PREPARAO DE LMINAS DE PONTA DE RAIZ DE CEBOLA PARA ESTUDO DE MITOSE INTRODUO

As pontas de raiz de cebola, por serem m8aterial fcil de obter e por apresentarem crescimento acelerado, so excelentes para estudo da MITOSE. A fixao importante para a estrutura interna e impedir alguma modificao da composio qumica ou da forma dos componentes do material em estudo. O corante e idencia estruturas pelas quais tem afinidade. !orantes bsicos so usados para obser a"es cromoss#micas por serem os cidos nuclicos os componentes celulares mais bas$filos. !armim%actico, Orcena%actica, &eulgen e 'iemsa so corantes mais comumente empregados. (egue%se s )idr$lise, para tornar o tecido macio e de fcil esmagamento. Os corantes acticos funcionam tambm como )idrolissadores. *o caso da colorao &eulgen, usa%se cido clordrico. A )idr$lise no de e ser muito prolongada, pois pode le ar + desintegrao de todo tecido.

OBJETIVO: MATERIAL:

,reparar l-minas de ponta de raiz de cebola para obser ao de mitose. .icrosc$pio 0-minas lamnulas /gua destilada e ,onta de raiz de cebola Orcena actica 1!l 2*

PROCEDIMENTO
3. Obten)a bulbos de cebola roxa em bom estado. !orte as razes secas, 4spete 5 a 6 palitos no bulbo, de forma a sustenta%lo na boca de um copo com gua da torneira, at tocar no que restou das razes. 7eixe em repouso por alguns dias, at obter razes de 3 a 8cm. 8. *um recipiente tampado, )idrolise as razes com 1!l 2* por 89 minutos :o 1!l oltil;. 5. <ransfira as razes para um recipiente com gua destilada enquanto prepara as l-minas. 6. !oloque uma ou duas coifas em uma l-mina e com um basto macere%as le emente para obter clulas mais indi idualizadas. !oloque uma ou duas gotas de orcena actica e deixe corar por 2 minutos. 2. !ubra com lamnula= !omprima sua emente o con>unto l-mina e lamnula entre dois papis de filtro para retirar o excesso de corante e parafine as bordas da lamnula : oc? poder usar esmalte incolor;. @. Asando o bocal de caneta BmacereC o tecido para romper os nDcleos. E. Obser e ao microsc$pio as di ersas fases da mitose.

2
Passe para o GRANDE AUMENTO e obser e: N!CLEOS INTER"#SICOS O $ides e centrais. A cromatina apresenta%se como gr-nulos bas$filos muito finos. O nDcleo, 3 ou 8 por clula, mostra%se como gro maior e bem definido no interior do nDcleo. N!CLEOS EM DIVISO MIT$TICA Apresentam cromatina condensada, formando cromossomos tambm bas$filos e organizados em diferentes fases. PR$"ASEF nDcleos de forma arredondada com cromatina em gr-nulos ou filamentos grosseiros de ido + condensao gradati a que ocorre nesta fase. A condensao torna os cromossomos indi idualizados. 4stes mostram%se compostos pelas cromtides, dois elementos longitudinais id?nticos que carregam 7*A duplicado na interfase. O nuclolo pode ser isualizados no incio da pr$fase, mas desorganiza%se no final desta. MET#"ASEF cromossomos muito condensados, formando filamentos curtos e espessos dispostos na regio equatorial da clula. AN#"ASEF cromtides separadas migram para os p$los opostos da clula. TEL$"ASEF os cromossomos, nos p$los, comeam a descondensar%se e o material nuclear olta + forma arredondada. A parede da clula egetal encontra%se em formao, di idindo o citoplasma das clulas%fil)as no final desta fase :citocinese;. %UESTION#RIO
3. 7esen)e em cores suas obser a"es, nomeando as fases da mitose. 8. !aracterizar as fases da mitose obser adas no microsc$pio. 5. ,esquisar sobre a diferena entre a mitose e meiose.

