28/02/2023

CENTRO UNIVERSITÁIO UNIFACID WYDEN

Métodos de estudo em
Histologia
Renan Paraguassu de Sá Rodrigues
DVM, MS, PhD

Teresina – PI
2022

Introdução
HISTOLOGIA

 Estudo das células e dos tecidos

 Como essas estrutura se organizam para constituir os órgãos

Células Tecidos Órgãos Sistemas

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Introdução
HISTOLOGIA  Pequenas dimensões – auxílio de microscópios

Introdução

Macroscopia Microscopia

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Tecidos básicos do organismo

QUATRO TIPOS BÁSICOS

DE TECIDOS

Tecido epitelial Tecido muscular

Tecido conjuntivo Tecido nervoso

Preparação de espécimes para exame microscópico

 Tecidos e órgãos são espessos

 Não possibilitam a passagem
adequada da luz micrótomos
 Necessidade de cortes histológicos

 Exceções:
 Mesentério
 Cauda de um girino

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Etapas

Coleta Fixação Inclusão Coloração

Preparação de espécimes para exame microscópico

Coleta
 Amostras
 Organismo vivo (biópsia ou durante uma cirurgia)
 Post mortem

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Preparação de espécimes para exame microscópico

Coleta

Fixação
Logo após sua remoção do corpo
 Evitar a autólise degradação por bactérias
 Endurecer os fragmentos
 Preservar a estrutura e a composição tecidos

Métodos

Químicos

Físicos
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Clivagem
 Reduzir as dimensões dos fragmentos dos tecidos coletados
 Fragmentos de 3mm até 5mm de espessura

Melhor difusão do
fixador

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Fixação química

Tecidos são imersos em soluções de agentes

desnaturantes – Fixadores
 Perfusão intravascular do fixador – Alternativa
 Formol, Álcool, Ácido acético

Fixador mais utilizado - formol

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Fixação

 Interromper o metabolismo celular

 Preservar e conservar
 Penetração de outras substâncias
subsequentes à fixação

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Fixação - preparo
Amostra

CASSETES

Cassete
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Fixação física por congelação

 Submeter os tecidos a um congelamento

rápido
 Tornam-se rígidos e prontos para serem
seccionados
 Criomicrótomo
 Utilizado em hospitais – análises rápidas
 Útil para estudo de lipídios
 Xilol dissolve essas substâncias

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Descalcificação
 Remover os sais de cálcio
 Cristais de cálcio destroem o fio da navalha - artefatos
 Acido fórmico, EDTA, Acido acético..

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Inclusão
 Substâncias que lhes proporcionem uma consistência rígida
 microscopia de luz - Parafina

Etapas Desidratação Clareamento Impregnação

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Inclusão
Desidratação

 Extração de água pela passagem

dos fragmentos por diversos
banhos de concentrações
crescentes de etanol
 70% - 100%

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Inclusão

Desidratação

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Inclusão
Processadores manuais ou automáticos
Desidratação

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Inclusão
2°Clarificação (diafanização)

 Parafina é insolúvel em água e muito

pouco em álcool
 Necessário substituir o álcool por um
produto o qual a parafina tenha afinidade
 Substâncias mais comuns - xilol e o toluol
 A medida que vai penetrando, a peça vai
ficando mais clara

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 Desidratação em série alcóolica crescente

 Clarificação em xilol

Álcool (desidratação) Xilol

clarificação
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Inclusão
3°Impregnação

 As peças são infiltradas por alguma substância de

consistência firme - PARAFINA
 Adquirir rigidez
 Possibilitar cortes finos
 Parafina
 Preenche os espaços existentes dentro dos
tecidos
 A parafina solidifica e eles se tornam rígidos.
 Formação de blocos

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Inclusão
Amostra
3°Impregnação

 O calor causa a evaporação do xilol

 Os espaços existentes dentro dos tecidos
tornam-se preenchidos com parafina
 A parafina solidifica e os fragmentos se
tornam rígidos

