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TCNICAS ROTINEIRAS DE PREPARAO E

ANLISE DE LMINAS HISTOLGICAS


Llian de L. Timm
Centro Universitrio La Salle
Museu de Cincias Naturais La Salle
ltimm@lasalle.tche.br
lltimm@hotmail.com

RESUMO
Para a anlise das microestruturas anatmicas dos tecidos de animais sob microscopia ptica necessria a confeco de lminas histolgicas. Neste artigo so abordadas
as tcnicas de coleta, fixao, incluso, microtomia, criomicrotomia e colorao em amostras de tecidos moles e as tcnicas de desgate
e descalcificao para tecidos sseos. So abordadas ainda, tcnicas especiais de preparao
de amostras para anlise sob microscopia eletrnica, criofratura e fracionamento celular.
PALAVRAS-CHAVE: Tcnicas histolgicas, microtomia, colorao, desgaste, descalcificao,
microscpios eletrnicos

INTRODUO
Histologia o ramo da anatomia que
estuda os tecidos animais e vegetais. Tanto a
zoologia quanto botnica apresentam nomenclaturas especiais. Neste artigo sero abordados, exclusivamente, conceitos e tcnicas de
histologia animal.
A maioria dos tecidos formada por
clulas e matriz extracelular. Nesta categoria
se enquadram os diferentes tipos de tecidos
conjuntivos especializados cartilaginoso, adiposo, sangneo e sseo alm dos tecidos
conjuntivo propriamente dito, muscular e nervoso. As clulas que os constituem, possuem

formas e funes muito distintas. Contudo, todas trabalham em conjunto na sustentao e


na manuteno do tecido. A matriz formada
principalmente por fibras e gua que auxilia,
principalmente no transporte de substncias.
A exceo regra est no tecido epitelial. Embora formado por clulas epiteliais com
diferentes formas, como cbicas, pavimentosas ou colunares, e arranjadas em diferentes
camadas (simples, estratificadas ou pseudoestratificadas), este tecido freqentemente
caracterizado pela ausncia de matriz extracelular. Sua nutrio acaba sendo efetuada pelo
tecido conjuntivo vascularizado adjacente.
Maior variao ainda se encontra em
alguns tipos de tecido sseo, como o tecido
acelular dos peixes telesteos, onde h a ausncia completa de clulas sseas. Neste caso
especial, h uma perda progressiva dos ostecitos durante o crescimento do animal, que
culmina na sua ausncia completa na matriz
calcificada do indivduo adulto (Enlow e Brown,
1956).

TCNICAS UTILIZADAS EM
HISTOLOGIA
Muitas so as tcnicas utilizadas em histologia e no seria possvel, neste momento,
aborda-las detalhadamente. Deste modo, foram
selecionadas algumas tcnicas freqentemente utilizadas em rotinas de laboratrios que proporcionam a visualizao das microestruturas
dos tecidos.

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Confeco de Lminas Histolgicas: Coleta, Fixao, Incluso e Microtomia
Para a anlise sob microscopia ptica
necessria a confeco de lminas delgadas
dos tecidos que formam os rgos. Estas lminas podem ser permanentes ou provisrias.
A seguir, sero descritas as etapas de confeco de lminas histolgicas permanentes.

Coleta do material
Partes de rgos so retiradas com o
auxlio de um bisturi, pina ou lmina de barbear. No indicada a extrao de pores
grandes, uma vez que o objetivo final a obteno de uma camada fina que possa ser analisada em um microscpio ptico.

Fixao do material
Esta etapa consiste na utilizao de
procedimentos fsicos ou qumicos para imobilizar as substncias constituintes das clulas e dos tecidos, fornecendo maior resistncia para suportar as demais etapas. Alm
disso, os fixadores retardam os efeitos post
mortem do tecido, mantendo sua arquitetura normal. Os agentes fixadores mais utilizados so o formol tamponado e o lquido
de Bouin. Ambos fixam as protenas evitando sua degradao.
O formol, por ser mais acessvel e de
uso simples, o fixador mais utilizado nas
tcnicas histolgicas. Contudo, seus resultados geralmente no so satisfatrios. Por
essa razo recomendada a dissoluo de
formol em tampo fosfatado preparado do
seguinte modo (Junqueira e Junqueira,
1983):
Formol (soluo a 37% de formaldedo)
_______________________________ 100ml
gua destilada ___________________ 900ml
Fosfato de sdio monobsico _______ 4,0g
Fosfato de sdio dibsico (anidro) ____ 6,5g
O tempo de fixao depender do tamanho do fragmento do tecido, podendo va-

