UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR INSTITUTO DE CINCIAS DO MAR PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS MARINHAS TROPICAIS

Lucas Buruaem Moreira

AVALIAO DE RISCO ECOLGICO DA CONTAMINAO DE SEDIMENTOS E MATERIAL DRAGADO NA REGIO DO PORTO DO MUCURIPE-CE ATRAVS DE MTODOS ECOTOXICOLGICOS.

FORTALEZA 2013

Lucas Buruaem Moreira

AVALIAO DE RISCO ECOLGICO DA CONTAMINAO DE SEDIMENTOS E MATERIAL DRAGADO NA REGIO DO PORTO DO MUCURIPE-CE ATRAVS DE MTODOS ECOTOXICOLGICOS.

Tese apresentada ao Curso de Cincias Marinhas Tropicais do Instituto de Cincias do Mar, da Universidade Federal do Cear, como parte dos requisitos para obteno do ttulo de Doutor em Cincias Marinhas Tropicais.

Orientador: Prof. Dr. Denis Moledo de Souza Abessa

Fortaleza - Cear 2013

Dados Internacionais de Catalogao na Publicao Universidade Federal do Cear Biblioteca Rui Simes de Menezes M838a Moreira, Lucas Buruaem. Avaliao de risco ecolgico da contaminao de sedimentos e material dragado na regio do porto do Mucuripe CE atravs de mtodos ecotoxicolgicos / Lucas Buruaem Moreira. 2013. 153 f.: il. color., enc. ; 30 cm. Tese (doutorado) Universidade Federal do Cear, Instituto de Cincias do Mar, Programa de Ps-Graduao em Cincias Marinhas Tropicais, Fortaleza, 2013. rea de Concentrao: Utilizao e Manejo de Ecossistemas Marinhos e Estuarinos. Orientao: Prof. Dr. Denis Moledo de Souza Abessa. Co-Orientao: Prof. Dr. Letcia Veras Costa-Lotufo 1. Avaliao de riscos ecolgicos. 2. Gesto ambiental. 3. Mucuripe, Porto de (Fortaleza, CE). I. Ttulo. CDD 577.6

Father can you hear me? How have I let you down? I curse the day that I was born and all the sorrow in this world Let me take you to the herding ground where all good men are trampled down Just to settle a bet that could not be won between a prideful father and his son Will you guide me now for I can't see a reason for the suffering and this long misery What if every living soul could be upright and strong? Well then I do imagine When all soldiers lay their weapons down or when all kings and all queens relinquish their crowns Or when the only true messiah rescues us from ourselves it's easy to imagine There will be, Yeah there will be, And there will be sorrow no more. Brett Gurewitz &Greg Graffin

Agradecimentos Agradeo primeiramente minha famlia, minhas irms e especialmente meus pais, que fizeram de todo o possvel para eu ser a pessoa que sou hoje. Sou grato tambm ao Prof. Denis Abessa pela amizade ao longo desses anos de orientao e conselhos, sempre instigando a inquietao e curiosidade como combustvel para a busca do conhecimento. Parafraseando nosso amigo Robson: Valeu Mestre!. Prof. Letcia Veras Costa-Lotufo pela co-orientao, por todo apoio durante o projeto e pela insistncia em tentar me consertar, conforme dito agora a pouco (enquanto eu escrevia estes agradecimentos). A Paula Jimenez, sempre ao meu lado e que faz valer toda a espera possvel, caso seja, da sua companhia. A Marcela (Tchuca), Luciane, Robson e Marcionlia. Parte da caminhada com amigos como vocs mais do que tranqila. Agradeo tambm ao Eduardo Freitas e Soldado, pela disponibilidade e apoio nas coletas. Vocs foram fundamentais nisso e se no fossem os sedimentos ressuspensos durante a dragagem os mergulhos seriam melhores. Aos colegas do laboratrio de Ecotoxicologia Marinha e todos os amigos da ps-graduao do LABOMAR. direo e coordenao do LABOMAR pelo apoio no projeto e viabilizao das coletas junto a DOCAS DO CEARA. A tripulao do Prof Martins Filho,em especial ao Miguel, Wilson e Prof Maria Ozilea Bezerra Menezes. Aos colegas Renan (Daku), Lucas (Gelia), Giuliana (Malria), Tain (Baiana), Roberta, Carol, Paloma, Fernando e demais colegas do Ncleo de Estudos em Poluio e Ecotoxicologia Aqutica (NEPEA) da UNESP So Vicente, que me deixa orgulhoso pelas conquistas do grupo com vocs.

Aos meus amigos Luiz Eduardo (Lula), Gustavo (Sal), Thiago, Sena, Marcos, Danilo, Joaquim, Renato (gacho), Felipe, Rodrigo (Boracia), Rafael Gara, Andr... Aos professores Augusto Cesar e Camilo D.S. Pereira, e equipe do laboratrio de Ecotoxicologia da Universidade Santa Cecilia. Ao Prof Dr. Edmundo Ferraz Nonato e Dr. Mnica A.V. Petti (IO/USP), pela ajuda na identificao dos poliquetas, me dando a honra de trabalhar com um dos nomes mais importantes para a Biologia Marinha no Brasil. Sarah Rodrigues pelas analises de nutrientes e carbono orgnico. Ao Prof. Jorge E.S. Sarkis e ao Marcos A Hortellani pela parceria e cooperao nas anlises das concentraes de metais da etapa inicial deste estudo. Prof. Mrcia Bcego, Dra. Satie Taniguchi e ao Dr. Silvio T. Sasaki pela cooperao nas anlises de hidrocarbonetos. Ao Prof. Luiz Drude de Lacerda, Profa. Rozane Valente Marins e ao Instituto Nacional de Cincia e Tecnologia (INCT) de Transferncia de Materiais Continente-Oceano pela cooperao nas anlises pela parceria para viabilizao das anlises das concentraes de metais deste estudo. A Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES) pela concesso de bolsa sanduiche. A Prof. Laura Martin-Daz, pela recepo, ajuda e conhecimentos que contriburam significativamente para execuo desta tese. Fundao Cearense de Apoio Pesquisa (FUNCAP) e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) pela concesso de bolsa de estudos, possibilitando a dedicao necessria para o desenvolvimento do projeto.

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Sumrio
Pgina Contextualizao e estrutura da tese.......................................................................... 1 4

rea de estudo ..............................................................................................

CAPTULO 1: Avaliao integrada da qualidade dos sedimentos do Porto do Mucuripe (Fortaleza/CE). 1. Introduo........................................................................................................ 7 2. Materiais e Mtodos........................................................................................ 2.1. rea de estudo..................................................................................... 2.2. Coleta, preparao e preservao das amostras................................ 2.3. Anlises sedimentolgicas: Granulometria, teores de matria orgnica e carbonatos de clcio........................................................ 2.4. Determinao das concentraes de carbono orgnico e fsforo................................................................................................ 2.5. Determinao das concentraes de metais em sedimentos............. 2.6. Determinao das concentraes de hidrocarbonetos alifticos, policclicos aromticos e alquilbenzenos lineares............................. 2.7. Testes de Toxicidade........................................................................... 2.7.1. Testes de toxicidade de sedimento integral................................... 2.7.2. Testes de toxicidade de fases lqidas do sedimento................... 2.7.3. Parmetros fsico-qumicos............................................................ 2.7.4. Anlise dos dados.......................................................................... 2.8. Estrutura da comunidade bentnica.................................................... 2.9. Comparao com valores-guias de qualidade de sedimentos........... 2.10. Integrao dos resultados.................................................................... 9 9 10 11 12 13 14 15 15 16 18 19 19 20 20

3. Resultados....................................................................................................... 22 3.1. Anlises sedimentolgicas, qumicas, toxicidade e estrutura da comunidade bentnica...................................................................... 22 23 3.2. Comparao com valores-guias de qualidade de sedimentos......... 3.3. Integrao dos resultados.................................................................... 4. Discusso........................................................................................................ 5. Concluses...................................................................................................... 25 30 36

CAPTULO 2: Respostas de biomarcadores em Anomalocardia brasiliana expostas a sedimentos e material dragado no Porto do Mucuripe. 1. Introduo........................................................................................................ 38 2. Materiais e mtodos........................................................................................ 42 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. 2.5. Organismo alvo.................................................................................... Estaes de coleta e formas de exposio......................................... Processamento do Material biolgico.................................................. Anlises fsicas, qumicas e testes de toxicidade com as amostras de gua. .............................................................................................. Anlises sedimentolgicas, e qumicas dos sedimentos..................... 42 44 48 49 50

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2.6. 2.7. 2.8.

Testes de toxicidade com sedimentos................................................. Anlise dos biomarcadores.................................................................. Integrao dos resultados....................................................................

52 53 57 58 58 62 62 69 74 79 79 80 84 86

3. Resultados....................................................................................................... 3.1. Caracterizao das estaes: Resultados das anlises das amostras de gua e sedimentos.......................................................... 3.2. Resposta dos biomarcadores.............................................................. 3.2.1. Exposio em campo..................................................................... 3.2.2. Exposio em laboratrio............................................................... 3.3. 4.1. 4.2. 4.3. Integrao dos Resultados ................................................................. Efeitos da dragagem sobre a qualidade ambiental.............................. Resposta dos biomarcadores.............................................................. Anlise Integrada. ............................................................................... 4. Discusso........................................................................................................

5. Concluses......................................................................................................

CAPTULO 3: Valores de qualidade stio-especficos para sedimentos superficiais da regio do Porto do Mucuripe. 1. Introduo........................................................................................................ 1.1. Critrios e valores-guias de qualidade de sedimentos em reas costeiras.............................................................................................. 1.2. Critrios de qualidade de sedimentos obtidos por abordagens tericas ou mecanstica....................................................................... 1.3. Critrios de qualidade de sedimentos obtidos por abordagens empricas............................................................................................. 1.4. Valores de qualidade stios-especficos obtidos por anlise multivariada. ....................................................................................... 1.5. Valores de qualidade de sedimentos no Brasil: histrico das regulaes. ......................................................................................... 2. Objetivos.......................................................................................................... 3. Materiais e Mtodos........................................................................................ 3.1. 3.2. 3.3. 3.4. Coleta de sedimentos.......................................................................... Anlises sedimentolgicas e qumicas dos sedimentos.................. Testes de toxicidade com sedimentos................................................. Organizao dos dados e anlise multivariada para obteno dos VQS. ................................................................................................... 87 90 91 94 98 100 105 106 106 106 107 108 110 121 122 140 141

4. Resultados e Discusso.................................................................................. 5. Concluses...................................................................................................... Referncias Bibliogrficas........................................................................................... Anexo 1....................................................................................................................... Anexo 2.......................................................................................................................

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Lista de Tabelas Pgina CAPTULO 1: Avaliao integrada da qualidade dos sedimentos do Porto do Mucuripe (Fortaleza/CE). Tabela 1 Resultados das anlises sedimentolgicas, qumicas, toxicidade e estrutura da comunidade bentnica das amostras do Porto do Mucuripe.............. 24

Tabela 2 Comparao dos resultados das anlises qumicas com valores-guias de qualidade de sedimentos. Violaes em negrito.................................................... 25 Tabela 3 Resultado da anlise de componentes principais (PCA) com 2 matrizes e correlaes de Pearson das variveis a cada componente..................................... Tabela 4 - concentraes de metais em g g em diferentes regies porturias....... Tabela 5 Distribuio de hidrocarbonetos em sedimentos de diferentes regies do Litoral do Brasil...................................................................................................... Tabela 6 Concluses nos resultados das trs linhas de evidncia empregadas para as amostras do Porto do Mucuripe. ...................................................................
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27 32 33 37

CAPTULO 2: Respostas de biomarcadores em Anomalocardia brasiliana expostas a sedimentos e material dragado no Porto do Mucuripe. Tabela 1 Parmetros de qualidade de gua e resultados dos testes de toxicidade das amostras de gua superficial (S) e fundo (F) coletadas nas estaes de exposio na regio do Porto do Mucuripe. ............................................................... Tabela 2 Resultado das variveis sedimentolgicas, e qumicas e resultados dos testes de toxicidade dos sedimentos coletados nas estaes de exposio na regio do Porto do Mucuripe. ..................................................................................... Tabela 3 Matriz de correlaes de Pearson com as respostas dos biomarcadores nas brnquias de A. brasiliana expostas em campo. Correlaes significativas em negrito. .......................................................................................................................

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Tabela 4 - Matriz de correlaes de Pearson com as respostas dos biomarcadores nas glndulas digestivas de A. brasiliana expostas em campo. Correlaes significativas em negrito.............................................................................................. 68 Tabela 5 Matriz de correlaes de Pearson com as respostas dos biomarcadores em A. brasiliana expostas em laboratrio. Correlaes significativas em negrito..... 74 Tabela 6 Integrao dos dados da exposio em campo baseada nos resultados da PCA. Correlaes das variveis e efeitos biolgicos com os eixos e % de contribuio de cada eixo na varincia dos dados..................................................... Tabela 7 Integrao dos dados da exposio em laboratrio baseada nos resultados da PCA. Correlaes das variveis e efeitos biolgicos com os eixos e % de contribuio de cada eixo na varincia dos dados............................................

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CAPTULO 3: Valores de qualidade stio-especficos para sedimentos superficiais da regio do Porto do Mucuripe. Tabela 1- Resultados das anlises sedimentolgicas, qumicas e toxicidade das amostras do Porto do Mucuripe para obteno dos VQS......................................... 111 .Tabela 2 - Resultado da anlise de PCA do tipo fatorial e correlaes de Pearson das variveis com cada fator. Correlaes em negrito............................................... Tabela 3 Projees dos fatores (scores) calculados para cada estao de coleta. 113 114

Tabela 4 Valores de qualidade de sedimentos stio-especficos (VQS) calculados para sedimentos do Porto do Mucuripe...................................................................... 114 Tabela 5 - Compilao dos VQS aplicados em diferentes pases........................... 117

Lista de Figuras
Pgina CAPTULO 1: Avaliao integrada da qualidade dos sedimentos do Porto do Mucuripe (Fortaleza/CE). Figura 1 Estaes de coleta de sedimentos na regio do Porto do Mucuripe..... Figura 2 Teste de toxicidade com sedimento integral. a= Tiburonella viscana (foto extrada de Abessa 2002); b= sistema de exposio do teste de toxicidade..... Figura 3- Larvas pluteus do ourio-do-mar Lytechinus variegatus. a= larvas com desenvolvimento normal; b = Larvas com desenvolvimento anmalo....................... Figura 4 Agitador mecnico utilizado no preparo dos elutriatos............................. 11 16 17 17

Figura 5 Sistema de exposio do teste de toxicidade com interface sedimentogua............................................................................................................................ 18 Figura 6 - ordenao do tipo bi-dimensional dos componentes 1 e 2 da PCA...... 28 Figura 7 Valores RTMes calculados para as amostras do Porto do Mucuripe..... 29

CAPTULO 2: Respostas de biomarcadores em Anomalocardia brasiliana expostas a sedimentos e material dragado no Porto do Mucuripe. Figura 1 Localizao da praia da Requenguela no municpio de Icapu, CE, Brasil........................................................................................................................... Figura 2 Organismo alvo utilizado no estudo........................................................... Figura 3 Localizao das estaes de coleta de sedimentos e exposio de bivalves in situ no Porto do Mucuripe......................................................................... Figura 4 Viso geral das estaes de coleta de sedimentos e exposio de bivalves in situ no Porto do Mucuripe......................................................................... 43 44 45 46

Figura 5 Atividade enzimtica da EROD nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo.............. 62 Figura 6 - Atividade enzimtica da GST nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo................... 63

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Figura 7 Atividade enzimtica da GPx nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo............... 64 Figura 8 Atividade enzimtica da GR nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo..................... 65 Figura 9 Peroxidao lipdica nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo..................... 66 Figura 10 Danos em DNA (quebra das fitas) nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo......................................................................................................................... 67 Figura 11 Atividade enzimtica da AChe nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio...................................................... 69 Figura 12 Atividade enzimtica da EROD nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio...................................................... 70 Figura 13 Atividade enzimtica da GST nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio...................................................... 70 Figura 14 Atividade enzimtica da GPx nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio...................................................... 71 Figura 15 Atividade enzimtica da GR nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio...................................................... 72 Figura 16 Peroxidao lipdica nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio. ............................................................................. 72 Figura 17 Danos em DNA (quebra das fitas) em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio...................................................... 73 Figura 18 Ordenao bidimensional dos Eixos 1 e 2 baseado nos resultados da PCA com os dados da exposio em campo............................................................. Figura 19 Ordenao bidimensional dos Eixos 1 e 2 baseado nos resultados da PCA com os dados da exposio em laboratrio....................................................... 76 78

CAPTULO 3: Valores de qualidade stio-especficos para sedimentos superficiais da regio do Porto do Mucuripe. Figura 1. Exemplo hipottico de um BDEB com os respectivos valores de ERL e ERM. .......................................................................................................................... Figura 2 Curva hipottica de concentraes de contaminantes x incidncia de efeitos txicos (modificado de Macdonald et al. 1996)............................................... Figura 3 Estaes de coleta de sedimentos para obteno dos VQS do Porto de Mucuripe..................................................................................................................... Figura 4 Disperso das mVQS x % de mortalidade de anfpodos nas amostras coletadas no Porto o Mucuripe................................................................................... 96 97 109 120

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Resumo Nas zonas porturias a contaminao dos sedimentos gera prejuzos econmicos, impactos ambientais e riscos ecolgicos. Em alguns casos, esses impactos comprometem as operaes de dragagem e disposio ocenica dos sedimentos. A partir desse cenrio, as Avaliaes de Risco Ecolgico visam determinar impactos ecolgicos causados por atividades antrpicas, que podem induzir efeitos adversos sobre os indivduos, populaes, comunidades ou ecossistemas de forma a auxiliar na identificao de problemas ambientais e na gerao de bases cientficas para as aes de gesto. J os mtodos ecotoxicolgicas estimam os efeitos de contaminantes presentes em compartimentos ambientais sob os organismos no alvos, auxiliando dessa forma na avaliao da forma de exposio e dos efeitos, necessrios para caracterizao dos riscos. Nesse contexto este trabalho apresenta um estudo de avaliao de risco ecolgico da contaminao dos sedimentos e dragagem do Porto do Mucuripe utilizando as seguintes abordagens ecotoxicolgicas: (1) Estudo integrado atravs da Trade da Qualidade dos Sedimentos; (2) Estudo das respostas de biomarcadores em moluscos bivalves da espcie Anomalocardia brasiliana expostos a sedimentos e material dragado no Porto do Mucuripe; e (3) obteno da faixa de efeito biolgico correspondente aos valores de qualidade de sedimentos stio-especficos para amostras coletadas na regio do Porto. Os resultados mostraram a influncia das fontes de contaminao sobre a toxicidade dos sedimentos, estrutura da comunidade bentnica e na respostas dos biomarcadores dos organismos expostos em campo e em laboratrio. Atravs da obteno dos valores de qualidade de sedimentos foi possvel observar que os efeitos biolgicos ocorrem em baixas concentraes, comparados aos valores de referencias apresentados em legislaes nacionais e internacionais, o que indica falhas por parte desses valores na predio de impactos associados a toxicidade. Os resultados apresentados neste estudo representam informaes relevantes no que se refere ao conhecimento da qualidade dos sedimentos em reas porturias no Litoral Brasileiro, em especial no Estado do Cear.

