TERAPIA GNICA

a manipulao de genes do indivduo para corrigir defeitos genticos. A terapia gnica pode ser do tipo: - correo, quando ocorre a insero de um gene funcional no local de um no funcional ou deleo de um gene deletrio; - complementao, quando feita a introduo de uma cpia normal sem modificao do original, ou - adio, com o acrscimo de um gene ausente no genoma.

Alvos da terapia gnica

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Inicialmente, as pesquisas em terapia gnica visavam curar doenas hereditrias, causadas por mutao em um nico gene, conhecidas como doenas monognicas. Nestas doenas, a mutao que gera o gene defeituoso pode ser causada pela troca de uma ou mais bases na seqncia de nucleotdeos do gene ou pela insero ou perda de bases no gene normal. A lgica para o uso da terapia gnica no tratamento dessas doenas seria substituir o gene defeituoso por um normal ou somente adicionar clula um gene normal cuja expresso corrija o problema.

No entanto, tem se investido na terapia gnica como alternativa teraputica em doenas adquiridas tambm, como o cncer. Neste caso, a estratgia inserir nas clulas tumorais genes que promovam a destruio da clula ou genes que restaurem o controle do ciclo celular.

A terapia gnica tambm tem sido pesquisada como forma de vacinas genticas. Nesse caso, o intuito no curar uma doena mas sim imunizar a populao contra uma doena infecciosa. A lgica, portanto, seria promover no organismo a produo de antgenos dos agentes infecciosos, evitando a infeco do indivduo com o patgeno.

Mtodos de terapia gnica

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Como o DNA de interesse pode ser inserido na clula? Existem dois mtodos: um chamado in vivo e outro, ex vivo. No mtodo in vivo o vetor contendo o gene de interesse injetado diretamente no organismo. J no mtodo ex vivo, clulas do organismo so retiradas e tratadas com o vetor. Selecionam-se ento aquelas clulas que apresentaram melhor resposta ao tratamento que so injetadas de volta no organismo.

Vetores para terapia gnica

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Os vetores empregados na terapia gnica so divididos em duas classes: vetores virais e vetores plasmidiais.

Os vetores virais consistem em vrus modificados para que no causem doenas, nos quais se insere o gene de interesse. Os vrus apresentam algumas caractersticas que os tornam instrumentos teis para a terapia gnica. Por exemplo, como podem replicar-se no organismo, aumentam a quantidade do gene in vivo. Sendo agentes infecciosos, j apresentam toda uma maquinaria que garante a infeco das clulas e a expresso dos genes contidos em seu genoma. No entanto, por se tratar de agentes estranhos ao organismo, desencadeiam respostas imunes.

A resposta imune destri as partculas virais, incluindo o gene de interesse, fazendo com que sua expresso no seja duradoura no organismo. Outra caracterstica que alguns desses vrus se integram ao DNA da clula. Isto pode ser bom, pois garante que o gene de interesse seja replicado juntamente com o DNA da clula. Por outro lado, a integrao dos vrus no genoma da clula aleatria, podendo danificar outros genes.

Problema
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A hemoglobina falciforme tem em uma de suas cadeias polipeptdicas (cadeia b) o aminocido valina no lugar de um glutamato que existe na hemoglobina normal. Analisando o gene da hemoglobina em clulas precursoras das hemcias na medula ssea, observa-se que o gene que codifica a cadeia alterada nos acometidos tem um A no lugar em que aparece um T nos indivduos sadios.

As 12 doenas genticas mais frequentes:

Hipercolesterolemia familiar (autossmica dominante); LDLR; 1/1000; Hemocromatose hereditria (autossmica recessiva); HFE 1/2500;
Miopatia de Duchenne e Becker (recessiva ligada ao X, meninos afetados); gene da distrofia 1/3000; Fibrose cstica do pncreas (mucoviscidose, autossmica recessiva); CF/CTFR, 1/3000; Retardo mental ligado ao X frgil (dominnate ligado ao X); FMR1. 1/3000; Hemofilia A (recessiva ligada ao X, meninos afetados); gene do fator VIII, 1/10000; Deficincia de a1-antitripsina (autossmica recessiva); gene da a1AT; 1/10000; Fenilcetonria (autossmica recessiva); gene da fenilalanina hidroxilase, 1/16000; Hemofilia B (recessiva ligada ao X); gene do fator IX, 1/30000 Drepanocitose (autossmica recessiva); b-globina; a-talassemia; a-globina b-talassemia; b-globina

 a aplicao dos princpios genticos no tratamento das doenas humanas pela introduo de material gentico em clulas-alvo.

