Introduo aos mtodos espectromtricos

A espectrometria compreende um grupo de mtodos analticos baseados nas propriedades dos tomos e molculas de absorver ou emitir energia eletromagntica em uma determinada regio do espectro eletromagntico.

Propriedades da radiao eletromagntica

A luz pode ser considerada como uma forma de energia radiante que propagada como ondas transversas.

Propagao da radiao eletromagntica

Parmetros de uma onda

COMPRIMENTO DE ONDA (): corresponde a distncia entre duas cristas de onda, medida em direo progresso de onda. FREQNCIA (): representa o nmero de oscilaes completas que uma onda faz a cada segundo. A unidade de freqncia s-1. Uma oscilao por segundo tambm chamada de 1 Hertz (Hz). VELOCIDADE DE PROPAGAO (vi): multiplicao da freqncia pelo comprimento de onda (vi = i). A unidade em metros por segundo.

Quando a radiao eletromagntica emitida ou absorvida, ocorre uma transferncia permanente de energia no objeto emissor ou no meio absorvente. Para descrever esse fenmeno, necessrio entender a radiao eletromagntica no como uma coleo de ondas mas sim como uma corrente de partculas discretas chamadas FTONS. Toda a radiao eletromagntica quantizada em ftons: isto , a menor poro de radiao eletromagntica que pode existir um fton, qualquer que seja seu comprimento, freqncia ou energia. Ftons esto sempre se movendo a velocidade da luz (a qual varia de acordo com o meio no qual ela viaja) em relao a todos os observadores. Os ftons so partculas que apresentam propriedades interessantes. Vejamos algumas dessas propriedades: 1) So partculas que no apresentam massa. 2) So partculas que possuem energia bem definida.

Relao
A relao entre FREQNCIA e COMPRIMENTO DE ONDA :

1 freqncia = nmero de onda = comprimento de onda velocidade da luz 1

= =

c = 2,99793 x 108 m s -1

A relao entre ENERGIA e COMPRIMENTO DE ONDA :

E=

hc

h = constante de Planck = 6,6 x 10 -34 m 2 kgs -1

Espectro eletromagntico

1. A pequena banda denominada luz compreende o conjunto de radiaes para as quais o sistema visual humano sensvel. 2. A banda do ultravioleta formada por radiaes mais energticas que a luz (tem menor comprimento de onda); por isso que penetra mais profundamente na pele, causando queimaduras quando voc fica muito tempo exposto radiao solar. 3. A banda de raios X mais energtica que a ultravioleta e mais penetrante; isso explica porque utilizada em medicina para produzir imagens do interior do corpo humano. 4. As radiaes da banda infravermelha so geradas em grande quantidade pelo Sol, devido sua temperatura elevada; entretanto podem tambm ser produzidas por objetos aquecidos (como filamentos de lmpadas).

Absoro de radiao eletromagntica

Regio raios raios X ultravioleta visvel infravermelho microondas ondas de rdio ondas de rdio vibrao e rotao rotao acoplamento de spins acoplamento de spins Tipo de transio transies nucleares transies eletrnicas transies eletrnicas

Estados energticos das espcies qumicas

tomos, ons e molculas podem existir somente em certos estados discretos, caracterizados por quantidades definidas de energia (estados eletrnicos). Se uma energia de uma certa magnitude for aplicada no tomo, a energia ser absorvida por este e os eltrons sero promovidos para camada de maior energia. E1 Excitao E2 Estado fundamental Estado excitado

Ao efetuar essa transio de um estado de energia para outro, a radiao de freqncia ou de comprimento de onda est relacionada com a diferena de energia entre os dois estados pela equao:

E1 E0 =

hc

Alm de apresentarem estados eletrnicos, as molculas tambm apresentam: Estados vibracionais quantizados que esto associados energia das vibraes interatmicas Estados rotacionais quantizados que provm da rotao das molculas em torno de seus centros de gravidade.

Rotacional

Vibracional

Emisso de radiao
A radiao eletromagntica produzida quando uma partcula excitada (tomos, ons ou molculas) relaxa para nveis de energia mais baixos, fornecendo seu excesso de energia como ftons.

Excitao

A radiao de uma fonte excitada convenientemente caracterizada por meio do espectro de emisso, que normalmente tem a forma de um grfico de potncia relativa da radiao emitida em funo do comprimento de onda ou freqncia.

