Faculdade Cincias Farmacuticas FBC0513 Bioqumica Clnica

Determinao da atividade plasmtica das Transaminases

Fernando V. Mansano Helio T. Jeng

Gabriela Molina Joana D. Campeiro As transaminases so enzimas intracelulares que permitem a trans er!ncia de grupos amina de "cidos aminados para ceto"cidos# em rea$%es designadas por rea$%es de transamina$o. A constante de equil&brio para a maior parte das transamina$%es ' pr()ima da unidade# o que signi ica que estas rea$%es so re*ers&*eis. Cada transaminase ' espec& ica para um par de amino"cidos. A A+T# aspartato amino,trans erase -ou transaminase glut.mico o)alac'tica/ catalisa a seguinte rea$o0 !T "c# asprtico $ "c# %&ceto'lutrico ( "c# o)alac*tico $ "c# 'lut+mico

A A1T# alanina amino,trans erase -ou transaminase glut.mico pir2*ica/ catalisa a seguinte rea$o0 ,T lanina $ cido %&ceto'lutrico ( cido pir-vico $ cido 'lut+mico

As transaminases e)istem em quantidades m&nimas no sangue de um indi*&duo normal# mas ap(s destrui$o celular e)tensa elas aumentam signi icati*amente. +o enzimas indicadoras de morte celular. 3)istindo em quantidades importantes nas c'lulas 4ep"ticas# card&acas# musculares e do pulmo# a leso celular nestes (rgos le*a ao aumento da ati*idade s'rica destas enzimas# como acontece# por e)emplo# nos quadros de 4epatite e de en arte de mioc"rdio. As transaminases t!m um papel importante nas rea$%es re*ers&*eis de trans er!ncia de grupos amina entre pares de 5,amino6 5,ceto"cidos# na trans er!ncia de grupos amina para produtos transportadores e na sua elimina$o. 7o soro normal# a A+T e)iste em quantidade superior 8 A1T.

3stas enzimas so intracelulares0 a A1T ' citoplasm"tica e a A+T ' citoplasm"tica e mitocondrial. Aumentos patol(gicos das transaminases0 9/ Hepatite aguda -tamb'm nas 4epatites cr:nicas/0 se a leso ' super icial e di usa# A1T;;A+T. </ Hepatites t()icas -4epatite alco(lica aguda/. =/ Cirrose 4ep"tica -se a A+T est" muito aumentada# ' sinal de leso pro unda a etando as mitoc:ndrias/. >/ Met"stases 4ep"ticas. ?/ 3n arte do mioc"rdio0 a partir das @ primeiras 4oras durante > a @ dias com pico m")imo 8s =@ 4oras. @/ 3mbolias ou tromboses0 tromboembolia pulmonar -aumento da A+T/A se 4" a ec$o 4ep"tica tamb'm aumenta a A1T. B/ Doen$as musculares0 poliomiosites# dermatomiosites# traumatismos musculares e)tensos. A determina$o de Gama Glutamil Trans erase -GGT/ tem aplica$o principal no estudo das doen$as 4epatobiliares e est" distribu&da em quase todo o tecido 4umano. C rim cont'm a mais ele*ada concentra$o# seguido pelo p.ncreas e &gado. A GGT ' um sens&*el indicador de doen$as in lamat(rias e leso 4ep"tica e est" signi icati*amente ele*ada nas doen$as obstruti*as das *ias biliares. A GGT tem maior especi icidade que a os atase alcalina -A1D/ e a transaminase o)alac'tica para a*aliar doen$a 4ep"tica. 3la no est" ele*ada na doen$a (ssea e durante a gra*idez como a os atase alcalina# nem nas doen$as do m2sculo esquel'tico como a transaminase o)alac'tica. A GGT au)ilia di erenciar colestases mec.nica e *iral das induzidas por drogas. 7as duas primeiras# a GGT e A1D esto igualmente ele*adas. 7as colestases induzidas por drogas a GGT est" muito mais ele*ada. Valores ele*ados de GGT em pacientes anict'ricos com c.ncer so um seguro indicador de met"stases 4ep"ticas. 3st" demonstrado que no alcoolismo cr:nico os n&*eis s'ricos da GGT diminuem com a retirada do "lcool e se ele*am com a e)posi$o ao mesmo. Com base nesta obser*a$o a determina$o da GGT est" sendo usada nos centros de tratamentos de
3

alco(latras para documentar o sucesso da terapia e identi icar os pacientes que retornam ao alcoolismo ap(s a alta ./0etivo1 Determinar a ati*idade enzim"tica das transaminases -A1T# A+T e GGT/ 2rincpio 3Determinao da spartato mino Trans4erase51

Como demonstrado nas (rmulas abai)o# a A+T catalisa a trans er!ncia de grupos amina do aspartato para o 5,Cetoglutarato# le*ando 8 orma$o de Glutamato e C)alacetato. C C)alacetato em presen$a do MDH reage com o 7ADH# reduzindo,se a Malato e o 7ADH o)ida,se a 7ADE. A *elocidade de o)ida$o ' proporcional 8 ati*idade da A+T na amostra.