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riar entre 06 e 24h. recomendado que, sempre que possvel, no ultrapasse a 3mm de
espessura e se utilize, no mnimo, um volume
20 vezes maior de fixador, em relao ao tecido a ser fixado, para que o material reaja
satisfatoriamente. Uma vez fixado, a pea deve
ser transferida para lcool 70%, onde poder
permanecer indefinidamente.
O fixador de Bouin tem a seguinte frmula (Junqueira e Junqueira, 1983):
Soluo aquosa saturada de cido pcrico
__________________________________ 75ml
Formol ___________________________ 25ml
cido Actico ______________________ 5ml
Aps a fixao fundamental a remoo do cido pcrico dos tecidos para a posterior etapa de colorao. Alm disso, resduos deste cido podem favorecer a deteriorao da pea com o passar do tempo. Para a
eliminao do excesso de fixador dos tecidos
recomendado (Junqueira e Junqueira,
1983):
1) Lavagem em gua corrente por 18h;
2) Transferncia da pea para lcool
50%, durante 30min;
70%.

3) Armazenamento da pea em lcool

Importante: O contedo dos frascos de cido


pcrico deve ser mantido mido, pois ele explosivo quando seco (Junqueira e Junqueira,
1983).

Incluso
Este procedimento consiste na impregnao do tecido com uma substncia de consistncia firme que permita, posteriormente,
seccion-lo em camadas delgadas. Pelo fcil
manuseio e bons resultados, a parafina a
mais utilizada neste procedimento. Como ela
no miscvel em gua, a primeira etapa da
incluso compreende a desidratao, quando ocorre a retirada da gua dos tecidos e a
sua substituio por lcool. A diafanizao

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a etapa seguinte, com a substituio do lcool, agora presente nos tecidos, por xilol. Finalmente, na impregnao, ltima etapa, o xilol
substitudo por parafina fundida a 60 em
pequenos blocos. Neste momento a catalogao do bloco importante para a posterior
identificao da pea.

Microtomia
Esta etapa (Fig. 1 A) consiste, basicamente, em utilizar um micrtomo para obter cortes
sucessivos, delgados e uniformes, a partir dos
blocos de parafina com as peas includas. Este
aparelho (Fig. 2) formado por uma lmina (fixa
ou descartvel) de ao, afiada, e um brao ao
qual se prende o bloco e que se desloca verticalmente.

Figura 2. Fotografia de um micrtomo para cortes em


resina (Retirado de Junqueira e Carneiro, 1995)

difcil obter cortes abaixo de 3 a 4


micrmetros de espessura dos materiais includos em parafina. De um modo geral, so obtidos cortes entre 5 e 7 micrmetros.

Montagem da lmina histolgica


As fitas obtidas a partir do micrtomo
so transferidas para um banho-maria, com o
auxlio de uma pina, para serem distendidas
(Fig. 1 B). A gua deve estar entre 3 e 8 abaixo do ponto de fuso da parafina utilizada.
Nesta etapa, so retiradas as dobras e evitadas as bolhas abaixo da fita. Aps a distenso,
os cortes so separados individualmente ou em
grupos, conforme a convenincia, utilizandose lminas de vidro previamente limpas com
detergente, estocadas em lcool 80% e previamente secas. Antes da utilizao das lminas,
necessrio revestir suas superfcies com uma
fina camada de albumina para facilitar a adeso da pea. Os cortes obtidos podem ser transferidos, inicialmente, para uma estufa onde ficam alguns minutos (no mais que dez minutos) para posteriormente serem colocados em
um suporte inclinado. Finalmente, os cortes
devem ser depositados em uma estufa a 60
para secagem entre uma e 24 horas.

(A)

(B)

Tcnica de Criomicrotomia (= Microtomia


por Congelamento)
Figura 1. Esquema das etapas de microtomia (A) e
distenso da fita em banho-maria (B) (Modificado de
Junqueira e Junqueira, 1983).

A tcnica descrita acima, sem dvida,


a mais utilizada. Contudo, em alguns casos, esta
tcnica contra-indicada, como, por exemplo,
no estudo da distribuio dos lipdios, em tcnicas histoqumicas avanadas ou quando so

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necessrios cortes urgentes, como em exames


patolgicos. Nestes casos, os tecidos so endurecidos atravs do congelamento. Os aparelhos utilizados para os cortes podem ser de
dois tipos: micrtomos de congelamento ou
criostatos (Junqueira e Junqueira, 1983).

modo, a remoo da parafina da pea que foi


preparada nas etapas descritas anteriormente
e que permanece na lmina de vidro.