Tipos de espectros
LINHAS: composto por uma srie de picos estreitos e bem definidos gerados pela excitao de tomos individuais. Este tipo de espectro caracterstico de tomos ou de ons excitados que emitem energia na forma de luz de comprimento de onda bem caracterstico. BANDAS: consiste de muitos grupos de linhas to prximas que no so completamente resolvidas. Grupos de linhas se aproximam cada vez mais at chegar a um limite, a cabea da banda. Este tipo de espectro caracterstico de molculas excitadas. CONTNUO: responsvel pelo aumento da radiao de fundo que ocorre acima de 350nm. So emitidos por slidos incandescentes e, neles, linhas claramente definidos esto ausentes. Essa classe de radiao trmica, que chamada de radiao do corpo negro, caracterstica da superfcie emissora, e no do material que compe a superfcie.

Absoro da radiao
Quando a radiao atravessa uma camada de slido, lquido ou gs, algumas freqncias so seletivamente removidas pela absoro, um processo no qual a energia eletromagntica transferida para tomos, ons, molculas que compem a amostra.

As radiaes visvel e ultravioleta tm energia suficiente para provocar as transies somente de eltrons da camada mais externa, ou dos eltrons de ligao.

As freqncias dos raios X so muitas ordens de grandeza mais energticas e so capazes de interagir com os eltrons mais prximos do ncleo dos tomos.

Absoro molecular
Os espectros de absoro para molculas poliatmicas nmero de estados de energia para os tomos isolados. A energia associada s bandas de uma molcula, constituda de trs componentes. E = Eeletrnica + Evibracional + Erotacional mais complexos nmero de estados de energia das molculas geralmente enorme quando comparado com o

Nveis de energia vibracionais

Aspectos quantitativos
Principais classes de mtodos espectroqumicos

Classe

Potncia de radiao medida

Relaes de concentrao Pe = kc Pt = kc

Tipos de mtodos

Emisso Luminescncia

Emitida, Pe Luminescncia, Pt

Emisso atmica Fluorescncia atmica e molecular, fosforescncia e quimiluminescncia

Espalhamento Absoro

Espalhada, Psc Incidente, P0 e transmitida, P

Psc= kc -log P/P0 = kc

Espalhamento Raman, turbidimetria e nefelometria Absoro atmica e molecular

Todas as classes precisam da medida de potncia radiante, P, que a energia de um feixe de radiao que incide em uma determinada rea por segundo. Mtodos de absoro requerem duas medidas de potncia: uma antes que um

feixe passe atravs do meio que contm o analito (P0) e outra depois (P).

Mtodos de absoro
Transmitncia (T): frao da radiao transmitida atravs do meio

P T= P

P %T = x100% P
0

Absorbncia (A): definida pela equao:

A = log T = log
10

P0
Soluo absorvente de concentrao c

Lei de Beer

A= bc : absortividade molar (L mol-1 cm-1)

coef. =b
A

b: comprimento do caminho ptico (cm) c: concentrao do analito (mol L-1)

Exemplo
A 452 nm, uma soluo com 1,68x10-3 g L-1 de clorofila B em etanol apresentou transmitncia igual a 49,7%. Sabendo que sua absortividade molar nesse comprimento de onda de 1,63x105 L mol-1 cm-1, calcule o peso molecular da clorofila B, considerando b =1,00cm.

Componentes dos instrumentos pticos

Os instrumentos espectroscpicos comuns tm cinco componentes, incluindo: Uma fonte estvel de energia radiante Um recipiente transparente para conter a amostra Um dispositivo que isole uma regio restrita do espectro para a medida Um detector de radiao, que converta a energia radiante para um sinal til (normalmente eltrico) Um processador e um dispositivo de sada que apresenta o sinal transluzido em uma escala de medida, em um medidor digital ou registrador grfico.