TE&TO COMPLEMENTAR SOBRE O

CICLO CELULAR

O ciclo celular compreende duas :98; etapas coordenadasF crescimento= di iso em duas clulas%fil)as. !ompreende os processos que ocorrem desde a formao de uma clula at sua pr$pria di iso em duas clulas%fil)as, todas iguais entre si. O estudo da di iso celular mostrou que o ciclo celular consiste em duas etapasF de um lado, aquela compreendida entre duas di is"es sucessi as, em que a clula cresce e se prepara para no a di iso, denominada '()*r+ase. A outra a etapa da di iso propriamente dita, pela qual se originam duas clulas%fil)as e que se caracteriza pela di iso do nDcleo, c)amada ,ar'o,'(ese ou -')ose, seguida pela di iso do citoplasma, ou ,')o,'(ese. O crescimento e a di iso celulares devem ser regulados e coordenados de tal modo que o ciclo transcorra em um equilbrio que assegure a manuteno das caractersticas celulares essenciais na prog?nie. ,or exemplo, para que se conser e constante o taman)o celular nas clulas%fil)as, o crescimento de e ser compensado com a di iso celular. Gsso significa que a durao do ciclo tem que se a>ustar perfeitamente ao tempo que a clula necessita para dobrar seu taman)o. Assim, e itado que a clula se>a cada ez menor, ou maior, dependendo do tempo de durao do ciclo em relao + massa celular. 4ssa coordenao requer que mecanismos de controle operem em pontos especficos do ciclo celular. *as clulas eucariontes, o controle do processo de reproduo celular feito por di ersos produtos g?nicos, que so, por sua ez, regulados por fatores extracelulares, se>am eles nutrientes ou fatores de crescimento, que fazem com que a di iso celular ocorra coordenadamente com as necessidades do organismo como um todo. Hesumindo, a '()*r+ase com as fases '3, ( e '8, consiste em ,res,'-e()o ,e./.ar, 0/p.',a12o 0o ,o()e30o e prepara12o para (o a 0' 's2o4 a -')ose compreende a 0' 's2o 0o (3,.eo e seguida pela di iso do ,')op.as-a. A di iso celular o perodo em que a clula reparte igualmente o seu conteDdo, > duplicado na intrfase, em duas clulas, denominadas clulas%fil)as. 4sse perodo inclui essencialmente dois processosF a repartio exata do material nuclear, c)amada, no sentido estrito, de -')ose :do grego mitos, fio, filamentos; ou ,ar'o,'(ese :kario, nDcleo, e kinesis, mo imento; e a 0' 's2o ,')op.as-5)',a ou ,')o,'(ese :kitos, clula;. 4m sentido amplo, no entanto,costuma%se identificar a mitose como a pr$pria di iso celular. ,ara facilitar seu estudo, a mitose subdi idida em quatro etapasF pr6+ase7 -e)5+ase7 a(5+ase e )e.6+ase.

GRUPO DE ESTUDO 3. &aa um res/-o simplificado do captulo I :C',.o ,e./.ar e Me'ose; do li ro do Junqueira K !arneiro :pginas3E3 a 3IE;. Ao terminar o resumo faa uma propos)a es8/e-5)',a 0e ,o-o o,9 repassar'a esses ,o()e30os .e a(0o e- ,o(s'0era12o o ro)e'ro '(','a. 0o .' ro :pg.3E3 e3E8; proposto pelos autores.

MITOSE
,rocesso pelo qual as clulas de animais se di idem, produzindo, cada uma, duas clulas id?nticas + original. A reproduo de clulas%fil)as iguais + original tem como finalidade repor as clulas mortas no organismo, ou possibilitar o aumento do nDmero delas nos

4
processos de crescimento. Outro processo de di iso celular a meiose, que produz duas clulas com metade dos cromossomos da clula%me. *o perodo que antecede a mitose, ocorre a duplicao dos cromossomos, numa fase denominada de intrfase. 4nto, os filamentos simples de cromossomos passam a ser duplos, recebendo o nome de cromtides. *as clulas )umanas, os 6@ cromossomos passam a ser 85 pares, unidos por um ponto denominado centr#mero. A di iso da clula realiza%se em cinco diferentes fasesF pr$fase, pr$metafase, metfase, anfase e tel$fase. Pr6+ase L *o nDcleo da clula, os cromossomos condensam%se e passam a ser cada ez mais curtos e grossos. *o citoplasma, massa fluida dentro da clula na qual o nDcleo est mergul)ado, os dois centrolos :organ$ides que se localizam >unto ao nDcleo e respondem pelo mo imento dentro das clulas; se duplicam e comeam a migrar em dire"es opostas. Pro-e)5+ase L A membrana nuclear rompe%se e os cromossomos espal)am%se pela clula. 4stes iro se prender no con>unto de fibras, cu>as extremidades terminam pr$ximas aos centrolos, agora > localizados em p$los opostos na clula. Me)5+ase L O con>unto de fibras, denominado fuso acromtico, forma uma MponteM entre os dois centrolos, que esto localizados nas extremidades da clula. As cromtides permanecem no meio da clula. A(5+ase L Os centr#meros rompem%se, os pares de cromossomos separam%se em lotes id?nticos e so puxados para os p$los opostos da clula na direo dos centrolos, indo constituir o nDcleo das clulas%fil)as. Te.6+ase L Os cromossomos de cada p$lo entrelaam%se, de modo que no se pode mais distingui%los separadamente, at ficarem in is eis e serem en ol idos dentro de um no o nDcleo. As fibras do fuso desaparecem e a clula comea ento a se di idir, dando origem a duas clulas independentes.