Palavras-chave: Avaliao de risco ecolgico, qualidade de sedimentos, dragagem, poluio marinha, gesto ambiental

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Abstract In harbor areas, sediment contamination promotes environmental impacts, economic losses and ecological risks. In some cases these impacts compromise dredging and oceanic disposal of the contaminated sediment. In this scenario, the Ecological Risk Assessments aim to determine ecological impacts caused by anthropogenic activities, which can induce adverse effects on individuals, populations, communities and ecosystems in order to assist in identifying environmental problems and the generation of scientific basis for management initiatives. Ecotoxicological approaches estimate the effects of contaminants in environmental compartments (or not) under non-target organisms, assisting, thus, in the type of exposure and the effects evaluations necessary for risk characterization. In this context, this research presents a study on Ecological Risk Assessment of sediment contamination and dredging operations of the Mucuripe Harbor using the following ecotoxicological approaches: (1) integrated assessment of sediments through the Sediment Quality Triad approach; (2) biomarkers responses in the bivalve mollusk Anomalocardia brasiliana exposed to sediments and dredged material in the Mucuripe Harbor; and (3) obtaining the range of biological effect corresponding to the site-specific sediment quality values from samples collected in the Harbor area. The results herein showed the influence of contamination sources on sediment toxicity, benthic community and biomarker responses of organisms exposed in the field and in the laboratory. By obtaining site-specific sediment quality values, it was possible to observe that the biological effects occur at low concentrations compared to reference values presented in national and international guidelines, indicating, thus, failure of these values in predicting impacts related to toxicity. Also, the results presented in this study provide information concerning the knowledge of sediment quality in harbor areas in the Brazilian Coast, especially in the Cear state.

Keywords: Ecological Risk Assessment, sediment quality, dredging, marine pollution, environmental management

1. Contextualizao e estrutura da tese As Avaliaes de Risco Ecolgico (ERA - do ingls Ecological Risk Assessment) visam determinar impactos ecolgicos causados por atividades humanas consideradas como fator de estresse ambiental e que podem induzir efeitos adversos sobre os indivduos, populaes, comunidades ou ecossistemas. Essas avaliaes ajudam na identificao de problemas ambientais, no estabelecimento de prioridades e na gerao de bases cientficas para as aes de gesto (USEPA, 1992). Segundo Hill et al. (2000), as avaliaes de risco ecolgico so elaboradas em critrios principais: 1-) Formulao do Problema - Consiste no levantamento de informaes do ambiente subsidiando o objetivo da avaliao e identificando os potenciais agentes estressores, fontes poluidoras e os componentes ecolgicos relevantes como alvos em potencial; 2-) Avaliao da exposio e dos efeitos Envolve a definio das formas e pontos de contato dos alvos (organismos, populaes e ecossistemas) com os contaminantes e a determinao e caracterizao espacial e temporal dos efeitos ecolgicos adversos, associados exposio aos fatores de stress. 3-) Caracterizao de risco - Integrao de dados e resultados dos critrios anteriores para caracterizao e apresentao dos riscos. Nesse contexto, as abordagens ecotoxicolgicas tm como principio a utilizao de mtodos para estimar os efeitos de substncias biologicamente ativas (contaminantes) a partir da sua presena em compartimentos ambientais, sob organismos no alvos, desde nveis moleculares e bioqumicos at nveis mais elevados de organizao (Walker et al., 1996). Essas abordagens so importantes para a proteo e conservao dos ecossistemas, necessrios para traduzir o significado ecolgico dos nveis de contaminao e fornecem indcios do grau de biodisponibilidade dos poluentes.

Dentre os compartimentos ambientais, os sedimentos so o destino final de muitos compostos, e dessa forma eles podem passar a atuar como fonte secundria de contaminantes para o ambiente aqutico, apresentando maiores concentraes em relao coluna dgua. Alm disso, o comprometimento da qualidade dos sedimentos em regies porturias afeta diretamente, alm do equilbrio ecolgico, as atividades de dragagens e disposio do material dragado, quando necessrias (Riba et al., 2004a,b; Burton & Johnston, 2010). Dentre as abordagens ecotoxicolgicas para avaliao de risco e qualidade de sedimentos, tem sido utilizados bioensaios ou testes de toxicidade, que determinam pela exposio de organismos sensveis as amostras, efeitos letais ou sub-letais durante um perodo do seu ciclo de vida e com isso, os efeitos so observados quando estes j se manifestam em nveis superiores de organizao biolgica. Alm do seu emprego isolado, os testes de toxicidade podem fazer parte de investigaes mais complexas. Estudos integrados de qualidade dos sedimentos tm sido desenvolvidos desde a dcada de 80, como a Trade da Qualidade dos Sedimentos - TQS (Long & Chapman, 1985; Chapman et al., 1987) que envolve a integrao de trs aspectos principais de qualidade ambiental dos sedimentos como linhas de evidncia: as anlises geoqumicas, a toxicidade e alteraes na comunidade bentnica. Entretanto, com a tendncia de utilizao de mtodos modernos e sensveis de deteco de efeitos bolgicos, Chapman & Hollert (2006) discutem sobre a importncia de diferentes linhas de evidncia e sua integrao aos componentes originais da trade, considerando a utilizao de estudos de biomarcadores em organismos bentnicos, com a verificao dos efeitos em laboratrio e tambm em campo (in situ). Tendo em vista a diversidade geoqumica na composio e complexidade das matrizes sedimentares ao longo da costa brasileira, se faz necessrio o entendimento dos diferentes processos de contaminao da zona costeira, principalmente na regio tropical, como o caso da regio Nordeste. Nesse sentido, o uso de abordagens ecotoxicolgicas como subsdio para avaliao de risco pode ser utilizada como base para a compreenso mais

profunda dos problemas causados pela poluio nas reas porturias, principalmente aqueles relacionados com as dragagens. Localizada na Regio Metropolitana de Fortaleza, a enseada do Mucuripe possui fontes significativas de contaminao: abriga um dos principais portos da regio Norte/Nordeste, o Porto do Mucuripe, que potencialmente fonte de impactos devido s suas atividades de operao e que sofre periodicamente com atividades de dragagem dos sedimentos para manuteno da sua profundidade de navegao. Alm disso, tambm local de lanamento dos efluentes tratados e tambm o descarte de esgotos e aporte das guas de drenagem da zona urbana da Regio Metropolitana de Fortaleza. Trabalhos pretritos j realizados na regio mostram evidncias de contaminao originada dessas fontes (Vasconcelos & Melo, 1996; Maia, 2004; Buruaem et al., 2012). Contudo, considerando as fontes de contaminao da regio, o objetivo principal deste estudo avaliar a qualidade dos sedimentos coletados na Enseada do Mucuripe por meio de abordagens ecotoxicolgicas de diferentes linhas de evidncia no sentido de caracterizar os riscos ecolgicos associados aos nveis de contaminao dos sedimentos da Regio. Para atingir este objetivo, os objetivos especficos foram divididos em trs captulos: CAPTULO 1: Avaliao integrada da qualidade dos sedimentos do Porto do Mucuripe (Fortaleza/CE). Nesta etapa inicial apresentado um estudo integrado dos nveis de contaminao dos sedimentos superficiais com efeitos biolgicos medidos atravs de testes de toxicidade e indicadores ecolgicos da estrutura da comunidade bentnica. Para a integrao dos resultados empregada a Trade da Qalidade dos Sedimentos; CAPTULO 2: Respostas de biomarcadores em Anomalocardia brasiliana expostas a sedimentos e material dragado no Porto do Mucuripe. O objetivo desta etapa avaliar os efeitos biolgicos da dragagem e ressuspenso dos sedimentos, medidos atravs de testes de toxicidade e respostas de

biomarcadores em bivalves da espcie A. brasiliana expostos em campo e em laboratrio; CAPTULO 3: Valores de qualidade stio-especficos para sedimentos superficiais da regio do Porto do Mucuripe. Por fim, a partir dos efeitos biolgicos determinados nas diferentes campanhas de amostragem, este captulo final apresenta a faixa de concentraes de contaminantes em sedimentos que corresponde a ocorrncia dos efeitos biolgicos, medidos atravs de testes de toxicidade. 2. rea de estudo Conforme j mencionado, o presente trabalho foi desenvolvido no Porto do Mucuripe e que est localizada na enseada de Mucuripe, regio metropolitana de Fortaleza (CE). O litoral cearense marcado por um clima tropical chuvoso (AW), quente e mido influenciado pela Zona de Convergncia Intertropical (ZCIT) com chuvas de vero e outono, com precipitao mdia anual de 1642,3 mm, sendo os meses mais chuvosos de Janeiro a Junho e os mais secos de Julho a Dezembro (Fundao Cearense de Meteorologia FUNCEME), com variaes em perodos de El Nio no perodo seco e La Nia, intensificando as chuvas (Paula et al., 2013). Nesse setor h a predominncia de ventos alsios de E-SE com velocidade mdia ente 4-7 m/s, que determinam a dinmica das ondas e as correntes de leste (90) que ocorrem em 95% do perodo anual com o transporte de sedimentos nesse sentido. A temperatura mdia anual de 27C, com uma evaporao mdia anual de 1469,2 mm (Maia et al., 1996; Jimenez & Maia, 1999; Nogueira et al., 2005; Paula et al., 2013). Em relao sedimentologia, as reas compreendem o segmento da Bacia do Cear, dentro da Bacia sedimentar da margem continental brasileira. Como caracterstica da plataforma continental do nordeste, a composio dos sedimentos em quase total maioria de carbonato de clcio biognico, sendo a textura dos sedimentos da plataforma externa (isbata de 40 m) coberta por cascalhos, e os sedimentos da plataforma interna (abaixo da isbata de 20 m) com predominncia de areias com pouco cascalho e baixos teores de lamas

(abaixo dos 2,5 %). A frao carbontica composta por cerca de 75 a 95 % de CaCO3 biognico e a frao terrgena dominada por areias quartzosas, feldspatos, minerais pesados e argilas (Marques, 2008). 2.1. O Porto do Mucuripe

Administrado pela Companhia Docas do Cear (CDC), um dos principais portos da regio Nordeste, movimentando grande parte dos bens comercializados no estado do Cear e em parte do Rio Grande do Norte. considerado um porto martimo artificial, e sua rea abrigada navegvel composta pelo canal de acesso, pelas reas de fundeio e bacias de evoluo, protegidas por dois quebra-mares construdos paralelamente costa, com disposio vertical irregular e constitudos por rochas granticas, sendo: o Titzinho, com aproximadamente 700 m de comprimento e 14m de altura e o Tit, com 1910 m de comprimento e 10 m de altura (Maia et al.,1998). As instalaes do porto organizado consistem em cais comercial, per petroleiro e cais pesqueiro. O cais comercial possui o comprimento de 1.116 m com extenso operacional de 1.047 m. O per petroleiro constitudo por uma ponte de acesso com comprimento total de 853 m e uma plataforma de atracao com dois beros sendo interno e externo, com 90 m e 28 m de comprimento e profundidades de 11 m e 12 m. O cais pesqueiro localizado a sudeste das instalaes porturias e possui comprimento total de 210 m e profundidade varivel de 3 m a 5 m. Esse cais utilizado quase que exclusivamente por barcos de pesca, no dispondo de equipamentos ou instalaes de suprimento (DOCAS DO CEARA, 2008). A retrorea porturia abriga moinhos de trigo e silos com capacidade para 38.000 toneladas, nove distribuidoras de combustveis, um parque de triagem da Companhia Ferroviria do Nordeste (CFN) e uma fbrica de gordura vegetal hidrogenada e margarina (Maia, 2004). Alm dessas empresas, est localizada na regio do porto a Lubrificantes do Nordeste Unidade Petrobrs (LUBNOR), a qual tem seus efluentes industriais lanados na regio do porto, atravs de um emissrio localizado entre os beros de atracao do

cais comercial, podendo ser considerada a principal fonte de contaminantes na regio do porto. Com a implementao da estrutura porturia e principalmente com a construo dos quebra-mares, houve a alterao no balano sedimentar, com mudanas observadas na interrupo do transporte de sedimentos e o avano do mar na Regio Metropolitana de Fortaleza e com isso houve a eroso das praias a oeste do porto (Maia et al. 1998). Como conseqncia disso, na regio do Porto h tambm o comprometimento da rea abrigada e do canal de navegao, com a difrao das correntes induzidas pelos quebra-mares aliadas as fortes correntes resultando num alto hidrodinamismo nessa rea, e nas regies oeste dessas estruturas ocorreu a atenuao das ondas e correntes, promovendo assoreamento e deposio de sedimentos mais finos. Com isso, esse fenmeno tem implicaes econmicas para o porto, tornando necessria a realizao de atividades de dragagem de manuteno por conta do assoreamento. Alm disso, esses sedimentos so suscetveis presena de contaminantes (atravs das atividades do porto e lanamentos de efluentes industriais) tornando-os potencialmente txicos, de modo que a dragagem e disposio dos sedimentos acabam tendo srias implicaes ambientais. No caso do Porto do Mucuripe, a CDC, administradora do Porto do Mucuripe, no seu programa de gesto ambiental porturia, busca a conciliao da Poltica de Modernizao dos Portos com a Agenda Ambiental Porturia, e, atravs do Plano de Desenvolvimento e Zoneamento (PDZ) contempla o zoneamento ambiental do porto, identificao de reas de risco, bem como a definio dos locais para servios de apoio, incluindo o tratamento de resduos e efluentes e o licenciamento para atividades de dragagens e reas para o descarte do material dragado.

CAPTULO 1: Avaliao integrada da qualidade dos sedimentos do Porto do Mucuripe (Fortaleza/CE).

