o cloreto de sdio (10 g.L-1), com concentraes variando entre 0,3; 0,6; 1,0; 1,3; 1,6; 2,2 g.L-1. Durante a realizao desses testes, para cada tratamento, foram utilizados 10 mL da soluo com 5 organismos, em rplica, totalizando 4 rplicas (ABNT, 2003). Os resultados foram expressos em porcentagem de organismos imveis, utilizando-se o programa Trimmed Sperman-Karber (Hamilton et al., 1977) para encontrar a faixa de sensibilidade dos organismos testados.

4.RESULTADOS E DISCUSSO Os testes de sensibilidade com cloreto de sdio (NaCl), apresentaram valores que variaram entre 1,22 e 1,52 g.L-1, sendo a concentrao letal de 1,36 g.L-1 (Tabela 1). Rodgher e Rocha (2005) encontraram valores de 0,75 a 1,43 g.L-1 aps a realizao de vrios testes para a determinao da CE (I)50. Oliveira Neto e Botta-Paschoal (2000) determinaram faixas de sensibilidade entre 1,41 e 1,67 g.L1 para Ceriodaphnia silvestrii. Deste modo os valores de sensibilidade para Ceriodaphnia silvestrii encontram-se dentro de uma faixa aceitvel de finalidade para bioensaios de toxicidade.

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Tabela 1: Testes de sensibilidade com Ceriodaphnia silvestrii utilizando NaCl. Mdia e desvio padro dos valores de CE (I) 50, 48h para NaCl (g.L-1). Organismo-teste Ceriodaphnia silvertrii CL 50 1,36 Desvio padro Intervalo de confiana de 95% (1,22 1,52)

Os resultados dos bioensaios de toxidade aguda com diclofenaco de sdio so encontrados na Tabela 2, mostrando uma Cl50 para este frmaco de 25 mg.L-1, variando entre 21,3 e 29,37 mg.L-1. A concentrao letal encontrada no presente estudo menor quando comparada a encontrada por Cleuvers (2004) em Daphnia magna (68 a 166 mg.L-1). Estudos realizados por Henschel et al. (1997) e Touliabah et al. (2008) reportaram valores intermedirios de CL50 aos encontradas no presente estudo com Daphnia sp., mas em exposio ao frmaco paracetamol, com valores variando entre 19 e 50 mg L1 e 50 e 293 mg L-1, respectivamente.

Tabela 2: Valores de CL50-48h de Ceriodaphnia silvestrii com diclofenaco de sdio. Mdia e desvio padro dos valores de CL50, 48h para diclofenaco de sdio em mg.L-1 Organismo-teste Ceriodaphnia silvertrii CL50 25 Desvio padro Intervalo de confiana de 95% (21,3 29,37)

A concentrao do frmaco testado no ensaio, que apresentou toxicidade para Ceriodaphnia silvertrii apresentou nveis superiores aos valores normalmente reportados na literatura, a exemplo o trabalho de Bila e Dezotti (2003), que detectaram concentraes mdias de diclofenaco entre 0,02 a 0,06 g.L-1 em guas superficiais brasileiras. Valores ligeiramente superiores de diclofenaco em guas superficiais foram descritos por Ternes et al. (1999), com concentrao de at 1,2 g.L-1 em um rio na Alemanha. Um estudo realizado por Tauxe-Wuersch et al. (2005) com efluentes de tratamento de esgoto na Sua detectaram a presena de 0,15 a 2 g.L-1 de diclofenaco, o que relativamente reduzido comparado aos nveis desse frmaco que promoveram um efeito letal sobre Ceriodaphnia silvertrii. Embora os valores que promoveram ao txica estejam acima dos nveis encontrados nos corpos d`gua, os resultados dos bioensaio apontam para o risco da toxicidade dessa substncia aos componentes da biota aqutica em ambiente intensamente impactados.

5.CONCLUSES A CL50- 48hs de C. silvestrii para diclofenaco de sdio foi de 25 mg.L-1 ; Os resultados encontrados apontam para o risco dos frmacos aos ambientes aquticos; Novos estudos so necessrios na avaliao dos efeitos de outros frmacos sobre microcrustceos de modo a ampliar o espectro da ecotoxicologia destes compostos xenobiticos.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS Associao Brasileira de Normas Tcnicas - ABNT. Ecotoxicologia aqutica Toxicidade aguda Mtodo de ensaio com Daphnia spp (Cladocera, Crustacea) NBR 12713, p. 17, 2003. Associao Brasileira de Normas Tcnicas - ABNT. Ecotoxicologia aqutica Toxicidade crnica Mtodo de ensaio com Ceriodaphnia spp (Crustacea ,Cladocera) NBR 13373, p.15, 2005.

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