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Apontamentos Gentica & Biologia 2009 / 2010

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Introduo Biologia Celular

Clula: a unidade bsica (estrutural e funcional) de todos os seres vivos. o mais pequeno sistema com caractersticas de vida. um sistema aberto, troca energia (calor, trabalho, solar, qumica) e matria (O2, CO2, nutrientes) com o exterior. Est envolvida por uma membrana e preenchida por uma soluo aquosa com agentes qumicos. Tem a capacidade de crescer e multiplicar-se. Atravs de um microscpio electrnico j possvel visualizar os organitos e algumas macromolculas (ex.: protenas, polissacrideos, fosflipidos, cidos nucleicos). 2 Tipos de microscpios electrnicos: Microscpio electrnico de transmisso para visualizar cortes delgados de tecido. Microscpio electrnico de varredura para visualizar detalhes da superfcie celular, assim como de subestruturas. O trabalho realizado por microscopitas permitiu concluir que as clulas so formadas pela diviso celular de clulas preexistentes doutrina designada de Teoria Celular. Vrus: Parasitas, visveis apenas ao Microscpio Electrnico. Reproduzem-se utilizando os materiais cedidos pela clula hospedeira. Seres na fronteira entre os sistemas vivos e no vivos, porque tem muitos materiais comuns aos seres vivos (protenas, gua, cidos nucleicos), no entanto no se conseguem replicar sozinhos, apenas dentro de outras clulas. Seres acelulares. Possuem patrimnio gentico constitudo por DNA ou por RNA, mas no os dois simultaneamente. O cido nucleico rodeado por uma camada protectora cpside. Possuem ainda um invlucro externo produzido pela clula hospedeira onde se multiplicam. So parasitas obrigatrios uma vez que no se reproduzem nem realizam o seu metabolismo de forma autnoma. Invadem as clulas e assumem o seu comando para se reproduzirem, este mecanismo chamado de ciclo ltico. Mecanismo chamado Ciclo Ltico: 1. Absoro O vrus liga-se clula hospedeira 2. Penetrao A parte interna do vrus entra na clula 3. Replicao As protenas virais da cpside so degradadas. Passa a ser expresso o material gentico do vrus e no o da clula. O DNA viral replica-se, ocorre a transcrio, originando assim uma grande quantidade de protenas virais. 4. Montagem Forma-se a cpside que envolve o DNA e o invlucro externo. 5. Libertao O vrus abandona a clula, provocando a lise das clulas infectadas. Este vrus que provoca a morte da clula hospedeira denominado vrus ltico.

As infeces no-lticas ocorrem quando o genoma viral integrado no DNA da clula hospedeira e, geralmente no leva morte celular, adaptam-se a elas e mantm sempre dentro destas. denominado vrus lisognico. Causam muitas doenas como o HIV. Caractersticas das Clulas Eucariticas Possuem ncleo; Podem ser organismos unicelulares ou multicelulares; Maiores e mais complexas; O genoma maior e possui mecanismos muito mais elaborados de expresso gentica; O ncleo encontra-se limitado num compartimento prprio, delimitado por membranas; Membrana celular constituda por lpidos e protenas; O metabolismo normalmente aerbio; No citoplasma existem vrios organitos delimitados por membranas e com funes especficas. As mitocndrias produzem energia e os cloroplastos realizam a fotossntese; O citoplasma possui citoesqueleto, ou seja redes filamentosas. Ex.: leveduras, protozorios, plantas, animais e fungos. Caractersticas das Clulas Procariticas No possuem ncleo, Tm nucleide; So normalmente seres unicelulares, podendo por vezes agruparem-se formando seres multicelulares; So mais pequenas; A parede celular constituda por polissacridos; No tm citoesqueleto; Tm DNA circular no citoplasma; O seu metabolismo pode ser aerbio ou anaerbico. Ex.: Cianobactrias e Bactrias.

Os organismos unicelulares so normalmente pequenos, consomem poucos nutrientes, dividem-se rapidamente e tm uma grande facilidade de adaptao a diversos meios ambientes. Nos organismos multicelulares existe uma diviso do trabalho entre as clulas, o que permite que muitas vezes estas se tornem especializadas numa determinada funo. O DNA permite a produo de uma enorme variedade de protenas. Em todos os seres vivos existem os mesmos 20 aminocidos, que se ligam de formas diferentes originando assim, protenas com diferentes propriedades qumicas. As diferentes protenas nas clulas originam diferentes funes. Protenas: So longas cadeias de aminocidos que esto unidos por ligaes peptidicas. As protenas exercem funes no nosso corpo como o transporte de oxignio no sangue como o caso da hemoglobina e pode nos proteger de infeces como o caso de anticorpos, etc Os aminocidos so constitudos por: 1 Grupo carboxlico 1 Grupo amina 1 Hidrognio 1 Radical (o que difere o aminocido) Os radicais podem ser apolares e outros polares por isso tm aminocidos que so hidrofilicos e aminocidos que so hidrofbicos. Ao todo existem 20 tipos diferentes de aminocidos. Entre cada aminocido estabelece-se uma ligao covalente amida que designada por ligao peptidica. Uma cadeia de aminocidos tem a designao de polipptidico. Os aminocidos ligam-se sempre de forma linear e atravs de reaces de condensao (reaces onde existe a perda de molcula de H2O).

As protenas quanto sua estrutura: Primria: A estrutura primria a sequncia de aminocidos que a compem a protena. Secundria: A estrutura secundria consiste no dobramento da protena e existe alguns padres de dobramento em protenas que se repetem de uma protena para outra, e so esses dobramentos de vrias protenas diferentes que se designam de estrutura secundria. Hlice e folha (zig zag) so exemplos de estrutura secundria. O que mantm estas estruturas so as ligaes de hidrognio entre os aminocidos. Terciria: Refere-se conformao em total de uma cadeia polipeptdica, isto o arranjo tridimensional de todos os aminocidos. Ao contrrio das estruturas secundrias, que so estabilizadas por pontes de hidrognio, a terciria estabilizada por interaces hidrofbicas entre as cadeias no-polares, pontes de hidrognio nas cadeias polares e ligaes peptidicas. Essas foras estabilizadoras mantm os elementos da estrutura secundria, hlice e folha unidos e compactos. Como as interaces que a estabilizam so fracas, a estrutura terciria de uma protena no rgida, apresentando uma flutuao discreta e contnua. Essa variao estrutural trs consequncias importantes na funo e regulao das protenas. Quartenria: S tm estrutura quartenria as protenas que so formadas a partir da unio de duas ou mais cadeias polipeptdicas, como o caso da hemoglobina. Christien de Duve diz que um sistema vivo deve poder: 1. Elaborar os seus prprios constituintes a partir dos materiais disponveis sua volta. 2. Extrair energia do seu meio ambiente e convert-la em diversa formas de trabalho necessrias para manter a vida 3. Catalisar numerosas reaces qumicas necessrias s suas actividades 4. Informar os seus processos biossintticos e outros de forma que a sua reproduo precisa esteja garantida 5. Isolar-se de maneira a conservar um controlo estrito sobre as trocas com o exterior 6. Exercer sobre as suas actividades uma regulao de modo a que a sua organizao dinmica seja mantida apesar das variaes do meio 7. Multiplicar-se Funes gerais das clulas: 1. Degradam e sintetizam numerosas molculas e estruturas. 2. As clulas produzem o seu meio exterior e as suas colas. 3. As clulas modificam a sua forma e movimentam-se. 4. As clulas sentem e enviam informao. 5. As clulas regulam a expresso dos seus genes em resposta s suas necessidades. 6. As clulas crescem e dividem-se. 7. As clulas morrem. As clulas degradam e sintetizam numerosas molculas e estruturas. As reaces qumicas so o resultado das interaces que existem entre as suas macromolculas. Para que estas reaces qumicas metabolismo ocorram necessrio que as clulas recebam do seu meio exterior energia e matria.

Autotrficos Necessitam de energia solar. Hetertricos Necessitam de energia qumica sob a forma de nutrientes.

As clulas necessitam sempre de energia ou de compostos orgnicos. Sendo assim, transformam os compostos que so ricos em energia em molculas designadas ATP: Autotrficos Utilizam directamente a energia s depois que a transformam em acar. Heterotrficos Utilizam directamente o acar e s depois que os transformam em ATP. Metabolismo So as reaces em que os compostos so alterados, transformandose em molculas de ATP. Existem dois tipos: Catabolismo (So normalmente as primeiras reaces). Anabolismo. Normalmente o que acontece que retirada a energia dos compostos, transferindose essa energia para a molcula de ATP molcula especializada em guardar e fornecer energia com uma grande facilidade. A energia guardada no ATP utilizada numa srie de reaces (de anabolismo): Sntese de macromolculas (RNA, DNA, protenas). Sntese de constituintes celulares como por exemplo: Membranas e fosfolpidos. Movimento celular incluindo a contraco dos msculos. Transporte das molculas contra os gradientes de concentrao. Formao de potenciais elctricos. Formao de calor.

As clulas obedecem s leis da fsica e da qumica, sendo assim tambm esto sujeitas s leis da termodinmica: 1. Lei da Termodinmica: A quantidade de energia mantm-se constante no universo. 2. Lei da Termodinmica: Todos os sistemas tendem para um maior grau de desorganizao: Aparentemente as clulas contrariam esta lei: As clulas tm de manter um grau de organizao elevado. Quando perdem esse grau de organizao morrem. Para que os sistemas vivos tambm estejam abrangidos por estas leis: Pensar nas clulas como um sistema que passa de um grau de menor organizao para um grau de maior organizao: o Quando as clulas aumentam o seu grau de organizao no seu interior, libertam constantemente energia para o meio exterior que est imediatamente sua volta.

A energia que as clulas libertam para o seu exterior corresponde ao seu estado de maior desorganizao calor.

Estrutura das membranas biolgicas Organito Subestrutura da clula que est limitada por uma ou mais biomembranas. Actualmente, a membrana plasmtica ainda invisvel ao microscpio ptico, sendo-o apenas atravs de tcnicas especiais. Quando a clula cresce ou muda de forma, a membrana tambm aumenta a sua rea por adio de membrana nova, assim como tambm se pode deformar sem romper. A membrana celular composta por duas camadas intimamente sobrepostas, formando uma bicamada lipdica. Esta estrutura serve como barreira de permeabilidade.

Os constituintes que fazem parte da membrana so: Os lpidos As protenas Os glcidos O modelo mais aceite da estrutura da membrana plasmtica o modelo do Mosaico Fludo concebido por Singer e Nicholson em 1972. Segundo este:

Os lpidos, contm uma camada polar designada por hidrfilica (afinidade com a gua). por esta razo que se apresentam as cadeias hidrofbicas voltadas umas para as outras e as cabeas hidrfilicas para o meio intracelular e extracelular constituindo assim uma dupla camada contnua. A fluidez, dinmica da membrana, uma vez que esta no esttica, conferida pelos lpidos. Assim, estes mudam de posies na prpria camada, os chamados movimentos laterais ou podem mesmo alterar-se de uma camada para outra, os chamados movimentos de flip-flop. A composio lipdica da membrana a seguinte: o Fosfoglicridos ou fosfolpidos (glicerol-3-fosfato): Consiste numa cauda hidrofbica composta por duas cadeias de cidos gordos esterificados para os dois grupos hidroxil no glicerol fosfato e uma poro polar ligada ao grupo fosfato. As duas cadeias de cidos gordos podem diferir no nmero de carbonos e no seu grau de saturao. o Esfingolpidos: Contm uma longa cadeia de cidos gordos ligados ao grupo amino da esfingosina. o Colestrol (esterides): abundante na membrana plasmtica das clulas dos mamferos, mas est ausente na maioria das clulas procariticas. Importante para a manuteno da fluidez das membranas naturais, o que essencial para o crescimento e a reproduo celular. As protenas dividem-se em dois grandes grupos: Intrnsecas ou Integradas que atravessam de um lado para o outro da dupla camada contnua de lpidos. Tm uma estrutura em forma de hlice de . o A mobilidade das protenas integradas na membrana plasmtica das clulas restrita devido s interaces com o citoesqueleto rgido. Algumas protenas integradas esto permanentemente ligadas ao citoesqueleto subjacente, sendo assim completamente imveis na membrana. Extrnsecas ou perifricas Que se localizam apenas num lado da camada de lpidos. Os glcidos encontram-se na superfcie exterior da membrana e quando esto ligados a protenas denominam-se glicoprotenas. No caso de estarem ligados a lpidos denominam-se glicolpidos. As membranas celulares podem envolver uma clula inteira ou os organitos, apresentado sempre uma face interna ou citoslica que se encontra voltada para o interior do organito e uma face externa ou exoplasmtica que se encontra voltada para o citosol. No caso dos organitos, a denominao contrria, isto , a face interna ou exoplasmtica aquela que se encontra voltada para o interior do organito e a face externa ou citoslica que se encontra voltada para o citosol.

A maior parte dos organitos existentes nas clulas so rodeados por uma nica membrana, no entanto outros so rodeados por duas membranas como o caso do ncleo, das mitocndrias e dos cloroplastos. O grau de fluidez da bicamada depende da composio dos lpidos, da estrutura das caudas hidrofbicas dos fosfolpidos e da temperatura. Quando as cadeias de cidos gordos se apresentam mais agregados empacotando-se fortemente originam um estado semelhante a um gel. Em geral, a fluidez da membrana diminui com os esfingolpidos e o colesterol e aumenta com os fosfoglicridos. O colesterol e as outras molculas que diminuem a fluidez da membrana permitem aumentar a sua espessura.

Algumas das funes desempenhadas pela membrana plasmtica so: Serve de barreira permevel, permitindo a entrada de nutrientes necessrios clula e a eliminao dos resduos resultantes do metabolismo. Permite a manuteno do pH (+- 7,2) e a composio apropriada para o citosol. A membrana plasmtica serve como barreira para previnir que o contedo da clula escape e se misture com o meio circundante. Possui protenas receptoras que se ligam a molculas de sinalizao especficas, levando a vrios tipos de respostas celulares. muito permevel entrada de gua, mas pouco permevel a sais e pequenas molculas como aucares e aminocidos. ento responsvel pelo processo de osmose. Descrio morfolgica e funcional dos vrios organitos de uma clula eucaritica: Ncleo: Tm normalmente uma forma esfrica e situa-se no centro da clula. circundada por duas membranas (externa e interna), cada uma contendo uma bicamada de fosfolpidos com diferentes tipos de protenas.

Na maioria das clulas a membrana nuclear externa contnua ao reticulo endoplasmtico rugoso. Os poros nucleares so complexos com a forma de um anel composto de protenas (sem lpidos), em que duas membranas se fundem e atravs das quais as substncias se movem entre o ncleo e o citosol. O ncleo replica DNA e sintetiza RNAr, RNAt e RNAm constantemente. o Dentro do ncleo est o nuclolo que se cora mais intensamente por ser rico em cido ribonucleico (RNA). O nuclolo uma fbrica de RNAr. o O resto do ncleo contm cromatina, assim chamada porque esta cora duma forma caracterstica. A cromatina constituda por: DNA Protenas RNA hn (heterogneo nuclear) pr-RNAm, pr-RNAr, prRNAt, pr-RNAp o Aquando das divises celulares a cromatina fica dispersa ao acaso dentro do ncleo, mas pouco antes da diviso celular a cromatina tornase organizada em discretos corpos granulares, os cromossomas. o Os cromossomas so formados por uma nica molcula de DNA extremamente longa, que contm uma srie de genes. o Entre os grnulos de cromatina e o nuclolo existe um fluido claro que foi denominado suco nuclear, nucleoplasma ou cariolinfa. o Ainda possvel distinguir a eucromatina (parte mais clara) corresponde zona do DNA funcional e a heterocromatina (parte mais escura) corresponde zona de DNA no funcional. Funo: Guarda a informao gentica.

Lisossomas: Organitos de pequenas dimenses. Forma esfrica. S possuem uma membrana. Lisossomas secundrios Lisossomas que se associam a outros lisossomas (primrios), formando estruturas de maiores dimenses. o Tambm ocorrem reaces de hidlise e existem hidrolases. o H degradao da matria que entra para dentro do lisossoma. o Ex.: as protenas que entram para dentro dos lisossomas so transformadas em aminocidos, que vo ser depois utilizados para a sntese proteica. Funo: Hidrlise de macromolculas (quebra de ligaes covalentes por enzimas hidrolases, transformando grandes molculas em pequenas molculas).

Peroxissomas: Morfologia semelhante aos lisossomas. Tm uma forma esfrica.