Bloco de
parafina

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Inclusão
3°Impregnação
Parafina
líquida

Colocação
da amostra
Pinça
Molde

Becker Resfriamento

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Inclusão

Corte  Secção tecidual: espessura de 3 à 6 micrômetros - Micrótomo

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Inclusão

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Inclusão
Banho maria
Pesca

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Desparafinização
 A maioria dos corantes são solúveis em água e a parafina não é miscível em água
 Precisa retirar toda a parafina e reidratar o espécime
 Agitar 20 vezes em cada frasco

Água 29

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Desparafinização

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Coloração Hematoxilina Eosina

 Tecidos são incolores
 Corantes tornam evidentes os
vários componentes dos
Cora em Cora em
tecidos, das células e da MEC violeta róseo
 Varia com o tecido
 Mais comuns: hematoxilina e
eosina (HE)
Estruturas Estruturas
ácidas básicas

Núcleo Citoplasma

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Coloração

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Lamínula - selagem

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Coloração

Sem coloração

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Coloração

Com coloração

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Coloração

Sem coloração Com coloração

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Coloração

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Coloração

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Microscopia de luz

 Microscópio de luz
 Preparações são examinadas por iluminação que
atravessa o espécime
 Composto de partes mecânicas e ópticas
 O componente óptico consiste em três sistemas
de lentes: condensador, objetivas e oculares.

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Microscopia de luz
Ocular
 Condensador
Concentra a luz de uma lâmpada e
projeta um feixe luminoso sobre o
espécime. Objetiva
 Objetiva
Recebe a luz que atravessou o Condensador
espécime e projeta uma imagem
aumentada do espécime em direção
à ocular
 Ocular
Novamente amplia a imagem e a
projeta na retina, em uma tela
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40

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Microscopia de luz Ocular Condensador

 A ampliação total é calculada multiplicando-se o aumento da objetiva pelo da ocular

Objetivas

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Microscopia de luz
Ocular (10X)

Objetivas

Ocular Objetivas
10X 4x, 10x, 40x e 100x

40, 100, 400 e 1000

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Cultura de células e tecidos

 Células podem ser mantidas vivas e estudadas fora do corpo
 Útil para se pesquisar o efeito isolado de moléculas naturais ou fármacos
 Possibilita a análise direta do comportamento de células vivas - cultivadas em soluções
de composição conhecida (sais, aminoácidos, vitaminas)

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Cultura de células e tecidos

• As células devem ser inicialmente separadas mecanicamente ou por meio de
tratamento enzimático.
• Uma vez isoladas, as células podem ser cultivadas em suspensão ou colocadas sobre
uma placa de Petri ou lamínula de vidro
• Procedimentos executados em área estéril

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Cultura de células e tecidos

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Problemas na interpretação de cortes

 Distorções e artefatos provocados pelo processamento dos tecidos
 Uma causa de distorção é a retração produzida pelo fixador, pelo etanol e pelo
calor da parafina usada para inclusão.
 Consequência: aparecimento de espaços artificiais nas células e entre as células e
outros componentes de tecido.
 Artefatos de técnica.
• Pregas do corte (que podem ser confundidas com capilares sanguíneos)
• Precipitados de corantes ou de sujeira (que podem ser confundidos com grânulos
citoplasmáticos)

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Duas dimensões e três dimensões

L
 Quando uma estrutura a
tridimensional é cortada em r
secções muito delgadas, as g
u
secções parecem ter somente r
duas dimensões a
 Comprimento
 Largura

Comprimento
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Duas dimensões e três dimensões

 Deve-se imaginar que algo pode estar faltando à frente ou atrás daquele corte

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Duas dimensões e três dimensões

 É necessário estudar secções feitas em planos diferentes.

Transversal Longitudinal
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Duas dimensões e três dimensões

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Duas dimensões e três dimensões

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https://www.youtube.com/watch?v=-CJ3jw2lyf0

https://www.youtube.com/watch?v=0HPGpcASAOg

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https://histologyguide.com/
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DÚVIDAS?

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