Terapia gnica somtica Definio: Transferncia de um gene com intuito teraputico. Permite corrigir o fentipo de doena de uma clula somtica pela introduo de um material gentico. Abordagens: Transferncia de genes ex vivo; Transferncia de genes in vivo; Transferncia in situ (diretamente para o tecido alvo).

Transferncia de genes ex vivo

Diferentes vetores de transferncia de genes

Vetores virais Retrovirus- integrao aleatria no cromosoma; Adenovirus- extracromossomico; AAV (vrus associado a adenovrus); ambas

_ Retrovirais: Alta taxa hospedeiro (somente conhecido; mas como clulas em diviso insercional.

de transduo, ampla espectro de clulas em diviso); sistema bem desvantagem imunognico; requer e existe risco de mutagnese

_ Adenovirais: Amplo espectro de hospedeiro (clulas mitticas e no mitticas), altos ttulos; alta eficincia de transduo; genoma viral epissomal; virus selvagem causa doena leve; no envelopado; porm como desvantagem imunognico, perodo curto de expresso gnica em clulas em diviso; reverso para o tipo selvagem. _ Adeno-associados: Amplo espectro de hospedeiro, nenhuma doena humana associada; infecta clulas em diviso ou paradas; integrao dirigida preferencial; mas como desvantangens tem limite ao empacotamento de DNA, integrao no sempre stio-dirigida.

n n n

Objetivo: Reduzir ou remover o efeito do gene doente; Introduzir uma nova funo; possvel aplicar em clulas somticas e em clulas germinativas.

Abordagem somtica:
Considerado um tipo de tratamento mdico para o paciente.

Abordagem germinativa:
Considerado um risco em potencial para futuras geraes. Atualmente ilegal.

n n n n n n

Aplicaes: Cncer Doenas hereditrias Doenas infecciosas (por vrus ou bactria) Doenas do sistema imune Doenas agudas Vacinao

O que necessrio para sua realizao:

n n

Compreenso do processo da doena Entender a estrutura e a funo do gene a ser introduzido Experimento em modelos animais e anlise da funo Transporte eficiente do gene de interesse

Evoluo do embrio humano durante seu trajeto pela tuba

O que so clulas tronco?

1998 - a equipe do bilogo James Thomson, na Universidade de Wisconsin isolou as primeiras clulastronco de embries humanos. No mesmo ano, tambm foram isoladas clulas embrionrias germinativas humanas, derivadas das clulas reprodutivas primordiais de fetos, pelo embriologista John Geahart, da Universidade Johns Hopkins (EUA).

Quanto a sua classificao, podem ser: Totipotentes, aquelas clulas que so capazes de diferenciarem-se em
todos os 216 tecidos que formam o corpo humano, incluindo a placenta e anexos embrionrios. As clulas totipotentes so encontradas nos embries nas primeiras fases de diviso, isto , quando o embrio tem at 16 - 32 clulas, que corresponde a 3 ou 4 dias de vida;

-Pluripotentes ou multipotentes, aquelas clulas capazes de

diferenciar-se em quase todos os tecidos humanos, excluindo a placenta e anexos embrionrios, ou seja, a partir de 32 - 64 clulas, aproximadamente a partir do 5 dia de vida, fase considerada de blastocisto. As clulas internas do blastocisto so pluripotentes enquanto as clulas da membrana externa destinam-se a produo da placenta e as membranas embrionrias;

-Oligotentes, aquelas clulas que se diferenciam em poucos tecidos;

- Unipotentes, aquelas clulas que se diferenciam em um nico tecido.

Clulas tronco embrionrias

Ainda constitui um mistrio para os cientistas a ordem ou comando que determina no embrio humano que uma clula-tronco pluripotente se diferencie em determinado tecido especfico, como fgado, osso, sangue etc. Porm em laboratrio, existem substncias ou fatores de diferenciao que quando so colocadas em culturas de clulastronco in vitro, determinam que elas se diferenciem no tecido esperado.

O QUE CLONAGEM?
A clonagem um mecanismo comum de propagao da espcie em plantas ou bactrias. De acordo com Webber (1903), um clone definido como uma populao de molculas, clulas ou organismos que se originaram de uma nica clula e que so idnticas clula original e entre elas. Em humanos, os clones naturais so os gmeos idnticos que se originam da diviso de um vulo fertilizado.

A grande notcia da Dolly foi justamente a descoberta que uma clula somtica de mamfero, j diferenciada, poderia ser reprogramada ao estgio inicial e voltar a ser totipotente.

J sabemos que no um processo fcil. Dolly s nasceu depois de 276 tentativas que fracassaram. Alm disso, dentre as 277 clulas da me de Dolly que foram inseridas em um vulo sem ncleo, 90% no alcanaram nem o estgio de blastocisto.