Nesta imagem possvel visualizar-se peroxisomas porque a amostra biolgica foi sujeita a um tratamento prvio, em que um componente (enzima que

hidrolisa a reaco) que s existe nestes organitos a catalase que foi identificada por anticorpos. o Anticorpos: Tm uma grande especificidade, sendo capazes de reconhecer uma substncia no meio de imensas diferentes. Protenas muito utilizadas numa srie de tecnologia, em reas como, a bioqumica e a imunologia. No nosso organismo, os anticorpos existem no sangue, mais especificamente no plasma. Estas s actuam fora das clulas Fazem parte do sistema imunitrio Reconhecem os antignios molculas estranhas ao nosso organismo e liga-se. uma protena que tm estrutura quartenria, existindo uma zona que varivel de anticorpo para anticorpo que reconhece o antignio outra zona que igual em todos os anticorpos. o As clulas so tratadas com anticorpos anticatalases que se ligam catalase, observando-se assim, umas pintas pretas que correspondem aos peroxissomas.

Funo: o Degradao de compostos que no so degradados por hidrlise, ocorrendo assim atravs de oxidao (perda de electres). o libertado perxido de hidrognio (H2O2). o Os compostos (normalmente fosfolpidos mais complexos e aminocidos) so sujeitos a esta degradao quando no conseguem ser degradados nos lisossomas.

Vesculas: Tm pequenas dimenses. Das vias de secreo fazem parte: o Retculo endoplasmtico. o Aparelho de golgi. o Lisossomas. Funo: Transporte de macromolculas para o exterior da clula ou para os lisossomas. Retculo endoplasmtico: uma rede de canais ligados, ocupando grande parte do citoplasma. Pode-se distinguir: o Tecido endoplasmtico liso: Sem ribossomas ligados o Tecido endoplasmtico rugoso: Com ribossomas ligados Funo: Sntese de determinados compostos

o o

Liso: Sintetiza lpidos, sobretudo os fosfolpidos da membrana, que so utilizados pela clula na formao das suas membranas. Rugoso: Sintetiza protenas de secreo (so utilizadas no exterior da clula), que so encaminhadas para o exterior da clula.

Complexo de Golgi: formado: o Cisternas: Maiores, achatadas e empilhadas. Podem ser designadas consoante a sua posio: Cis regio convexa Mdia entre a zona cis e a zona trans Trans regio cncava

o o

Mais pequenas e de estrutura esfrica. Transportam as protenas do reticulo endoplasmtico para o complexo de golgi, entre as cisternas do complexo e deste para o exterior: No complexo de golgi, as protenas so modificadas e marcadas e consoante as marcas so encaminhadas para diferentes stios.

Vacolos: S existem nas clulas vegetais. A sua forma irregular. Tm grandes dimenses, ocupando praticamente toda a clula. Quando a clula se forma so muitos e pequenos, depois com a sua maturao passam a ser poucos e grandes, resultam da fuso dos pequenos. O que o impede de crescer mais a parede celular que comprime os vacolos. Possui s uma membrana. Tem enzimas degradadas que lhe conferem um ph cido. Funo: o Armazenar compostos como aminocidos, glucose, acdos gordos, sais, sdio, potssio. o Degradar macromolculas. o Armazenar gua. o Regular a presso osmtica. Uma vez que nas clulas animais no existe nenhum organito que seja responsvel pela regulao da presso osmtica, estas vivem em meios isotnicos, em que a tonicidade dentro e fora das clulas no varia. Mitocndrias: Tm duas membranas (externa e interna), a membrana interna sofre invaginaes formando as cristas. Podem ser distinguidas 4 zonas na mitocndria: o Membrana externa o Zona intermembranar o Membrana interna o Matriz mitocondrial Tem uma forma alongada Funo: produo de ATP

Cloroplastos: S existem nas clulas vegetais. Possui duas membranas (externa e interna). No seu interior tem um sistema membranal (tilacoides) e vrias vesculas empilhadas (grana). Possui pimentos que recebem a luz solar, que se localizam na membrana dos tilacides. Funo: fotossntese. Citoesqueleto: Citoesqueleto uma estrutura existente em todas as clulas que responsvel pela sua forma e rigidez. formada por 3 tipos de fibras: Microtubulos o Dimetro 25 nm o Protena tubulina: Estrutura alongada (protofilamento) delimitando um cilindro. Os microtubulos so uma espcie de cilindros ocos de tubulina. Microfilamentos o Dimetro 5 nm o Protena actina: Enrola-se em hlice, formando uma estrutura alongada com espao interno. Filamentos intermdios o Dimetro 7 nm o As protenas so globulares No esfricas Mais alongadas Tm dimetros diferentes porque: o Vrios tipos de protenas: Diamantina Queratina o As protenas so diferentes e organizam-se de forma diferente. Estas fibras atravessam a clula. Inicialmente pensava-se que estas fibras apenas exixtiam no citoplasma (citoesqueleto esqueleto no citoplasma). Actualmente, j se sabe que existem alguns filamentos intermdios no ncleo. Funes: o Confere rigidez. o Responsvel pelas estruturas das clulas, a sua organizao. o Permite o movimento das substncias que existem dentro das clulas. feito ao nvel dos microtubulos, microfilamentos e filamentos intermdios.

As clulas movimentam-se atravs: Clios: o Ex.: mucosas das vias respiratrias Neste caso no permitem que a clula se movimente, mas sim o que se encontra fora da clula, permitindo assim, que as secrees no se acumulem. o Todas as clulas tm clios, no entanto, existem clulas especializadas que possuem mais clios. o Os clios no so formados por prolongamentos do citoesqueleto, mas sim por fibras de microtubulos. Flagelos: o Ex.: Espermatozides.

Mecanismos de Expresso Gentica

Mecanismos de Expresso Gentica Transcrio Transferncia da informao gentica do DNA para o RNA, o qual sintetizado a partir de uma das cadeias de DNA que lhe serve de molde com base na complementaridade de bases. Gene Poro de DNA que contm informao para produzir um RNA funcional ou protenas.

Transcrio em clulas procariotas: Promotor Sequncia de nucletidos de DNA que permitem o incio da transcrio pela RNA polimerase. Existe uma sequncia consenso (TATA) que uma regio que rica em A e T, o que confere uma certa fragilidade, permitindo a ruptura das pontes de H e, posterior interaco com os factores de transcrio. Repressor Molcula que se liga ao promotor impedindo, que a enzima RNA polimerase se ligue zona, para iniciar a transcrio. Enhancers Protenas de controlo, que esto afastadas do local onde se inicia a transcrio, influenciando a velocidade a que decorre a transcrio. RNA policistrnico Um gene tem informao para vrias protenas. Opero Sequncia de nucletidos com informao para uma ou mais protenas e que tm a capacidade de regular a expresso gentica de determinadas substncias como o caso da lactose.

Mecanismo molecular da transcrio em clulas procariotas. Regulao: Nas clulas procariotas, os genes ocupam toda a molcula de DNA, sendo a sua distribuio homognia. RNA polimerase Protena responsvel pela sntese do RNA, atravs de uma reaco de molde. A RNA polimerase ao contrrio da DNA polimerase no necessita de primers. formada por 4 subunidades: 2 e 2: o A estrutura 3D da protena importante no processo de transcrio. o Para alm destas 4 subunidades tambm precisa de uma subunidade sigma, que interage directamente com a zona promotora. o A subunidade sigma liga-se ao DNA porque este tem informao para reconhecer esta sequncia de nucletidos. Quando est activa associa-se a uma subunidade sigma (), esta subunidade reguladora determina se h transcrio. Possibilitando assim, a RNA polimerase a identificar os locais que so expressos e os que no so. Consegue reconhecer o promotor, local onde o gene vai ser transcrito: o Tem de reconhecer o gene que vai ser transcrito o O princpio e o fim desse gene. o Tem que se ligar ao incio desse gene fundamental que o gene tenha uma zona inicial que seja facilmente reconhecida pela enzima, isto a zona promotora seuquncia de DNA que vai ser reconhecida pela RNA polimerase, indespensvel para que o mecanismo da transcrio ocorra. Esta zona (promotora) no transcrita. o Quando reconhece o final do gene e separa-se do DNA, separando-se tambm a molcula do RNA. o A RNA polimerase tem uma capacidade de regulao isto porque reconhece 2 sequncias de genes 1 que o incio e outra o fim. Desnatura o DNA (funo de helicase separao das 2 cadeias de nucletidos da molcula de DNA): o As ligaes que se estabelecem entre as 2 cadeias de DNA feita a partir de pontes de hidrognio, que unem os nucletidos de cadeias complementares. A separao das 2 cadeias no permanente, esta tambm responsvel por, no final da transcrio, fechar a cadeia. Cataliza a formao de ligaes fosfodister entre ribonucletidos (polimerizao ou sntese), em reaces de molde. S funciona no sentido 5 3. A RNA polimerase s consegue fazer a ligao entre nucletidos no sentido 5 3.

O facto da RNA polimerase conseguir reconhecer todas as sequncias de genes foi estudado fazendo um estudo comparativo: Compara-se as zonas do DNA que tm a mesma funo e observa-se o que h de comum entre elas. Quanto maior for o nmero de sequncias comparadas mais significativa a informao que se obtm. Verificou-se que existem 2 zonas do DNA que so comuns a todas os genes: o Zona promotora. o Zona onde se liga a subunidade da RNA polimerase. No caso de serem retirados esse nucletidos especficos verifica-se que a enzima no se via ligar. O estudo comparativo permite termos uma hiptese de trabalho, comparamos esta zona e vimos que h 1 que comum a todas as clulas: o Pela negativa se no estiverem l os nucletidos a enzima no se consegue ligar a RNA polimerase. o Pela positiva utiliza-se um bocado de DNA que nunca foi promotor e introduzem-se esses nucletidos. Este DNA nunca foi promotor, mas introduzindo esses nucletidos verifica-se que passa a ser reconhecido pela RNA polimerase. Demonstrao mais forte do que pela negativa. o Assim conclui-se que so estes genes os responsveis pela ligao da protena ao DNA. o Ento define-se uma sequncia mais provvel para existir naquela zona sequncia consensos ento uma sequncia que existe associada a quase todas as capacidades funcionais do DNA.

Para alm da RNA polimerase e da subunidade ainda existe outro tipo de protenas que se podem ligar ao promotor factores de transcrio so os responsveis dos genes serem expressos em maior e menor quantidades. A cadeia de DNA que vai ser utilizada para a formao do RNA chama-se cadeia molde, pois esta vai servir de modelo para a formao da molcula de RNA. Esta que determina qual a sequncia de nucletidos que vai aparecer no RNA. Regulao da transcrio: As bactrias tm um tamanho de 10 (6) pares de bases e aproximadamente 3000 genes diferentes.

Aquando do processo de transcrio estes no esto a ser todos transcritos ao mesmo tempo: o Uns no so transcritos pois no so indispensveis para a sobrevivncia da clula. o So transcritos em maior quantidade. o So transcritos em menor quantidade.

Opero lactose:

Genes constitutivos Genes que esto sempre a ser transcritos pois fazem parte da constituio da clula pois originam protenas que fazem sempre falta clula. Genes reguladores Genes que s so transcritos em determinadas ocasies. A regulao da transcrio mediada apenas pelos genes reguladores pois os constitutivos esto constantemente a ser transcritos. Opero Genes que so todos regulados da mesma maneira pois s tm um promotor. Factores de transcrio So as protenas que ao ligarem-se ao DNA vo permitir ou no que o mecanismo de transcrio ocorra.

Legenda: O opero do triptofano um segmento contnuo do cromossoma (E. coli), que contm 5 genes (em azul) que codificam as enzimas necessrias para as etapas de sntese de triptofano. O opero inteiramente transcrito a partir do promotor sob a forma de um longo e contnuo RNAm trp (em vermelho). A traduo deste RNAm tem incio em cinco diferentes stios de iniciao, originando cinco protenas (em verde). A ordem dos genes sobre o genoma bacteriano espelha o funcionamento sequencial das protenas codificadas na via do triptofano.

Na ausncia da lactose: O gene regulador responsvel pela produo de um repressor (a verde) uma protena do ponto de vista molecular. O repressor liga-se ao operador (s existe nas clulas procariticas). Assim a RNA polimerase no se pode ligar ao promotor. A transcrio bloqueada. impedida a transcrio dos trs genes constitutivos a, b e c. Na presena da lactose (no esquema): A lactose liga-se ao repressor modificando a sua forma tridimensional, deixa de ter reentrncias e salincias que encaixavam no DNA. Assim o repressor (que faz parte dos factores de transcrio que tm capacidade de se ligar ao DNA) no se pode ligar ao operador. A RNA polimerase pode ento transcrever os genes constitutivos a, b e c enquanto o operador estiver livre. Posteriormente d-se a traduo surgindo assim as enzimas que intervm na degradao da lactose. Promotor a amarelo. Gene Z, Y e A: Z -galactosinase (enzima que consegue fazer a degradao da lactose 1 dissacrido logo a quebra desta ligao glicosdica s ocorre se houver uma enzima associada originando glucose + galactose). Ento se as clulas no tiverem glucose utilizam a lactose imediatamente degradam a lactose originando glucose + galactose. Y permease. A acetilase

Obtm-se assim 3 genes que do origem a 3 protenas que so reguladas pelo mesmo promotor. Isto apenas acontece nas clulas procariotas porque normalmente, nas clulas eucaritas cada gene tem o mesmo promotor.

Esta regulao vantajosa para a clula porque consegue produzir 3 protenas que so necessrias naquele momento, utilizando o mesmo promotor e por isso: Menos energia. Menos probabilidade de erro. Como este RNA tem informao para 3 protenas chama-se RNA policistrnico um RNA que tem informao para mais do que uma protena. Este tipo de RNA no existe nas clulas eucaritas. Nas bactrias 50% dos genes esto organizados em operes e os outros 50% esto organizados cada um com o seu promotor. Normalmente as bactrias utilizam como fonte de energia glucose e no necessitam de lactose: Logo no necessitam estes genes do opero lactose. Ento estes normalmente no so transcritos, mas se no houver glucose e se houver lactose, as clulas tero de utilizar a lactose como fonte de energia e ento vo Necessitar destes genes. Neste caso os genes vo ser transcritos originando as protenas que so necessrias naquela altura. A regulao da lactose no depende apenas da presena desta, ainda existem mais protenas envolvidas na regulao deste opero: Protenas CAP: o Existem normalmente quando: Existe glucose Quantidade de AMPcclico (adenosina monofosfato) baixa (no existe lactose). No ocorre transcrio e por isso no se forma os genes constitutivos. Os AMPcclico juntamente com o clcio so chamados de segundos mensageiros: Qualquer pequena alterao na quantidade destes compostos na clula provoca: o Inibio ou activao de genes No AMPcclico a designao cclica deve-se a uma ligao que se estabelece entre o acar e a base, graas presena de uma enzima na sua membrana: Quando a clula recebe um sinal exterior, essa enzima activada o que provoca uma maior concentrao de AMPcclico vai desencandear uma resposta. Ento podem surgir vrios casos: a) Presena de glucose e baixa concentrao de AMPcclico Situao normal. No so produzidos RNA nem -galactosinase. b) Presena de lactose e glucose e AMPcclico em concentraes baixas: O repressor fica inactivo. No se liga ao promotor. Vai haver transcrio e produzida uma baixa concentrao de galactosinase.

c) Ausncia de glucose, presena de lactose a concentrao de AMPcclico aumenta: A protena CAP liga-se AMPcclico:

o o o o

Altera-se a conformao do AMPcclico. Fica com afinidade para o DNA ligando-se a este. Activa o funcionamento da RNA polimerase. produzida uma grande quantidade de RNA e portanto de galactosinase.

Relativamente ao controlo destes genes temos ento: Factores de transcrio positivos Protenas CAP Factores de transcrio negativos Repressor Caso do Triptofano: O triptofano um aminocido que est constantemente a ser produzido a partir de outros compostos: o opero que produz as protenas que so necessrias para a produo do triptofano. Este est activo (ao contrrio do que acontece na lactose). Quando h excesso de triptofano dentro da clula o opero vai ser inibido e os genes deixam de ser transcritos. No triptofano as enzimas responsveis pela sua degradao so as enzimas d, e, f,g e h. Na ausncia de triptofano: O gene regulador responsvel pela produo de um repressor inactivo. Assim o repressor no se pode ligar ao operador. A RNA polimerase pode ento transcrever os genes constitutivos (d, e, f, g e h) enquanto o operador estiver livre. Posteriormente d-se a traduo surgindo assim as enzimas que intervm na degradao do triptofano.

Na presena de triptofano: O triptofano liga-se ao repressor, activando-o. O repressor liga-se ao operador. Assim a RNA polimerase no se pode ligar ao promotor. A transcrio bloqueada. impedida a transcrio dos genes constitutivos (d, e, f, g e h). Regulao da transcrio por factores alternativos: A RNA polimerase constituda por 2 subunidades e 2 subunidades . Quando a enzima inicia a transcrio necessita da subunidade pois esta que faz realmente a ligao.