1. Introduo As atividades porturias so importantes para economia global, pois os portos e terminais porturios desempenham um papel fundamental no ciclo de vida dos bens produzidos e comercializados. No entanto, tanto sua instalao quanto suas atividades de operao so consideradas impactantes aos ecossistemas costeiros. Alm disso, a proximidade dos ambientes costeiros com centros urbanos e industriais facilita o aporte de contaminantes, que ocorre pela liberao de lixo, esgotos e outros efluentes, queima de combustveis, petrleo e seus derivados alm de substncias presentes em tintas anti-incrustantes nas embarcaes (NRC, 1997; Buruaem et al., 2012). No ambiente aqutico, os sedimentos constituem o destino de grande parte Uma desses vez compostos, no apresentando fundo, os maiores concentraes podem de contaminantes em relao coluna dgua (Burton, 1992; Riba et al., 2004). depositados contaminantes sofrer transformaes, por processos biogeoqumicos (mobilidade e partio geoqumica, adsoro e formao de complexos) que variam de acordo com as condies do meio, e que alteram a sua biodisponibilidade ou originam formas mais ou menos txicas, resultando diretamente em efeitos letais ou sub-letais aos organismos bentnicos, e indiretamente sobre as cadeias trficas superiores, atravs da bioacumulao e biomagnificao desses compostos, gerando potenciais riscos a sade humana. Dessa forma, os sedimentos passam a atuar no apenas como destino, mas como fonte secundria de contaminao (Burton, 1992; DelValls & Conradi, 2000; Abessa, 2006; Chapman & Hollert, 2006). Alm dos riscos ecolgicos, a contaminao dos sedimentos representa tambm um problema para a gesto ambiental porturia, pois existem impactos diretos e indiretos relacionados s atividades de dragagens, necessria para aprofundamento e manuteno dos canais de navegao e essas atividades afetam diretamente duas regies distintas: (1) as reas dragadas onde ocorre a

remoo e a ressuspenso de sedimentos, promovendo mudanas no meio e liberao de contaminantes; (2) e os stios de disposio, que recebem o material dragado que por sua vez pode estar contaminado. Por definio, contaminao a presena de compostos onde eles no deveriam ocorrer ou a ocorrncia em nveis acima do background, e a poluio caracterizada quando a contaminao causa efeitos biolgicos adversos (Chapman, 2007). Nesse sentido, ainda segundo Chapman (2007), determinar quando a contaminao resulta em poluio requer o uso integrado de abordagens qumicas e biolgicas, as quais constituem a base das avaliaes de diferentes linhas de evidncias de contaminao. Dentre essas avaliaes, estudos integrados de qualidade dos sedimentos tm sido desenvolvidos desde a dcada de 1980, como a Trade da Qualidade dos Sedimentos - TQS (Long & Chapman, 1985; Chapman et al., 1987) que envolve a integrao de trs aspectos principais de qualidade ambiental dos sedimentos como linhas de evidncia: as anlises qumicas, a toxicidade e alteraes na comunidade bentnica, permitindo dessa forma a identificao de reas poludas. Recentemente no Brasil, o setor porturio vem crescendo alavancado pelo desenvolvimento de regies antes pouco industrializadas (como a Regio Nordeste, por exemplo). Ao mesmo tempo as movimentaes nos portos tm sido impulsionadas, intensificando os impactos ambientais nessas reas. No entanto, ainda hoje existe grande carncia de estudos integrados de qualidade dos sedimentos das reas porturias, sendo as Regies Sul e Sudeste as que dispem de um volume maior de dados (Cesar et al., 2007; Abessa et al., 2008; Choueri et al., 2009a) Na capital do Estado do Cear em Fortaleza, est localizado o Porto do Mucuripe que representa um importante instrumento econmico por ser um dos principais portos da regio Nordeste, movimentando grande parte dos produtos comercializados no estado do Cear e em parte do Rio Grande do Norte. Alm das atividades de operao porturia, nessa regio ocorrem tambm o refino de petrleo e o lanamento de seus efluentes no mar. H tambm a alta urbanizao do Municpio de Fortaleza promovendo o lanamento de

contaminantes atravs de fontes difusas como a deposio atmosfrica e escoamento superficial (Cavalcante et al., 2010, 2011), alm das atividades de dragagem, necessrias devido alta deposio de sedimentos induzida pela presena do quebra-mar. Esses vetores somados representam riscos ecolgicos associados a contaminao e poluio dos sedimentos na regio do Porto. Nesse sentido, o objetivo deste estudo avaliar a qualidade dos sedimentos do Porto do Mucuripe atravs da abordagem da Trade da Qualidade dos Sedimentos, de modo a identificar reas contaminadas bem como os efeitos dessa contaminao e que possa auxiliar e/ou subsidiar aes de gesto ambiental que possam ser implementadas na regio. 2. Materiais e Mtodos. 2.1. rea de estudo O Porto do Mucuripe est localizado na enseada de Mucuripe, na regio metropolitana de Fortaleza (CE) e nesse setor o clima litoral cearense caracterizado como tropical chuvoso (AW), quente e mido, com chuvas de vero e outono, sendo os meses mais chuvosos de Janeiro a Junho e os mais secos de Julho a Dezembro. Em funo da zona de convergncia subtropical da regio, h a predominncia de ventos alsios na direo E-W que determina um alto transporte de sedimentos nesse sentido, (Jimenes & Maia, 1999; Nogueira et al., 2005). Em relao sedimentologia, a rea compreende o segmento da Bacia do Cear, dentro da Bacia sedimentar da margem continental brasileira. Neste segmento da plataforma continental do nordeste a caracterstica principal a composio dos sedimentos que em total maioria de carbonato de clcio biognico, sendo a textura dos sedimentos da plataforma externa (isbata de 40 m) coberta por cascalhos, e os sedimentos da plataforma interna (abaixo da isbata de 20 m) com predominncia de areias com pouco cascalho e baixos teores de sedimentos finos (abaixo dos 2,5 %). A frao carbontica composta por cerca de 75 a 95 % de CaCO3 biognico e a frao terrgena dominada por areias quartzosas, feldspatos, minerais pesados e argilas (Freire 2004).

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O Porto do Mucuripe administrado pela Companhia Docas do Cear (CDC) e considerado um porto martimo artificial, pois a sua rea abrigada navegvel protegida por dois quebra-mares construdos paralelamente costa, com disposio vertical irregular e constitudos por rochas granticas (Maia et al.,1998). As instalaes do porto organizado consistem em cais comercial, per petroleiro e cais pesqueiro. Na retrorea porturia encontram-se moinhos de trigo e silos, distribuidoras de combustveis, um parque de triagem da Companhia Ferroviria do Nordeste (CFN) e uma fbrica de gordura vegetal hidrogenada e margarina (Maia, 2004). Alm dessas empresas, est localizada na regio do porto a Lubrificantes do Nordeste Unidade Petrobrs (LUBNOR), a qual tem seus efluentes industriais lanados na regio do porto, atravs de um emissrio localizado entre os beros de atracao do cais comercial. 2.2. Coleta, preparao e preservao das amostras

No Porto do Mucuripe, a coleta foi realizada no dia 31 de agosto de 2007 a bordo da B/Pq Prof. Martins Filho, do Instituto de Cincias do Mar da Universidade Federal do Cear (LABOMAR/UFC). As amostras de sedimentos foram coletadas em 10 estaes na regio do Porto, sendo elas estabelecidas em: M1 e M2, localizadas prximas ao cais comercial e onde so lanados os efluentes da LUBNOR; M3, M4 e M5, localizadas no entorno do per petroleiro; M5 e M6 e M8 situadas no canal de acesso, sendo M8 j nos limites da rea abrigada; e M9 e M10 localizadas nas zonas desabrigadas e prximas ao quebra-mar (Figura 1). As amostras para as anlises sedimentolgicas, qumicas e ecotoxicolgicas foram coletadas e compostas em um pool de 3 rplicas com auxlio de um pegador de fundo tipo van Veen (com rea de 0,055 m2 e capacidade de 3Kg de sedimentos) e mantidas sob refrigerao durante o transporte at os laboratrios de Ecotoxicologia Marinha do LABOMAR para posterior processamento. Para os testes de toxicidade, alquotas foram separadas e acondicionadas em potes de polietileno a 4C at a realizao dos ensaios. J para as anlises sedimentolgicas e qumicas, alquotas de

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amostras foram secas a 40C para cada varivel, exceto para os contaminantes orgnicos, as quais foram acondicionadas em recipientes de alumnio e mantidas a -20C. Para avaliao da estrutura da macrofauna bentnica, ainda em campo foram coletadas trs rplicas verdadeiras de cada estao, fixadas em formalina 4% no momento da coleta, ainda na embarcao durante o transporte ao laboratrio para posterior triagem.

Mucuripe
Oceano Atlntico

Brasil

Cear

Figura 1 Estaes de coleta de sedimentos na regio do Porto do Mucuripe

2.3.

Anlises sedimentolgicas: Granulometria, teores de matria orgnica e carbonatos de clcio.

A determinao das fraes granulomtricas foi feita atravs do peneiramento mido das amostras secas (50g) em malha de 0,063 mm com o objetivo de separar a frao de sedimentos finos (silte+argila). Em seguida,

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com as fraes remanescentes foram feitos peneiramentos secos com auxilio de um agitador mecnico (Shaker) com a separao das diferentes fraes, de acordo com a escala de Wentworth (Wentworth, 1992). O resultado da anlise expresso em % das fraes principais: cascalho (>2mm), areia (>0,063 2mm) e finos (<0,063mm). A estimativa dos teores de carbonato de clcio (CaCO3) foi feita seguindo o mtodo descrito por Gross (1971), no qual amostras de sedimento seco (10 g) foram digeridas com acido clordrico (HCl 0,1M) para eliminao dos carbonatos e em seguida lavadas com gua destilada sobre papis filtro cujo peso era previamente conhecido, sendo ento secas em estufa a 60 C e novamente pesadas. A diferena entre o peso final e o inicial correspondeu estimativa do teor de carbonatos. A determinao dos teores de matria orgnica (MO) foi feita atravs do mtodo de combusto e gravimetria (Luczak et al., 1997), onde 20g de sedimento seco foram digeridos com acido clordrico (HCl 0,1M) para remoo do CaCO3. Em seguida, as amostras foram lavadas com gua destilada em papeis filtro previamente pesados, secas em estufa a 60 C em seguida, 5g de sedimento seco e livre de carbonatos foram pesados em cadinhos e levados para queima em mufla, a uma temperatura de 450C por 24h. O valor de matria orgnica foi obtido pela diferena de massa das amostras antes e aps a queima, e expressa em %.

2.4.

Determinao das concentraes de Carbono orgnico e fsforo.

A concentrao de carbono orgnico total (TOC) das amostras foi obtida atravs do analisador de carbono orgnico total (TOC V CPH Shimadzu) acoplado com mdulo para amostras slidas (SSM 5000 Shimadzu). Para carbono total, primeiramente foi feita a digesto das amostras com cido clordrico (0,1M) para remoo dos carbonatos de clcio. Em seguida, com os sedimentos secos, uma alquota de aproximadamente 0,02g foi aferida em cadinhos de porcelana e levada ao analisador.

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Para a anlise do e fsforo total (P) foi tomada uma frao de aproximadamente 0,06 g de sedimento seco e macerado, a qual foi oxidada com uma soluo de persulfato de potssio (Na2S2O8) em autoclave para converso de toda a poro orgnica em inorgnica. Aps a oxidao, 10 mL da soluo contendo a amostra foram utilizadas para a determinao de fsforo total na forma de nutriente inorgnico, atravs do mtodo colorimtrico descrito por Grasshoff et al. (1999), quantificados em espectrofotometro UV a 880nm (P). 2.5. Determinao das concentraes de metais em sedimentos

As anlises foram realizadas no Laboratrio de Caracterizao Isotpica do Centro de Qumica e Meio Ambiente, no Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares em So Paulo (SP) sob a coordenao do Prof. Dr. Jorge E. Sarkis. Os teores de metais foram determinados na frao total das amostras secas (com remoo de cascalhos, em M10) atravs do mtodo de Digesto Assistida por Microondas, descrito em EPA 3051A (USEPA, 1996). Neste mtodo, as amostras de sedimento (0,5g) foram digeridas em tubos de PTFE (Teflon) com adio de 12 ml de gua rgia (HCl/HNO3) e levados para aquecimento em um sistema de microondas modelo MDS2000 (CEM Corporation). A leitura da concentrao dos metais Al, Fe, Cd, Cr, Cu, Ni, Pb e Zn nos extratos foi feita em um Espectrofotometro de Absoro Atmica em Chama modelo Varian Spectr-AAS-220-FS com correo com lmpada de deutrio para anlise de Pb, Ni e Hg. J as concentraes de Hg foram obtidas pela Gerao de vapor frio atravs de um sistema de injeo em fluxo (FIA) acoplado ao Espectrofotometro. Para validao do procedimento de extrao e leitura, foram analisados em triplicatas amostras do material de Referncia SRM 2704 - Buffalo River Sediment e SRM-1646a - Estuarine sediments BRC 667.

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2.6.

Determinao

das

concentraes

de

hidrocarbonetos

alifticos, policclicos aromticos e alquilbenzenos lineares As anlises das concentraes hidrocarbonetos alifticos, policclicos aromticos e alquilbenzenos lineares foram realizadas no Laboratrio de Qumica Orgnica Marinha do Instituto Oceanogrfico da Universidade de So Paulo (IOUSP), coordenado pela Prof. Dr. Mrcia Caruso Bcego. A partir do congelamento a -20C, as amostras de sedimento foram liofilizadas e homogeneizadas num almofariz com pilo. Antes da extrao, foram adicionadas quantidades conhecidas de n-hexadeceno, n-eicoseno, naftalenod8, acenafteno-d10, fenantreno-d10, criseno-d12, perileno-d12 e dodecil-benzeno1 (1C12LAB) como padres internos em todas as amostras, incluindo branco e material de referncia do Instituto Nacional de Padres e Tecnologia (NIST SRM 1944). Em seguida, os extratos das amostras de sedimento foram preparados em Soxhlet com 80 ml de uma mistura 50% diclorometano/nhexano, e concentrados a 1 ml, em rotoevaporador a vcuo, em banho de 30 C de seguindo a metodologia descrita em UNEP (1992). Os extratos foram ento fracionados em F1 para hidrocarbonetos alifticos (AH) e alquilbenzenos lineares (LAB), e F2 para hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA) por cromatografia em coluna de slica-gel e alumina. As concentraes de AH foram determinadas por cromatografia gasosa 6890 da Agilent Technologies com detector de ionizao de chama (GC-FID), enquanto as concentraes de LAB e HPA foram quantificadas em um cromatgrafo a gs Agilent 6890 acoplado a um espectrmetro de massa 5973N (GC/MS) no modo de monitoramento seletivo de ons (SIM). Ambos os instrumentos foram equipados com uma coluna capilar HP-5MS (25m x 0,25mm; 0,25m) com a temperatura do injetor programada com rampa de 40C por 1minuto, elevada at 60C a 20C/min, e apos at 300C a 4C/min, onde foi mantida por 10 minutos. Os clculos finais foram feitos atravs de curvas analticas de calibrao usando padres certificados (AccuStandard). A identificao dos LAB e HPA foi baseada nos tempos de reteno no GC dos padres certificados e na quantificao individual dos ons.

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2.7.

Testes de Toxicidade

Os testes de toxicidade foram realizados no laboratrio do Ncleo de Estudos em Poluio e Ecotoxicologia Aqutica (NEPEA) do Campus Experimental do Litoral Paulista da Universidade Estadual Paulista (UNESP), em So Vicente, SP, e no Laboratrio de Ecotoxicologia Prof. Caetano Belliboni da Universidade Santa Ceclia, em Santos. As amostras foram testadas quanto ao sedimento integral, pelo teste de toxicidade aguda com o anfpodo escavador Tiburonella viscana (Melo & Abessa, 2002; ABNT 2008), e quanto s fases lquidas, pelo teste crnico de curta durao com larvas do ourio-do-mar Lytechinus variegatus (ABNT, 2012). 2.7.1. Testes de toxicidade de sedimento integral Por serem representativos e considerados os mais sensveis dentre as espcies bentnicas, estando entre os primeiros organismos a apresentar respostas aos sinais de contaminao, diversos anfpodos tm sido utilizados em testes de toxicidade para avaliao da qualidade de sedimentos. O teste de toxicidade de sedimento integral consiste na utilizao do anfpodo escavador T. viscana (Thomas & Barnard, 1983) como organismo-teste (Figura 2a), segundo o procedimento descrito por Melo & Abessa (2002) e ABNT (2008). O experimento consistiu na preparao do sistema em frascos de polietileno de 1 litro, em triplicata, e ento as amostras de sedimento foram introduzidas nas cmaras-teste em alquotas de aproximadamente 175 ml. Em seguida, foram acrescidos 750 ml de gua do mar filtrada obtida no prprio local de coleta dos organismos, compondo o sistema do experimento (Figura 2b). O teste foi conduzido pela exposio dos organismos s amostras (10 indivduos por rplica) por um perodo de 10 dias sob condies controladas de temperatura e salinidade, e sob aerao e iluminao constantes, sendo observados os efeitos letais (mortalidade). Ao final do teste as amostras foram peneiradas e o nmero de organismos vivos contado. Como controle interno do experimento foi utilizado o sedimento do local de coleta dos organismos, na praia do Engenho Dgua. Os resultados so expressos em valores mdios de % de mortalidade em cada amostra.