Introduo espectrometria de absoro molecular no UV/Vis

Aplicvel na regio de comprimento de onda entre 160 e 780nm. Est baseada na medida de transmitncia ou absorbncia. Espcies que absorvem no ultravioleta ou no visvel (espcies coloridas). Espcies que no absorvem: reao com cromforo. Cromforo: grupo funcional que tem um espectro de absoro caracterstico na regio do UV-Vis. Lei de Beer Aplicao da lei de Beer a misturas: Atotal = A1 + A2 + A3 +...+An = 1bc1 + 2bc2 + 3bc3+...+nbcn

Limitaes da Lei de Beer

Limitao real: A lei vlida somente para baixas concentraes. Altas concentraes = interao entre as molculas afeta a distribuio de carga, havendo assim um desvio linear de A x c. Desvios qumicos: Surgem quando um analito se dissocia, se associa ou reage com um solvente para dar um produto que tem um espectro de absoro diferente. Ex: HA + H2O H3O+ + A-

CONDIO DE LINEARIDADE: Uso de um tampo ou HA = A-

Desvios qumicos

Desvios qumicos

Cr2O72- + H2O

2CrO42- + 2H+

Desvios instrumentais
A lei s vlida para radiao monocromtica, ou seja, para um nico comprimento de onda (). A concentrao da absorbncia medida no mais linear quando as absortividades molares diferem. Mais ainda com o aumento da diferena entre elas podem ser esperados maiores desvios da linearidade.

Desvios instrumentais
COMO MINIMIZAR O DESVIO? Escolher regio onde o constante na banda selecionada.

Desvios instrumentais
Radiao espria

A= log

P0 + Ps P + Ps

Ps = potncia de radiao espria no-absorvida

Aplicao da Lei de Beer

radiao monocromtica solues diludas condies reacionais (excesso de reagente, pH, natureza do solvente) A < 1,0

Instrumentao

Fontes Seletores de comprimento de onda Recipientes para amostra Transdutores de radiao Processadores de sinal e dispositivos de leitura

Fontes
Necessita-se de uma fonte contnua cuja potncia no varie bruscamente em uma faixa considervel de comprimento de onda.

Lmpadas de deutrio e hidrognio Um espectro contnuo na regio do ultravioleta produzido por excitao eltrica de deutrio ou hidrognio em baixa presso. D2 + Ee deutrio excitada. D 2* D + D + h Onde Ee a energia eltrica absorvida pela molcula e D2* a molcula de

Emisso de uma lmpada de deutrio

Lmpadas de filamento de tungstnio A distribuio de energia dessa fonte aproxima-se da de um corpo negro e , portanto, dependente da temperatura. til na regio de comprimentos de onda entre 350 e 2500nm.

Lmpadas de arco de xennio Produz radiao intensa pela passagem de corrente em uma atmosfera de xennio. O espectro contnuo na faixa entre 200 e 1000nm.

Seletores de comprimento de onda

Para a maioria das anlises espectroscpicas, necessria radiao constituda de um grupo estreito de comprimentos de onda, limitado e contnuo chamado BANDA. Uma largura de banda estreita aumenta a sensibilidade de medidas de absorbncia, pode fornecer seletividade para o mtodo de absoro, e freqentemente um pr-requisito, do ponto de vista da obteno de uma relao linear entre o sinal ptico e a concentrao.

Sada de um seletor de comprimentos de onda tpico

Tipos
FILTROS e MONOCROMADORES FILTROS Filtros de interferncia: esto disponveis para as regies UV, VIS e infravermelho do espectro. Utilizam a interferncia ptica para fornecer bandas estreitas de radiao.

Filtros de absoro: so geralmente mais baratos que os filtros de interferncias. So restritos regio visvel do espectro. O tipo mais comum consiste de vidro colorido, ou de um corante suspenso em gelatina e disposto entre placas de vidro.

MONOCROMADORES: so projetados para varredura espectral. Em termos de construo mecnica empregam fendas, lentes, espelhos, janelas e redes ou prismas. Os materiais empregados na fabricao desses componentes dependem da regio de comprimento de onda em que se pretende us-los.

Componentes dos monocromadores

Efeito da largura da fenda sobre a resoluo

Recipientes para amostra

Detectores
Nos primeiros instrumentos espectroscpicos, os detectores eram o olho humano ou uma placa ou filme fotogrfico.

Esses meios de deteco foram substitudos por transdutores, que convertem energia radiante em sinais eltricos. Ideal apresentar uma alta sensibilidade, uma alta relao sinal- rudo, uma resposta constante sobre um intervalo considervel de comprimentos de onda e um tempo de resposta rpido. Dois tipos: um responde a ftons (detectores fotoeltricos) e outro a calor.