Existem vrios factores : O que normalmente utilizado o factor 70, os outros encontram-se na maior parte das vezes inibidos. O factor 32 utilizado para genes de choque trmico, como reconhece uma sequncia diferente de nucletidos, origina genes diferentes. o Conjunto de genes que so activados quando as clulas se encontram em ambientes diferentes dos normais. o Quando h um aumento de temperatura das nossas clulas as protenas podem ficar desnaturadas e perderem assim a sua funo: Assim a clula produz estas protenas (choque trmico) que se ligam s protenas que esto parcialmente desnaturadas ficando novamente renaturadas. Voltam a enrolar-se e ficam funcionais. o Sabe-se que estas protenas tambm so utilizadas em condies de stress. o Actualmente estas protenas so chamadas de protenas chaperon protenas que acompanham as protenas que so necessrias ao funcionamento da clula, tornando-se funcionais quando ocorrem pequenas alteraes no ambiente em que as clulas se encontram. o Pensava-se que s apareciam em condies anormais, actualmente sabe-se que fazem parte do mecanismo geral. As clulas em condies fisiolgicas adequadas produzem sempre protenas que so necessrias ao enrolamento correcto das protenas, mantendo-as funcionais. No que diz respeito ao mecanismo de regulao da transcrio nas bactrias temos: Actuao de factores de transcrio. Alterao do factor associado RNA polimerase. o Assim activado outro gene especfico.

Nas clulas procariotas, a transcrio feita em simultneo com a traduo e pode ser dividida em 3 fases: Iniciao Durante a iniciao da transcrio a RNA polimerase reconhece e se liga a uma regio especifica, chamada promotor. A RNA polimerase necessita do auxilio de vrios factores proteicos, chamados de factores de transcrio, para localizar os promotores e dar inicio transcrio. Aps a sua ligao ao promotor, a RNA polimerase abre as fitas de DNA, para que as bases nucleotdicas da fita molde estejam acessveis para as ligaes com as bases ribonucletidos. Forma-se o complexo aberto, considera-se completa a iniciao da transcrio quando os dois primeiros ribonucletidos de uma cadeia de RNA esto unidos por uma ligao fosfodister. Elongao Aps a RNA polimerase se libertar do DNA promotor e dos factores comuns de transcrio, segue-se a etapa de elongao, na qual consiste na polimerizao ou associao de vrios ribonucletidos, e ou, corresponde polimerizao da molcula de RNA, por adio de ribonucletidos atravs de ligaes fosfodister por aco da RNA polimerase. Terminao Durante a terminao da transcrio, a etapa final da sntese do RNA, a molcula completa de RNA, ou transcrito primrio, libertado da RNA polimerase e a polimerase liberta-se do DNA molde. Sequncias especificas (Rh0 ou estruturas secundrias chamadas de stem-stop) no DNA molde sinalizam para a RNA polimerase a terminao da transcrio. Uma vez libertada, uma RNA polimerase est livre para nova transcrio do mesmo ou de outro gene.

Transcrio em clulas eucariotas:

Legenda: Viso geral do controlo transcricional em eucariticos multicelulares. As protenas activadoras se ligam aos elementos controladores especficos do DNA na cromatina e interagem com as maquinarias co-activadoras multiproteicas, como os mediadores, para descompensar a cromatina e organizar a RNA polimerase e os factores gerais de transcrio nos promotores. Os genes inactivos so reunidos em regies de cromatina condensada, o que inibe a interaco das RNA polimerases e seus factores gerais de transcrio associados (GTFs) com os promotores. Alternativamente, as protenas repressoras se ligam a outros elementos controladores para inibir a iniciao pela RNA polimerase e interagem com complexos corepressores multiprtaicos para condensar a cromatina.

Nas clulas eucariotas, o DNA linear, encontranso-se os genes agrupados em regies designadas por clusters. Na molcula de DNA existem zonas que no so fundamentais, no codificam nem protenas nem molculas de RNA. Existem certas zonas de DNA, em que no existe informao gentica, como o caso do centrmero, em que no h sntese nem codificao de RNA ou protenas. No entanto fundamental para manter os cromatdeos unidos e tambm na sua separao.

Os genes que existem numa clula podem variar muito: Clulas humanas: 32000 Plantas: 25000 Monhoca: 18000 E. Coli: 3000 Levedura: 6000 Drosfila: 10000 O nmero de genes diminui consoante os organismos esto a mais na escala filogentica.

Em cada clula os genes no so todos transcritos: As clulas tm muito mais informao do que aquela que utiliza. Permite explicar as diferenas morfolgicas e funcionais que existiam nas clulas do nosso organismo. o Entre uma clula nervosa e uma clula epitelial. Normalmente s 1/3 dos genes esto a ser transcritos. (10000) O DNA nas clulas eucaritas encontra-se normalmente muito condensado, formando uma estrutura chamada cromatina: As molculas de DNA de grandes dimenses enrola-se volta de 8 histonas formando um nucleossoma (colar de prolas). Ainda podem enrolar-se mais entre si formando uma estrutura em que o DNA se encontra muito enrolado teleride. o Normalmente, o DNA quando tm esta organizao, os seus genes encontram-se inactivos pois no h espao para a interaco das protenas com o DNA. o Estas zonas so visualizadas ao microscpio com uma colorao mais intensa heterocromatina. o As zonas em que o DNA est menos enrolado corresponde a zonas em que os genes esto activos, sendo visualizads ao microscpio com uma colorao mais clara eucromatina. Aquando da transcrio torna-se fundamental a descondensao dos cromossomas e a separao das 2 cadeias de DNA. S ento, que as protenas e os factores de transcrio se podem ligar para regular a transcrio. As histonas tm vrias funes: Enrolamento do DNA. Ajudam a proteger o DNA contra a enzima DNAse quanto mais enrolado estiver o DNA. Nas clulas eucarticas funcionam quase como factores de transcrio: o Regulam se os genes esto ou no activos dependendo do grau de enrolamento do DNA. Nas clulas eucaritas podemos ter 3, 4 ou 5 RNA polimerases:

3: o 3 Diferentes RNAs que existem no ncleo (RNA polimerase I, II e III). 4 (clulas animais): o 3 Diferentes RNAs que existem no ncleo. o 1 RNA que existe nas mitocndrias. 5 (clulas vegetais): o 3 Diferentes RNAs que existem no ncleo. o 1 RNA que existe nas mitocndrias. o 1 RNA que existe nos cloroplastos.

Os 3 tipos de RNA que podem existir so: RNA polimerase I RNA polimerase II RNA polimerase III As RNA polimerases das bactrias so tambm constitudas por: 2 Subunidades 2 Subunidades As actividades comuns entre todas as RNA polimerases so: Tm de reconhecer e ligar-se zona promotora. Separam-se as 2 cadeias, desnaturam o DNA correspondente zona que vai ser transcrita. Catalisam a formao de ligaes fosfodister entre os ribonucletidos e no sentido 5 3. As diferenas que se verificam entre as RNA polimerases so: RNA polimerase I: o Existe no ncleo. o Sintetiza RNA ribossomal, isto os elementos estruturais dos ribossomas. o Existem 3 tipos de RNAr: 28s 5,8s 18s RNA polimerase II: o Produz RNA mensageiro, isto , reconhece os genes que tm informao para a formao de uma determinada protena. o Podem tambm produzir RNA pequenos. RNA polimerase III: o Existe no ncleo. o Sintetizam RNA transferncia. o Podem tambm produzir RNA pequenos. o Sintetiza ainda RNA ribossomal. 5s As RNA polimerase I, II e III produzem RNAs diferentes pois reconhecem a regio promotora de genes que codificam diferentes RNAs.

Existem assim, 4 RNAr diferentes:

3 Produzidos pela RNA polimerase I: o 28s, 5,8s e 18s. Estes 3 RNAr encontram-se sempre agrupados e na mesma sequncia (18s; 5,8s; 28s) So regulados por apenas 1 promotor (so os nicos nas clulas eucaritas). 1 Produzido pela RNA polimerase III: o 5s

A regulao faz-se no incio da transcrio (deciso se o gene ou no transcrito) e determinado pelos elementos cis e trans: Elementos cis Sequncia de DNA que reconhecida por protenas. Elementos trans ou factores de transcrio Protenas que reconhecem as sequncias de DNA que esto na zona promotora. o Interagem com a RNA polimerase activando-a. No caso dos elementos cis estarem todos enrolados (associados a histonas), estes no conseguem ser reconhecidos pelos elementos trans. Unidade de transcrio Zona do DNA que vai ser transcrita.

Enhancers (a verde) Est localizada em vrios locais (antes, dentro e depois) e so sequncias de DNA reconhecidas por protenas que activam a transcrio, fazem com que as protenas se liguem e a transcrio torna-se mais activa. O enhancer que est no gene vai influenciar a RNA polimerase que est no promotor atravs de uma protena mediadora porque o DNA est todo enrolado e vai haver contacto fsico entre os factores de transcrio (enhancer) e a RNA polimerase (a amarelo). Existem genes que do origem a protenas e outros que do origem a RNAs: Muito poucos originam RNAs. A maior parte origina protenas (10000) o A RNA polimerase II vai ter de reconhecer 10000 regies promotoras. Vai necessitar da ajuda de outras protenas. Existem muitos elementos cis que possibilitam a ligao entre protenas que vo possibilitar a interaco com a RNA polimerase II ocorrendo ou no a transcrio. O nmero de elementos cis cada vez maior dependendo da complexidade dos organismos (ao longo do processo evolutivos).

Ainda se pode distinguir:

Promotor proximal Zona do promotor que est prxima do incio da transcrio (primeiros 200 nucletidos): o Zona onde se liga a RNA polimerase II com a ajuda de outras protenas vai permitir a trnacrio. Promotor distal pode ter 50000pb: o Interagem com a RNA polimerase II e aumnetam ou diminuem a capacidade da polimerase II sintetizar RNAm.

Actualmente o estudo que se faz dos factores de transcrio com o intuito de descobrir a funo e a sua estrutura tridimensional (como a protena se enrola para se ligar com maior afinidade ao DNA): Estrutura em dedos de zinco o Tm cisternas e istininas que interagem simultaneamente originando uma estrutura tridimensional que permite um encaixe privilegiado no DNA.

Estrutura fecho eclair: o Tem uma estrutura alongada que contacta com o DNA Estrutura com hlice bsica, loop e hlice.

Estrutura homeodomnios.

Os factores de transcrio podem ser:

Dmeros: o Com 2 subunidades (que podem ser iguais ou diferentes). o O facto de haver associaes entre 2 subunidades ainda aumenta mais a especificidade de regulao, tm um maior nmero de factores de transcrio. Heterodmeros: o Associao de vrias subunidades, assim o nmero de factores de transcrio aumenta o que permite uma melhor regulao.

Os enhancers esto afastados do incio da transcrio, no promotor distal embora se possam colocar um pouco por todo o gene. Enanceosomes o local de ligao entre vrios factores de transcrio e a RNA polimerase II, que interage para que ocorra a transcrio.

Nas clulas procaritas para a RNA polimerase II se tornar funcional apenas necessita da subunidade , j nas clulas eucaritas so necessrios vrias protenas: TFIIA TFIIB TFIID TFIIC TFIIH o As protenas TFII tambm so consideradas elementos cis e trans pois so indispensveis para o funcionamento da RNA polimerase II. o So adicionadas sequencialmente na zona promotora. Quais as funes de: Promotor proximal Posiciona correctamente a RNA polimerase II, atravs das vrias sequncias reguladoras, sendo o elemento fundamental para que ocorra a transcrio. o Tem cerca de 200 nucletidos (-200). o Contm elementos cis aos quais se ligam protenas que no fazem parte da RNA polimerase mas que so fundamentais para a sua regulao: Tata box: constituda essencialmente por timina e adenina (TATATATA). Existe na zona -30. Vai ser reconhecida por uma protena e que vai ajudar a RNA polimerase II a ligar-se. Nem todos os genes tm TATA box.

Sequncia iniciadora: Quando os genes no tm TATA box. Posiciona-se volta do nucletido +1. Y corresponde s pirimidinas, isto a T (Timina) ou A (Adenina). Antes do nucletido +1 aparece A (adenina). A seguir ao +1 pode ser um qualquer (N). Depois um T ou um A. Por fim, 3 pirimidinas. (Y). A sequncia ento a que se segue:

Ilhas de CpG: Se no tiver TATA box nem sequncia iniciadora.

Promotor distal Serve para a ligao dos factores de transcrio, permite aumentar ou diminuir a transcrio (activa ou inibe a transcrio). Iniciao pela RNA polimerase II:

1. A ligao da RNA polimerase II ao promotor proximal necessita de uma srie de protenas. A esse conjunto de protenas d-se o nome de TFII (factores de transcrio que esto associados RNA polimerase II). o Quando os genes tm TATA box (zona -30) primeira coisa a acontecer a ligao de uma protena TATA box, que a TBP introduzindo um ngulo de ligao onde se vai ligar a RNA polimerase II.

2. Seguidamente liga-se um factor de transcrio que chamado de TFIIB TBP.

3. Seguidamente a RNA polimerase II, que previamente se ligou a TFIIF, pois s assim, a RNA polimerase II se consegue ligar TBP e TFIIB formase ento este complexo proteico.

4. Ainda se liga a TFIIE RNA polimerase II.

5. E ainda a TFIIH que tem actividade de fosforilao fundamental para o funcionamento da RNA polimerase II forma-se ento o complexo de priniciao.

6. Ento so adicionados grupos fosfatos RNA polimerase II pela TFIIH. 7. S ento se vo ligar os nucletidos que so ligados pela RNA polimerase II, quando j tm o domnio terminal fosforilado. 8. A parir do momento que a enzima se liga ao DNA os TFII separam-se, pois estes tiveram apenas como funo a ligao da RNA polimerase II ao DNA. 9. A RNA polimerase II desloca-se ento, ao longo do DNA originando o RNA.

A RNA polimerase II tambm tem actividade helicsica, pois ainda vai separar as 2 cadeias do DNA e tambm capacidade de reparao do DNA quando ocorrem alteraes neste processo. Quando a TFIIH deixa de funcionar aparecem doenas como: Xeroderma pigmentosa. Sndrome de cockayne. O incio da transcrio pela RNA polimerase II pode ser regulada: Ex.: Transcrio do DNA que codifica o RNA que faz parte da estrutura do HIV. Elongao pela RNA polimerase II: Regulao durante a sntese dos primeiros 50 ribonucletidos. Exs HIV e HSP.

Terminao pela RNA polimerase II: Associada ao processo de clivagem e poliadenilao.

Transcrio do RNA mensageiro. Modificaes ps-transcricionais. Regulao da transcrio: Quando se forma o pr RNAm (tambm chamado de transcrito primrio) ainda no se encontra funcional, tem que sofrer modificaes (ocorre ao nvel do ncleo), nomeadamente: Adio de CAP: o Estrutura que se adiciona extremidade 5 do pr-RNAm.

o o

A estrutura CAP vai ser fundamental para a RNAm se ligar ao ribossoma. Estrutura CAP um nucletido modificado uma metiguanosina: A base guanina est metilada (azoto 7). Est associada a uma ribose (guanosina). Est associada ao grupo fosfato que faz parte dos nucletidos.

Adio de cauda poli A: o Na extremidade 3 o RNAm tem que ter uma sequncia de A (muitos 200, 300, 400), que adicionada por uma polimerase que reconhece o sinal de poliademilao. o Funo: Maior estabilidade do RNAm. O facto de existirem vrios A na extremidade permitia que fossem retirados alguns sem que o RNA perdesse a funcionalidade. Permite aumentar o tempo de vida do RNAm. Est relacionado com o processo de envelhecimento. Splicing: o Mecanismo especfico dos RNAm. o Consiste na remoo dos intres. Do pr-RNAm. o Os intres so muito maiores que os exes. o Os intres ficam no ncleo e vo ser degradados pelas RNAses. o Permite reconhecer os limites do intro (o incio e o fim). So os nucletidos na extremidade dos intres que tm de ser reconhecidos.

Os RNApequenos associados a protenas reconhecem as extremidades dos intres permitindo o corte rigoroso.