Isto foi conseguido por meio da transferncia do ncleo de uma clula somtica da glndula mamria da ovelha que originou a Dolly para um vulo enucleado. Surpreendentemente, este comeou a comportar-se como um vulo recm-fecundado por um espermatozide. Isto provavelmente ocorreu porque o vulo quando fecundado tem mecanismos, para ns ainda desconhecidos, para reprogramar o DNA de modo a tornar todos os seus genes novamente ativos, o que ocorre no processo normal de fertilizao .

Na realidade, experincias recentes com diferentes modelos animais tm mostrado que essa reprogramao dos genes, para o estgio embrionrio, o processo que originou Dolly, extremamente difcil.
Pouqussimos animais que nasceram vivos aps inmeras tentativas, observamos: telmeros encurtados; placentas anormais; gigantismo em ovelhas e gado; defeitos cardacos em porcos; problemas pulmonares em vacas, ovelhas e porcos; problemas imunolgicos;

1) A maioria dos clones morre no incio da gestao; 2) os animais clonados tm defeitos e anormalidades semelhantes, independentemente da clula doadora ou da espcie; 3) essas anormalidades provavelmente ocorrem por falhas na reprogramao do genoma; 4) a eficincia da clonagem depende do estgio de diferenciao da clula doadora.

 importante que as pessoas entendam que na clonagem para fins teraputicos sero gerados s tecidos, em laboratrio, sem implantao no tero. No se trata de clonar um feto at alguns meses dentro do tero para depois lhe retirar os rgos como alguns acreditam. A clonagem teraputica teria a vantagem de evitar rejeio se o doador fosse a prpria pessoa. Seria o caso, por exemplo, de reconstituir a medula em algum que se tornou paraplgico aps um acidente ou para substituir o tecido cardaco em uma pessoa que sofreu um infarto.] Entretanto, essa tcnica tem suas limitaes. O doador no poderia ser a prpria pessoa no caso de afetada por doenas genticas, pois a mutao patognica causadora da doena est presente em todas as clulas. No caso de usar-se linhagens de clulas-tronco embrionrias de outra pessoa ter-se-ia, tambm, o problema da compatibilidade entre o doador e o receptor. Seria o caso, por exemplo, de um afetado por distrofia muscular progressiva que necessita substituir seu tecido muscular.

Clone- O conjunto de clulas-filhas originrias de uma clula inicial denominado clone Linhagem: Uma clula isolada pode dar origem, atravs de divisoes celulares sucessivas, a uma srie de clulas-filhas, que podem se diferenciar. Estas clulas constituem o clone. O conjunto das diferenciaes que podem acompanhar estas clulas representa as potencialidades da clula inicial. Denomina-se linhagem de uma clula o conjunto das modificaes morfolgicas e temporais que conduzem formao de um clone. Desde modo, a linhagem representada como uma rvore genealgica mostrando a filiao das diferentes clulasfilhas.

A maioria das clulas tronco extrada de embries gerados pelo processo de fertilizao in vitro.

1) As clulas somticas so retiradas do doador 2) Essas clulas so cultivadas em laboratrio 3) De uma doadora colhe-se um vulo no fertilizado 4) O ncleo contendo DNA retirado do vulo 5) A clula cultivada fundida ao vulo por meio de corrente eltrica 6) Agora temos o vulo fertilizado com nova informao gentica 7) Este vulo vai se desenvolver at a fase de blstula (embrio com mais de 100 clulas) onde esto as clulas tronco.

Embrio de 5 dias
Clula em cultura

155 linhagens de clula-tronco embrionrias: Ir 1, Espanha 2, Reino Unido 3, Israel 5, Cingapura 7, ndia 10, Coria do Sul 24, Sucia 33, EUA 70. Pode se tornar qualquer um dos mais de 200 tipos de clulas do corpo. So capazes de reproduzir-se ad infinitum. Linhagem de clula-tronco

Clonagem Teraputica
a clonagem sem fins reprodutivos. O que temos de diferente da clonagem humana que, antes de comear a diviso e houver diversificao para formas os tecidos, as clulas do embrio, so diferenciadas. A diferenciao da clonagem teraputica e clulas tronco que, a primeira, criaria embries, enquanto que as clulas tronco ocorre a auto regenerao, no necessitando de embries para possu-la nem ocorrer rejeio do rgo lesado, uma vez que esta clula pertence ao prprio paciente.

