Métodos de estudo de

Células e Tecidos.

Profª. Me. Gilmara Prado de Sousa

 Histologia

• Estudo das células e dos tecidos do corpo

e de como essas estruturas se organizam
para constituir os órgãos.
Técnicas de estudo da biologia celular

• Microscopia de luz;
• Microscopia confocal;
• Microscopia de fluorescência;
• Microscopia eletrônica;
• Radioautografia em tecidos;
• Cultura celular in vitro;
• Fracionamento celular;
• Histoquímica e citoquímica;
• Imunocitoquímica.
 Estudo Celular em Microscopia

• Os métodos de preparação podem ser:

 Exame a fresco (in vivo): verifica tipos de movimentos,
estrutura celular, aspectos de reprodução celular,
aspectos de ingestão e excreção de substâncias
metabólicas.
 Estudo Celular em Microscopia
 Exame de tecidos mortos e preservados: permite a
obtenção de preparados histológicos permanentes
(lâminas) para o estudo ao microscópio.

• PROBLEMAS:
 Os órgãos na sua maioria são muito espessos e precisam
ser reduzidos a cortes finos.

 Células são translúcidas.

O material é submetido a uma sequência de tratamentos

(técnicas histológicas) a fim de adquirir condições de ser
analisado ao microscópio de luz.
 Técnicas Histológicas

 Coleta do material: retirado de um animal anestesiado

ou imediatamente após a sua morte.

 Tipos de coletas:

• Biópsia: remoção de tecido vivo.

• Necrópsia: remoção do tecido morto.
• Punção.
• Esfregaço.
• Escarificação: raspagem
 Preparação do material

 FIXAÇÃO: Realizada logo após a remoção do material

biológico.
 Objetivos: Evitar a destruição das células por suas próprias
enzimas (autólise) ou por bactérias. Endurecer os
fragmentos e preservar a estrutura e a composição
molecular dos tecidos.
Químicos: Tamanho das peças:
Formaldeído 4%. 3 mm a 1 cm.
Glutaraldeído O volume do
 Agentes fixadores: fixador: 20 vezes o
volume da peça.
Físicos:
Congelamento.
 Preparação do material

 Características de um bom fixador:

 Poder de penetração;
 Endurecer a peça para facilitar a obtenção de cortes;
 Deve matar microrganismos que eventualmente
contaminam as peças;
 Conservar o máximo possível da estrutura celular;
 Facilitar a coloração dos cortes;
 Insolubilizar as proteínas.
 Preparação do material
 Inclusão: Processo de impregnação dos tecidos, por
meio da infiltração em substâncias que lhes
proporcionem consistência rígida.
 Etapas para a inclusão da peça
• Desidratação - solução crescente de álcoois (70% a 100%).
• Diafanização – substância intermediaria (Xilol, benzol).
• Impregnação - Parafina e resinas de plástico.
• Confecção do bloco de parafina com a peça.

 Objetivos: obter cortes finos

Espessura média dos cortes - 3 a 8µm.

 Preparação do material
 Coloração: Contratar, evidenciar os vários componentes
dos tecidos, células e da MEC. Tecido conjuntivo

Corantes básicos:
• Hematoxilina (azul ou violeta)
• Azul de toluidina
• Azul de metileno

Corantes ácidos:
• Eosina (rosa)
• Orange G
• Fucsina ácida
Tecido muscular

Tecido muscular
 Microscopia

 Microscópio de luz ou óptico: permite a visualização de

estruturas por meio da incidência de luz.

 Composto por partes mecânicas e ópticas.

 Parte Óptica: 3 sistemas de lentes
• Condensador: concentra e projeta a luz sobre as células.
• Objetiva: recebe a luz que atravessou o espécime,
projeta uma imagem aumentada.
• Ocular: Amplia a imagem e a projeta na retina, câmera
fotográfica etc.
Microscopia - MO
 Tipos de microscópios ópticos

• Microscópio ultravioleta -investigação

científica, para estudo de evidências.
• Microscópio de fluorescência – permite a
identificação de compostos naturalmente
fluorescentes.
• Microscópio de contraste de fase -
permite o estudo de células vivas,
cultivadas, sem uso de corantes
• Microscópio de polarização - Permite
estudar aspectos sobre a organização
molecular da célula.
 Microscopia eletrônica
 Baseia-se na interação entre elétrons e componentes dos
tecidos.
ME. Transmissão
 Possibilita imagens de alta
resolução – em torno de 3nm.

 Ampliação até 400 mil vezes.

 Usado para analisar partículas
ou moléculas isoladas.
 Microscopia eletrônica
 ME. Transmissão

 Lente condensadora – focaliza o

feixe.
 Elétrons interagem com átomos da
amostra.
 Lente objetiva aumenta a imagem e
projeta para as outras lentes.
 Microscopia eletrônica

 ME. varredura
Os elétrons percorre a
permitem obter imagens tridimensionais, sendo bastante
superfície da amostra.
utilizados para a observação da estrutura superficial da
Os elétrons são capturados
amostra. por um detector e
transmitidos a amplificadores
e geram a imagem