O pr-RNAm s se transforma em RNAm quando se torna funcional, isto , quando: capaz de ser traduzido. Ligar-se ao ribossoma. Originar uma protena. Uma doena que provocada pelo mau funcionamento do mecanismo do splicing o Lpus Eritrmatoso: Excesso de anticorpos anti-Sm. uma doena inflamatria crnica cuja a causa no se conhece. Pertence ao grupo de doenas autoimunes. Nestas, o sistema imunitrio, que habitualmente nos protege de estruturas que nos so estranhas, agride os nossos prprios tecidos. Associados ao splicing existem: Unidades de transcrio simples: o Tem os exes perfeitamente definidos. o Processa-se sempre da mesma maneira sendo retirados 2 intres, originando um tipo de RNAm. o S se pode formar uma protena. Unidades de transcrio complexa: o Os pr-RNA so processados de maneira diferente, podendo ser retirados diferentes intres, originando diferentes tipos de RNA a partir do mesmo gene. o A partir do DNA forma-se um pr-RNAm igual ao da unidade de transcrio simples, no entanto aquando do splicing, o reconhecimento do incio e do fim dos intres que pode ser diferente, originando assim diferentes RNAm: Ex.: Pode ter a parte inicial mas conter um maior nmero de aminocidos. o Podem assim formar-se 2 ou mais RNA pelo facto do splicing ser alternativo, ou ainda sinais diferentes de poliademilao.

Os mecanismos de ps-transcrio permitem um maior grau de regulao na formao dos RNAm e, portanto, uma maior variedade. O RNA mensageiro depois de todas estas alteraes a nvel do ncleo vai para o citosol onde se liga aos ribossomas e vai ser traduzido. Esta passagem do RNA do ncleo para o citosol faz-se atravs de uma estrutura poros: So estruturas em que a membrana interna e externa se encontram fundidos (sem parte lquida). Permite assim facilitar a passagem de substncias com carga, visto no existir uma zona hidrfoba, que normalmente limita a livre circulao de substncias atravs da membrana. O poro tem uma estrutura em que parte que se encontra virada para o citosol mais larga, e a que se encontra virada para o ncleo mais estreita (comparada com um cesto de basquetebol). Esta estrutura deve-se existncia de protenas que interagem e ajudam livre circulao de substncias entre o ncleo e o citosol. Este mecanismo est mais estudado na passagem de protenas do que de RNAs. o Sabe-se que se no tiver ainda sofrido as modificaes pstranscricionais no consegue sair do ncleo. o Ento s quando o RNAm se encontra funcional e com ajuda de proteas que se vo associar a este e vo arrasta-lo atravs do poro, o RNAm chega finalmente ao citosol (citoplasma). Quando o mecanismo de splicing no funciona correctamente e a RNA ainda com alguns intres consegue passar do ncleo para o citosol, so produzidas protenas anormais, responsveis pela causa de certas doenas, como: Thalassemias: o Doena que ocorre ao nvel do sangue (glbulos vermelhos) em que h produo de hemoglobina alteradas. No caso dos vrus os intres contm informao para a formao das protenas, isto porque: Tm de guardar muita informao em clulas que so muito pequenas. frequente que muitos genes se encontrem sobrepostos e, por isso, os intres tenham informao que na realidade seja importante para a formao da protena. Assim, quando um vrus infecta uma clula (ex.:vrus HIV) podem passar a transportar RNAm do ncleo para o citosol ainda contendo intres, sem que o processo do splicing esteja completo. Transcrio pela RNA polimerase I e Modificaes ps-transcricionais. O mecanismo da transcrio dos RNAr pela RNA polimerase I ocorre na parte central do ncleo mais corada nuclolo: Na clula podem existir mais do que um nuclolo. no nuclolo que se encontra os genes que codificam o RNAr, isto porque o RNA polimerase I se concentra nesta zona. o Actualmente sabe-se que a RNA polimerase est fixa ao DNA e este que se movimenta. o As imagens que foram inicialmente visualizadas ao microscpio electrnico da transcrio de RNAr, estas pareciam rvores de tal:

As linhas pretas compridas correspondem a RNAr que esto a ser transcritos pela RNA polimerase I. O promotor situa-se em baixo pois o local onde a RNA polimerase I se est a ligar, iniciando-se a produo de RNAr. Os riscos pequenos correspondem iniciao da produo de RNAr e os riscos maiores ao final da transcrio. So chamados de genes constitutivos pois esto constantemente a ser transcritos, logo os seus mecanismos de regulao no so to complexos como os da RNA polimerase II. O promotor tambm muito mais pequeno (200 nucletidos) do que o que codifica para a RNAm. Os elementos trans, neste caso so designados por UAF (upstream activated factor). Upstream (montante) corresponde a zona promotora. Downstream (jusante) corresponde unidade de transcrio.

O mecanismo de transcrio muito mais simples: Promotor mais pequeno. As protenas que se ligam so 3: o As primeiras a ligarem-se so UAF o AS protenas HKI e HIV ligam-se regio promotora. So histonas, no necessrio que estas se separem para que os genes sejam activados. Liga-se ainda TPG. S depois de todos estes factores estarem ligados que a RNA polimerase I se vai ligar. D-se ento o reconhecimento da RNA polimerase I, esta liga-se, separa as duas cadeias do DNA e inicia-se a transcrio. A RNA polimerase I volta a ligar as cadeias do DNA quando um sinal que indica o fim da transcrio.

O pr-RNAr depois de se formar atravs do processo da transcrio, ainda no se encontra funcional, ento sofre um conjunto de modificaes ps-transcricionais: Consistem em clivagens e metilaes. O pr-RNAr que se formou tem um tamanho de 45s. o Esta molcula de grandes dimenses vai ser separada em 2. o Sofre ento uma clivagem originado 2 molculas: 20s Vai sofrer uma clivagem e origina uma molcula de 18s. 32s Vai sofrer uma clivagem e origina 2 molculas: 28s e 5,8s medida que vo ocorrendo estas clivagens (hidrolases) estas so acompanhadas por metilaes (adio de grupos metil) por enzimas metilases. S depois dos RNAr formados terem os tamanhos correctos que vo passar do ncleo para o citosol. Ento associam-se a protenas formando os ribossomas. Transcrio pela RNA polimerase III. Modificaes ps-transcricionais. O RNA sintetizados pela RNA polimerase III so: Sintetizam RNA transferncia. Podem tambm produzir RNA pequenos. Sintetizam ainda RNA ribossomal: o 5s. Os RNAt e o RNAr (5s) tm pequenas dimenses e os seus genes encontram-se fora do nuclolo: Os genes que codificam para o RNAr (5,8; 18; 28) encontram-se no nuclolo. o So necessrios em grandes quantidades. Existem muitos genes. Muitas repeties. Mais de 100 genes que tm informao para estes 3 RNAs.

Cada gene pode ser transcrito por vrias enzimas ao mesmo tempo. O RNA (5s) tmabm faz parte do ribossoma. o necessrio tambm em grandes quantidades: Existem muitos genes. Mais de 100 genes que tm informao para estes RNA.

Esta RNA polimerase III funciona de um modo semelhante s outras: Reconhecer o promotor. Separa a cadeia de DNA. Liga as ribonucletidos. Separa-se quando existe um local de terminao. Iniciao: o Para o reconhecimento do promotor a enzima ajudada por factores de transcrio: TFIII (significa factor de transcrio associada polimerase III). No cado do gene que d origem ao RNAr (5s) so utilizados os factores: TFIIIA TFIIIB TFIIIC Estas protenas ligam-se regio promotora antes da RNA polimerase se ligar para dar origem ao RNAr (5s). A ligao destes 3 factores proteicos feita na zona +1, sendo assim, estes factores ligam-se ao DNA na zona que vai ser transcrita. A RNA polimerase III tambm se vai ligar. As enzimas fixam-se nesta zona e o DNA que vai avanar. Fica assim atrs da zona +1 e depois avana. Origina-se a RNAr (5s).

Este RNA (5s) dos poucos que mal acaba de ser feito j est funcional, sendo assim no vai sofrer modificaes ps-transcricionais.

Os 3 papis do RNA na Traduo: RNAm Transporta a informao gentica transcrita do DNA sob a forma de uma srie de sequncias trinucleotdicas, denominadas codes, cada um dos quais especificando um determinado aminocido. RNAt a chave para decifrar os codes do mRNA. Cada tipo de aminocido possui o seu prprio conjunto de tRNAs, os quais se ligam ao aminocido e o transportam para a extremidade em crescimento de uma cadeia polipeptdica. O tRNA possui uma sequncia de trs nucleotdeos, o anticodo que se liga ao codo do mRNA de acordo com as bases de complementares. RNAr Associa-se a um conjunto de protenas para formar os ribossomas. Essas estruturas complexas, que se movimentam fisicamente sobre uma molcula de mRNA catalizam a unio dos aminocidos sob a forma de ligaes peptidicas. Descoberta do Cdigo Gentico: Cdigo Gentico Conjunto de regras que estabelecem a relao entre 3 nucletidos e aminocidos. Existe 64 hipteses para 20 aminocidos. Tripleto AUG codifica a meteonina, que o primeiro tripleto de todas as protenas que se conhecem e, portanto o local a partir do qual o RNAm comea a ser traduzido. o Existem excepes: o caso das bactrias que comeam a traduo no tripleto GUG. Os codes STOP tm os tripletos UAG, UGA e UAA so o sinal para acabar a traduo, terminando assim a sntese da protena. O cdigo gentico universal igual para todos os seres vivos, pois a sequncia de tripletos que codifica um aminocido a mesma. o Existem excepes: Alguns protozorios. Mitocndrias. Cloroplastos. sem virgulas Os nucletidos so seguidos no h intervalos. Degenerado Podem existir repeties. Isto para cada aminocido pode existir mais do que um tripleto. A diferena entre tripleto, codo e anticodo: Tripleto Conjunto de 3 ribonucletidos em qualquer tipo de RNA. Codo 3 Ribonucletidos no RNAm. Anti-codo 3 Ribonucletidos no RNAt. A interaco entre o 3 nucletido do codo e o 1 nucletido do anti-codo diferente da complementariedade que ocorre normalmente nas regras de complementariedade entre ribonucletidos: chamado de fenmeno de Wobble. Consiste em haver um emparelhamento diferente do normal. Isto porque podem existir diferentes RNAt a ligar-se ao mesmo codo. Permite ento, aumentar a probalidade de interaco RNAm e RNAt a velocidade do mecanismo de traduo aumenta. O facto de haver vrios RNAt que codificam o mesmo aminocido no vai alterar a sequncia de aminocidos.

Mecanismo geral da TRADUO em clulas procariotas e eucariotas. O mecanismo de traduo pode ser dividido em 3 etapas distinas: Iniciao: O incio da traduo est relacionado com a activao do RNAt que j deve estar ligado a um aminocido, pois sem este activado no possvel iniciar este processo. Ainda necessria a presena de RNAm e ribossoma. Forma-se assim o complexo de iniciao: o RNAm o RNAt (activado) o Ribossoma o Pequena subunidade o Grande subunidade Essa associao feita do seguinte modo: o Nas clulas os ribossomas podem ter as suas 2 subunidades ligadas ou separadas. o Para que estas no se liguem (se mantenham separadas) necessria a ajuda de factores de iniciao. o Vai haver assim, factores de iniciao III que interagem com a pequena subunidade do ribossoma. o Ainda se vai ligar pequena subunidade do ribossoma o factor de iniciao I que est ligado ao GDP (utiliza o factor de iniciao I para se ligar subunidade). o S ento que este complexo se liga ao 1 RNAt que reconhece o codo AUG, transportando a metionina. o Este RNAt o primeiro a ligar-se pequena subunidade. o O mescanismo de reconhecimento do 1 codo AUG um pouco diferente nas clulas eucaritas e procaritas. O complexo de pr-iniciao vai-se ligar zona CAP do RNAm. Quando se forma esta ligao, o complexo de pr-iniciao vai-se deslocar ao longo do RNAm. At aparecer o 1 AUG que ento, reconhecido pelo codo de iniciao. Este liga-se pequena subunidade. Aps a associao entre pequena subunidade e o AUG vose libertar os factores de iniciao. Forma-se assim uma estrutura que constituda por RNAm, RNAt e subunidade pequena do ribossoama, s ento que se liga a subunidade grande do ribossoma formando o complexo de iniciao. Existe uma parte inicial que no traduzida, esta tem uma sequncia de nucletidos emparelhados com o RNAr da pequena subunidade, posicionando-se um pouco antes do codo de iniciao. Existe complementaridade entre o RNAr da pequena subunidade e o inco do RNAm. Que permite a correcta ligao da pequena subunidade.

Elongao: Consiste na continuao da ligao entre os aminocidos. O RNAm e o RNAt ficam no interior do ribossoma. Podem ser dessignadas 3 zonas diferentes onde ocorre a interaco entre o RNAm e o RNAt: o E Exit o P Pptido o A Aminocido O 1 RNAt (com a meteonina) liga-se ao RNAm no local P. Os RNAt que existem no citosol vo ser transportados at ao ribossoma e quando existe complementaridade entre as bases estes ficam l fixos. Vo ser transportados todos os RNAt que se encontram no citosol. o Quando h reconhecimento entre o codo e o anticodo fica fixo, seno no fica. o Para que haja o emparelhamento do codo anticodo necessria a ajuda de um factor EF1. O que permite os RNAt entrarem no ribossoma: o So os factores de elongao que se ligam ao RNAt e ao GTP, ficando assim o RNAt activado este pode ser transportado at o ribossoma (local A), onde se liga os prximos aminocidos e assim, sucessivamente. o Os factores de elongao saem do ribossoma, o que permite os 2 aminocidos formados ficarem mais prximos: Estabelecem assim uma ligao pptidica: uma ligao covalente. Necessita de energia para se formar.

Interveno de uma enzima peptidiltransferase que cataliza a reaco entre 2 aminocidos na formao da ligase. O ribossoma movimenta-se de 3 nucletidos, passando o RNAt que estava no local P para o local E, e o que se encontrava no local A desloca-se para o local P ficando o local A livre. o Este deslocamento chamado de translocao. Aquando deste movimento do ribossoma de 3 nucletidos ao longo do RNAm verifica-se que os RNAt mudam de posio. So ento novamente necessrios factores de elongao e GTP. O RNAt vai ento sair do ribossoma, posicionando-se no local E. Este processo ocorre tantas vezes quantas as forem necessrias para o nmero de aminocidos da protena que se vai formar. Forma-se assim, uma sequncia de aminocidos a que se chama polipptido (protena ainda no funcional), tornando-se numa protena quando passa a ter qualquer funo. Os factores de elongao fazem parte de uma famlia de protenas G: o Que esto associadas a muitos mecanismos de regulao. o As suas protenas rapidamente esto: Activas associadas a GTP (adenosina trifosfato) Inactivas associadas a GDP (adenosina difosfato) Quando o RNAt se desloca at ao ribossoma necessrio que o factor de elongao esteja associado aGTP. Quando o RNAt j est em contacto com a protena, o factor de elongao, deixa de estar associado ao GTP e passa a associar-se ao GDP (fica inactiva). o Para voltar a estar activa necessita de um factor de elongao que troque o GDP por GTP.

Terminao: O ribossoma que foi avanando ao longo do RNAm e a terminao inicia-se quando o ribossoma tem no local A um codo STOP (UAA, AUG ou UGA): o No existe nenhum RNAt complementar destes codes. o Quem reconhece esses codes so protenas factores de terminao. Os factores de terminao vo desfazer todo este complexo, separando-se assim: RNAt 2 Subunidades do ribossoma

A protena que acabou de se formar constituda por uma sequncia de aminocidos pptidos. o Estes pptidos tm que se enrolar: Existem protenas que no necessitam da ajuda de outras protenas, a prpria sequncia de aminocidos que determina o grau de enrolamento. A estrutura secundria (enrolamento em hlice ou em folha ) depende da estrutura dos aminocidos.

Estrutura terciria no se sabe o que responsvel pelo seu enrolamento. Umas vezes as protenas enrolam-se com ajuda e outras sem ajuda. Quando so ajudadas so pelas protenas que pertencem a uma famlia de protenas chaperons: Enrolam ou desenrolam outras protenas, utilizando energia que fornecida pelo ATP.

Estudo e Sntese do DNA

Estudo e sntese do DNA Replicao um mecanismo de sntese de DNA: As clulas necessitam de sintetizar DNA para se dividirem. o Ocorrer a duplicao das clulas. No necessrio replicao do DNA para fazer protenas novas (transcrio e traduo). A replicao um mecanismo semi-conservativo: Foi proposto por Watson e Crick. Considera que uma molcula de DNA d origem a 2 molculas de DNA filhas: o Cada uma das molculas filas que se formam constituda por: Uma cadeia de nucletidos da molcula-me. Uma cadeia de nucletidos nova. Quem demonstrou que era verdade foi Meselson e Stach.