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Figura 2 Teste de toxicidade com sedimento integral. a= Tiburonella viscana (foto extrada de Abessa 2002); b= sistema de exposio do teste de toxicidade. 2.7.2. Testes de toxicidade de fases lqidas do sedimento Para avaliao das fases liquidas, foram utilizadas as seguintes formas de exposio: gua intersticial, elutriato e interface sedimento-gua. O teste utilizado foi o ensaio crnico de curta durao com larvas do ourio-do-mar Lytechinus variegatus, conforme a Norma Tcnica NBR 15350 (ABNT, 2012), na qual feita a induo da liberao dos gametas e posteriormente a fecundao in vitro. O teste foi conduzido com a adio de cerca de 350 ovos a cada rplica do sistema. Foram montadas 4 rplicas para cada amostra, alm do controle referente gua do mar filtrada, para observao de efeitos subletais (mal-formao das larvas) ao final do teste (Figura 3). 2.7.2.1. Testes de toxicidade de gua intersticial

Nesse mtodo, a gua intersticial foi extrada do sedimento por meio de suco (Winger & Lasier, 1991) e testada por procedimentos semelhantes aos utilizados para amostras de gua e efluentes nas seguintes diluies: 100,50 e 25 %. A partir dos resultados das diluies, foram calculadas as concentraes de inibio de 14% das larvas (CI14) utilizando o mtodo de interpolao linear do programa ICPin (Norberg-King, 1993). A escolha da CI14 foi feita com base nos nveis de efeito relevante calculados por Bertoletti et al. (2007) que assumem a variabilidade natural do desenvolvimento larval no teste, usados em teste de hiptese por bioequivalncia.

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Figura 3- Larvas pluteus do ourio-do-mar Lytechinus variegatus. a= larvas com desenvolvimento normal; b = Larvas com desenvolvimento anmalo. 2.7.2.2. Testes de toxicidade com sedimento elutriato

Os elutriatos foram preparados segundo o mtodo Sediment Processing for Elutriate Toxicity Tests (USEPA, 2003) onde uma parte de sedimento foi adicionada a trs partes de gua de diluio para agitao mecnica com o uso de um aparelho agitador do tipo Jar-Test por 30 min (Figura 4). Em seguida as amostras permaneceram em repouso por um perodo de 24h para decantao do material em suspenso e posteriormente alquotas do sobrenadante foram retiradas para realizao dos testes de toxicidade. Os resultados so expressos em valores mdios da % de mal-formao das larvas em cada amostra.

Figura 4 Agitador mecnico utilizado no preparo dos elutriatos

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2.7.2.3.

Testes de toxicidade com interface sedimento-gua

Neste experimento foi utilizado o sistema-teste proposto por Anderson et al. (2001) e adaptado por Cesar (2003) para pequenos volumes. Para a realizao dos testes, foram preparadas rplicas de cada amostra em tubos de ensaio. Em cada um deles foi adicionada uma poro de 2 ml de sedimento e sobre esta camada foi colocada uma rede de plncton (100 m) fixada por um anel plstico esterilizado, em seguida foram adicionados 8ml de gua de diluio (Figura 5). O propsito da rede constituir uma barreira fsica entre o sedimento e a gua de diluio possibilitando a recuperao das larvas. O conjunto permaneceu em descanso por um perodo de 24h para posterior realizao dos testes de toxicidade com larvas de ourio do mar. Os resultados so expressos em valores mdios da % de mal-formao das larvas em cada amostra.

Figura 5 Sistema de exposio do teste de toxicidade com interface sedimento-gua 2.7.3. Parmetros fsico-qumicos Os seguintes parmetros fsico-qumicos foram medidos durante a execuo dos testes: salinidade por meio de um refratmetro, pH e oxignio dissolvido pela utilizao de sondas portteis. Nveis de amnia (total e no ionizada) por ser um dos principais interferentes naturais ao teste com larvas de ourio-do-mar (Prsperi, 2002) foram estimados atravs de um eletrodo seletivo para amnia, modelo ORION 95-12 nas amostras de gua intersticial e

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nos testes com interface sedimento-gua e elutriatos o nveis de amnia foram medidos pelo mtodo 4500 C de destilao e titulao (APHA, 1999). 2.7.4. Anlise dos dados Para analise estatstica do teste com sedimento integral, os dados foram comparados com o sedimento do controle interno empregando o teste tStudent para os dados de sobrevivncia dos anfpodos, enquanto para nos ensaios com fases lquidas os dados foram comparados com o controle da gua do mar atravs do teste-t por bioequivalncia usando a constante de 0,81. Antes da aplicao, os dados foram submetidos avaliao do tipo de distribuio (normalidade) pelo teste do Chi-quadrado e homogeneidade de varincias pelo teste de Fisher. Para estas anlises, foi utilizado o software TOXSTAT - verso 3.5 (West & Gulley, 1996). As amostras diferentes significativamente do controle foram consideradas txicas (p<0,05) e as que no apresentaram diferena significativa foram consideradas no txicas. J os resultados do teste com gua intersticial so apresentados em unidades txicas, uma vez que o ndice de efeito utilizado (CI14) apresenta uma relao inversa com a toxicidade (quanto menor o ndice, maior a toxicidade). 2.8. Estrutura da comunidade bentnica

Os organismos coletados, triados e fixados foram identificados at o menor nvel de organizao possvel, sendo os poliquetos identificados por Lucas Buruaem e Denis Abessa, com identificao confirmada pelo Dr. Edmundo Ferraz Nonato e pela Dr. Mnica Anglica Varella Petti (IOUSP), utilizando chaves de identificao para famlias e gneros (Amaral & Nonato, 1996). Os moluscos foram identificados por Lucas Buruaem, com o uso da chave proposta por Rios (1984). Equinodermos e crustceos identificados por Lucas Buruaem e Denis Abessa. Com base nos dados qualitativos e quantitativos dos organismos identificado, foram calculadas, para cada rplica as densidades totais de organismos por m2 (nmero de indivduos) e densidades relativas (em %) dos grupos Polychaeta, Mollusca, Crustacea, Nematoda e Echinodermata para cada estao. No sentido de determinar uma

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anlise descritiva da comunidade bentnica em cada local, foram calculados como descritores, os seguintes ndices ecolgicos: Diversidade de ShannonWeaver (H) e Equitatividade, (H/H max). 2.9. Comparao com valores-guias de qualidade de sedimentos

Uma vez que a rea do porto susceptvel a atividades de dragagens, as concentraes dos contaminantes encontradas foram comparadas com os valores-guias de qualidade de sedimentos da Resoluo CONAMA 454/12 (Brasil, 2012) que trata do gerenciamento de sedimentos dragados no pas e de protocolos para o licenciamento dessas atividades. Tais valores correspondem a 2 limiares (Nveis 1 e 2, respectivamente), que indicam 3 categorias de contaminao para cada substncia analisada: (1) concentrao abaixo do Nvel 1 que indica boa qualidade em relao ao contaminante avaliado, com baixa probabilidade de efeitos adversos biota; (2) concentrao acima do Nvel 2 que indica grande probabilidade de efeitos adversos biota; e (3) concentrao entre os nveis 1 e 2 que indica possibilidade da contaminao causar efeitos adversos. 2.10. Integrao dos resultados Alm da comparao das concentraes com valores-guias, foram utilizados tambm mtodos estatsticos multivariados atravs da Anlise dos Componentes Principais com Ordenao do tipo Bi-Dimensional (PCA) e aplicao dos valores RTMe para integrao dos dados, no sentido de estabelecer associaes entre as variveis analisadas. Na PCA, os dados foram organizados em duas matrizes sendo a primeira composta pelas variveis granulomtricas, profundidade, CaCO3, MO, COT, P, metais, AH, HPA, LAB e os resultados dos testes de toxicidade. J a segunda matriz foi composta pelos descritores da comunidade bentnica: n de especies, densidade total de organismos (Indivduos), diversidade de Shannon (H), equitabilidade e densidades de Polychaeta, Mollusca, Crustacea, Nematoda e Echinodermata.

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Em cada matriz, os resultados expressos em % foram transformados pela funo arco-seno, possibilitando a comparao com os dados contnuos e em seguida os dados da matriz foram normalizados pela funo log(x)e,visando reduzir diferenas de grandeza entre as variveis. Para as estaes que apresentaram concentraes abixo do limite de deteco, foram considerados os prprios valores de limite de deteco para evitar a incluso de valores 0 na matriz. J o mtodo dos valores RTMe (Ratio-to-Mean) uma adaptao proposta por Cesar et al. (2009) dos valores RTR (Ratio-to-Reference) de Long & Chapman (1985) e RTM (Ratio-to-Maximum Values) proposto por Del Valls e Chapman (1998). Estes mtodos consistem na reduo dos dados de cada linha de evidncia em ndices que combinados, evidenciam grau de degradao da qualidade de cada estao, dentro do conjunto de amostras. Especificamente no mtodo RTMe, a partir da matriz de dados, cada varivel foi transformada em um nmero adimensional pela diviso de cada valor pela respectiva mdia de todas as 10 estaes, numa espcie de normalizao pela mdia. Em seguida, para cada linha de evidncia foi feita a mdia destes nmeros, gerando 3 ndices RTMe sendo um para cada linha de evidncia da amostra em questo. Com estes ndices foram ento construdos grficos radiais de 3 eixos formando tringulos e a rea calculada de cada um deles (rea=1/2* RTMe 1* RTMe 2*sen120) representa o valor stio-especifico RTMe que por sua vez refere o grau de degradao da amostra, ou seja, quanto maior a rea da figura em relao aos valores mdios, mais degradado est o local amostrado.

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3. Resultados 3.1. Anlises sedimentolgicas, qumicas, toxicidade e estrutura da comunidade bentnica Os resultados so apresentados na Tabela 1. Em relao granulometria, os sedimentos das estaes do Porto do Mucuripe podem ser classificados como arenosos, com baixos teores de lama (silte+argila), exceto para estao M10 onde a frao predominante foi o Cascalho (40,82%). A matria orgnica apresentou uma faixa de variao entre 0,13 e 16,22% e os teores de carbonatos variaram entre 5,74% a 34,96%, com os altos valores observados nas reas abrigadas e em zonas de maior profundidade, o que indica uma maior deposio de materiais nessas estaes. Padro similar ao da matria orgnica foi observado na distribuio dos teores de carbono orgnico total, com variao entre 0,16 e 1,43%. J em relao a distribuio do P foi mais homognea com variao de 0,09% a 0,48%. Os resultados das analises qumicas dos metais mostram um aumento nas concentraes de Al, Fe, Cr, Cu, Ni e Zn no sentido estaes mais externas (M8 a M10) em direo as zonas abrigadas (M1 a M7) enquanto que as concentraes encontradas de Hg, Cd e Pb foram baixas. Distribuio similar a dos metais foi encontrada para as concentraes de hidrocarbonetos alifticos (AH) e policclico aromticos (HPA), com os maiores valores encontrados nas estaes das zonas abrigadas. J as concentraes de alquilbenzenos lineares (LAB) foram baixas no geral, sendo detectadas apenas em M4 e M6. Para os testes de toxicidade com sedimento integral (SI), as amostras das reas abrigadas nos cais comerciais e no per petroleiro (M1, M2, M3, M4 e M5) e na rea do canal de acesso (M6, M7 e M8) apresentaram toxicidade, com altas taxas de mortalidade de anfpodos variando de 26,67 a 66,67%. Nas reas desabrigadas (M9 e M10), no foi observada toxicidade. Nos testes com gua intersticial (AI), os resultados so apresentados em Unidades Txicas (UT), ou seja, quanto maior o valor maior o efeito txico e com isso as amostras mais txicas foram M1, M5 e M7. Os resultados do teste com interface sedimento-gua (ISA) aforam similares ao teste com sedimento

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integral, com as maiores taxas de efeito sobre o desenvolvimento das larvas de L. variegatus observadas nas estaes de M1 a M7. Por fim, no teste de toxicidade com elutriatos (ELU) M2, M3, M4 e M6 foram txicas. Na estrutura da comunidade bentnica, 1351 indivduos foram identificados, distribudos entre 47 taxa. Sobre os descritores da comunidade bentnica, um baixo nmero de espcies foi encontrado por estao e em conseqncia disso baixos ndices de diversidade foram calculados, sendo os maiores valores observados em M1, M3, M4, M5 e M7 enquanto que os baixos valores de equitabilidade foram observados em M2, M5, M9 e M10. A listagem com a ocorrncia das espcies apresentada no ANEXO I. Polychaeta foi o grupo mais abundante (M1 a M7), seguidos por Mollusca (em M3, M6 e M9), Crustacea (em M2, M3 M5, M7, M8 e M9), Echinodermata (em M8, M9 e M10) e Nematoda (em M1, M2, M5 e M8). Houve tambm a ocorrncia de Chaetognata em M2. As espcies mais frequentes foram: Prionospio pinnata > Magelona posterolongata > Temnoconcha brasiliana > Laeonereis acuta > Nematoda > Glycera lapidum > Mellita quinquiesperforata > Prionospio pygmaea > Magelona papillicorni > Scoloplos sp1 > Sthenolepis grubei > Cossura cndida. 3.2. Comparao com valores-guias de qualidade de sedimentos.

A comparao das concentraes de metais e HPA encontradas nas amostras do porto do Mucuripe com os valores-guias de qualidade de sedimentos da Resoluo CONAMA 454/12 apresentada na Tabela 2. Concentraes acima do nvel 1 so observadas para o Cd (M3), Ni (M4) e Zn (M3, M5 e M7) enquanto que concentraes acima no nvel 2 so observadas para o Zn (M1, M2, M4 e M6). No foram observadas concentraes de HPA acima dos nveis 1 e 2. De acordo com a Resoluo 454/12, tais violaes podem resultar em riscos de toxicidade, corroborando os resultados dos testes de toxicidade apresentados na seco anterior.

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Tabela 1 Resultados das anlises sedimentolgicas, qumicas, toxicidade e estrutura da comunidade bentnica das amostras do Porto do Mucuripe.
M1
7,40 Profundidade (m) 0,00 Cascalho (%) 75,56 Areia (%) 24,03 Finos (%) 5,61 MO (%) 18,28 CaCO3 (%) 0,94 COT (%) 0,23 P (%) 2,90 Al (%) 1,94 Fe (%) 0,04 Hg (g/g) 0,90 Cd (g/g) 38,00 Cr (g/g) 13,82 Cu (g/g) 16,54 Ni (g/g) 2,59 Pb (g/g) 469,33 Zn (g/g) 25,36 AH (g/g) 77,87 HPA (ng/g) <0,85 LAB (ng/g) 66,67* SI (% efeito) 26,18 AI (UT) 78,25* ISA (% efeito) 3,75 ELU (% efeito) 17 Especies/0,055 m2 2 218 Individuos/0,055 m 2 0,90 Equitatividade/0,055 m 1,56 Diversidade/0,055 m2 73,22 Polychaeta (%) 14,48 Mollusca (%) 0,00 Crustacea (%) 8,30 Nematoda (%) 0,00 Echinodermata (%)

M2
15,00 0,00 92,02 7,86 12,72 30,26 1,43 0,25 2,42 2,39 < 0,03 0,85 38,10 15,46 19,89 6,69 535,82 19,09 107,78 <0,85 66,67* 3,00 90,50* 99,75* 11 97 0,61 0,98 59,22 13,63 13,63 18,74 0,00

M3
15,40 0,00 77,03 22,74 5,99 25,05 0,96 0,42 2,49 1,85 0,03 1,41 32,32 11,20 16,66 3,58 399,58 17,60 59,65 <0,85 43,33* 3,00 92,00* 89,00* 12 85 0,97 1,33 56,79 24,09 21,42 0,00 0,00

M4
14,70 0,00 96,18 2,42 16,22 34,96 1,40 0,40 3,13 2,47 0,04 0,64 50,13 16,76 21,49 2,60 583,51 21,15 87,92 5,84 50,00* 3,00 97,50* 100,00* 11 91 0,96 1,23 90,00 0,00 0,00 0,00 0,00

M5
10,70 0,16 84,36 15,56 3,28 15,72 0,44 0,48 0,87 0,80 < 0,03 < 0,60 13,45 3,71 6,95 < 2,00 199,46 1,06 27,95 <0,85 40,00* 10,54 75,75* 4,50 21 297 0,59 1,36 48,70 19,04 32,04 12,60 0,00

M6
14,60 0,00 83,05 16,74 8,64 26,60 1,11 0,35 3,36 1,99 0,04 0,60 41,48 12,13 17,78 2,54 420,90 2,46 36,73 1,35 30,00* 3,10 96,75* 32,75* 7 85 0,83 0,71 63,17 26,83 0,00 0,00 0,00

M7
9,60 0,00 94,13 5,45 12,23 22,19 0,85 0,27 1,70 1,66 0,03 < 0,60 26,89 9,77 15,24 2,06 365,65 13,48 43,44 <0,85 26,67* 15,50 82,25* 8,25 21 309 0,95 1,78 71,40 10,80 14,96 0,00 0,00

M8
9,60 0,00 99,39 0,59 0,96 9,41 0,16 0,11 0,30 0,29 < 0,03 < 0,60 5,23 0,49 7,20 < 2,00 62,64 1,01 <1,00 <0,85 26,67 3,20 23,50 5,00 12 133 0,91 1,25 28,09 16,99 27,00 17,57 38,98

M9
11,90 0,00 99,81 0,08 0,57 5,74 0,18 0,09 0,16 0,13 < 0,03 < 0,60 3,33 0,00 < 2,00 < 2,00 25,03 0,46 <1,00 <0,85 16,67 6,01 8,00 0,25 3 30 0,33 0,23 0,00 30,00 30,00 0,00 40,00

M10
12,60 40,82 99,85 0,00 0,13 8,58 0,22 0,10 0,20 0,28 < 0,03 < 0,60 5,16 1,01 5,29 < 2,00 41,98 0,34 <1,00 <0,85 6,67 3,00 8,50 0,75 1 6 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 100,00

*=amostra txica, comparada ao controle interno (P<0,05), MO= matria orgnica, COT= carbono orgnico total, AH = hidrocarbonetos aliftico totais, HPA = hidrocarbonetos policclicos aromticos totais, LAB= alquilbenzenos lineares totais, SI= sedimento integral, AI= gua intersticial, ISA= interface sedimento gua, ELU= elutriatos.