Nos micrtomos de congelamento


(Fig. 3) os tecidos so congelados tanto fixados quanto frescos. O congelamento ocorre
por expanso de CO2 no suporte apropriado
para o tecido. Assim como nos micrtomos
de parafina, estes micrtomos possuem uma
navalha. Contudo, no produzem cortes muito
finos. Suas lminas cortam acima de 10 micrmetros. Outro inconveniente acertar a
temperatura ideal para corte: se estes se fragmentam durante a passagem pela navalha, o
tecido est frio demais; se ao contrrio, se
deformam, o tecido precisa ser resfriado.

Corantes que diferenciam os componentes cidos e bsicos das clulas;

Existem muitos tipos de corantes, mas


de um modo geral podem ser agrupados em
trs classes distintas (Gartner e Hiatt, 1999):

Corantes especializados que diferenciam os componentes fibrosos da matriz extracelular;


cidos.

Sais metlicos que precipitam nos te-

Os corantes mais utilizados nos procedimentos histolgicos so a Hematoxilina e a


Eosina (HE). A Hematoxilina uma base que
cora, preferencialmente, componentes cidos
das clulas em um tom azulado escuro. Como
os componentes cidos mais abundantes so
o DNA e o RNA, tanto o ncleo, quanto certas
partes do citoplasma, se tornam azulados. Esses componentes so chamados de basfilos.
A Eosina, ao contrrio, um cido que cora as
estruturas bsicas da clula de rosa. Estas estruturas so abundantes no citoplasma e so
chamadas de acidfilas (Gartner e Hiatt, 1999).
Outros corantes so tambm utilizados
em procedimentos de rotina em laboratrios,
tais como (Gartner e Hiatt, 1999):

Figura 3. Fotografia de um micrtomo para cortes congelados.

O criostato um aparelho mais aperfeioado que o anterior. Permite a obteno de


cortes muito mais finos de tecidos no fixados
(at dois micrmetros), facilitando a visualizao das clulas (Junqueira e Junqueira, 1983).

Tcnicas de Colorao de Cortes Histolgicos


A colorao consiste numa etapa muito
importante para a visualizao das estruturas
do tecido. Normalmente so utilizados corantes hidrossolveis, sendo necessrio, deste

Tricrmico de Masson - cora o ncleo


de azul escuro, o citoplasma, a queratina e o
msculo de vermelho e o mucignio e o colgeno de azul claro;
Orcena - cora as fibras elsticas de
marrom;
azul;
preto;

Weigert - cora as fibras elsticas de


Prata - cora as fibras reticulares de

Hematoxilina frrica - cora as estriaes dos msculos, os ncleos e os eritrcitos


de preto;
cido peridico reativo de Schiff - cora
as molculas ricas em glicognio e carboidrato de magenta;
Wright e Giemsa - especializado em
clulas sangneas, cora de rosa os eritrci-

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tos e os grnulos eosinfilos, de prpura o
ncleo dos leuccitos e grnulos basfilos e
de azul o citoplasma dos moncitos e dos linfcitos.
Para corar peas includas em parafina
necessria a retirada da parafina e a hidratao da pea. Este procedimento realizado a
partir de uma seqncia de banhos em xilol,
lcool e gua, inversamente ao procedimento
executado na etapa de incluso. Segundo Junqueira e Junqueira (1983), o procedimento
o seguinte:
1 Banho de xilol ___________________5min
2 Banho de xilol ___________________2min
3 Banho de xilol ___________________1min

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as duas solues devem ser misturadas e aquecidas at a fervura. O xido de mercrio adicionado soluo que deve ser resfriada, mergulhando-se o frasco em gua fria. O cido
actico ento colocado na soluo fria para
finalmente ser filtrada.
O prazo de envelhecimento desta soluo entre dois e trs meses. A partir desta
data o corante perde suas propriedades e no
reage adequadamente com o tecido.
b) Material necessrio para a Eosina
(Junqueira e Junqueira,1983):
Eosina solvel em gua _______________ 1g
gua destilada ___________________ 100ml

lcool 100% ______________________1min


lcool 95% ______________________1min
lcool 70% ______________________1min
gua _____________________________2min
Aps a hidratao, os cortes so corados de acordo com o procedimento mais apropriado para a anlise que ser realizada posteriormente. Aqui sero abordadas as etapas
do mtodo da hematoxilina-eosina, por ser o
mais utilizado e por ter um resultado final satisfatrio.