A origem da replicao ocorre no meio do DNA: Nas clulas eucariticas (46 molculas de DNA) existem vrias origens de replicao: o O DNA feito em vrios sentidos at que se juntem os DNAs feitos a partir de diferentes origens de replicao. Nas clulas procariotas existe apenas uma origem de replicao. Para ocorrer replicao as molculas tm que se separar: Separam-se na parte central. O crescimento feito nos dois sentidos bidirecional o A molcula aberta numa parte central e a partir de um ponto origem de replicao ocorrendo sntese de DNA para os dois lados.

INICIAO Observao de uma molcula de DNA, observada ao microscpio de transmisso ( o que tm maior poder de resoluo).

A origem de replicao ocorre neste ndulo, quando h o afastamento aumenta o tamanho. Bolha de replicao zona onde existe a origem da replicao. Esta vai aumentando medida que o DNA vai sendo feito. A origem de replicao uma zona do DNA que tem informao para ser o local em que as duas cadeias se separam. Na origem de replicao tem que existir uma sequncia de bases especficas, nos quais se encontra uma sequncia de nucletidos repetidos. Para que se d inicio replicao, para alm de existir uma sequncia de bases especficas, as 2 cadeias do DNA tm que se separar, para isso ligam-se a protenas que tm como funo separar as 2 cadeias da molcula de DNA.

No caso da E. coli tem uma molcula de DNA circular, que est muito enrolada, onde existe a origem de replicao (250 nucletidos), nos quais existem uma sequncia de nucletidos que vai ser reconhecida por protenas: Primeira protena chama-se DNA A reconhece as repeties de nucletidos e liga-se, provocando um maior enrolamento da molcula de DNA. o Quando se enrolam muito a tendncia para se formarem tenses, que provocam a separao das 2 cadeias. o Para isso, necessrio, energia ATP. o Para estabilizar esta separao ligam-se outras protenas DNA B e DNA C que se juntam s bases para manter a zona separada e aumentam a bolha de replicao. DNA D ( uma helicase) uma enzima que tm a capacidade de separar as 2 cadeias de nucletidos por quebras de pontes de H entre 2 cadeias.

Mantm-se sempre ligada ao DNA e vai permitir a sntese da outra molcula de DNA.

A replicao pode-se dividir em 3 fases: Iniciao: o Reconhecimento da origem (bolha de replicao). o Inicio da separao das 2 cadeias (DNA helicase).

Elongao: o A enzima fundamental a DNA polimerase: Polimerase que sintetiza DNA. S funciona a partir da elongao. o A DNA polimerase s funciona no sentido: 5 3. o Como existem 2 cadeias molde: Uma tm o sentido 3 5 e portanto a cadeia que se forma tem o sentido correcto 5 3 e chama-se cadeia contnua. o A DNA polimerase catalisa reaces de condensao que so responsveis pela formao de ligaes fosfodister entre os nucletidos. No consegue ligar os primeiros nucletidos (5, 6 nucletidos), para ligar os seguintes: necessrio que na parte inicial se posicione uma sequncia de nucletidos de RNA primers ou iniciador

a partir dos quais a DNA polimerase j consegue fazer a sntese da cadeia complementar no sentido 5 3. Primers So fragmentos de RNA que so feitos medida que vo sendo necessrios. Como a replicao bidireccional so sintetizadas 2 cadeias em simultneo: medida que as 2 cadeias se separam vai haver sntese de pequenos fragmentos de DNA: Um no sentido 3 5 cadeia descontnua. Os pequenos segmentos de DNA que se formam chamam-se fragmentos de Okazaki. So uma mistura de um pequeno fragmento de DNA que se forma e de um pequeno fragmento de RNA que existe no inicio. Estes primeiros nucletidos no se ligam (5, 6 nucletidos). S a partir da a DNA polimerase consegue lig-los devido aos primers. Os fragmentos de RNA (primers de RNA) sero ento depois eliminados pela DNA polimerase. Vo-se formando vrios primers pela enzima primase estes tm de ser feitos de acordo com as regras de complementaridade entre as bases, consoante a cadeia molde do DNA a que se vo ligar. Os vrios fragmentos de Okazaki so depois ligados pela DNA ligase. Outro no sentido 5 3 cadeia contnua Forma-se um primer e a partir da forma-se uma cadeia contnua.

Em experincias in vitro, quando de utiliza apenas uma cadeia de nucletidos: Se colocar DNA B e a primase liga-se a protenas e comeam a fazer a sntese de DNA Depois estas protenas separam-se e vo ser reutilizadas para fazer a sntese de outro primer (so RNAs).

Nas bactrias a enzima envolvida na replicao a DNA polimerase III. Antes da enzima encontra-se a helicase, a primase e a Ssb protena que se liga ao DNA de cadeia simples que se liga porque: Quando se separam as cadeias de nucletidos as bases so complementares e a tendncia para voltarem a ligar-se. A Ssb evita que as 2 cadeias se liguem antes da DNA polimerase originasse a cadeia complementar. Uma vez que a mesma enzima (DNA polimerase III) que responsvel pela sntese de 2 cadeias (contnua e descontnua), para que no rebente: A cadeia molde descontnua tem de estar enrolada de modo a que a enzima prossiga em ambas as cadeias no mesmo sentido.

A DNA polimerase uma enzima formada por vrias subunidades (por isso de grandes dimenses): Existem na zona de DNA. Nem sempre esto fixas ao DNA, tm tendncia para se separar. Durante o processo de replicao necessrio que a DNA polimerase se mantenha ligada para seguir toda a molcula de DNA (que no pequena). formada por 2 subunidades: o Subunidade forma um anel que se associa ao DNA, permitindo assim que a enzima se ligue cadeia molde e no se separe at que o processo termine. Esta capacidade de a enzima no desligar chama-se processividade.

Existem vrias DNA polimerases: Clulas procaritas (E. coli) o 3 DNA polimerases diferentes Todas elas: Sintetizam no sentido 5 3 Capacidade exonuclesica capazes de degradar molculas de DNA ou RNA pelas extremidades. Se no fosse a capacidade endonuclesica no conseguiam fazer a degradao do meio para as extremidades. Necessitam de primer. A velocidade a que funcionam diferente: Quando se fazem mutaes nos genes que codificam estas enzimas pode ser letal: DNA polimerase I a mutao letal (a protena indespensvel) mais lenta, mas existem em maior quantidade, est associada ao mecanismo de reparao de DNA. DNA polimerase II dispensvel (no se sabe bem para que serve, talvez para substituir outras protenas, quando necessrias). DNA polimerase III indespensvel para a replicao pois tem uma grande velocidade de ligao entre os nucletidos. Clulas eucaritas (mamferos): o J foram identificados: 5 DNA polimerases diferentes: As DNA polimerases que esto associadas replicao so a (alfa) e a (delta):

2 Enzimas a fazer a replicao do DNA, onde 1 est mais associada cadeia contnua e outra a cadeia decontnua. A (beta) e a (epslon) no se sabe qual a sua funo. A (gama) uma enzima que se encontra na mitocndria, associada replicao de DNA mitocondrial. O facto de existirem vrias protenas com o mesmo nome, significa que tm algumas capacidades comuns: o Esto associadas realizao de funes nas clulas que so semelhantes. o Todas elas vo fazer sntese de DNA, mas esto adaptadas a situaes diferentes.

A actividade exonuclesica a mesma enzima tem 2 funes: Liga os nucletidos. Degrada molculas de DNA (sentido 5 3). importante para retirar os primers dos fragmentos de okazaki A enzima tambm tem actividade no sentido 3 5. o Quando as interaces entre nucletidos no so as correctas, provocando uma alterao na estrutura do DNA. o A DNA polimerase reconhece essa alterao, ento degrada o que estava a sintetizar, iniciando novamente a sntese. A DNA polimerase so enzimas que tm vrias actividades: Faz e desfaz ligaes fosfodister. o Isto porque a molcula tem grandes dimenses e so constitudas por vrias subunidades. o Cada uma das subunidades, que tm uma sequncia de nucletidos diferentes, consegue desempenhar funes diferentes. o As protenas tm domnios funcionais zonas indispensveis para que uma reaco qumica se realize.

As diferenas entre DNA polimerase e a RNA polimerase: DNA polimerase: o Tem capacidade exonuclesica. o Precisam de primers. o No tm capacidade elicsica. RNA polimerase: o No tm capacidade exonuclesica. o No precisam de primers. o Tm capacidade elicsica. Modelo da forquilha de replicao do DNA de SV40 a protenas associadas.

1. Um hexmero do antigene T. 2. Uma protena viral, funcional como helicase para desenrolar as fitas de DNA parental. As regies de fita simples do molde parental desenrolando pelo grande antigene T sofrem a ligao de mltiplas cpias da protena heterotrimrica RFA. 3. A fita lder sintetizada por um complexo de DNA polimerase (pol. ), PCNA e Rfc. 4. Os iniciadores para a sntese da fita retardada (em vermelho, RNA; azul-claro, DNA) so sintetizados por um complexo de DNA polimerase (pol.) e primase. 5. A seguir, a extremidade 3 de cada iniciador sintetizado pela Pol. primase sofre a ligao de um complexo PCNA-Rfc-Pol. , que proceder extenso do iniciador e a sntese da maior parte dos fragmentos de okazaki. A iniciao do vrus SV40 comea com o reconhecimento da origem de replicao pelo antignio T, que se liga: Separa as cadeias, que so mantidas separadas pela protena RFA. Liga-se polimerase alfa. A primase vai sintetizar o primer. A RFC associa-se primase e a polimerase alfa, permitindo a sntese do DNA. RFC sabe-se que indispensvel mas no se sabe a sua funo. A polimerase alfa vai ser substituda pela polimerase delta pela protena PCNA, para que a sntese seja feita pela polimerase delta. A partir da origem de replicao h uma cadeia contnua e uma descontnua.

Terminao: Existe um sinal que faz com que todas estas enzimas se separem do DNA, quando as 2 cadeias complementares j esto sintetizadas. O fim da replicao ocorre quando as 2 cadeias se juntam. Nas extremidades do DNA existem telomeros: o uma sequncia de nucletidos que evitam a degradao do DNA e que esto relacionados com o envelhecimento. o Em termos estruturais so repeties de sequncias CCGG, que vo ser repetidas muitas vezes. o Quem adiciona essas sequncias no a DNA polimerase mas sim a telomerase: So enzimas que levam no seu interior um fragmento de DNA que vai servir como cadeia molde. Uma vez que adicionam CCGG, esta protena tm GGCC que serve de molde. Tem a capacidade de fabricar este fragmento e adicionar a cadeia de DNA. Fabrica e liga as repities s pontas das molculas de DNA. Ainda existem outras enzimas que so importantes na replicao que so as: Topoisomerases: So responsveis pela topologia do DNA, isto , o grau de enrolamento do DNA.

Estas existem na extremidade do DNA e tem como funo verificar se o enrolamento est correcto ou no. Catalizam as reaces de condensao e hidrlise de ligaes fosfodister. A seguir s histonas so as topoisomerases as molculas mais abundantes no ncleo. Existem 2 tipos: o Topoisomerase I: Corta uma das cadeias e vai regular o grau de enrolamento. Quando h excesso de enrolamento liga-se cadeia vermelha e corta esta ligao covalente (desfaz uma ligao fosfodister). Entre os limites em que a enzima se ligou o enrolamento desfazse e a enzima depois de cortar consegue ligar: Corta Desenrola Liga Deixa assim de estar sujeita a foras que a podem partir. o Topoisomerase II: Corta as 2 cadeias numa mesma molcula. A molcula de DNA clivada simultaneamente. Nas bactrias quando uma molcula de DNA d origem a 2 molculas de DNA filhas ficamos com 2 molculas de DNA circular que esto encaixadas uma na outra. Cada uma delas vai para a sua clula filha. Uma delas vai ser cortada e separa-se da outra. A topoisomerase II muito importante nas clulas eucariotas porque: Tm uma grande quantidade de DNA enrolado. Cada vez que h replicao ou transcrio necessrio haver a separao das 2 cadeias. A topoisomerase no stio em que no se consegue separa as 2 cadeias, corta, repara e prosseguem-se os processos.

Noo de ciclo celular de clulas procariticas e eucariticas. As clulas humanas so diploides e a maior parte das clulas divide-se por mitose: A quantidade de DNA das clulas filhas exactamente igual ao DNA das clulas-me (2n). Antes de elas se dividirem necessrio uma fase em que as clulas tenham o dobro da quantidade de DNA (4n), isto ocorre na replicao. Replicao do DNA diferente de replicao celular: Replicao do DNA sintetiza-se DNA. Replicao celular uma clula d origem a duas, o mecanismo de diviso. Estes mecanismos no ocorrem em simultneo. Os processos de diviso celular so: Mitose: o Da energia de uma clula formam-se todas as clulas do nosso organismo. o Processo utilizado para realizar a proliferao celular. o Uma clula origina duas iguais. Meiose: o Processo de diviso das clulas que originam os gmetas. o Uma clula diferencia-se e d origem a 4 clulas filhas diferentes da clula me. Ciclo celular Conjunto de fenmenos que ocorrem numa clula, desde que se forma, por diviso da clula me, at ao momento em que d origem a 2 clulas filhas. A maior parte do ciclo celular corresponde interfase, que pode ser dividida em: G1: o Sucede-se mitose. o Durao varivel de clula para clula. o Verifica-se um crescimento intenso do citoplasma. o Quantidade de DNA permanece constante. S: o Replicao do DNA. G2: o Ncleo e a clula preparam-se para entrar na diviso.

Os neurnios so um exemplo de clulas que no se dividem: Perdem a capacidade de se dividir. No ocorre replicao. Passam da fase G1 para a G2 e ficam nesta fase.

Mitose. A fase que se segue ao perodo G2 a mitose, que embora seja um processo contnuo podem-se distinguir-se 4 etapas: Profase: o Condensao dos cromossomas, tornando-se visveis ao microscpio ptico. o Desaparecimento do nuclolo e do invlucro nuclear. o Formao dos microtubulos e do fuso acromtico. o Os centrolos dividem-se e deslocam-se para os plos opostos da clula. o O fuso acromtico alonga-se e os cromossomas alinham-se ao centro do fuso. Metafase: o Os centmeros dos cromossomas esto ligados s fibras do fuso acromtico e alinhados ao longo da placa equatorial. o Os centrmeros so duplicados e cada cromatdeo converte-se num cromossoma individualizado. o Cada um dos cromossomas liga-se a uma fibra do fuso acromtico, ficando-se assim a um dos plos. Anafase: o Os 2 cromatdeos j se encontram individualizados. Porque as interaces protena protena que se fazem sentir no centrmero so degradadas pela aco de proteases. o Asceno dos cromatdeos para os plos da clula. Telofase: o O fuso acromtico desintegra-se. o Descondensao dos cromossomas. o Reaparecimento do nuclolo e do invlucro nuclear. Para que se formem 2 clulas iguais individualizadas ainda ocorre a citocinese diviso do citoplasma.

Diviso I da Meiose: Profase I: o Fase mais longa da meiose. o No incio da fase, o ncleo aumenta de volume. o Os cromossomas sofrem uma esperalizao, a qual faz com que se tornem mais grossos, curtos e visveis. o Os cromossomas homlogos emparelham num processo denominado sinapse, formando as dadas cromossmicas ou bivalentes. o Comea-se a visualizar dois cromatdeos em cada cromossoma dos bivalentes. o Quando os bivalentes apresentam os quatro cromatdeos bem individualizados, denominam-se ttrada cromatdica. o Entre os cromatdeos das ttradas cromatidicas, ocorrem sobrecruzamentos em vrios pontos. A estes pontos de contacto chamam-se de quiasmas ou pontos de quiasma. o Nos pontos de quiasma ocorre troca de informao gentica, ou seja quebras e troca de segmentos entre os cromatdeos de cromossomas homlogos. Este processo designa-se de sobrecruzamentos ou crossing-over. o A membrana nuclear e o nuclolo desorganizam-se progressivamente. o Nas clulas animais, os centrolos, devidem-se e colocam-se em plos opostos, a partir dos quais se forma o fuso acromtico. o Finalmente as dadas cromossmicas deslocam-se para a zona equatorial do fuso. Metafase I: o Os cromossomas homlogos separam-se aleatoriamente (reduo cromtica) e afastam-se para plos opostos. o A asceno polar ocorre devido retaco das fibras do fuso acromtico. o No final desta fase os cromossomas encontram-se agrupados em cada um dos plos da clula. Telofase I: o volta de cada um dos grupos de cromossomas reorganiza-se o invlucro nuclear. o Os nuclolos reaparecem. o O fuso acromtico desorganiza-se. o Os cromossomas descondensam-se, ficando menos visveis. o No final, a clula fica constituda por dois ncleos haplides (n). o Em algumas clulas ocorre a diviso do citoplasma (citocinese). o Em algumas clulas, aps a diviso I, ocorre uma interfase sem perodo S (sntese de DNA). Diviso II da Meiose: Profase II: o Ocorre a condensao dos cromossomas tornando-se mais curtos e grossos, ficando mais visveis. o Formao do fuso acromtico. o O invlucro nuclear fragmenta-se e o nuclolo desaparece. Metafase II: o Os cromossomas apresentam a sua mxima concentrao. o Os cromossomas dispem-se na placa equatorial, equidistantes dos plos. o Os centrmeros ficam voltados para o centro desse plano e com os braos para fora, formando a chamada placa equatorial.