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Tabela 2 Comparao dos resultados das anlises qumicas com valoresguias de qualidade de sedimentos. Violaes em negrito.
Estao M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10 Nvel 1 Nvel 2 Hg (g/g) 0,04 <0,03 0,03 0,04 <0,03 0,04 0,03 <0,03 <0,03 <0,03 0,3 1 Cd (g/g) 0,90 0,85 1,41 0,64 <0,60 0,60 <0,60 <0,60 <0,60 <0,60 1,2 7,2 Cr (g/g) 38,00 38,10 32,32 50,13 13,45 41,48 26,89 5,23 3,33 5,16 81 370 Cu (g/g) 13,82 15,46 11,20 16,76 3,71 12,13 9,77 0,49 0,00 1,01 34 270 Ni (g/g) 16,54 19,89 16,66 21,49 6,95 17,78 15,24 7,20 <2,00 5,29 20,9 51,6 Pb (g/g) 2,59 6,69 3,58 2,60 <2,00 2,54 2,06 <2,00 <2,00 <2,00 46,7 218 Zn (g/g) 469,33 535,82 399,58 583,51 199,46 420,90 365,65 62,64 25,03 41,98 150 410 HPA (ng/g) 77,87 107,78 59,65 87,92 27,95 36,73 43,44 <1,00 <1,00 <1,00 4000

3.3.

Integrao dos resultados

O resultado da anlise PCA apresentado na Tabela 3. Os primeiro 3 componentes (eixos) explicam 84,88% das varincias, apresentando a seguinte tendncia dos dados: (i) Ao componente 1 (PC1) explica 66,46% das varincias e representa, atravs de fortes correlaes negativas, a deposio de sedimentos finos, enriquecidos organicamente, com elevadas concentraes de metais, AH e HPA e txicos para SI, ISA e ELU. Na segunda matriz, tal componente est associada a estaes com maior diversidade, equitatividade e alta (ii) ocorrncia de polychaeta, contrastando com echinodermata. J o componente 2 (PC2) explica 12,02% das varincias, onde sedimentos finos esto correlacionados Na positivamente matriz, toxicidade enquanto que profundidade e toxicidade para AI e ELU esto correlacionados diversidade negativamente. uma segunda da correlaes positivas do numero e espcies, indivduos e indicam influncia

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(correlacionada negativamente no matriz 1) sobre esses descritores. (iii) Por fim o componente 3 explica 6,40% das varincias e na matriz 1 apenas as concentraes de LAB esto correlacionadas positivamente, enquanto que na segunda matriz a ocorrncia de Nematoda, apresentou correlao negativa. A ordenao do tipo bi-dimensional dos dois primeiros componentes (Axis 1 e 2, respectivamente) as estaes foram agrupadas em trs conjuntos distintos: (1) o primeiro composto pelas estaes M2, M3, M4 e M6, caracterizadas por uma maior contribuio das variveis do PC1 correlacionadas negativamente; (2) o segundo que inclui as estaes M1, M5 e M7 onde as associaes positivas do componente 2 foram significativas e (3), que inclui as estaes M8, M9 e M10, onde as associaes positivas do componente 1 foram mais significativas (Figura 6). J o resultado da integrao das linhas de evidncia atravs da trade da qualidade de sedimentos utilizando o RTMe apresentado na Figura 7. De modo geral, a contaminao e a toxicidade influenciaram mais na classificao das estaes. Para as estaes M9 e M10 o baixo numero de espcies, indivduos e ocorrncia dos principais grupos, geraram um alto ndice de degradao da comunidade bentnica em relao s outras linhas de evidncias. No entanto, os trs ndices combinados geraram a seguinte gradiente do grau de degradao da qualidade dos sedimentos das estaes: M9<M8< M5< M10< M7< M1< M6< M3< M2< M4. Comparando estes resultados com a ordenao do tipo bi-dimensional da PCA possvel observar uma concordncia entre os resultados encontrados, exceto para M10, o que corrobora caracterizao da qualidade dos sedimentos da regio apresentados.

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Tabela 3 Resultado da anlise de componentes principais (PCA) com 2 matrizes e correlaes de Pearson das variveis a cada componente.correlaes em negrito.
Matriz 1 Variveis Profundidade Cascalho Finos CaCO3 TOC P Al Fe Hg Cd Cr Cu Ni Pb Zn AH HPA LAB SI AI ISA ELU PC1 -0,41 0,49 -0,65 -0,96 -0,97 -0,65 -0,97 -0,98 -0,70 -0,79 -0,97 -0,98 -0,96 -0,83 -0,99 -0,82 -0,93 -0,48 -0,81 -0,14 -0,94 -0,81 PC2 -0,81 -0,40 0,52 -0,14 -0,12 0,11 0,12 0,07 0,23 -0,06 -0,01 0,02 -0,05 -0,15 0,04 0,21 0,03 -0,41 0,31 -0,92 0,10 -0,50 PC3 -0,02 -0,02 -0,06 0,13 -0,02 0,37 0,12 0,04 0,47 -0,31 0,15 0.00 0,04 -0,49 0,02 -0,23 -0,25 0,61 -0,32 -0,09 0,19 -0,14 Bentos Espcies Indivduos Equitatividade Diversidade Polychaeta Mollusca Crustacea Nematoda Echinodermata Matriz 2 PC1 -0,39 -0,15 -0,65 -0,52 -0,90 0,12 0,45 0,01 0,81 PC2 0,70 0,79 0,34 0,61 0,26 0,29 0,19 0,16 -0,40 PC3 0,06 0,18 0,22 0,09 0,26 -0,16 -0,22 -0,56 -0,10

Varincia (%) Varincia total (%)

66,46 66,46

12,02 78,48

6,40 84,88

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Indivduos

M1
3 Espcies Diversidade 2

M7

M5

Axis 2

1 Polychaeta 0

Equitatividade

-1

M2 M4
LAB

M3

finos Mollusca Hg AH ISA SI Nematoda P Zn Crustacea Al HPA Cu Cd Cr Ni Fe CaCO3 Pb TOC profundidade ELU

M8

M9

M6

AI

Echinodermata

M10
Cascalho

-2 -6 -4 -2 0 Axis 1 2 4

Figura 6 - ordenao do tipo bi-dimensional dos componentes 1 e 2 da PCA

29

M1
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

M2
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

M3
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

Bentos

Toxicidade

Bentos

Toxicidade

Bentos

Toxicidade

M4
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

M5
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

M6
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

Bentos

Toxicidade

Bentos

Toxicidade

Bentos

Toxicidade

M7
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

M8
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

M9
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

Bentos

Toxicidade

Bentos

Toxicidade

Bentos

Toxicidade

M10
Contaminao
2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

Estao RTMe

M9

M8

M5

M10

M7

M1

M6

M3

M2

M4

0.25 0.28 0.42 0.46 0.59 0.95 1.38 1.51 1.75 2.46

Bentos

Toxicidade

Grau de degradao dos sedimentos

Figura 7 Valores RTMes calculados para as amostras do Porto do Mucuripe.

30

4. Discusso Na regio do Porto do Mucuripe, durante a implementao das estruturas porturias, aspectos da hidrodinmica costeira no foram devidamente avaliados de modo que impactos sobre o balano sedimentar foram observados a cerca de 20 km de Fortaleza (Bezerra et al. 2007). A construo do quebra-mar promoveu a alterao do transporte de sedimentos, que ocorre no sentido leste-oeste, criando zonas de deposio na rea abrigada (Maia et al., 1998). Este processo explica a distribuio dos teores elevados de sedimentos finos, CaCO3 e MO nas estaes de M1 a M7. Estes teores corroboram com descrio das fcies sedimentares da regio, que possui uma composio de 0,2 a 95% de carbonatos biognicos e nveis de matria orgnica variando de 0,76 a 38,9% (Freire et al., 2004; Lacerda & Marins, 2006; Marques et al., 2008; Nascimento et al., 2010). Considerando essa alterao nos processos hidrodinmicos, possvel que essa zona de abrigo das correntes tambm influencie na disperso de compostos lanados prximos a costa, comprometendo no apenas a qualidade das guas da regio com a o aumento da concentrao de contaminantes, que por sua vez podem atingir os sedimentos. Os valores de COT variaram entre 0,16 e 1,43%, com as maiores concentraes ocorrendo junto com sedimentos finos. O carbono na sua forma orgnica um dos principais constituintes da matria orgnica em sedimentos. J o P foi detectado acima de 0,20% nos sedimentos das estaes de M1 a M7, valores prximos aos reportados por Marins et al. (2007) para a regio da foz do Rio Jaguaribe (0,32 e 0,33%) e estes valores podem estar associados a atividades antrpicas como lanamento de esgotos e efluentes (Siqueira et al. 2006). Em relao aos metais, os processos de intemperismo fsico e qumico formam uma srie de materiais sedimentares tais como minerais de silicato, quartzo, feldspato, mica e argilas, xidos de metais e sulfetos que constituem origem das concentraes naturais (Carvalho et al., 2002) enquanto que as atividades antrpicas por meio dos lanamentos pontuais e difusos tambm

31

influenciam na distribuio dos elementos. Efluentes industriais, hospitalares e domsticos alm do escoamento urbano superficial contem substncias oriundas de tintas, pesticidas, frmacos, detergentes, leo e derivados, baterias e plsticos que representam as principais fontes de contaminao por metais na zona costeira (Petrovic et al., 2003; Marins et al., 2004). Alm disso, em regies com intensa atividade nutica, tais como portos e marinas, o trfego e ancoragem de embarcaes bem como atividades de limpeza dos cascos, promovem o a liberao de metais presentes em tintas anti-incrustante e nos prprios cascos (constitudos de liga metlica) para o ecossistema aqutico (Yetreberg et al. 2010; Biggs & DAnna, 2012). A Tabela 4 apresenta as concentraes de metais em diferentes regies porturias e nela possvel observar que as concentraes de Hg, Cd, Cu, Ni e Zn encontradas no Porto do Mucuripe so similares quelas encontradas nos portos de outros pases como Victoria (China), Rotterdam (Holanda), Montevideo (Uruguai) e Barcelona (Espanha) e tambm em portos do Brasil como Paranagu (PR) e Santos (SP). Compostos orgnicos como os AH e HPA so frequentemente encontrados em altas concentraes em regies porturias (Medeiros & Bcego 2004, 2007; Bcego et al., 2006; Silva & Bcego, 2010). Entre as suas principais fontes de emisso esto as atividades industriais por meio de efluentes e emisses atmosfricas, queima de combustvel fssil por veculos automotores (incluindo embarcaes), escoamento superficial e deposio atmosfrica (Liu et al., 2005; Cavalcante et al., 2009). J os LAB so subprodutos do alquilbenzeno linear sulfonato (LAS) que um tensoativo aninico usado em detergentes, lanados no ambiente desde 1960 e agora so utilizados como marcadores de esgoto no ambiente marinho (Martins et al. 2010).

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No presente estudo, as concentraes tanto de AH como de HPA podem ser consideradas baixas quando comparadas com concentraes de reas contaminadas tanto das regies Sul e Sudeste como o Porto de Santos, Baia de Guanabara e Lagoa dos Patos, como tambm as reas de intensa ocupao urbana e industrial na regio nordeste, como a Baia de Todos os Santos (Tabela 5). No entanto, a ocorrncia das maiores concentraes nas estaes de M1 a M7 corroboram a hiptese de que as zonas abrigadas do porto promovem no s a deposio de sedimentos finos, mas tambm a deposio destes compostos. Tabela 4 - Concentraes de metais em g g-1 em diferentes regies porturias.
Local
Victoria Harbor Porto de Rotterdam Porto de Montevideo Porto de Barcelona Porto de Ceuta Porto de Santos Sistema Estuarino de Vitoria Sistema Estuarino de Paranagu Porto do Mucuripe

Hg
<0,2-0,8 0,6-1,3 < 0,03 0,92 0,03-0,82 <0,030,04

Cd
2,61-3,33 <0,5-1,8 <1,0-1,6 4-1,4 < 0,50 1,49 <0,001 <0,601,41

Cr
57,5601,2 79-253 45-95 13-381 < 5,0 97,5 35-280 14,5058,00 3,3350,13

Cu
453789,5 <5-40 59-135 70-195 5-865 5-660 <0,0416,20 <0-16,76

Ni
23,6177,1 <5-20 26-34 18-27 8-671 1,3-44,2 6-245 6,6521,90 <2,0021,49

Pb
47,4138,1 <10-60 44-128 85-130 10-516 < 2,0204,8 5-292 <0,3029,75 <2,003,58

Zn
97,9610,4 15-190 174-491 180-300 29-695 6,0-312,0 27-812 26,9580,50 25,03583,51

Autor A B C D E F G H I

A - Wong et al. (1995); B - Van DenHurk et al. (1997); C - Muniz et al. (2004); D GuevaraRiba et al. (2004); E - Guerra-Garca & Garca-Gmez (2005); F Hortellani et al. (2008); G Jesus et al.(2004); H - Choueri et al. (2009b); I Presente estudo.

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Tabela 5 Distribuio de hidrocarbonetos em sedimentos de diferentes regies do Litoral do Brasil. AH LABs HPA Local -1 -1 (gg ) (ngg ) (ngg-1)
Porto do Mucuripe MundaManguaba Bacia Potiguar Rio Cear Rio Coc Baia de Todos os Santos Lagoa dos Patos Baia de Guaratuba Baia das Laranjeiras Porto de Santos Canal de So Sebastio Angra dos Reis Baia de Guanabara 0,34-25,36 28,7-139,5 0,015,0 1,1-129,6 0,28-8,19 0,17 - 2508 0,04-8,53 14,5-464,9 0,81- 21260,44 1,35-5,84 3,2-1601,9 16,9- 430,6 12,6-27,7 27,95-107,78 29,2 - 222,7 0,510 3,04-2234,76 3,34-1859,21 42-4187 37,7-11779,9 10,5-349 3,85-89,1 22,668130 2,9-370 6,3-2,77 96-153316,0

Autor
A B C D D E F G H I,J K L M

Sul/Sudeste

Nordeste

A Este estudo; B- Silva et al. (2012); C- Wagener et al. (2011); D - Cavalcante et al. (2009); E Wagener (2010); F - Medeiros et al. (2005); G - Pietzsch et al. (2010); H - Martins et al. (2012); I - Medeiros & Bcego (2004); J - Bcego et al. (2006); K - Medeiros & Bcego (2007); L - Azevedo et al. (2007); M - Wagener et al. (2012).