MEIOSE
,rocesso de di iso celular no qual clulas dipl$ides, ou se>a, com dois lotes de cromossomos, do origem a quatro clulas )apl$ides, com apenas um lote de cromossomos. 4ssa forma de di iso possibilita a formao dos gametas :clulas sexuais;. *as clulas )umanas dipl$ides :somticas; existem 6@ cromossomos. Atra s da meiose, elas passam a ter 85 cromossomos. *o processo de fecundao )umana, ocorre a unio de dois gametas dos pais, resultando em um o o com 6@ cromossomos. A meiose respons el pela di ersificao do material gentico nas espcies. A reproduo sexuada permite a mistura de genes de dois indi duos diferentes da mesma espcie para produzir descendentes que diferem entre si e de seus pais em uma srie de caractersticas. A meiose ocorre em duas etapas que, por sua ez, se subdi idem em pr$fase, pr$metafase, metfase, anfase e tel$fase. A fase que antecede a meiose con)ecida como interfase, quando os cromossomos da clula se duplicam e se apresentam como filamentos duplos, as cromtides. Pr6+ase : L Os cromossomos )om$logos, ou se>a, que possuem a mesma forma e constituio, se >untam formando pares. !ada par de cromossomos composto por quatro cromtides, ligadas por dois centr#meros, que so pontos que as unem. *esse estgio existe uma recombinao do material gentico, denominado como permuta ou crossing-over. Pro-e)5+ase : L As cromtides tomam forma espiral. A membrana do nDcleo desaparece, fazendo com que elas se espal)em no meio da clula. Me)5+ase : L As cromtides encontram%se presas por um con>unto de fibras, denominadas fuso acromtico.

5
A(5+ase : L Os grupos de quatro cromtides separam%se em grupos de dois, sendo le ados cada um deles aos p$los opostos da clula. Te.6+ase : L Os cromossomos condensam%se e os p$los da clula reorganizam%se em dois no os nDcleos. 0ogo depois a clula di ide%se em duas, dando fim + primeira fase. A segunda fase da meiose mais simples. Pr6+ase ; L Os nDcleos das duas clulas desaparecem e as cromtides espal)am%se pelo citoplasma. Me)5+ase ; L O fuso acromtico ocupa as regi"es centrais, mantendo presas as cromtides na regio equatorial da clula. A(5+ase ; L O ponto que une os pares de cromtides se parte, di idindo%as. !ada um comea, ento, a ser puxado para os p$los opostos. Te.6+ase ; L Os cromossomos condensam%se, os nDcleos reaparecem e o citoplasma, massa fluida dentro da clula na qual o nDcleo est mergul)ado, se di ide dando origem a duas no as clulas. A principal caracterstica da meiose ser um tipo especial de di iso celular que permite aos cromossomos )om$logos, presentes na clula original, se emparel)arem intimamente e efetuarem o interc-mbio de material )ereditrio : crossing-over;. A troca fsica real de 7*A entre os cromossomos materno e paterno de um par de )om$logos resulta em uma mistura dos genes parentais, o que le a, por sua ez, a um significati o aumento das combina"es genticas. !om esta maior recombinao g?nica, ocorre uma maior ariabilidade dos tipos de gametas formados ao final de cada meiose, o que contribui com uma mais alta di ersidade de organismos e fa orece a maior adaptao e oluti as das espcies,. 4m Dltima anlise, o processo de recombinao gentica acelera o processo e oluti o das espcies. 4mbora o crossing-over aparentemente se>a o Dnico e ento c)a e da meiose que resulta em ariabilidade gentica, existe um segundo fator ainda mais importante que este, a segregao independente dos cromossomos )om$logos, que ocorre durante a a(5+ase I. A -e'ose7 +or-a(0o ,*./.as ,o- -e)a0e 0o (3-ero 0e ,ro-osso-os )<p',o 0a esp*,'e7 per-')e 8/e7 ,o- a /('2o 0os =a-e)as >ap.6'0es ?(@ se res)abe.e1a (os (o os '(0' <0/os o -/(0o 0'p.6'0e ?;(@ 0e ,ro-osso-os ,ara,)er<s)',os 0a esp*,'eA

ATIVIDADE
0eia o captulo 9I do li ro BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR do Junqueira e !arneiro e o captulo 98 do li ro BASES DA BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR do 7e Hobertis e faa um resumo mais abrangente sobre 7i iso !elular.

C*./.a e- 0' 's2o (o 5p',e ra0',/.ar 0e ,ebo.a ?Allium@A