Anafase II: o Ocorre o rompimento do centrmero de cada cromossoma, separandose assim os cromatdeos. o Inicia-se a asceno polar, isto , as fibrilas ligadas aos cromossomas fazem-nos deslocar para plos opostos da clula. o No final, os cromossomas vo-se agrupando em cada um dos plos da clula, so haplides. Telofase II: o Os cromossomas atingem os plos da clula e volta de cada um destes grupos reorganiza-se o invlucro nuclear. o Os nuclolos reaparecem. o O fuso acromtico desorganiza-se. o Os cromossomas descondensam-se ficando menos visveis.

A meiose origina clulas com informao gentica diferente devido a: Separao ao acaso dos cromossomas homlogos. Existncia de crossing-over.

Quinases Protenas que permitem a passagem das clulas para as diferentes fases. Esto associadas a muitos mecanismos de regulao. Normalmente associam um grupo de fosfato a outra protena. constituda por: o Subunidade reguladora: Escolhem quais as protenas que vo ser fosforiladas. A regulao das diferentes fases do ciclo celular feita pela subunidade reguladora ciclinas variam ao longo do ciclo celular. Consoante as ciclinas que existem num determinado momento so fosforiladas diferentes protenas originando uma determinada fase. o Subunidade cataltica: capaz de transferir o grupo fosfato.

Mecanismo de Reparao do DNA: Os mecanismos de regulao do DNA: Clulas procariticas: o DNA polimerase I Clulas eucariticas: o DNA polimerase epslan e beta. Que no esto associados replicao. O DNA quando est sujeito a radiao ultravioleta: O exceso de radiao vai fazer com que os 2 carbonos se associem a outros 2 carbonos, ou seja, que se estabeleam ligaes entre 2 bases que esto seguidas: Normalmente as bases no se ligam entre si, mas sim com a cadeia complementar. O que faz com que o enrolamento do DNA vai ser alterado (mais enrolado). Essa zona vai ser reconhecida como alterada pela DNA polimerase I e com o auxilio de outras 3 enzimas (UvrA, UvrB, UvrC): Esta zona vai ser retirada e refeita pela DNA polimerase. No origina alterao das cadeias de nucletidos, uma vez que apenas uma das cadeias vai ser modificada: A cadeia molde fica completamnete intacta. Assim a sequncia de nucletidos que vai ser introduzida igual que existia inicialmente.

Transportes

Mecanismos de entrada de pequenas molculas na clula. As membranas constituem barreiras passagem de determinadas substncias: Conseguem passar: o Gases (CO2; O2, N2) o Etanol o Algumas molculas de H2O No conseguem passar: o A maior parte no consegue o Glucose o Aminocidos o Aucares o Nucletidos o Protenas o cidos nucleicos As membranas so constitudas por uma parte lipdica e outra proteica: Parte lipdica: o Funciona como barreira o Pode ser hidrfoba impede a passagem de substncias Parte proteica: o Seleccionam as substncias que passam o Existem 2 tipos de protenas: Extrnsecas Intrnsecas: So responsveis pelo transporte de substncias atravs da membrana. o As protenas que seleccionam o que passa atravs da membrana podem ser classificadas em 3 grupos: ATPases ou bombas: sempre contra o gradiente de concentrao. Gasta energia fornecida pelo ATP. A velocidade baixa. Canais inicos: S fazem o transporte de ies. Transporte de substncias a favor do gradiente de concentrao. No gastam energia. So os que permite a passagem de mais molculas por segundo. Transportadores: Uniporte Transporte de substncias a favor do gradiente de concentrao. Libertao de energia (no gasta) Simporte e antiporte Permitem sempre a passagem de 2 substncias uma contra e outra a favor. Simporte: Ambas as substncias vo para o mesmo lado da membrana. Antiporte: As substncias que passam vo cada uma para um lado da membrana.

o Qualquer uma destas protenas especfica pois selecciona o que vai passar, a grande diferena: A velocidade a que as molculas passam. Se h gasto ou no de energia associado a essa paragem. Se a passagem feita a favor ou contra o gradiente de concentrao: De um meio menos concentrado para um meio mais concentrado contra o gradiente de concentrao, uma reaco desfavorvel, no ocorre do ponto de vista termodinmico, a menos que esteja associada a outra reaco termodinmica favorvel. As setas na imagem simbolizam a concentrao de uma substncia. Estas so as condies fisiolgicas normais, no entanto, qualquer uma destas protenas pode funcionar ao contrrio. Em termos de transporte podem ser classificados do seguinte modo: Transporte activo: o Transporte primrio: Est associado a bombas. o Transporte secundrio ou co-transporte: Esto associados s protenas simporte e antiporte. Transporte passivo: o Difuso simples ou passiva: No est associada a nenhuma protena. As protenas que passam por difuso passiva so: Genes Alguma gua Molculas lipossolveis (molculas que conseguem penetrar em zonas hidrfilas) o Difuso facilitada: No necessita de energia. Est associada a protenas a favor do gradiente de concentrao

As substncias que passam por difuso facilitada so: Glucose Aminocidos Ies gua As protenas que esto associadas: Canais inicos: Ies e gua Protenas uniporte: Glucose e aminocidos

Caracterizao dos diferentes tipos de transporte passivos: Difuso simples e Difuso facilitada: A difuso simples ou passiva refere-se passagem de molculas lipossoluveis e possvel calcular a velocidade a que as substncias passam de acordo com vrios parmetros que esto definidos na equao a que se d o nome de Lei de Fick: O processo pouco especfico, qualquer molcula que tenha um coeficiente de partio alto consegue passar por difuso simples. Este coeficiente de partio a medida de afinidade da molcula relativamente a uma fase aquosa e uma fase lipdica. As molculas quando esto em contacto com a membrana distribuem-se pela fase aquosa e pela fase lipdica. Quando maior for o coeficiente de partio maior a lipossolubilidade da substncia, por isso mais facilmente atravessa a membrana.

Lei de Fick

A Lei de Fick corresponde a uma taxa de DNDT (o nmero de molculas que passam num determinado momento). Tambm possvel quantificar a energia que libertada. Quando uma substncia se movimenta de um meio de concentrao maior para um meio com menor concentrao vai haver libertao de energia que pode ser quantificada G variao de energia). Uma reaco favorvel termodinamicamente quando G negativo: Liberta energia: o Esta energia que libertada quando as substncias passam a favor do gradiente de concentrao fica retida na membrana (servem como reservatrios de energia). o Essa energia depois utilizada pelas substncias que passam contra o gradiente de concentrao. Por outro lado, existem molculas que para atravessarem a membrana necessitam de protenas, pois so lipossoluveis: Neste caso necessria a interveno de protenas. Gasto de energia. A difuso facilitada um processo muito especfico porque tm protenas associadas que seleccionam as substncias que atravessam a membrana: A taxa de transporte muito superior passagem de molculas prevista pela Lei de Fick, isto , esta lei no se verifica. A taxa de entrada de uma substncia no aumenta linearmente com o aumento da concentrao dessa substncia. possvel comparar com reaces enzimticas atravs da equao de Michaelis Mendis. Estes valores podem ser calculados com muito rigor se conseguirmos isolar uma protena especfica (um transportador) e colocarmos numa estrutura que tem o nome de lipossoma. Um lipossoma : Estrutura que tem dupla camada de fosfolpidos a formar uma espcie de uma esfera lipdica. Os lipossomas so um veculo que facilita entrada de substncias dentro das clulas. Tendo os lipossomas possvel controlar a concentrao das substncias dentro ou fora do lipossoma a ver a velocidade a que as substncias passam. As protenas uniporte esto relacionadas com o transporte de glucose e por isso so chamadas de GLUT. Nas clulas humanas existem pelo menos 12 protenas GLUT (12 genes diferentes): Depende das clulas em que se encontram So utilizadas com diferentes funes A protena GLUT que existe em praticamente todas as clulas a GLUT1 As substncias vo passar a favor do gradiente de concentrao As protenas vo se ligar especificamente a uma substncia H afinidade entre substncia e a protena o Estas ligam-se o Depois da substncia se ligar: Alteram a conformao da protena.

Permite a passagem da substncia para o outro lado da membrana. Quando a substncia passa: A protena passa a adquirir a sua estrutura original, em que facilita a ligao com a substncia.

Este grfico permite comparar a velocidade a que as substncias passam por difuso simples e difuso facilitada:

A GLUT1 permite a passagem muito mais rapidamente do que a GLUT2: GLUT1 existe nos eritrcitos e na maior parte das clulas. GLUT2 s existe nos hepatcitos (clula do fgado) e nas clulas do pncreas. Ainda existem: GLUT4 existem nas clulas musculares e adiposas. GLUT5 transporte de frutose. Todas as nossas clulas utilizam glucose, mas em certas situaes em que h excesso de glucose no sangue, o que vai acontecer que existem clulas especializadas que vo captar a glucose. A glucose fica ento, como substncia de reserva glicognio. As clulas em que h acumulao de glicognio so as clulas do fgado. o S quando as concentraes de glucose so muito altas que as clulas do fgado, vo captar maior quantidade de glucose e transform-lo em glicognio. por isso que existe a GLUT2 - Que tem muito menor afinidade com a glucose. - S quando as concentraes de glucose so muito elevadas que se verifica a entrada de glucose.

Bombas: Bombas classe P: Fazem parte: o Bomba de sdio-potssio. o Bombas que fazem o transporte de hidrogenies (H+) presentes nas bactrias, plantas e fungos. o Bombas que existem nas clulas epiteliais do estmago: Que faz a passagem de H+ e K+. o Bomba de CO2+ que existe nas clulas eucaritas, sobretudo nas clulas musculares. A regulao do clcio muito importante para a contraco. o O funcionamento destas bombas est relacionado com a hidrlise de ATP: Forma-se uma molcula de ADP O grupo fosfato necessita de estar ligado protena, ficando a protena fosforilada. Normalmente estas protenas no tm tantas subunidades como as outras bombas das outras classes.

Modelo operacional de uma bomba, ATPase classe P:

Bombas classe V: Encontra-se nas membranas vasculares de plantas e fungos. Tem muito mais subunidades. Utilizam ATP mas a protena no fica fosforiladas. Foram estudadas inicialmente nos vacolos.

Existem em grande quantidade tambm nas membranas dos lisossomas. So protenas associadas ao transporte de H+. So importantes na acidificao dos lisossomas e dos vacolos. A acidez tem a ver com concentrao de H+ e dentro dos lisossomas o pH (5) cido, enquanto, que no citosol 7 (neutro). o Para que este pH 5 se mantenha tem que haver constantemente a passagem de H+ do citosol para dentro do lisossoma. o Esta passagem contra o gradiente de concentrao.

Bombas classe F: Encontram-se nas membranas internas das mitocndrias Esta protena pode ter 2 nomes: o ATPsintetase o ATPase F0, F1 Funciona na parte final da respirao aerbia. A produo de ATP est associada passagem de H+ a favor do gradiente de concentrao, atravs desta protena, que simultaneamente uma enzima que cataliza a reaces ADP+P > ATP. Estas bombas em condies fisiolgicas normais funcionam a favor do gradiente de concentrao e libertam energia para produzir ATP. o Do ponto de vista funcional classificada dentro dos transportes activos.

Bombas ABC superfamily: Protenas associadas a resistncia a vrias drogas. Existem na membrana celular das bactrias. Foram estudadas quando se tentou perceber porque existiam drogas que eram dadas no tratamento de cancro que no entravam nas clulas matando as clulas cancerosas, isto porque: o As drogas para entrarem nas clulas normalmente so lipoflicas, assim atravessam a membrana. o Estas drogas eram lipofilicas, entravam dentro das clulas, mas a clula reconhecia as substncias como txicas. o E utilizavam estas protenas para expulsar as drogas. No so to especficas como as outras protenas de transporte porque eliminam uma srie de substncias diferentes. Tm uma estrutura com 4 subunidades. Necessitam de ATP para funcionar. Nas bactrias esto associadas entrada de substncias e nutrientes.

Quando estas bombas no funcionarem correctamente surgem doenas (associadas a alteraes da expresso de genes), nomeadamente: Adrenoleucodistrofia doena associada alterao das molculas que permitem a entrada das molculas no peroxissoma. Doena de Tangier associada ao transporte de lpidos e colestrol que afectado. Canais inicos: Os canais inicos do protenas muito importantes: Fazem a regulao da concentrao inica dentro das clulas. A concentrao dos ies tem de se manter constante e normalmente so concentraes definidas em cada clula. A concentrao mais baixa do que dentro das clulas no caso: o Sdio o Cloro o Bicarbonato o Magnsio o Clcio As clulas gastam muita da sua energia a manter a concentrao dos ies constantes, pois se tal no acontecesse as clulas acabavam por morrer porque os ies esto envolvidos em muitas reaces qumicas. o Muitos ies se ligam directamente s enzimas e s depois desta ligao que as enzimas podem funcionar. So tambm muito importantes na regulao do potencial da membrana: o Potencial da membrana diferena de cargas de um e de outro lado da membrana. o O facto de as membranas serem selectivas vai fazer com que a concentrao de um e outro lado da membrana sejam diferentes. o O potencial elctrico de uma membrana anda volta de 70 milivolts (mv). o A membrana tem maior potencial elctrico do que um cabo de alta tenso. No caso de as membranas serem impermeveis temos concentrao de KCI e KNa de um lado e de outro da membrana diferente. o Como a membrana impermevel no h passagem de ies e por isso no h potencial elctrico.

Se a membrana for permevel ao sdio, o que acontece que s o sdio que vai atravessar: Cria-se uma diferena de carga de um lado e de outro da membrana e, portanto um potencial de -60mV

Se a membrana for permevel ao potssio, o que acontece que s o potssio vai atravessar: Cria-se um potencial de +60mV

Os canais inicos so muito especficos: As protenas seleccionam os ies que passam baseando-se no seu tamanho. Quando os ies passam pelos canais tm que se dissociar das molculas de gua: o Isto porque esto normalmente associados a molculas de gua. A abertura do canal est feita para permitir apenas a passagem do io. o Assim interage directamente com a protena. o Induz alteraes na protena que permitem passagem de grandes quantidades de ies simultaneamente. Quando um io passa atravs de uma membrana liberta mais energia do que se for uma substncia sem carga. o Porque soma a variao de energia resultante da diferena de: Concentrao Potencial elctrico que se cria na membrana.

Protenas uniporte: Deixam passar as molculas de acordo com a equao de Michaelis Mendis que est associada s reaces enzimticas.

Caracterizao do transporte activo: No transporte activo secundrio ou co-transporte: Envolve a passagem de duas ou mais molculas em que: o Uma se encontra contra o gradiente de concentrao. o E a outra a favor do gradiente de concentrao. As protenas que so associadas neste processo so: Simporte transportam substncias para o mesmo lado da membrana. Antiporte transportam substncias para lados diferentes das membranas. Existe uma maior concentrao de ies sdio fora das clulas: Os ies de sdio tm tendncia a entrar para dentro da clula, a favor do gradiente de concentrao. Muitas vezes a entrada de ies sdio atravs da membrana conseguida graas a protenas antiporte e simporte.

Osmose:

O processo de osmose ocorre quando solues com diferentes concentraes so postas em contacto: A gua pensa sempre da soluo hipotnica a que possui uma maior quantidade de gua e portanto menor concentrao de soluto para uma soluo hipertnica que possui uma menor quantidade de gua logo uma maior concentrao de soluto. A movimentao da gua efectua-se at se estabelecer uma igual concentrao de solutos dos dois lados da membrana, isto at os meios permanecerem isotnicos. Qual a funo das tight junctions? Para que as clulas epitiliais polarizadas funcionem, os fluidos extracelulares que rodeiam as membranas apical e basolateral das clulas tm de se manter separados das mesmas. Isto garantido pelas tight junctions, que fazem a conexo entre as clulas epitiliais. Portanto, as clulas adjacentes (apical e basolateral), de modo a que as molculas solveis em gua no possam passar entre as clulas. Sem este tipo de junes, a composio do meio nas 2 faces (interna e externa) do epitelio tornava-se uniforme. Por exemplo, nas clulas epitiliais do intestino, as tight junctions normalmente encontram-se mesmo abaixo da superfcie apical das microvilosidades. Quando observada ao ME, a tight junction apresenta zonas nas quais existem pontos de contacto intimo entre as membranas plasmticas, zonas estas que alteram entre si em intervalos idnticos.