Em relao a toxicidade, as amostras de M1 a M7 foram txicas para o sedimento integral, e nas condies do ensaio, os anfpodos so diretamente expostos aos contaminantes associados s partculas de sedimento e a gua intersticial e portanto estes efeitos txicos podem ser resultados da mistura dos contaminantes pela exposio via superfcie corprea, respiratria e tambm pela ingesto (Kennedy et al., 2009; Burton & Johnston 2010). J no teste com gua intersticial, todas as amostras foram txicas a 100% mas nessas diluies os nveis de amnia no ionizada estiveram acima do limiar de efeito o que indica uma contribuio deste composto para o efeito encontrado, sendo considerado um interferente natural (Melo & Nipper, 2007). Com isso, o uso das diluies teve como objetivo a reduo dessa interferncia no ensaio e nesse caso, para as amostras M1, M5 e M7 provvel que contaminantes dissolvidos nessa fase lquida possam ter contribudo tambm para os efeitos txicos. De acordo com Camargo & Alonso (2006), a interao da amnia com o Cu, Zn, cloretos e fenis podem resultar em efeitos sinrgicos potencializando o efeito txico. Alm disso, importante salientar que em ambientes anxicos e ricos em matria orgnica, os processos de

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transformao da matria orgnica a atividade bacteriana promove a formao de amnia, mas em ambientes contaminados, esse composto possui tambm a fonte de origem associada a atividades antrpicas como o lanamento de efluentes industriais e esgoto (Losso et al., 2007). No teste de toxicidade da interface sedimento-gua, baixos ndices de desenvolvimento larval foram observados nas amostras de M1 a M7, sugerindo a transferncia de compostos do sedimento para a coluna dgua adjacente e determinando o risco de efeito sobre os organismos epibentnicos e planctnicos. Wauhob et al. (2007), observaram a transferncia dos metais Cd, Cu e Al, alm de compostos orgnicos como pesticidas, dos sedimentos para a interface sedimento-gua nas cmaras testes, determinando efeitos sobre o desenvolvimento das larvas de ourio-do-mar Arbacia punctulata e sobre a reproduo do coppodo Schizopera knabeni expostos a amostras de sedimentos da Baa de Corpus Christi, no Texas (EUA). J Cesar (2003) ao avaliar a contaminao por metais dos sedimentos da Baa de Portman (Espanha), observou toxicidade na interface sedimento-gua para larvas dos ourios do mar Arbacia lixula e Paracentrotus lividus, associada a concentraes de Zn, Pb, Al e Fe. Portanto, os efeitos observados neste estudo possivelmente foram causados por essa transferncia de contaminantes na camara-teste. Os elutriatos apresentaram toxicidade apenas para as M2, M3, M4 e M6 e considerando que nessa forma de exposio feita uma diluio dos e posterior ressuspenso, pode-se dizer que a transferncia/mobilizao de compostos na proporo avaliada 1:4 (sedimento/gua) baixa e ainda assim capaz produzir efeitos txicos e que nas operaes de dragagens, elutriatos mais concentrados so produzidos. Torres et al. (2009) ao avaliar a composio do overflow das dragas que operam no aprofundamento do canal do Porto de Santos, observou um aumento significativo dos teores de metais e de compostos orgnicos (HPA) no material do interior da draga, em relao ao sedimento do local de coleta, antes da operao. Dentre os fatores naturais a granulometria, considerada um dos principais controladores das comunidades bentnicas. Fresi et al. (1983)

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salientam que sedimentos heterogneos formam uma variedade de habitats, o que possibilita o assentamento de grande nmero de organismos, criando um ambiente da grande diversidade. Conforme discutido anteriormente, a composio granulomtrica na zona abrigada do Porto do Mucuripe influenciada pelos processos de deposio de sedimentos finos e pela existncia do canal de navegao, ambos em funo da estrutura do quebramar. No presente estudo, as amostras que apresentaram os melhores ndices para os descritores da comunidade foras as amostras de M1 a M8, que apresentaram sedimentos contendo mistura de areia e finos. J para as amostras M9 e M10, provvel que o alto hidrodinamismo em funo da zona de quebra de correntes, caracterizado pela textura dos sedimentos grosseiros (cascalho em M10) seja um fator limitante para a colonizao dos substratos na regio. J analisando a composio da comunidade bentnica possvel observar a ocorrncia da bolacha-do-mar M. quinquiesperforata em M8 a M10 e tambm de anfpodos Gammardeos em M8 e M9. Para as outras estaes o grupo mais abundante foi Polychaeta. Equinodermos e anfpodos bentnicos so grupos sensveis a contaminantes e so considerados indicadores de boa qualidade ambiental, pois so os primeiros a desaparecer em reas poludas, enquanto que muitos grupos de poliquetos so oportunistas e pouco sensveis, os quais frequentemente so abundantes em condies favorveis a proliferao, como, por exemplo, em reas contaminadas e enriquecidas organicamente (Long et al. 2001; Dauvin & Ruellet, 2007). Com isso, as estaes de M1 a M6 apresentaram alta densidade de poliquetos, predominando sobre os outros grupos, o que pode ser interpretado como um indicador de mudana na composio da comunidade bentnica. Na Praia do Futuro, regio adjacente ao Porto, Rocha-Barreira et al. (2001) reportam uma comunidade bentnica composta por Polychaeta, Mollusca e Crustacea, com a ocorrncia da M. quinquiesperforata. Porm importante salientar que a contaminao e a toxicidade tambm podem contribuir para a distribuio das espcies, uma vez que em regies contaminadas espcies tolerantes e/ou oportunistas tem a capacidade de se

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reproduzir em altas taxas, levando a colonizao dos habitats (Hartwell & Hameedi, 2006), o que explica a abundncia dos poliquetos Prionospio pinnata e Magelona posterolongata. 5. Concluses Na integrao dos resultados atravs da PCA, os nveis de contaminao (exceto LAB) estiveram correlacionados com os sedimentos finos e matria orgnica, e estes sedimentos, associados com os efeitos biolgicos observados, em especial a toxicidade do sedimento integral, interface sedimento-gua e elutriatos. Em reas porturias tais componentes dos sedimentos constituem os principais carreadores geoqumicos de contaminantes, controlando a sua biodisponibilidade de acordo com as condies do meio (Langston & Pope, 1995; Burgess & Kester 2002; McGee et al., 2009; Mzoughi & Chouba, 2011) e dessa forma a ocorrncia dessa mistura de contaminantes explica a toxicidade para os sedimentos efetivamente txicos. Para os efeitos sobre a comunidade estes sedimentos estiveram correlacionados com a diversidade, equitatividade e densidade de poliquetos. Com isso, possvel concluir que na regio do Porto do Mucuripe a distribuio das espcies bentnicas condicionada pela granulometria, com uma contribuio tambm da contaminao e da toxicidade, uma vez que h a mudana na composio das espcies em relao a regio a montante do quebra-mar . J a integrao atravs da trade da qualidade dos sedimentos usando os valores RTMe foi importante para classificar as estaes, identificando as reas de pior qualidade em relao aos valores mdios dos parmetros analisados, conforme os estudos de Abessa et al.,(2008) e Cesar et al. (2009), que utilizaram abordagem similar para identificar reas crticas de contaminao de sedimentos do sistema estuarino de Santos-So Vicente, alm da Baia de Santos. Por fim, baseado nestes resultados, a Tabela 6 sumariza os resultados das trs linhas de evidncia empregadas de acordo as tabelas de deciso

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proposta por Chapman (1996) para a TQS com as respectivas concluses para cada estao. As estaes de M1 a M7 apresentaram evidencia de poluio induzida por contaminantes (em especial os metais Cd, Ni e Zn alm do HPAs), porm efeitos in situ sobre o numero de espcies e indivduos da comunidade bentnica no foram observados, ao passo que a composio das espcies mostra a ocorrncia de poliquetos oportunistas, o que indica certo grau de degradao ambiental. Para estas estaes, o uso de outras abordagens e linhas de evidncia adicionais como exposio in situ, estudo de biomarcadores e bioacumulao pode ajudar nas investigaes das relaes de causa e efeito dos contaminantes, bem como na tomada de deciso nas aes de gesto de sedimentos contaminados (Chapman & Hollert, 2006; Chapman, 2007). Tabela 6 Concluses nos resultados das trs linhas de evidncia empregadas para as amostras do Porto do Mucuripe.
Estao M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10 Anlises quimicasa Toxicidadeb Alterao no Bentosc Concluso Evidncia de poluio induzida pelos contaminantes Evidncia de poluio induzida pelos contaminantes Evidncia de poluio induzida pelos contaminantes Evidncia de poluio induzida pelos contaminantes Evidncia de poluio induzida pelos contaminantes Evidncia de poluio induzida pelos contaminantes Evidncia de poluio induzida pelos contaminantes Boa qualidade dos sedimentos - ausncia de contaminao Alterao associada a fatores naturais (granulometria) Alterao associada a fatores naturais (granulometria)

+ + + + + + + -

+ + + + + + + -

+ + + + + + + +

a concentrao de contaminantes acima do Nivel 1; b - Toxicidade em dois ou mais testes de toxicidade; c baixo numero de indivduos e espcies.

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CAPTULO 2: Respostas de biomarcadores em Anomalocardia brasiliana expostas a sedimentos e material dragado no Porto do Mucuripe.

1. Introduo Os sedimentos tm sido considerados como destino final de grande parte dos materiais transportados no ambiente marinho, incluindo os contaminantes. As avaliaes da qualidade dos sedimentos tm avanado significativamente com a utilizao de abordagens integradas baseadas no uso de mltiplas linhas de evidncia, que visam determinar impactos ecolgicos de estressores (Chapman, 2007). Dentre tais abordagens, a trade da qualidade dos sedimentos utiliza os aspectos qumicos, ecotoxicolgicos e ecolgicos (estrutura da comunidade bentnica), constituindo assim a base das avaliaes de risco ecolgico de sedimentos e material dragado, e fornecendo tambm subsdios para o desenvolvimento de critrios e valores-guias de qualidade de sedimento (DelValls & Chapman, 1998; Wenning et al., 2005; Chapman & Smith, 2012). Porm, em muitos casos existem incertezas para estabelecer relaes de causa-efeito entre os estressores (contaminantes) e biota, que so fundamentais para as aes de gesto e proteo dos ecossistemas (Burton & Johnston, 2010). Alm disso, nos procedimentos laboratoriais (anlises qumicas e testes ecotoxicolgicos), embora haja um grande controle das condies experimentais, a manipulao das amostras pode alterar as propriedades da matriz analisada, levando a perdas de representatividade dos efeitos avaliados (Burton et al. 2005). Recentemente, Chapman & Hollert (2006) discutiram essas limitaes, propondo a incorporao de outras linhas de evidncia dentro das avaliaes integradas de sedimentos, como o estudo de biomarcadores e a utilizao de sistemas de exposio in situ, entre outras, de forma a auxiliar a identificao e caracterizao dos riscos. No caso dos testes de toxicidade, avaliada a resposta do organismoteste exposto ao sedimento em questo sob condies controladas, onde os

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efeitos so observados atravs da mortalidade para determinar a toxicidade aguda e tambm parmetros sub-letais como crescimento, mobilidade, desenvolvimento larval ou taxa de reproduo para determinao dos efeitos crnicos. Tais efeitos muitas vezes esto associados exposio em nveis de organizao biolgica com alta complexidade (como em populaes e comunidades) ou em situaes onde o dano irreversvel (Van Gestel & Van Brummelen, 1996). Os biomarcadores so alteraes nas respostas biolgicas em nvel de sub-organismo, variando desde nveis moleculares, celulares e fisiolgicos at alteraes comportamentais, e que podem estar relacionadas com a exposio a contaminantes ou outros agentes estressores (Peakall, 1994). Posteriormente os termos biomarcadores, bioindicadores e indicadores ecolgicos foram redefinidos por Van Gestel & Van Brummelen (1996) no sentido de conect-los com seus respectivos nveis de organizao ecolgica e dessa forma os biomarcadores foram considerados como respostas biolgicas a qualquer composto qumico no ambiente em nvel de sub-indivduo, medidas no prprio organismo ou nos seus produtos (exemplo: urina, fezes, cabelos, penas) e que indicam uma variao do status normal. J os bioindicadores so organismos que fornecem informaes das condies ambientais ou do seu habitat pela sua presena, ausncia ou comportamento e os indicadores ecolgicos so definidos como parmetros de ecossistema que descrevem a sua estrutura e funcionamento (Van Gestel & Van Brummelen, 1996; Martn-Daz et al., 2004). A partir dessa definio, os biomarcadores podem ser divididos em: (1) Biomarcadores de exposio, que consistem na deteco de substncias exgenas e/ou seus metablitos, e tambm o produto da interao de um xenobitico (contaminante) com molculas-alvo ou clulas medidas no organismo; (2) Biomarcadores de efeito, que incluem medidas bioqumicas, fisiolgicas ou quaisquer alteraes em tecidos ou fluidos corporais de um organismo, associadas com o comprometimento do estado de sade ou doena, e (3) Biomarcadores susceptibilidade, que correspondem capacidade inerente ou adquirida de um organismo para responder a exposio aos

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xenobiticos, incluindo fatores genticos e danos nos receptores que alteram a sensibilidade a essa exposio (NCR, 1987; WHO, 2001). Nos estudos que utilizam os biomarcadores como linhas de evidncia da qualidade de ecossistemas aquticos, geralmente so avaliadas respostas bioqumicas atravs do monitoramento da atividade enzimtica de vias de detoxificao, que podem ser divididas em: (1) Fase I (biotransformao) e (2) Fase II (conjugao). A Fase 1 consiste na biotransformao dos contaminantes atravs de reaes oxidativas, catalisadas pelo sistema oxigenase de funo mista (MFO) que inclui o grupo de enzimas denominado Citocromo P450 (CYP), capaz de atuar sobre a oxidao de compostos orgnicos (Stegeman & Livingstone 1998; Van der Oost et al., 2003). J a Fase 2 consiste basicamente na atividade de enzimas como a Glutationa-STransferase (GST), que atua sobre a conjugao de compostos modificados pelo mecanismos de biotransformao (Fase 1) com a glutationa reduzida, facilitando a sua dissoluo em meio aquoso, visando a sua excreo (Schlenk et al., 2008). Alm das vias de detoxificao, outros mecanismos importantes para compreenso da toxicidade so aqueles associados ao sistema de defesa antioxidante, que atuam sobre o estresse oxidativo que por sua vez pode ser induzido pela exposio aos contaminantes, resultando na gerao de espcies reativas de oxignio (ROS) como nion radical superxido (O2-) e o perxido de hidrognio (H2O2) (Di Giulio & Meyer, 2008). Em situaes onde os mecanismos de defesa so sobrepostos pelos mecanismos pr-oxidantes (gerao de ROS) o estresse oxidativo pode induzir efeitos como a inativao enzimtica, a peroxidao lipdica e danos em DNA (Cheung et al., 2001). No caso da peroxidao lipdica, os cidos graxos poliinsaturados, importantes componentes estruturais das membranas celulares e organelas, fundamentais para o funcionamento celular so comprometidos por meio de reaes induzidas pelas ROS, modificando sua estrutura e comportamento qumico (Janero, 1990; Di Giulio & Meyer, 2008). J em relao ao DNA, alm dos danos promovidos pelo estresse oxidativo, os contaminantes

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(principalmente compostos orgnicos) tm um grande potencial genotxico, gerando danos integridade do DNA e levando instabilidade (e quebra) das fitas da molcula (strand breaks); de modo que o acmulo de danos no interior da clula na ausncia de mecanismos de reparos pode levar a clula a apoptose (Everaarts, 1995; Cory & Adams, 2002). De acordo com Martn-Daz et al. (2004), os biomarcadores tm sido cada vez mais empregados em estudos ambientais como avaliaes de sedimentos e material dragado em conjunto com s anlises qumicas. De acordo com os autores nessas avaliaes os protocolos contemplam a determinao de efeitos biolgicos apenas atravs de ensaios de toxicidade, que medem os efeitos em altos nveis de organizao biolgica, e so pouco sensveis comparados aos biomarcadores em relao a deteco da manifestao dos primeiros efeitos txicos ao longo do tempo de exposio (Van Gestel & Van Brummelen, 1996). Com isso, os biomarcadores podem auxiliar no entendimento dos mecanismos de ao da toxicidade, aumentando a certeza em torno do papel dos contaminantes como estressores e a causalidade sobre os feitos observados. Nesse sentido, esta etapa do estudo tem como objetivo principal a avaliao das respostas de biomarcadores de forma integrada e complementar a caracterizao qumica e toxicidade dos sedimentos do Porto do Mucuripe, durante as operaes de dragagem dos sedimentos da regio. Para isso, foi empregada uma bateria de anlises de biomarcadores proposta por MartnDaz et al. (2004) que inclui a atividade de enzimas de fase 1 e 2, estresse oxidativo, danos em DNA e peroxidao lipdica como biomarcadores de efeito em moluscos bivalves da espcie Anomalocardia brasiliana expostos no campo (in situ) e em laboratrio.

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2. Materiais e mtodos. 2.1. Organismo alvo

No presente estudo foi utilizada como organismo alvo a espcie Anomalocardia brasiliana (GMELIN, 1791), molusco bivalve lamelibrnquio da famlia Veneridae popularmente conhecido como berbigo na regio NE do Brasil. Espcie bentnica representante da infauna, geralmente encontrada a at 5 cm de profundidade nos bancos de sedimentos. Esta espcie no apresenta dimorfismo sexual e sob os aspectos bsicos da sua biologia, uma espcie euritrmica e eurihalina, tendo grande resistncia s condies de anxia e hipxia, caractersticas estas que facilitam seu manejo durante coleta e transporte. Alm disso, a sua alimentao ocorre atravs da filtrao de partculas retidas nas brnquias (Narchi 1972; Araujo, 2004). Dada a sua importncia ecolgica, a espcie A. brasiliana tambm compe a dieta de comunidades pesqueiras e explorada comercialmente. Os espcimes de A. brasiliana foram coletados manualmente e com o auxilio de uma p quando preciso, na zona entre mars em bancos de sedimentos na praia da Requenguela (9482282,69 S, 684441,50 W), no municpio de Icapu, litoral leste do Cear (Figura 1). Sobre a escolha do local de coleta dos organismos, alm da abundncia da espcie, a regio tambm foi escolhida como referncia em funo da ausncia de fontes de contaminao significativas/relevantes, alm da baixa ocupao e urbanizao. Aps a coleta, os animais foram transportados em caixas trmicas at o Laboratrio de Ecotoxicologia marinha do LABOMAR-UFC onde foram aclimatados em aqurios contendo gua do mar limpa (livre de contaminantes) com salinidade 35 e aerao (Figura 2) e mantidos at o momento do transplante para exposio em campo e realizao dos bioensaios de exposio em laboratrio.

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Fortaleza

Oceano Atlntico

Icapu

Brasil

Cear

Figura 1 Localizao da praia da Requenguela no municpio de Icapu, CE, Brasil.