A redu$o da absorb.ncia em =>Fnm# conseqGente 8 o)ida$o da coenzima 7ADH# ' monitorada otometricamente# sendo diretamente proporcional 8 ati*idade da A+T na amostra. 6ateriais e 6*todos1 Heagente 90 Tampo Tris 9F? mmol61 pH B#IA 1,aspartato ==F mmol61A MDH J I<? K61A 1DH J9<FFK61 e azida s(dica F#FL?M Heagente <0 Tampo Tris <F mmol61 7ADH 9=<F mol61A al acetoglutarato @@ mmol61 e azida s(dica F#FL?M ,Amostras0 +oro obtido li*re de 4em(lise ou plasma col4ido com 4eparina. A enzima s'rica ' est"*el = dias entre < e I NC. Foram marcados = tubos de ensaio0 O# A9 -Amostra 9/# A< -Amostra </ Cs reagentes e amostras oram adicionados aos tubos de acordo com a tabela a seguir0
B -1000 L Amostra 1 100 L 1000 L Amostra 2 100 L 1000 L 4

Amostra Reagente

(1+2)

Cada tubo oi 4omogeneizado e incubado a =B NC por 9 minuto. Dara *eri icar a linearidade da rea$o oram realizadas = leituras da absorb.ncia das Amostras com inter*alo de 9 minuto acertando o zero com "gua destilada. Cs *alores obtidos para A+T oram0
1min B Amost ra1 Amost ra2 0,624 0,526 0,545 2min 0,624 0,523 0,544 3min 0,623 0,519 0,543

em comprimento de onda de =>F nm#

Determinao de

!T7

,T e 88T

Dara determinar o per il de transaminases de cada paciente# os n&*eis de A1T e GGT medidos pelos outros grupos tamb'm oram incorporados a este resultado. Dados do 1aborat(rio de Oioqu&mica Cl&nica
1min ALT AST 0,46 0,624 0,419 0,526 0,521 0,545 2min ALT AST 0,46 0,624 0,405 0,523 0,521 0,544 GGT 1min 0,26 0,366 0,29 3min ALT AST 0,46 0,623 0,392 0,519 0,519 0,543

B A1 A2

B A1 A2

2min 0,262 0,375 0,294

!T1
!T 39:,5 P A6min Amostra ) Fator :min P -A) min Q A)E9 min/6< Fator1 VT P *olume total do ensaio -99FF R1/ VA P *olume da amostra -9FF R1/ 9FFF P con*erso de K6m1 para K61 d P espessura da solu$o -9 cm/ P Absorti*idade milimolar do 7ADH em =>Fnm P @#= Fator P -99FF ) 9FFF/ 6 -@#= ) 9FF ) 9/ P 9B>@

2ara o paciente 1 temos1 A96min P F#FF= A<6min P F#FF> A6min Amostra P F#FF=? A+T -K61/ P F#FF=? ) 9B>@ P ;710 2ara o paciente < temos1 A96min P F#FF9 A<6min P F#FF9 A6min Amostra P F#FF9 A+T -K61/ P F#FF9 ) 9B>@ P 17=5

,T1
!T 39:,5 P A6min Amostra ) Fator :min P -A) min Q A)E9 min/6< Fator1 VT P *olume total do ensaio -99FF R1/ VA P *olume da amostra -9FF R1/ 9FFF P con*erso de K6m1 para K61 d P espessura da solu$o -9 cm/ P Absorti*idade milimolar do 7ADH em =>Fnm P @#= Fator P -99FF ) 9FFF/ 6 -@#= ) 9FF ) 9/ P 9B>@

2ara o paciente 1 temos1 A96min P F#F9> A<6min P F#F9= A6min Amostra P F#F9=? A+T -K61/ P F#F9=? ) 9B>@ P <375= 2ara o paciente < temos1 A96min P F#FFF A<6min P F#FF< A6min Amostra P F#FF9 A+T -K61/ P F#FF9 ) 9B>@ P 17=5
6

88T1
> -A<min Q A9min/ 88T 39:,5 P A6min Amostra ) Fator Fator1 99?I

2ara o paciente 1 temos1 A9min P F#=@@ A<min P F#=B? A P F#FFL GGT -K61/ P F#FFL ) 99?I P 107?< 2ara o paciente < temos1 A9min P F#<LF A<min P F#<L> A P F#FF> GGT -K61/ P F#FF> ) 99?I P ?7;3

Concluso1

A rela$o A+T6A1T -Sndice DeHitis/ tem sido empregada algumas *ezes para au)iliar no diagn(stico di erencial das 4epatopatias. 7a 4epatite *ir(tica aguda# a rela$o A+T6A1T ' sempre menor que 9# enquanto que nas outras doen$as 4epatocelulares -cirrose# 4epatites cr:nicas# etc/ ' sempre > 9. 2aciente 11
ALT AST GGT AST/A LT U/L 23,57 6,1 10,42 0,26 <1

C paciente 9 apresenta *alor normal de A1T e GGT e um *alor de A+T abai)o do normal podendo estar associada a uremia# ou a m" conser*a$o da amostra. A rela$o A+T6A1T ' in erior a 9# que poderia *ir a indicar uma 4epatopatia aguda. 2aciente <1
U/L 1,75 1,75 4,63 1

ALT AST GGT AST/A LT

=1

C paciente < apresenta todos os *alores de transaminase abai)o do normal# pro*a*elmente de*ido ao tempo da amostra coletada. A rela$o A+T6A1T ' igual a 9. Cbser*a$o0 As amostras 4a*iam sido coletadas 4a 9F dias. C que pode e)plicar os *alores abai)o do normal de algumas medidas.