O que so GAP junctions? (Plasmodesmos) So associaes de protenas conexinas, que permite a entrada de substncias nas clulas. Permite a passagem de pequenas molculas e fazem a ligao entre molculas adjacentes. A abertura e fecho destes canais (plasmodesmos) dependem da estimulao hormonal. Se houver um aumento de (clcio), a protena transportadora de clcio activada. Quando a hormona se liga a uma clula, h um aumento de (AMPc), e h abertura ou fecho dos canais. A informao de abertura ou fecho de canais transmitida de clula para clula.

O que um desmossoma? uma estrutura em que h ligao entre as fibras do citoesqueleto. D a estrutura a um tecido de suporte e manuteno das posies relativas entre as clulas.

Vias de Secreo

Viso geral da principal via de distribuio de protenas em clulas eucarticas. Todos os RNAm codificados no ncleo so traduzidos nos ribossomas citoslicos. Esquerda (Via Secretora). 1 e 2 Os ribossomas sintetizando protenas nascentes na via secretora so direccionados para o reticulo endoplasmtico rugoso por uma sequncia sinal do RE. 3 Aps o final da traduo RE essas protenas podem mover-se atravs de vesculas de transporte para o complexo de golgi. 4a e 4b As etapas de distribuio adicionais transportam as protenas para a membrana plasmtica ou para os lisossomas. Direita (Vias no-secretoras) 1 - A sntese das protenas que no apresentam uma sequncia-sinal para o RE completada em ribossomas livres. 2 As protenas que no contm as sequncias de direcionamento so libertadas para dentro do citosol e l permanecem. As protenas com uma sequncia de direcionamento primeiro so libertadas no citosol. 3 a 6 Para depois serem importadas para dentro das mitocndrias, dos cloroplastos, dos peroxissomos ou do ncleo.

Retculo endoplasmtico liso e rugoso. Estrutura e funo do retculo endoplasmtico: As protenas tm funes e fundamental que estejam localizadas nos stios certos dentro das clulas. Quando se produz uma protena h um dispndio de energia clula, sendo necessrio mobilizar ATPs e outras molculas, por isso a protena tem que se deslocar para o stio onde vai exercer a sua funo.

As protenas tambm tm de adquirir a sua estrutura tridimensional quando saem do ribossoma: Existem protenas que depois de serem feitas enrolam-se, adquirindo a sua estrutura tridimensional. Outras no: o Necessitam da ajuda das protenas chaperons. Famlia de protenas que se associam a outras protenas e que enrolam ou desenrolam custa da energia fornecida pelo ATP. Para alm de adquirirem a sua estrutura tridimensional, tambm tm que ser modificadas depois de adquirirem a sua estrutura: As protenas que so feitas podem situarem-se, consoante a localizao dos ribossomas: o Citosol o Ligadas membrana do ritculo o Dentro dos organitos Depois tm de adquirir marcas, que se encaminham para o local onde vo exercer a sua funo. Dependendo do local onde vo desempenhar a sua funo, as protenas so produzidas: o Citosol (livres) vo para o ncleo. o Ligadas membrana do retculo tm vrios destinos as protenas (so chamadas de protenas de secreo). o Dentro dos organitos (mitocndrias e cloroplastos) ficam dentro desses organitos. O movimento das protenas dentro das clulas para se deslocarem para os seus stios correctos, comeou a ser estudado associado s protenas de secreo (que vo para o exterior das clulas). o Funcionam no exterior das clulas e tm uma funo especfica. o mais fcil estudar protenas que se encontram no exterior das clulas do que dentro: Dentro das clulas existem 10000 protenas diferentes. Fora das clulas existem vrias mas no so to diversificadas e em grande abundncia. o Exemplos de protenas de secreo que so: Secretadas continuamente: Albumina Transferrina Lipoprotenas Imunoglobinas Fibroblastos Vias de secreo Percurso que as protenas fazem desde o local onde so produzidas at ao exterior. Foi inicialmente observada por microscopia. o Marcou-se radioactivamente as protenas que saam das clulas. o Utilizou-se uma clula secretora, que se adicionou aminocidos radioactivos. Assim possvel distingui-las das outras protenas que existem dentro das clulas. Observou-se assim, o percurso das protenas radioactivas: Retculo endoplasmtico rugoso Aparelho de golgi

Exterior atravs das vesculas Associado a esta via existe ainda o lisossoma (que tambm segue o mesmo percurso).

Ribossomas livres: (REL) Protenas que ficam no citosol. Protenas do citoesqueleto. Protenas que vo para o ncleo. Protenas que vo para os peroxisomas. Protenas que vo para as mitocndrias e para os cloroplastos. Ribossomas ligados s membranas: (RER) Protenas que entram na via de secreo que vo para o exterior. Protenas intrnsecas da membrana. Protenas que vo para lisossomas. Protenas que fazem parte do retculo e do aparelho de golgi. No existe grande diferena entre retculo endoplasmtico liso e rugoso: O facto de estarem ribossomas ligados ou no transitria, no definitivo. To depressa o retculo endoplasmtico tem ribossomas ligados como no. As protenas para entrarem no retculo, para que assim se inicie a via de secreo, necessitam de uma marca: Ligam-se s membranas do retculo e iniciam todo este processo. Esta marca tm o nome sequncia sinal: o Foi definida por comparao entre uma protena que entra para dentro do retculo e uma protena que feita artificialmente num ribossoma livre, fora da estrutura da clula. o Quando se faz essa comparao verifica-se que as protenas que entram dentro do retculo e tm uma sequncia de aminocidos sequncia sinal: So os primeiros aminocidos da protena que vo ser reconhecidos (vo ser a marca), permitindo que as protenas entrem no retculo.

Assim, compararam-se vrias sequncias sinais para definir uma sequncia consensos, no entanto verificou-se que no tinham nada em comum e, por isso tambm no h uma sequncia consensos.

Protena pr a sequncia de aminocidos que as protenas adquirem quando no entram para o retculo endoplasmtico. Ex.: pr-albumina: ainda tem uma sequncia de aminocidos a mais. As sequncias sinal so cerca de 20 a 25 aminocidos e o que h de comum entre todos eles que predominam aminocidos hidrfobos e com carga positiva. Experincias permitem concluir que no h diferenas do ponto de vista funcional entre ribossomas livres e ligados e ambos tem a capacidade de produzir quanlquer tipo de protenas. A distino entre as protenas que so produzidas nos ribossomas livres e nos ligados possvel, tem a ver com a protena que est a ser produzida, se tiver sequncia sinal, os ribossomas ligam-se membrana do retculo, se no tiverem sequncia sinal no se ligam ao retculo. Quando a protena produzida possvel verificar que o ribossoma separa-se das protenas e passa a ser livre: A populao de ribossomas livres e ligados artificial pois tem a ver com a protena que est a ser sintetizada. A sntese de protenas tem de ser feita em simultneo com, a entrada isto : Os ribossomas tm que se ligar quando a protena est a ser feita. A protena comea a entrar na membrana do retculo antes de ser feita. o Este mecanismo chamado de transporte co-traducional o transporte feito em simultneo com a traduo: Envolve uma srie de interaces com a protena para permitir a interaco entre o ribossoma e as entradas. A protena acaba por entrar para o retculo atravs de vrios processos: O RNAm vem para o citosol, liga-se aos ribossomas e comea a sintetizar a protena. Quando a protena tem uma srie de aminocidos associados os primeiros aminocidos comeam a sair para fora dos ribossomas. Estes primeiros aminocidos sero a sequncia sinal, que vai ser reconhecida pela partcula reconhecedora de sinal (SRP). Entretanto o ribossoma vai avanando no RNAm e vai aumentando o tamanho da protena. A SRP quando reconhece liga-se sequncia sinal. o Esta ligao permite que haja aproximao entre os ribossomas e as membranas do retculo. O ribossoma liga-se assim directamente a um conjunto proteico que es dentro da membrana do retculo com o nome de transloco. o O transloco que serve de poro, permitindo a passagem da protena que est a ser feita atravs da membrana. Na membrana do retculo tambm existe uma protena chamada sinalpeptidase que retira os primeiros aminocidos (a sequncia sinal), ficando assim a protena no retculo j sem sequncia sinal.

Legenda: Sntese de protenas secretadas e seu transporte co-traducional atravs da membrana do RE: Etapa 1 e 2 Uma vez que a sequncia sinal para o RE emerge do ribossoma, ela ligada por uma partcula de reconhecimento de sinal (SRP). Etapa 3 A SRP encaminha o complexo ribossomo / polipeptdeo nascente para o receptor de SRP na membran do RE. Essa interaco fortalecida pela ligao de GTP SRP e ao receptor da SRP. Etapa 4 A transferncia do ribossomo / polipeptdeo nascente para o transloco leva abertura desse canal de transporte e insero da sequncia sinal e do segmento adjacente do polipeptdeo crescente para dentro do poro central. Ambos, a SRP e o receptor da SRP, uma vez desassociados do transloco, hidrolisam o seu GTP ligado, e ento, prontos para a iniciar a insero de uma outra cadeia polipeptdica. Etapa 5 Enquanto a cadeia polipeptdica se alonga, ela atravessa o canal de transloco para dentro do RE onde a sequncia sinal clivada por uma peptidase sinal e rapidamente degradada. Etapa 6 A cadeia peptdica continua a se alongar enquanto o RNAm traduzido em direco extremidade 3. Como o ribossoma est ligado ao transloco a cadeia crescente expelida atravs do transloco para o lmen do RE. Etapa 7 e 8 Uma vez a traduo esteja completa, o ribossoma libertado, o resto da protena arrastada para o lmen, o transloco fecha-se e a protena assume a sua conformao final. Os elementos que so ento necessrios para que a protena entre no retculo so: SRP consttuida por 6 protenas e por um RNApequeno que existe no citosol. o RNAp servem para reconhecer o incio e o fim dos intres e tambm formam uma estrutura que reconhece a sequncia sinal e que fundamental para a entrada das protenas no retculo, por isso tambm so importantes na secreo. o Nas bactrias existe uma partcula semelhante SRP que tambm vai reconhecer a sequncia sinal das protenas bacterianas que so enviadas para o exterior. As funes da SRP so: Reconhecer a sequncia sinal. Aproximar o ribossoma da membrana. As protenas que possuem sequncia sinal ficam pelo caminho.

Quando para a traduo, impede que seja produzida a protena a memnos que o ribossoma esteja ligado a um receptor ( membran do retculo). o A protena s falta se o ribossoma se ligar membrana do retculo endoplasmtico. o Assim, garantido que a protena vai entrar para o interior do retculo, para a via de secreo.

Este processo envolve o gasto de energia sob a forma de GTPs que est associado a mecanismos de regulao: O reconhecimento que feito pela partcula SRP s possvel quando uma das 6 protenas est ligada a um GTP (fase activa). A ligao do receptor s se faz quando uma das protenas do receptor est associada a GTP. As protenas Gs quando ligadas a: o GTP activas. o GDP inactivas. Depois de existir interaco as protenas ficam inactivas, ou seja, o GTP passa a GDP. Dentro do retculo ainda existe uma protena chamada Bip, que muito abundante no retculo e que associada protena quando esta est a entrar pelo transloco: Ajuda a puxar a protena que est a entrar ao longo do translco. Gasta ATP que resulta da interaco com a outra protena. Foi classificada como protena chaperon. Ainda ajuda as protenas que entraram a enrolar-se correctamente. Protena sinal peptidade protena que hidrolisa a sequncia final. A maior parte das protenas intrnsecas da membrana (tm uma parte hidrfoba na sua estrutura) foram feitas nos ribossomas ligados ao retculo endoplasmtico. Existem vrios tipos de protenas intrnsecas: Protenas do tipo I: A maior parte da protena est virada para o interior do retculo.

Legenda: Sntese e insero na membrana do RE das protenas do tipo I. Etapa 1 Depois que o complexo ribossomo / cadeia nascente se associa a um transloco na membrana do RE, a sequncia sinal na extermidade clivada. Etapa 2 e 3 A cadeia alongada at que a sequncia-ncora hidrofbica de finalizao de transferncia seja sintetizada e entre no transloco, onde ela impede que a cadeia nascente seja expelida mais adiante para dentro do lmen do RE.

Etapa 4 A sequncia-ncora de finalizao de transferncia move-se lateralmente entre as subunidades do transloco e ncora na bicamada fosfolpidica. Nesse momento provavelmente o transloco fecha-se. Etapa 5 Enquanto a sntese continua a cadeia que est se alongando pode formar uma ala para dentro do citosol atravs do pequeno-espao entre o ribossoma e o transloco. Etapa 6 Quando a sntese est completa, as subunidades ribossomais so libertadas para dentro do citosol, deixando a protena livre para difundir pela membrana. A parte inicial est virada para o citosol e a parte terminal para o retculo endoplasmtico e a maior parte da protena tem a sua estrutura no interior do retculo. A maior parte da estrutura est virada para o citosol (parte terminal). Protenas que atravessam as membranas vrias vezes.

Nas protenas intrnsecas a zona que est dentro da regio hidrfoba corresponde a cerca de 20 aminocidos, maioritariamente com uma estrutura secundria em hlice . As protenas intrnsecas ficam dentro da membrana porque: O processo o mesmo: o O RNAm vai ser traduzido. o Produz-se uma protena que tem uma sequncia sinal. o por esta razo que o ribossoma se aproxima da membrana. o Passa pelo transloco. o A protena vai passando ao longo do transloco. A diferena: o Quando a protena passa ao longo do transloco, aparece uma sequncia que chamada sequncia ancoradora, que impede que a protena continue a passar ao longo do transloco. o A protena continua a ser feita, mas a parte final fica virada para o citosol. Isto acontece nas protenas do tipo I: Para alm da sequncia sinal ser retirada, tem uma outra sequncia de aminocidos (sequncia ancoradora) que faz com que a protena fique dentro da membrana. Nas protenas do tipo II verifica-se que: A sequncia sinal e a sequncia ancoradora so a mesma sequncia de aminocidos. A sequncia sinal e ancoradora no est no incio da protena, mas no meio desta: o A protena comea a ser feita. o S quando aparece a sequncia sinal que o ribossoma se aproxima da membrana. o A sequncia sinal em vez de ser clivada fixa a protena membrana e o ribossoma continua a sntese da protena. o As protenas dispem-se do seguinte modo: A parte inicial fica virada para o citosol. A parte terminal fica virada para o retculo endoplasmtico.

Legenda: Sntese e insero na membrana do RE das protenas do tipo II. Etapa 1 Depois que a sequncia-sinal-ncora interna sintetizada em um ribossoma do citosol, ela ligada por uma SRP (no mostra) que direcciona o complexo ribossomo / cadeia nascente para a membrana do RE. Etapa 2 Enquanto a cadeia alongada e expelida para o lmen, o sinal-ncora interno se move lateralmente para fora do transloco e ncora a cadeia na bicamada fosfolpidica. Etapa 3 Uma vez que a sntese da protena esteja completa, a extremidade CTerminal do polipeptideo libertada para dentro do lmen e as subunidades ribossomais so libertadas para o citosol. Quando as protenas entram para dentro do retculo tm de continuar o percurso at chegarem ao exterior, entrando para dentro de organitos e passando destes para outros. As protenas entram para dentro de organitos uma vez que estes vo ser importantes para direccionarem as protenas no seu percurso. Quando as protenas entram no retculo endoplasmtico vo sofrer modificaes e consoante estas vo: Originar a sua estrutura tridimensional correcta. Adquirir marcas que indicam para onde a protena se tem de dirigir. As modificaes ps-traducionais que as protenas vo sofrer no retculo endoplasttico so: Clivagem da sequncia sinal. Glicosilao. Formao de ligaes persulfuretos (S-S). Aquisio de estrutura quartenria. Clivagem da sequncia sinal: Consiste em retirar os primeiros aminocidos que se tinham inicialmente formado constituindo a sequncia sinal. S ocorre clivagem da sequncia sinal no retculo endoplasmtico porque s as protenas que possuem sequncia sinal so que entram no retculo. S dentro do retculo que existe a enzima que faz a clivagem da sequncia sinal chamada peptidase.