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Figura 2 Organismo alvo utilizado no estudo. Onde a = local de coleta na praia da Requenguela; b = A. brasiliana; c = aclimatao dos organismos em laboratrio.

2.2.

Estaes de coleta e formas de exposio.

Conforme j mencionado, no presente estudo foram adotadas duas estratgias de exposio, em campo e em laboratrio. Para isso, foram determinadas 3 estaes de coleta e/ou exposio: MD1, no cais comercial e onde so lanados os efluentes da LUBNOR; MD2, localizada prxima ao per petroleiro e MD3, na bia de sinalizao da entrada do canal de navegao do porto e fora da rea abrigada (Figura 3). As campanhas de coletas e exposio foram realizadas em dois perodos distintos, sendo o primeiro entre 27 de dezembro de 2010 a 24 de janeiro de 2011, durante as atividades de dragagem iniciadas em setembro de 2010. J a segunda campanha foi realizada entre 01 a 28 de julho de 2011, ao final das operaes de dragagem.

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No sistema de exposio em campo, moluscos bivalves da espcie A. brasiliana coletados na praia da Requenguela foram transplantados para as estaes de coleta e exposio em lanternas de cultivo de ostras fixadas em cordas presas a uma poita na estao MD1, amarradas em um dos pilares de sustentao do per petroleiro em MD2 e presas a corrente de poita da bia de sinalizao em MD3 (Figura 4). Em cada estao foram transplantadas 4 lanternas contendo 30 organismos cada, posicionadas na interface sedimentogua. O tempo total de exposio foi de 28 dias e foram feitas retiradas de uma gaiola a cada 7 dias, constituindo tempos de resposta para avaliao da cintica dos efeitos. Aps a retirada, os organismos foram mantidos em gua do mar limpa e filtrada por um perodo de 6-8h para posterior processamento.

Mucuripe
Oceano Atlntico

Brasil

Cear

Figura 3 Localizao das estaes de coleta de sedimentos e exposio de bivalves in situ no Porto do Mucuripe.

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Figura 4 Viso geral das estaes de coleta de sedimentos e exposio de bivalves in situ no Porto do Mucuripe. Onde a e b = lanamento de efluentes na regio do porto, c= lanterna transplantada em MD1; d = pilar de fixao no per petroleiro em MD2; e = bia de sinalizao em MD3.

Ao final do 28 dia, antes da retirada da ultima lanterna, amostras de gua superficial e de fundo foram coletadas com auxlio de Garrafa de van Dorn para determinao do material particulado em suspenso (MPS) e testes de toxicidade. Foram coletadas tambm amostras de sedimento com auxlio de um pegador de fundo do tipo van Veen (com rea de 0,055 m2 e capacidade de 3Kg de sedimentos) para realizao dos bioensaios de exposio em laboratrio, alm de teste de toxicidade, caracterizao sedimentolgica e

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anlises qumicas. As amostras de gua foram armazenadas em garrafas plsticas e mantidas a 4C at a anlise do MPS (feitas em at um dia aps as coletas) e outras alquotas congeladas e mantidas a -20C para anlise dos testes de toxicidade. J as amostras de sedimento foram armazenadas em sacos plsticos e mantidas a 4C at a preparao para as anlises fsicas e qumicas e dos bioensaios. As coletas foram realizadas a bordo da embarcao SOLDADO I e nas estaes MD2 e MD3 a fixao das lanternas foi feita por meio de mergulho autnomo com auxlio dos equipamentos do Laboratrio de mergulho cientfico e instrumentao (LAMERC) do LABOMAR, coordenado pelo Prof. Dr. Tito Monteiro da Cruz Lotufo e os amostradores utilizados cedidos pelo Laboratrio de Oceanografia Fsica, coordenado pela Prof. Dr. Maria Ozilea Bezerra Menezes. Durante o perodo de exposio em campo, as gaiolas da estao MD3 foram perdidas, provavelmente ineficincia das fitas de fixao, o que permitiu apenas a anlise dos organismos expostos em MD1 e MD2, alm do controle no tempo 0 (Icapu). A partir da exposio em campo, uma semana aps as coletas, foram feitos bioensaios de exposio em laboratrio. O sistema de exposio foi estabelecido de acordo com USEPA (1993, 2000). Frascos de polietileno de alta densidade (PEAD) com capacidade para 3L foram usados como cmarasteste onde 400g de sedimento foram adicionados formando uma camada de 45 cm aproximadamente, de forma a possibilitar o enterramento dos organismos. Em seguida foram acrescidos 1,6L de gua do mar limpa e filtrada e posteriormente o sistema foi mantido a 252C por 24h para que a amostra de sedimento entrasse em equilbrio (qumico e fsico) com a gua e aps esse perodo, 5 organismos foram expostos em cada rplica. O sistema foi montado em 12 rplicas nos mesmos tempos de exposio do transplante em campo (7, 14, 21 e 28 dias), e semanalmente 3 rplicas eram desmontadas e os organismos retirados para avaliao das respostas dos biomarcadores. Aps a retirada, os organismos foram mantidos em gua do mar limpa e filtrada por um perodo de 6-8h para posterior processamento.

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Durante os bioensaios, a temperatura foi mantida a 252C e o fotoperodo 12:12h (claro:escuro) com aerao moderada de forma a manter a saturao entre 70-100%. A alimentao dos animais foi feita a cada 2 dias com ml de uma soluo de microalgas do gnero Chlorella sp, com renovao da gua na cmara teste no 14 dia. 2.3. Processamento do Material biolgico

Aps o perodo de depurao de 6-8h aps a exposio, no sentido de minimizar o estresse de coleta e transporte, os tecidos foram processados de acordo com a forma de exposio empregada. Para os organismos expostos em campo foram utilizadas as brnquias e glndulas digestivas, onde para cada estao de coleta foram preparadas 5 amostras compostas por um pool de 3 animais, possibilitando uma quantidade mnima de tecido para deteco das atividades enzimticas. No foram observadas mortes dos organismos durante o perodo de exposio. J para os organismos expostos em laboratrio, em funo da limitao logstica para realizao de um bioensaio com o numero de rplicas necessrio para separao dos tecidos, foram preparadas 5 amostras utilizando o organismo inteiro. Como controle, foram preparadas 5 rplicas dos tecidos (brnquia e glndula digestiva) e dos organismos inteiros com animais aclimatados, antes da exposio, constituindo a amostra no tempo 0 (T=0). Os organismos foram dissecados no laboratrio com auxlio de um bisturi e as amostras dos tecidos acondicionadas em microtubos do tipo Eppendorf e mantidas congeladas em um ultrafreezer a uma temperatura de -80C. Aps o trmino das coletas as amostras foram enviadas ao Laboratrio do Ncleo de Estudos em Poluio e Ecotoxicologia Aqutica da UNESP So Vicente onde permaneceram a -70C at a realizao das anlises. Como parte do preparo para a realizao das anlises, as amostras de tecido de cada organismo foram descongeladas sobre gelo e em seguida homogeneizadas com 2 vezes o volume em uma soluo tampo 100 mM NaCl, 0,1mM EDTA, 0,1 mM DTT e PMSF 1 mM, pH 7,6 em um homogeneizador motorizado do tipo Tissue Tearor. Aps a homogeneizao,

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uma alquota de 400 l do extrato foi separada para anlise da peroxidao lipdica (LPO) e de danos em DNA (biomarcadores de efeito) e o volume restante foi centrifugado a 4C, a 15.000g durante 30 minutos, obtendo-se assim a frao S15 (sobrenadante de 15.000g) correspondente a frao celular citoplasmtica onde foram analisadas as atividades das enzimas Etoxiresorufina-O-deetilase (EROD), Glutationa Peroxidase (GPx), Glutationa Redutase (GR), Glutationa-S-transferase (GST) e Acetilcolinesterase (AChe) apenas nos organismos expostos em Laboratrio. Foram analisadas as concentraes de protenas nas duas fraes (extrato e S15) atravs do mtodo de Bradford (1976).

2.4.

Anlises fsicas, qumicas e testes de toxicidade com as amostras de gua.

Em laboratrio, as amostras de gua superficial e de fundo foram analisadas quanto ao teor de material particulado em suspenso (MPS) atravs da filtrao de 3L de gua em filtros de 0,45 m de dimetro de poro para reteno de partculas (MIllipore ) com resultados expressos em mg/L. Nveis de amnia (total e no ionizada) foram estimados atravs de um eletrodo seletivo para amnia, modelo ORION 95-12. Testes de toxicidade aguda e crnica foram realizados como medidas de efeito e qualidade das guas. O teste de toxicidade aguda foi empregado utilizando como organismo teste o misidceo Mysidopsis juniae de acordo com protocolo descrito na norma tcnica NBR 15308 (ABNT, 2011). Neste teste, as amostras (incluindo o controle, que a gua do mar do cultivo) foram preparadas em bqueres em alquotas de 300 ml, compondo o sistema-teste, montados em triplicatas. Em cada rplica do sistema, 10 indivduos juvenis de M. juniae (proveniente do cultivo Laboratrio de Ecotoxicologia Marinha do LABOMAR), foram expostos s amostras e mantidos sob fotoperodo de 12h luz : 12h escuro a 252C. A durao da exposio do teste foi de 96h, tendo sido feitas a cada 24h a contagem dos indivduos mortos e tambm a alimentao dos animais com nuplios de Artmia sp., numa proporo de 30:1

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(nuplios: misidceo). Ao final do perodo o nmero total de mortos foi contado em todas as amostras, incluindo o controle para interpretao dos resultados, expressos em % de mortalidade. J o teste de toxicidade crnica empregado foi o de curta durao de desenvolvimento larval do ourio-do-mar Lytechinus variegatus conforme a Norma Tcnica NBR 15350 (ABNT, 2006). Foram montadas 4 rplicas para cada amostra, alm do controle referente gua do mar filtrada, e o sistemateste incubado a 252C por 24h. Ao final do teste foi feita a contagem das larvas para estimativa de efeitos sub-letais (mal-formao das larvas). Os resultados foram expressos em % de larvas anmalas. Para anlise estatstica dos testes os dados de mortalidade M. juniae e desenvolvimento anmalo das larvas de L. variegatus foram comparados com os seus respectivos controles empregando o teste-t simples (tStudent) e teste-t por bioequivalnciausando a constante de 0,91 (Bertoletti et al., 2007). Antes da aplicao, os dados foram submetidos avaliao do tipo de distribuio (normalidade) pelo teste do Chi-quadrado e, homogeneidade de varincias, pelo teste de Fisher. Para estas anlises, foi utilizado o software TOXSTAT verso 3.5 (West & Gulley, 1996). As amostras diferentes significativamente do controle foram consideradas txicas (p<0,05) e as que no apresentaram diferena significativa foram consideradas no txicas.

2.5.

Anlises sedimentolgicas, e qumicas dos sedimentos.

A determinao das fraes granulomtricas foi feita atravs do peneiramento mido das amostras secas (50g) em malha de 0,063 mm para separao da frao fina (silte+argila). Em seguida, com as fraes remanescentes foram feitos peneiramentos secos em um agitador mecnico (Shaker) com a separao das diferentes fraes: cascalho (>2mm), areia (>0,063 2mm) e finos (<0,063mm). A estimativa dos teores de carbonato de clcio (CaCO3) foi feita seguindo o mtodo de digesto e gravimetria descrito por Gross (1971). J a determinao dos teores de matria orgnica (MO) foi

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feito atravs do mtodo de combusto e gravimetria (Luczak et al., 1997). Os resultados foram expressos em %. A concentrao de carbono orgnico total (TOC) das amostras foi obtida atravs do analisador de carbono orgnico total (TOC V CPH Shimadzu) acoplado com mdulo para amostras slidas (SSM 5000 Shimadzu). As anlises de nitrognio total (N) e fsforo total (P) foram feitas atravs do mtodo colorimtrico descrito por Grasshoff et al. (1999), quantificados por espectrofotometria. As anlises das concentraes de metais em sedimentos foram realizadas no Laboratrio de Biogeoqumica Costeira do LABOMAR, sob a coordenao da Prof. Dr. Rozane Valente Marins. Os teores de metais foram determinados na frao total das amostras secas atravs do mtodo de Digesto cida em HCl/HNO3 (3:1) Assistida por Microondas de acordo com o mtodo EPA 3051A (USEPA, 1996). A leitura da concentrao dos metais Al, Fe, Cd, Cr, Cu, Ni, Pb e Zn nos extratos foi feita em um Espectrofotometro de Absoro Atmica em Chama modelo com correo com lmpada de deutrio para anlise de Pb, Ni e Hg. Para validao do procedimento de extrao e leitura, foram analisados em triplicatas amostras do material de Referncia SRM 2704 - Buffalo River Sediment e SRM-1646a - Estuarine sediments BRC 667. Anlises das concentraes hidrocarbonetos alifticos (AH), policclicos aromticos (HPA) e alquilbenzenos lineares (LAB) foram realizadas no Laboratrio de Qumica Orgnica Marinha do Instituto Oceanogrfico da Universidade de So Paulo (IOUSP), coordenado pela Prof. Dr. Mrcia Caruso Bcego. Nesta anlise, extratos das amostras de sedimento foram preparados em Soxhlet com uma mistura 50% diclorometano/n-hexano, seguindo a metodologia descrita em UNEP (1992). Os extratos foram ento fracionados por cromatografia em coluna de slica-gel e alumina. As concentraes de AH foram determinadas por cromatografia gasosa 6890 da Agilent Technologies com detector de ionizao de chama (GC-FID), enquanto as concentraes de LAB e HPA foram quantificadas em um cromatgrafo a

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gs Agilent 6890 acoplado a um espectrmetro de massa 5973N (GC/MS) no modo de monitoramento seletivo de ons (SIM). 2.6. Testes de toxicidade com sedimentos

Nos testes de toxicidade com sedimentos, foram empregadas duas formas de exposio: sedimento integral e interface sedimento-gua atravs de testes de efeitos agudos e crnicos. O teste de toxicidade de agudo com sedimento integral empregado consistiu na utilizao do anfpodo escavador Tiburonella viscana como organismo-teste segundo o procedimento descrito na Norma tcnica NBR 15638 (ABNT, 2002) e descrito no capitulo 1 deste estudo. No teste crnico, foi utilizado coppodo bentnico harpaticoida da espcie Tisbe biminiensis como organismo teste, de acordo com o mtodo descrito por ISO (1999), utilizando a frao total dos sedimentos. Os organismos so mantidos em cultivos no Laboratrio do Ncleo de Estudos em Poluio e Ecotoxicologia Aqutica (NEPEA) do Campus Experimental do Litoral Paulista da Universidade Estadual Paulista (UNESP). No procedimento, uma alquota de aproximadamente 5g de sedimento foi colocada em um frasco de polietileno com capacidade para 30 ml e em seguida 20 ml de gua do mar filtrada foram adicionados, constituindo a cmara-teste, montadas em 5 rplicas. O teste consistiu na exposio de 5 fmeas ovgeras por rplica durante 7 dias a 252C com fotoperiodo de 16:8 (claro/escuro). Ao final do teste, as amostras foram fixadas com formol 4% e coradas com corante RosaBengala 0,1%. Em seguida, os organismos contados e identificados para avaliao e expresso dos resultados em fecundidade, pelo nmero de napulios + copepoditos por fmeas em cada rplica. Para o teste agudo com a interface sedimento-gua, foi empregado o misidceo da espcie M. junie como organismo teste. A cmara-teste foi preparada em um bquer contendo 60 g de sedimento acrescidos de 240ml de gua do mar filtrada. Aps o perodo de equilbrio na cmara, foram adicionados 10 juvenis de M. junie e o teste conduzido conforme o procedimento descrito na norma tcnica NBR 15308 (ABNT, 2011).