Tcnica da hematoxilina-eosina (HE)


a) Material necessrio para a soluo de
Hematoxilina de Harris (Junqueira e Junqueira,1983):

c) Procedimentos para a colorao:


Embora as etapas possam ser definidas, o tempo em cada fase depende da qualidade e da idade das solues dos corantes.
Deste modo, poder ser observada nas etapas abaixo uma variao muito grande em
relao ao tempo que pode ser ajustado durante o procedimento no laboratrio. De acordo com Junqueira e Junqueira (1983), as etapas so:
1) desparafinar e hidratar os cortes;
2) corar em hematoxilina entre 5 e
15min;
3) lavar em gua corrente por 10min;
4) corar em eosina entre 1 e 10min;
5) lavar em gua e desidratar em
lcool 70% rapidamente;
6) diafanizar e montar em resina.

Hematoxilina ______________________ 2,5g


lcool 100% _____________________ 25ml
Almen de amnio ou potssio ______ 50g
gua destilada ___________________ 500ml
xido vermelho de mercrio _______ 1,25g
cido actico _____________________ 20ml
Inicialmente, a hemotoxilina deve ser
dissolvida no lcool e o almen na gua destilada (previamente aquecida). Posteriormente,

d) Montagem Final da Lmina:


Este processo consiste em depositar
uma gota de resina lquida sobre o corte que
est aderido lmina de vidro e cobri-lo com
uma lamnula. Nesta etapa deve-se evitar as
bolhas de ar que se formam na resina durante
a colocao da lamnula. Finalmente a lmina
catalogada.
A resina depois de seca garantir uma
lmina permanente que poder durar anos.

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Tcnicas Utilizadas para Confeco de


Lminas sseas

Etileno Diamino Tetra Acetato (EDTA) __ 5,5g

Para a confeco de lminas sseas so


utilizadas duas tcnicas: a primeira consiste no
desgaste do osso atravs do polimento com
lixa (Fig. 4). Inicialmente, retirado um fragmento do osso a ser analisado. Esse fragmento colado com blsamo do Canad sobre uma
superfcie de madeira plana. Em um bloco de
madeira colada uma lixa de granulometria
grossa para o primeiro polimento. O polimento
final feito com uma lixa mais fina, com movimentos firmes e no mesmo sentido, at que se
tenha obtido uma camada de osso delgada.
O osso retirado da madeira com xilol e aderido superfcie da lmina de vidro. Sobre ele
colocada uma lamnula e fixada com resina
(Amaral et al. 1994 ; Timm, 1996 a,b).

Formol ___________________________ 10ml

gua ____________________________ 90ml

Aps a fixao, o material lavado para


retirar o excesso de fixador e transferido para
um descalcificador. No recomendado utilizar fragmentos maiores do que 3mm de dimetro. Deve-se usar, no mnimo, 40 vezes o
volume do tecido, agitando o frasco vrias vezes ao dia e trocando o descalcificador a cada
2 ou 3 dias. Os tecidos descalcificados no
devem ser transferidos diretamente ao lcool
70%, e sim, lavados em gua corrente por algumas horas.
Para a confeco das lminas histolgicas de ossos descalcificados seguem-se as etapas rotineiras citadas anteriormente.

Microscopia ptica de Alta Resoluo


A microscopia ptica utiliza cortes delgados e preparados com qualquer uma das
tcnicas descritas anteriormente, com o objetivo de estudar a morfologia celular. A resoluo das estruturas pela microscopia ptica
da ordem de 0,2 micrmetros. Na prtica histolgica em parafina, raramente inferior a 0,6
micrmetros, o que mesmo assim proporciona um bom resultado visual (Stevens e Lowe,
1995).

Figura 4. Confeco de lminas sseas por desgaste.