Transdutores fotoeltricos
-Clulas fotovoltaicas, nas quais a energia radiante gera uma corrente na interface na interface entre uma camada de material semicondutor e um metal. -Tubos fotomultiplicadores, que contm superfcie fotoemissora, alm de vrias superfcies adicionais que emitem uma cascata de eltrons quando atingidas por eltrons provenientes da rea fotossensvel.

Transdutores de diodo de silcio

-consiste de uma juno pn inversamente polarizada formada em um chip de silcio. -menos sensveis que os tubos fotomultiplicadores -respondem na faixa espectral em torno de 190 a 1100nm.

Tipos de instrumentos
Feixe nico

Feixe duplo

Multicanal

Desenvolvimento de um mtodo
-Espectro: registro de um espectro na regio de interesse seleo do

-Fixao de comprimento de onda: monitoramento da absorbncia no desejado -Cintico: registro da absorbncia em funo do tempo. -Os efeitos das variveis que influenciam a absorbncia devem ser conhecidos. -Limpeza e manuseio das clulas -Determinao da relao entre absorbncia e concentrao.

Anlise quantitativa
A leitura do sinal para a amostra e padro lida separadamente e a identificao do composto desejado feita atravs da comparao do comprimento de onda.

CURVA DE CALIBRAO

ABSORBNCIA

Absorbncia = a + b.concentrao Absorbncia = bC

CONCENTRAO DO PADRO

Exemplo

[MnO4-] / mmol L-1 Absorbncia 1 0,180 2 0,370 3 0,600 4 0,800 5 0,990 Amostra 1 0,400 Amostra 2 0,189

Mtodo da adio de padro

-Adies de quantidades conhecidas do analito na amostra (spiking) -Elimina ou minimiza interferncias introduzidas pela matriz de amostras complexas -A matriz permanece quase inalterada aps cada adio, a nica diferena concentrao do analito.

S=

kVs c s + kVx c x V
t

A equao da reta : y = a + bx y = resposta do instrumento x = concentrao da soluo padro b = inclinao da reta a = interseco no eixo dos y

a=

kVx c x Vt
b= kVs Vt

Exemplo
Uma amostra de 2,00 mL de urina foi tratada com um reagente para gerar cor com fosfato; aps, a amostra foi diluda a 100 mL. A uma segunda amostra de 2,00 mL, foram adicionados exatamente 5,00 mL de uma soluo de fosfato contendo 0,0300 mg de fosfato / mL, a qual foi tratada do mesmo modo que a amostra original. A absorbncia da primeira soluo foi 0,428; a segunda, 0,538. Calcule a concentrao em mg de fosfato por mL da amostra.

Anlise de uma mistura Atotal = A1 + A2 + A3 +...+ An = 1bc1 + 2bc2 + 3bc3+...+nbcn

O que fazer quando os espectros se sobrepem? trabalhar com vrios comprimentos de onda

AX
XS = soluo padro de X YS = soluo padro de Y m = mistura

A [Y ] Y = [Y ] S AX

[X ] + [X ] S

Inclinao

Interseco

Anlise de uma mistura

O que fazer quando os espectros esto bem resolvidos?

A = Xb[X] + Yb[Y]

A = Xb[X] + Yb[Y]

se aplicam a cada espcie em cada comprimento de onda devem ser medidos em experimentos separados

Exemplo
Uma mistura dos compostos X e Y numa clula de 1,000 cm apresentou uma absorbncia de 0,957 em 272 nm e de 0,559 em 327 nm. Encontre as concentraes de X e Y na mistura.

(mol L-1 cm-1) (nm) 272 327 X 16.440 3.990 Y 3.870 6.420

Ponto isosbtico

Ponto isosbtico
465 A 465 = HIn b[ HIn] + 465b[ In ] In

Em 465nm:
465 = 465 HIn In

[ HIn] + [ In ] = cte

Titulaes espectrofotomtricas
Analito, reagente ou produto absorvem radiao

Vantagens
-Resultados mais exatos. -Presena de outras espcies absorventes podem no interferir, uma vez que apenas uma variao na absorbncia est sendo medida. -Os dados experimentais so medidos bem distante da regio do ponto de equivalncia. -Solues relativamente diludas podem ser tituladas.

Exemplo

Cu2+ e Bi3+

2,0 mmol L-1 , = 745nm

= 745nm

nenhum dos ctions e nem os reagentes absorvem, nem

complexo de bismuto mais estvel formado, somente o complexo de cobre.