Aplicaes

Tcnica para a captao e a utilizao de clulas tronco adultas

Administrar ao paciente o fator de crescimento de granulose (G-CSF), hormnio que leva as clulas-tronco a se desgrudarem da medula e irem para o sangue. Depois, o sangue coletado, submetido a uma cultura srica e congelado em nitrognio lquido. A pessoa, ento, submetida quimioterapia e imunoterapia, que causam a destruio de seu sistema imunolgico, reconstrudo posteriormente pelo transplante do material coletado e congelado. lpus; esclerose mltipla e esclerose sistmica

Aspectos Sociais e ticos

tica no uso das clulas tronco

Os fins justificam os meios? FIM: Cientistas esperam aliviar o sofrimento humano com o uso de clulas tronco. MEIO: Consumo de embries humanos doados, embries estes que nunca sero colocados em um tero e que seriam normalmente descartados.

Braslia, 23 de novembro de 2005 NOTA n. 002/2005 NOVO DECRETO PUBLICADO

A Secretaria Executiva da Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana - CTNBio torna pblico que, de acordo com a nova Lei de Biossegurana n. 11.105, de 24 de maro de 2005, foram revogadas a Lei n. 8.974, de 05 de janeiro de 1995 e a Medida Provisria n. 2.191, de 23 de agosto de 2001. E, ainda, de acordo com os artigos 7, 8 e 9 do Decreto n. 5.591, publicado em 23 de novembro de 2005: O Ministro de Estado da Cincia e Tecnologia constituir comisso ad hoc, integrada por membros externos CTNBio, representantes de sociedades cientficas, da Sociedade Brasileira para o Progresso da Cincia - SBPC e da Academia Brasileira de Cincias - ABC, encarregada de elaborar a lista trplice para escolha dos doze especialistas de notrio saber cientfico e tcnico, no prazo de at trinta dias de sua constituio. Esta comisso j foi instituda, atravs da Portaria n. 725 de 23 de novembro de 2005; Os representantes ministeriais, e seus suplentes, sero indicados pelos titulares dos respectivos rgos no prazo de trinta dias da data do aviso do Ministro de Estado da Cincia e Tecnologia. Porm, no existe prazo para o envio desse aviso ministerial; A indicao dos especialistas em defesa do consumidor, na rea de sade, em meio ambiente, em biotecnologia, em agricultura familiar e em sade do trabalhador ser feita pelos respectivos Ministros de Estado, a partir de lista trplice elaborada por organizaes da sociedade civil providas de personalidade jurdica, cujo objetivo social seja compatvel com a especializao prevista naqueles incisos, em procedimento a ser definido pelos respectivos Ministrios. Porm, no existe prazo para essa indicao. Contudo, o Ministro de Estado da Cincia e Tecnologia j enviou Avisos Ministeriais aos ministrios relacionados para que estes enviem ao MCT suas indicaes com a maior brevidade possvel. Portanto, todas as atividades da CTNBio, a saber, reunies mensais, emisso de pareceres tcnicos, anlises de pleitos relacionados com atividades envolvendo OGM e/ou derivados esto suspensas, aguardando as devidas indicaes e nomeaes da nova composio da CTNBio.A Secretaria Executiva da Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana CTNBio permanece inteira disposio para esclarecimentos adicionais que se fizerem necessrios. Jairon Alcir Santos do Nascimento Coordenador Geral da CTNBio

O novo texto da Lei de Biossegurana, sancionado pelo presidente Luiz Incio Lula da Silva, prev a liberao das pesquisas com embries humanos no Brasil, a exemplo do que j acontece na maioria dos pases europeus, como Dinamarca, Espanha, Finlndia, Reino Unido, Blgica, Itlia, Holanda, Sucia, entre outros. A utilizao de embries em pesquisa dever obedecer a critrios legais, dentre eles: ser oriundos de clnicas de Reproduo Assistida e estar congelados h pelo menos trs anos. Segundo especialistas, nesta fase que o embrio comea a perder as suas caractersticas e a chance de se adaptar ao tero materno diminui. Para ter acesso a este material gentico, pesquisadores tero que obter autorizao por escrito dos genitores. A Lei probe a criao de embries para fins industriais e de pesquisa e veta a comercializao de material gentico humano para qualquer fim.

Banco de cordo umbilical

Cerca de doze mil partos por ms e quatro mil novos pacientes com indicao para transplante de medula ssea por ano.

Onde este novo mundo da engenharia gentica est nos levando?

Estaremos a caminho de criar um mundo perfeito ou h um lado obscuro a esta intruso da cincia em cada aspecto de nossas vidas?
Claramente, a humanidade obter muitos benefcios da revoluo molecular, mas quais sero algumas de suas potenciais desvantagens?