A segunda tcnica implica na descalcificao do osso. Este procedimento tem por


objetivo retirar o fosfato de clcio do tecido
sseo para que possa ser seccionado posteriormente. A descalcificao pode ser feita atravs da imerso em cidos ou compostos quelantes.
Os quelantes capturam os ons metlicos (entre os quais o clcio), removendo-os dos
tecidos com um mnimo de alterao. Embora
de ao mais lenta, agridem menos o tecido, e
so mais utilizados nos procedimentos histolgicos. Uma das frmulas mais usadas, segundo Junqueira e Junqueira (1983):

O microscpio ptico possui um arranjo especfico de grupos de lentes para ampliar


a imagem do tecido. Como tem mais que uma
lente, freqentemente conhecido como microscpio composto. A fonte de luz provm de
um bulbo eltrico com um filamento de tungstnio, cuja luz conflui para um feixe focal atravs das lentes do condensador. Microscpios
mais antigos no possuem sua prpria fonte
de luz, necessitando do auxlio de uma luminria que projeta a luz para um espelho situado
na base do microscpio que a reflete para o
condensador.
Em ambos os casos, o feixe de luz atravessa o tecido delgado fixado na lmina histolgica e penetra em uma das lentes objetivas.
Estas lentes esto situadas em um cilindro
mvel conhecido como canho. Normalmen-

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te, existem quatro lentes objetivas que ampliam a imagem em 4, 10 e 40 vezes e uma lente
de imerso que amplia a imagem em 100 vezes, onde deve ser utilizado um leo mineral.
A imagem das objetivas conflui e posteriormente aumentada pela lente ocular que
normalmente amplia a imagem em um mltiplo de 10. A imagem ampliada pela objetiva
deve ser multiplicada pelo valor da ocular para
a obteno do valor de aumento total.
A focalizao da imagem obtida atravs
do uso de parafusos que movem as lentes objetivas para cima e para baixo. O parafuso macromtrico move-se em intervalos maiores que o
parafuso micromtrico. A imagem projetada na
retina invertida da direita para a esquerda e de
cima para baixo (Gartner e Hiatt, 1999).

Microscopia Eletrnica
Nos microscpios pticos, as lentes focalizam a luz visvel (feixe de ftons). Nos microscpios eletrnicos, os eletromagnetos focalizam um feixe de eltrons. A resoluo cerca de mil vezes maior do que a de um microscpio ptico, podendo ampliar em 150.000
vezes a imagem de um objeto, o que permite,
por exemplo, a visualizao de macromolculas como DNA (Gartner e Hiatt, 1999).

Microscopia Eletrnica de Transmisso


(MET)
A preparao de amostras de tecido para
o MET (Fig. 5) envolve as mesmas etapas bsicas da microscopia ptica. Contudo, fixadores
especiais tm sido desenvolvidos, uma vez que
as ligaes cruzadas entre protenas devem ser
mais finas em funo da alta resoluo do aparelho. Estes fixadores incluem solues tamponadas de glutaraldedo, paraformaldedo, tetrxido de smio e permanganato de potssio que
no s atuam na preservao das ultraestruturas, como tambm atuam como corantes eltrons-densos. Para a incluso tambm foi desenvolvida uma resina especial, como a resinas
epxi e o bloco resultante no maior do que
1mm3 (Gartner e Hiatt, 1999). Os cortes devem
ser ultrafinos, na ordem de 0,1 micrmetro de
espessura (Stevens e Lowe, 1995).

Figura 5. Fotografia de um Microscpio Eletrnico de


Transmisso (MET).

Os feixes de eltrons so produzidos


numa cmara a vcuo pelo aquecimento de
um filamento de tungstnio, o catdio. Os eltrons so atrados para o andio, carregado
positivamente, numa placa de metal em forma
de amndoa com um orifcio central. O feixe
de eltron focalizado no material atravs de
eletromagnetos anlogos s lentes do condensador do microscpio ptico.
Os tecidos so corados com metais pesados (urnio ou chumbo) que precipitam nas
membranas lipdicas, fazendo com que os eltrons percam parte da sua energia cintica
medida que interagem com o tecido. Os eltrons que deixam os tecidos esto sujeitos aos
campos magnticos de muitos eletromagnetos adicionais, que focalizam o feixe numa placa fluorescente. medida que os eltrons alcanam a placa, sua energia cintica convertida em pontos luminosos. feito um registro permanente da imagem resultante, atravs da substituio de um filme sensvel ao
eltron no local da placa fluorescente, com a
produo de um negativo a partir do qual pode
ser impressa uma fotomicrografia em preto e
branco (Gartner e Hiatt, 1999; Stevens e Lowe,
1995).