Glicosilao: Adio de acares protena. Existem 2 tipos de glicosilao: o Tipo N o Tipo O O mais frequente o Tipo N. A glicosilao inicia-se no retculo endoplasmtico e vai continuar no complexo de golgi. A glicosilao pode ter vrias funes: o Funo final que a protena vai exercer: Estabilizar a estrutura tridimensional das protenas. Podem ser marcar para as protenas se encaminharem para outros locais especficos. Formao de ligaes persulfureto: Ligaes que se fazem entre 2 tomos de enxofre que existem nos aminocidos. Uma doena que pode surgir do enrolamento incorrecto da protena : Enfisema: o Ocorre um enrolamento anormal da protena. o Resulta de uma mutao pontual, de um nico nucletido. o O enrolamento incorrecto impede que a protena continue a sua via de secreo e no vai para o exterior. Aquisio da estrutura quaternria: Quando as protenas entram para o retculo esto desenroladas atravs do transloco. Para que no sejam degradas imediatamente no retculo tem de adquirir a sua estrutura tridimensional (terciria e quaternria) correcta. Dentro do retculo existe uma protena muito importante protenas BIP que ajuda a puxar a protena para o retculo, mas tambm ajudam as protenas a adquirir a sua estrutura tridimensional correcta. No obrigatrio que todas as protenas tenham todas estas modificaes: Existem protenas intrnsecas em que no h clivagem da sequncia sinal. A maior parte das protenas que entram para o retculo, no so protenas de secreo mas sim protenas que no vo ficar no retculo: So enviadas para o complexo de golgi, atravs das vesculas. As protenas para ficarem no retculo tm que possuir uma marca. Aparelho de golgi. Estrutura e funo: O complexo de golgi formado por: Cisternas so compartimentos de maiores dimenses normalmente achatados e empilhados. volta das cisternas existem pequenas vesculas, que permitem a passagem das protenas de umas para as outras cisternas. Funo: o As protenas quando passam de umas cisternas para as outras vo sofrer reaces qumicas, que podem ser: Adio de acares (glicosilao)

Acetilaes Fsforilaes Metilaes Estas reaces permitem adicionar s protenas grupos que vo funcionar como marcas.

A formao de complexos de golgi forma-se do seguinte modo: Forma-se a partir das vesculas que saem do retculo endoplasmtico. Vrias vesculas que saem do retculo fundem-se e formam uma cisterna cis. Seguidamente a cisterna cis transforma-se em mdia e esta em trans. A trans acabam por desaparecer formando-se muitas vesculas. Diminui o tamanho da cisterna, que acaba por desaparecer. o Existe assim, uma contnua movimentao das cisternas em relao periferia: Transporte das vesculas at ao exterior chama-se antergrado. Ao contrrio (para trs) chamam-se retrogado. Modificaes ps-traducionais das protenas: As glicosilao tipo N (predominante no retculo) vo permitir a formao de marcas que indicam se as protenas esto prontas para sair do retculo, encaminhando-se para o complexo de golgi, atravs de vesculas. As glicosilaes tipo N tinham imensos acares associados (3 glucoses terminais das 9 manoses): o Dentro do retculo vai haver perda das 3 glucoses e de 1 manose. o Quando as protenas tm os acares, com esta conformao a marca para as protenas continuem o seu percurso complexo de golgi. Glicosilaes no complexo de golgi: o So diferentes consoante as protenas esto nas cisternas: Cis: As protenas continuam a perder aucares. Mdias: Adio e perda de acares. Trans: Predomina a adio de acares. o Os acares que so adicionados s protenas vm do citosol: Estes acares esto normalmente associados a nucletidos. So estes que vo ser adicionados s protenas. Os nucletidos vo entrar para o complexo de golgi atravs de protenas antiporte: As protenas antiporte tm o nome das substncias que transportam. O mecanismo o transporte activo secundrio. 1 Das molculas vai a favor do grandiente de concentrao e outra vai contra. As protenas que ficam dentro do golgi tem marcas: Esta marca correponde a 25 aminocidos que esto na zona hidrfoba, que so caractersticas das protenas intrnsecas da membrana do aparelho de golgi o A sua estrutura em hlice Se as protenas no tiverem estas marcas para ficarem no complexo de golgi deslocam-se: Exterior Membrana citoplasmtica Lisossomas

Lisossoma: Mecanismos de entrada no lisossoma do material que vai ser degradado: As enzimas que esto dentro dos lisossomas so as hidrolases: Funo do lisossoma: Degradar as macromolculas atravs de uma reaco qumica chamada hidrlise. Consiste na quebra de 1 ligao covalente na presena de uma molcula de H20. As hidrolases que esto dentro dos lisossomas so cidas: o S funcionam a pH cido. o Estas enzimas no citosol so inactivas pois o pH no citosol 7. A marca das hidrolases amnose-6-fosfasto (carbono 6 da manose fosforilado). As prtenas que se deslocam para os lisossomas (hidrolases), em vesculas, tm uma marca menos conhecida, sendo retirado o grupo fosfato: Quando no existem hidrolases funcionais nas clulas: o Origina falta de capacidade de degradao nas clulas. o As substncias que deveriam ser degradadas nos lisossomas fazem com que, estas substncias se acumulem no lisossoma. As protenas que entram no lisossoma (hidrolases) so degradas em aminocidos e so enviadas para o citosol, podendo ser reutilizadas para fazer outras protenas. Proteossoma Local alternativo de degradao das protenas. As protenas podem ser degradadas no lisossoma ou no proteossoma ( mais especfico). Durante a passagem das vesculas do aparelho de golgi para o exterior ainda h modificaes das protenas: Clivagens Protelise retira alguns aminocidos Secreo constitutiva quando as protenas medida que se vo fazendo, vo sendo enviadas para o exterior. Secreo regulada protenas que so enviadas para o exterior em resposta a um estmulo. Ex.: insulina: o Para se tornar funcional necessrios que sejam retirados os aminocidos que se encontram na zona central, ficando formada apenas pelos iniciais e terminais associados atravs de ligaes peptdicas. Nos mecanismos em que se formam hormonas para originarem uma determinada resposta verifica-se sempre um aumento da concentrao de clcio. As clulas que fazem secrees so normalmente polarizadas.

Mecanismos de formao e fuso de vesculas. Durante a via de secreo, as protenas atravessam a membrana do retculo endoplasmtico, ai nesse organito sofrem modificaes e vo continuar o seu percurso: No entanto, ao longo do restante percurso no vo necessitar de atravessar mais nenhuma membrana pois: o Vo ser inseridos em vesculas, quando saem do retculo. o Esta vescula vai migrar para o prximo organito. o Quando h fuso da membrana do organito com a vescula, o contedo despejado. o As protenas vo sempre dentro de vesculas percorrendo os seguintes organitos: Retculo Cisternas cis do complexo de golgi Cisternas mdias do complexo de golgi Cisternas trans do complexo de golgi Exterior Sendo assim, existe uma grande acumulao de vesculas nestas zonas.

A formao de uma vescula feita por uma protena G: Encontra-se no citosol Vai ser activada Para isso, tem de estar associada a GTP Quando est activada: o Insere-se na membrana o O que vai desencadear o processo de formao de vesculas: Envolve a acumulao de protenas responsvel pela formao da franja, que envolvem as vesculas. A claterina que foi a proimeira protena a ser identificada, que ajudava a puxar a membrana para fora, permitindo ento a gemulao. Ocorre uma salincia na membrana H a sua separao As vesculas vo fundir com a membrana do organito onde se dirigem

Outra protena que tambm est envolvida neste processo a protena snare, que importante para a fuso das membranas da vescula com o organito para onde se dirige. o Assim, quando se aproximam 2 membranas, estas fundem-se imediatamente na presena desta protena.

Existem vrios tipos de vesculas diferentes a formar a franja: COP II: o Vesculas que fazem o movimento das protenas do retculo para o complexo de golgi. COP I: o Vesculas que fazem o movimento das protenas de umas cisternas para outras no complexo de golgi. o Vesculas que fazem o movimento das protenas do complexo de golgi para o retculo. Claterina: o Vesculas que fazem o movimento das protenas entre as cisternas trans do complexo de golgi e a membrana. Quando a vescula est formada estas protenas desaparecem, ficando apenas constituda pela sua membrana. Endossoma vescula que se forma quando o material entra por endocitose (reentrncia da membrana). Na membrana das vesculas existe a protena V-snare (v vescula) que vai interagir com a T-snare do organito de chegada, ocorrendo a fuso: A fuso das membranas resulta ento da interaco entre as protenas V-snare e t-snare. As protenas que esto envolvidas na fuso tm sempre uma zona fora da membrana (estrutura em hlice ). o As hlices permite o enrolamento de umas protenas com as outras: Permitindo aproximar a vescula da membrana. As protenas GTPases, pertencem famlia RAB, determinam se a vescula se encaminha para um organito ou para a membrana citoplasmtica. Entrada de macromolculas, partculas e microrganismos. Endocitose: H a formao de vesculas um mecanismo especfico da membrana citoplasmtica para a entrada de substncias dentro das clulas. H uma ivanginao da membrana, isto : o Deposio de uma protena colaterina que puxa a membrana e origina a formao de uma vescula. O destino das vesculas que entram por endocitose o lisossoma. o Durante o percurso estas vesculas chamam-se endossomas (entraram por endocitose). Pode ser: o Especfico: O que entra seleccionado. o Inespecfico: Chama-se pinocitose (est associado a protenas). Fagocitose O material tem maiores dimenses do que o material que entra por endocitose: Normalmente est associado a vvrus e bactrias.

Imite prolongamentos envolvendo o que vai entrar.

Viso geral das vias secretora e endocitica de distribuio das protenas:

Legenda: Etapa 1 as cadeias do polipeptdeo recm-sintetizadas so inseridas na membrana do RE ou a atravessam em direco ao lmen. Algumas protenas permanecem no RE. As restantes so empacotadas em vesculas de transporte. Etapa 2 que brotam a partir do RE e fundem-se, formando uma nova cisterna de cisgolgi. As protenas residentes no RE transportadas erroneamente, e as protenas da membrana das vesculas reutilizveis so recuperadas e traduzidas no RE por vesculas. Etapa 3 formadas a partir do cis-golgi que se fundem ao RE. Cada cisterna cis-golgi, com seu contedo proteico, move-se fisicamente, da face cis para a face trans do complexo de golgi. Etapa 4 por um processo no vesicular chamado processo cisternal. O transporte retrgado. Etapa 5 transporta as protenas residentes no golgi para o seu compartimento correcto dentro do golgi. Em todas as clulas, determinadas protenas solveis so transportadas para a superfcie celular em vesculas de transporte. Etapa 6 e so secretadas continuadamente (secreo constitutiva). Em certos tipos celulares, algumas protenas solveis so armazenadas em vesculas secretoras. Etapa 7 e liberadas somente aps a clula receber um sinal hormonal ou neuronal adequado (secreo regulada). As protenas solveis e da membrana destinadas ao lisossoma, que so transportadas em vesculas formadas no trans-golgi. Etapa 8 primeiro movem-se para o endossoma tardio e dai para o lisosoma. Via endcita: as protenas extracelulares solveis e de membranas incorporadas em vesculas formadas a partir da membrana plasmtica. Etapas 9 tambm podem ser transportadas para o lisossoma pelo endossoma.

Citoesqueleto

Citoesqueleto. Microfilamentos: Filamentos de actina e miosina. Em ambas as extremidades dos microfilamentos (+ e -) associam-se e dissociam-se actinas, a velocidade em que acontece que diferente. Crescimento do microfilamento: o Extremidade + - verifica-se um grande aumento de tamanho. o Extremidade - - verifica-se um aumento pequeno de tamanho. Diminuio do microfilamento: o Extremidade + - verifica-se uma grande diminuio de tamanho. o Extremidade - - verifica-se uma diminuio pequena de tamanho.

Estas diferenas de crescimento e diminuio em que se verificam esto relacionadas com a concentrao crtica necessria para serem adicionadas actinas: Extremidade + - basta haver uma concentrao de 0,1 micromolar. Extremidade - - tem de haver uma concentrao de 0,6 micromolar. o No caso da concentrao der inferior concentrao critica no ocorre nem aumento nem diminuio do microfilamento. o No caso da concentrao ser igual concentrao critica o tamanho do microfilamento mantm-se constante. o No caso da concentrao ser superior concentrao critica ocorre aumento ou diminuio do microfilamento. Os microfilamentos mesmo que mantenham o seu tamanho, verifica-se que a actina est sempre a ser renovada. Existem substncias que impedem o constante movimento de renovao da actina, que podem ser produzidas por vrios microrganismos: Ex.: Doena apoloidina O aumento e diminuio da actina no dependem apenas da actina mas tambm de outras protenas: Estas protenas associam-se s actinas e podem: o Incentivar a sua polimerizao. Ex.: profilina. o Inibir a sua polimerizao: Ex.: timosina, protenas caping o Cortar microfilamentos: Protenas serium, gelsolina As bactrias entram nas clulas por fagocitose e movimentam-se at s zonas centrais: No entanto, no possuem clios nem flagelos. Assim, emite uma substncia qumica, que induz a polimerizao dos microfilamentos por trs da bactria. o O que permite a bactria ser empurrada para a zona central. O movimento das protenas apenas da responsabilidade da protena miosina: A miosina pertence a uma famlia de genes que produzem: o Miosina tipo I, II, VI, XI o Tem uma estrutura em que existem 2 subunidades: Uma globular Uma alongada Enrolam-se em hlice

Estas diferentes miosinas so responsveis por diferentes tipos de movimentos: o Miosina tipo I movimento dos organitos para dentro da clula. o Miosina tipo II forma fibras. constituda por: Cabea Pescoo Cauda Formam uma estrutura em que tm as cabeas viradas para o mesmo, lado e as caudas para uma zona central, originando fibras de miosina (de protenas motoras). o Miosina tipo VI associadas endocitose (invaginao da membrana).

Protenas motoras protenas que esto associadas a movimentos, que tm de estar associados a microtubulos ou microfilamentos. Para funcionarem necessitam de enrgia (ATP) e o mecanismo geral da miosina consiste: o A zona globular da miosina liga-se ao microfilamento e s membranas. o As cabeas das protenas motoras ligam-se s fibras e hidrolisam ATP. o A cabea da protena associada actina, na presena de ATP, promove a separao entre 2 protenas. o O ATP vai ser hidrolisado. o A conformao da miosina vai ser alterada, esticasse e liga-se actina, por intermdio de clcio. o A miosina liga-se ao microfilamento fixo e desloca-se ao longo deste promovendo ligaes e separaes. o No caso, da miosina formar fibras de miosina II, esta fica fixa e o microfilamento que se move. O movimento dos organitos que se encontram nas clulas no aleatrio: Quando a miosina se movimenta, a vescula vem por arraste. Estrutura dos msculos e sua funo. A miosina tipo II forma fibras que so muito importantes no tecido muscular: Est presente em todas as suas clulas. Tm a capacidade de se contrair e distender. por esta razo que estas clulas tm uma certa maleabilidade. No mecanismo de citocinese, de diviso do citoplasma: Na parte central da clula organizam-se fibras de actina e miosina que permitem a contraco. Esta contraco aproxima 2 membranas. Ocorrendo a sua fuso. Originando assim 2 clulas independentes. o Em experincias em que retira a miosina tipo II verifica-se: Quando as clulas se dividem, como no ocorre a separao das clulas, forma-se uma clula enorme com imensos ncleos.

possvel distinguir 2 tipos de tecidos musculares: Tecido muscular liso: o As clulas tm um aspecto fusiforme o S tm 1 ncleo o Tm muitas mitocndrias, pois necessitam de muita energia (ATP) para as ligaes actina-miosina. o um tecido que reveste o intestino, em que se verifica a contraco dos vasos sanguneos. o Existem fibras de actina e miosina que esto dispersas e sarcmeros. o Mecanismo de contraco muscular. Tecido muscular esqueltico: o formado por fibras de grandes dimenses o Com uma forma cilndrica o Existe retculo sarcoplstico: Consiste numa modificao do retculo endoplasmtico porque: Nestas clulas a secreo praticamente no existe. Os organitos associados via de secreo perdem a sua funcionalidade. O retculo endoplasmtico transforma-se num compartimento, em que a sua funo principla guardar clcio. Tem estruturas chamadas microfibrinas, onde se encontram as unidades responsveis pela contraco sarcmeros. o Funo: associado a movimentos voluntrios, resultantes de impulsos nervosos. Contraco muscular: Os filamentos de actina so encontrados nos msculos esquelticos, proporcionando a contraco muscular. A contraco muscular depende do deslizamento direccionado de um conjunto de filamentos de actina sobre um conjunto de filamentos de miosina II. As clulas musculares esquelticas, so formadas por filamentos denominados de miofibrilas. As miofibrilas so formadas por unidades que se repetem denominadas sarcmeros. Que confere ao msculo-esqueltico, uma aparncia estriada. A contraco muscular causada pelo encurtamento simultneo de todos os sarcmeros, causados pelo deslizamento de actina sobre miosina. A contraco desencadeada por um aumento repentino na concentrao de clcio no citosol.