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Microscopia Eletrnica de Varredura
(MEV)
Diferentemente da MET, a Microscopia
Eletrnica de Varredura utilizada para observar a superfcie de um espcime slido (ao invs de cortes), proporcionando uma imagem
tridimensional (Fig. 6). O material preparado
com uma camada de metal pesado como ouro
ou paldio, depositado na sua superfcie. Conforme o feixe de eltrons varre a superfcie do
material, alguns se refletem (eltrons de disperso) e outros so ejetados (eltrons secundrios) a partir da cobertura do metal pesado.
Estes eltrons so capturados por detectores,
interpretados, coletados e mostrados em um
monitor com uma imagem tridimensional.
A imagem pode ser fotografada ou digitalizada
(Gartner e Hiatt, 1999).

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tirado e a rplica examinada ao microscpio
eletrnico de transmisso, revelando, por
exemplo, as protenas intercalares da membrana endoplasmtica (Gartner e Hiatt, 1999).

Fracionamento Celular
Esta tcnica permite que clulas inteiras sejam rompidas de maneira controlada. As
diferentes partculas que resultam so separadas para anlise funcional ou estrutural, atravs da centrifugao das clulas rompidas em
solues especializadas de densidade conhecida, alta velocidade. Os ncleos, as mitocndrias, os retculos endoplasmticos e os ribossomos podem ser isolados em forma relativamente pura (Stevens e Lowe, 1995).

INTERPRETAO DE CORTES
HISTOLGICOS
Analisar uma lmina histolgica pode ser
uma tarefa difcil. O primeiro passo entender
o que se est observando. O rgo antes tridimensional, agora est seccionado, preparado,
corado e fixado em uma lmina de vidro. As
estruturas, quando cortadas transversalmente,
se apresentam de modo distinto de quando
cortadas longitudinalmente. Alguns planos de
corte podem ser observados na Fig. 7.
Figura 6. Fotografia de um Microscpio Eletrnico de
Varredura (MEV).

Criofratura
Tecidos congelados rapidamente, mas
tratados com criopreservativos, no desenvolvem cristais de gelo durante o processo de
congelamento e, por isso, no sofrem dano
mecnico. Quando seccionado por uma navalha fria, o tecido sofre fratura de acordo com o
plano de clivagem, nas regies com menos
pontes moleculares. Nas clulas, a fratura tende a ocorrer entre as camadas interna e externa das membranas. A face fraturada coberta
por platina ou carbono, formando acmulos em
apenas um dos lados da projeo, o que gera
uma rplica da superfcie. O tecido ento re-

Figura 7. Tipos de cortes que podem ser obtidos (Retirado de Gartner e Hiatt, 1999).

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Entendido isto, basta ter ateno aos
detalhes, desenhar o que se est sendo observado e acompanhar esta tarefa com um
atlas histolgico. O mundo das microestruturas anatmicas (Fig. 8) pode ser bem interessante. Visualizar a base de todo organismo
vivo, sua relao com outras clulas, sua organizao em tecidos e entender que somos
um conjunto de estruturas vivas formando um
nico ser fazem parte da formao de todo
bilogo.

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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
AMARAL, Daoiz Mendoza; MENDONA, Olavo Valmor; LAURINO, Laviera B. Patologia ssea Fundamentos. So Paulo: BYK, 1994.
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bone tissues. Part 1. The Texas Journal of
Science, p. 405-443, 1956.
GARTNER, Leslie P.; HIATT, James L. Tratado de
histologia. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
1999.
JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO, J. Histologia bsica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
1995.
JUNQUEIRA, Luis Carlos U.; JUNQUEIRA, Luiza Maria M. S. Tcnicas bsicas de citologia e
histologia. So Paulo: Santos,1983.

Figura 8. Corte histolgico da costela de Caiman


latirostris realizado pelo mtodo de desgaste. Seco
transversal. Aumento: 96x. (Retirado de Timm, 1996b).

AGRADECIMENTO
Ao tcnico administrativo Paulo Roberto Peres Carvalho do Centro de Microscopia
Eletrnica da UFRGS (CME) pela permisso de
fotografar os Microscpios Eletrnicos.

STEVENS, Alan; LOWE, James. Histologia. So


Paulo: Manole, 1995.
TIMM, Llian de L. Preliminary data on the pachyostosis in rib of the Trichechus inunguis
Natterer, 1883 (Mammalia: Sirenia). In: Sesso
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Anais da Academia Brasileira de Cincias.
Porto Alegre: UFRGS/ILEA, 1996a. p. 296.
______ . Estudo paleo-histolgico acerca da
paquiostose em mesossauros.1996b. 181f.
Dissertao (Mestrado em Geocincias) - Instituto de Geocincias, Universidade Federal do
Rio Grande do Sul, 1996b.

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