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J o teste crnico empregado foi o de curta durao com as larvas do ourio-do-mar Lytechinus variegatus, conforme a Norma Tcnica NBR 15350 (ABNT, 2006) utilizando o sistema-teste proposto por Anderson et al. (2001) e adaptado por Cesar (2003) para realizao em pequenos volumes, conforme descrito no capitulo 1 deste estudo. O teste foi conduzido pela adio de cerca de 400 ovos a cada rplica do sistema (4 rplicas), alm dos controles, para observao de efeitos sub-letais (mal-formao das larvas) ao final do teste. Para anlise estatstica dos testes, foram utilizados os mesmos procedimentos e testes empregados nos ensaios com as amostras de gua. 2.7. Anlise dos biomarcadores

2.7.1. Colinesterase (AChe) A AChe atua principalmente nas terminaes nervosas e a sua funo bsica catalisar a hidrolise do neurotransmissor acetilcolina formando acetato e tiocolina, permitindo que o receptor colinrgico retorne a condio inicial antes da ativao e inibindo a transmisso excessiva do mesmo (Andreescu & Marty, 2006). A metodologia utilizada para determinao da atividade da AChe na Frao S15 dos organismos expostos em laboratrio foi aquela descrita por Ellman et al. (1961) e adaptada por Montserrat et al. (2006) para realizao em leitor de placas multicavidades. Alquotas de 33,4 l das amostras foram incubadas em tampo Fosfato (0,1M; pH 7,6) com o substrato iodeto de acetiocolina (Sigma-aldrich) 0,075M e ditionitrobenzeno 10mM (DTNB). A reao colorimtrica da tiocolina com o DTNB foi ento monitorada por espectrofotometria a 412 nm em intervalos de 5 min, durante 20 min. Os resultado so expressos em mol min-1 mg-1 de protena. 2.7.2. Etoxiresorufina-O-deetilase (EROD) A EROD uma enzima da famlia Citocromo P450, que atua na Fase 1 como uma representante do grupo das oxigenases de funo mista (MFO). Nesta anlise, a atividade da enzima EROD foi determinada na frao S15 das amostras, de acordo com o mtodo proposto por (Gagn & Blaise, 1993) adaptado por Martn-Daz et al. (2009) para realizao em leitor de placas

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multicavidades. Neste protocolo, 50 L da frao S15 foram incubados em um meio de reao para transformao do substrato 10 M 7-etoxiresorufina em 7hidroxiresorufina (resorufina) pela enzima EROD, iniciada pela adio de 100 M de NADPH (em tampo 100 mM KH2PO4). A partir do inicio da reao, a formao do composto 7-hidroxiresorufina foi monitorada cada 10 min durante 1h atravs da fluorescncia da reao (516nm de excitao e 600nm de emisso). A fluorescncia de cada amostra foi transformada usando uma curva padro de 7-hidroxiresorufina e os resultados expressos em pmol resorufina.min1.mg1 de protena.

2.7.3. Glutationa-S-transferase (GST) A enzima GST participa dos mecanismos da Fase 2 atuando sobre a conjugao de compostos modificados pelo mecanismos de Fase 1 com a glutationa reduzida. O protocolo utilizado para determinao da atividade da GST na frao S15 das amostras foi descrito por McFarland et al. (1999) e adaptado por Martn-Daz et al. (2009) para realizao em leitor de placas multicavidades. As amostras foram incubadas em um meio de reao tampo fosfato de potssio (pH 6,5) contendo 42 mM 1-cloro-2,4-dinitrobenzeno (CDNB) e 1mM GSH como substratos e a formao do conjugado glutationa2,4-dinitrobenzeno foi monitorada a cada 5 min durante 30min por espectrofotometria a 340 nm. Os resultado foram expressos em mol NADPH min-1 mg-1 de protena. 2.7.4. Glutationa Peroxidase (GPx). A GPx desempenha um papel importante nos processos de defesa contra o estresse oxidativo atravs da catlise do perxido de hidrognio (H2O2) em gua atravs da oxidao da glutationa reduzida (GSH) que passa ento a estar na forma oxidada (GSSG) (Van der Oost et al., 2003). A enzima utiliza o co-fator NADPH como doador de eltrons e a oxidao observada pelo consumo do NADPH o indicativo da atividade enzimtica. O mtodo utilizado para a anlise da GPx na frao S15 das amostras foi descrito McFarland et al.

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(1999) para realizao em leitor de placas multicavidades, onde a atividade enzimtica foi monitorada por espectrofotometria a 340 nm a partir da incubao das amostras em um tampo de reao (pH 7) contendo 50 mM de fosfato de potssio, 0.1 mM EDTA e azida sdica 0,15 mM, usando hidroperxido de cumento (1 mM) como substrato. Os resultado foram expressos em mol NADPH min-1 mg-1 de protena. 2.7.5. Glutationa Redutase (GR) Paralelamente GPx, a enzima GR catalisa a reduo do GSSG a GSH. A enzima tambm utiliza o co-fator NADPH como doador de eltrons e o consumo do NADPH tambm o indicativo da atividade enzimtica. O mtodo utilizado para a anlise da atividade da GR na frao S15 das amostras foi descrito McFarland et al. (1999) para realizao em leitor de placas multicavidades. Alquotas das amostras foram incubadas em um tampo fosfato de potssio (pH 7,6) contendo o 30mM glutationa oxidada (GSSG) como substrato e o co-fator NADPH 0.8 mM. O consumo do NADPH foi monitorado a cada 2 min durante 10min por espectrofotometria a 340 nm. Os resultado foram expressos em mol NADPH min-1.mg-1 de protena.

2.7.6. Peroxidao lipdica (LPO) No presente estudo a anlise de peroxidao lipdica foi realizada pelo o mtodo das substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBARs) proposto por Wills (1987). As TBARs so produtos intermedirios da peroxidao lipdica gerada por radicais livres durante o estresse oxidativo e uma delas, o malonidialdedo (MDA), reage com o cido tiobarbitrico produzindo tetrametoxipropano (Janero, 2000). Neste mtodo as 150 l das amostras foram incubadas em cido tricloroactico 10% (TCA) e cido tiobarbitrico 0.67% (TBA) em 1mM FeSO4 a 70C por 10 min. Aps a incubao as amostras fora centrifugadas e o precipitado analisado em fluorescncia 516 nm excitao/600 nm emisso. Atravs de um curva padro de

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tetrametoxipropano, as concentraes foram calculadas e os resultados expressos em M TBARs/mg protenas. 2.7.7. Danos em DNA (quebras de fita) Tal qual a LPO, os danos em DNA podem se manifestar como efeito do estresse oxidativo ou da exposio a agentes qumicos (hidrocarbonetos e pesticidas). O mtodo empregado para avaliao dos danos em DNA foi o da precipitao alcalina (Olive, 1988), que quantifica vestgios livres de DNA, resultado da quebra da fita do DNA genmico, separados durante o procedimento. Amostras dos extratos de tecido homogeneizado (25 L) foram adicionadas a 200 L de 2% SDS contendo 10 mM EDTA, 10 mM Trisbase e 40 mM NaOH e aps a mistura das solues, 200 L de KCl 0,12M foram adicionadas e a soluo misturada novamente. Feito isso, as solues foram aquecidas em banho-maria por 10min a 60C e em seguida incubadas a 4C por 30 min. Por fim, as amostras foram ento centrifugadas por 5 min a 8000g (4C). Na placa multicavidade, o sobrenadante (50 L) foi separado e adicionado a 150 L de corante Hoescht que foi preparado e diludo a 1g/mL em um tampo contendo 0,4 M NaCl, 4 mM colato de sdio e 0,1 M Tris acetato (pH 8,5). No leitor de microplacas, aps uma agitao de 5min, a fluorescncia foi medida atravs de filtros de 360 nm (excitao) e 450 nm (emisso). Os valores de fluorescncia foram ento transformados em concentraes atravs da leitura de uma curva padro de DNA genmico de esperma de salmo e os resultados expressos em g de DNA por mg1 de protena. 2.7.8. Quantificao da concentrao das protenas totais. Os resultados das atividades enzimticas, bem como da peroxidao lipdica e danos em DNA so normalizados e expressos por mg de protena total e para isso, a concentrao de protenas foi determinada em ambas as fraes (S15 e homogenato) atraves do mtodo de Bradford (1976). Nele,

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alquotas de 20l das fraes das amostras foram incubadas por 30 min em um meio contendo reagente de Bradford, preparado a partir da diluio do corante Comassie Blue G-250 em etanol 95% e H3PO4 85%. Em seguida, foi feita a leitura das amostras por espectrofotometria a 595 nm, as absorbncias das amostras transformadas em concentraes de protenas totais atravs da leitura de curvas padro de albumina de soro bovino (BSA), e os resultados foram expressos em mg.mL1. 2.7.9. Anlise estatstica dos biomarcadores Mtodos estatsticos univariados foram utilizados para analisar as respostas dos biomarcadores. As respostas obtidas em cada estao e em cada tempo foram comparadas com as respostas dos organismos no controle (t=0) atravs da anlise de varincias (ANOVA), seguida de comparaes mltiplas pelo teste Dunnett, com nvel de significncia de 5% (p=0,05).

2.8.

Integrao dos resultados

Foi empregado o mtodo estatstico multivariado de Anlise dos Componentes Principais com Ordenao do tipo Bi-Dimensional (PCA), no sentido de estabelecer associaes entre as variveis analisadas e as respostas dos biomarcadores. Duas anlises foram feitas, sendo a primeira integrando os dados da exposio em campo e a segunda integrando os resultados da exposio em laboratrio. Em cada anlise, os dados foram organizados em duas matrizes: a primeira foi composta pelas variveis ambientais e a segunda foi organizada com os dados das respostas biolgicas, incluindo os testes de toxicidade aguda e crnica, alm das respostas dos biomarcadores no 28 dia de exposio. Em cada matriz, os resultados expressos em % foram transformados pela funo arco-seno, possibilitando a comparao com os dados contnuos e em seguida os dados da matriz foram normalizados pela funo log(x+1)10,visando reduzir diferenas de grandeza entre as variveis.

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3. Resultados 3.1. Caracterizao das estaes: Resultados das anlises das amostras de gua e sedimentos.

Na Tabela 1 so apresentados os parmetros de qualidade de gua e resultados dos testes de toxicidade das amostras de gua superficial (S) e fundo (F) coletadas nas estaes de exposio na regio do Porto do Mucuripe durante a dragagem (1 campanha) e ao fim da dragagem (2 campanha). A salinidade variou pouco, entre 35 e 38. O mesmo ocorreu com o pH, que variou entre 8,1 e 8,3. Os de teores de oxignio dissolvido (OD) medidos em campo foram altos, com concentraes entre 6,3 e 7,9. Baixas concentraes de nitrognio amoniacal (NH4) e amnia no-ionizada (NH3) foram detectadas apenas em MD1 na 1 campanha. Em relao ao material particulado em suspenso (MPS), possvel observar um efeito direto da dragagem sobre a distribuio de partculas na coluna dgua, onde os teores na 1 campanha variaram entre 0,03 a 0,316 g/l enquanto que na 2 campanha os teores variaram entre 0,014 e 0,025 g/l. Sobre a toxicidade aguda, a amostra da estao MD1 foi txica, produzindo mortalidade significativa para M. junie nas amostras de gua de superfcie e fundo nas duas campanhas enquanto que para a toxicidade crnica, em MD1, para guas de superfcie e fundo, em MD2, para gua de fundo, ocorreu toxicidade sobre as larvas de L. variegatus.

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Tabela 1 Parmetros de qualidade de gua e resultados dos testes de toxicidade das amostras de gua superficial (S) e fundo (F) coletadas nas estaes de exposio na regio do Porto do Mucuripe.
Amostra CONTROLE MD1S MD1F MD2S MD2F MD3S MD3F MD1S' MD1F' MD2S' MD2F' MD3S' MD3F' salinidade 36 35 38 38 38 38 38 38 38 37 38 37 38 pH 8,0 8,2 8,2 8,3 8,2 8,2 8,3 8,1 8,1 8,2 8,2 8,1 8,2 OD (mg/L) 5,3 6,1 6,3 6,7 6,6 6,6 6,6 6,9 7,5 7,5 7,6 7,9 7,5 NH4 (mg/L) <0,04 0,05 0,05 <0,04 <0,04 <0,04 <0,04 <0,04 <0,04 <0,04 <0,04 <0,04 <0,04 NH3 (mg/L) <0,01 0,03 0,04 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 MPS (g/l) 0,006 0,126 0,316 0,035 0,188 0,041 0,030 0,017 0,014 0,014 0,018 0,016 0,025 Agudo (% efeito) 36 *7721 *7725 1010 0 36 2020 *1000 *200 100 100 0 76 Crnico (% efeito) 94 *362 *458 163 *963 104 192 136 137 146 187 115 135

2 campanha

1 campanha

*= amostra txica (p<0,05) Os resultados das anlises das amostras de sedimento so

apresentados na Tabela 2. A profundidade nas estaes MD1 (11 e 13m) e MD3 (5 e 8m) variou entre as campanhas como resultado direto das atividades de dragagem; j a estao MD2 no foi dragada. A granulometria dos sedimentos foi similar nas duas campanhas, com as fraes com a predominncia de sedimentos finos (silte+argila) em MD1 e predominncia de sedimentos arenosos em MD2 e MD3 nas duas campanhas e na estao do Icapu a predominncia foi de sedimentos arenosos. Os teores de carbonato de clcio (CaCO3) foram similares entre as estaes, com os maiores valores em MD1, estao de maior deposio de sedimentos e na estao Icapu os teores foram de 95,91%. Os teores de carbono orgnico total (COT) e nitrognio (N) apresentaram distribuio similar, com os maiores valores nos sedimentos de MD1 com 0,49 e 0,69% de COT, 0,60 e 0,51% de N nas 1 e 2 campanhas, respectivamente, porm tais valores foram similares aos valores da estao de referncia (Icapu). J os teores de fsforo (P) foram maiores nos sedimentos de MD3 nas duas campanhas, mas similares ao valor da estao do Icapu, que foi de 3,56%.

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Em relao aos metais, os sedimentos da estao MD1 apresentaram as maiores concentraes para todos os metais nas duas campanhas. O mesmo padro de distribuio foi encontrado para os contaminantes orgnicos, com as maiores valores de hidrocarbonetos alifticos (AH) e policclicos aromticos (HPA) encontradas em MD1, sendo as concentraes de HPA detectadas apenas em MD1 nas duas campanhas e MD2 na primeira campanha. J as concentraes de alquilbenzenos lineares (LAB) foram baixas no geral, sendo detectadas apenas em sedimentos de MD1 na segunda campanha. No foram detectadas concentraes de contaminantes de HPA e LAB nos sedimentos do Icapu. De modo geral comparando as concentraes dos contaminantes, possvel observar uma reduo dos valores, o que pode ser efeito das dragagens, atravs da remoo de sedimentos superficiais recentes com nveis mais altos de contaminao. Por fim, em relao aos resultados dos testes de toxicidade, os sedimentos de todas as estaes na primeira campanha e MD1 na segunda campanha foram txicos sobre o anfpodo T. viscana (SI agudo). No teste crnico com sedimento integral (SI crnico), apenas o sedimento de MD3 na segunda campanha induziu uma reduo significativa na taxa de reproduo do copepodo T. biminiensis. Nos testes de toxicidade com interface sedimentogua, sedimentos das estaes MD1 (nas duas campanhas) e MD2 (na segunda) apresentaram efeito txico agudo. J no teste crnico, apenas sedimento de MD3 na primeira campanha no apresentou efeito significativo. A estao do Icapu no apresentou toxicidade em nenhum dos testes empregados, o que confirma a estao como rea referncia.

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Tabela 2 Resultado das variveis sedimentolgicas, e qumicas e resultados dos testes de toxicidade dos sedimentos coletados nas estaes de exposio na regio do Porto do Mucuripe.
Varivel MD3 MD3' profundidade (m) 0 5 8 % de areia 95,91 91,59 87,94 % de finos 4,59 10,02 13,36 % de CaCO3 35.43 18,44 13,56 COT (%) 0,10 0,06 0,06 N (%) 0,43 0,43 0,36 P(%) 3,56 4,01 3,60 Al (%) 0,09 0,25 0,08 Fe(%) 0,13 0,26 0,21 Cd (g/g) 0,19 0,15 0,14 Cr (g/g) <2,00 13,43 <2,00 Cu (g/g) 0,36 1,56 2,18 Ni (g/g) 2,07 2,23 3,52 Pb (g/g) 9,84 19,44 22,43 Zn (g/g) 0,71 2,84 2,14 0,56 0,76 0,48 AH (g/g) HPA (ng/g) <1,00 <1,00 <1,00 LAB (ng/g) <0,85 <0,85 <0,85 Toxicidade (% de efeito) SI agudo 2312 1721 2712 *9312 *5715 *376 *7017 SI crnico** 2518 113 372 2811 4632 142 *41 ISA agudo 36 1010 2017 1211 *4020 *4411 *5936 ISA crnico 202 8712 *991 *6316 *1000 *1000 *1000 *= amostra txica (p<0,05); ** = fecundidade (n de napulios + copepoditos/fmeas). Icapu 1 campanha MD1 MD2 11 6 37,91 82,73 62,16 19,08 25,29 5,45 0,49 0,07 0,60 0,19 2,76 2,08 0,96 0,24 1,06 0,25 0,16 0,16 25,94 15,51 13,64 1,41 8,04 1,57 21,99 15,93 25,79 2,45 655,53 0,99 1160,43 2,96 <0,85 <0,85 2 campanha MD1' MD2' 13 6 36,55 57,58 63,51 44,40 17,61 7,64 0,69 0,04 0,51 0,37 2,50 3,52 0,96 0,06 1,08 0,14 0,15 0,14 2,51 <2,00 11,11 2,03 10,06 4,24 22,92 13,89 20,97 1,10 408,47 0,54 690,88 <1,00 91,62 <0,85

62

3.2.

Resposta dos biomarcadores

3.2.1. Exposio em campo Atividade enzimtica da EROD nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo apresentada na Figura 5. Na 1 campanha, houve um aumento significativo (p<0,05) da atividade enzimtica em relao ao tempo 0 (Icapu) nas brnquias em MD1 e MD2 apenas no 28 dia de exposio. J nas glndulas digestivas, houve um aumento significativo no 14 e 28 dias em MD1 e no 7 e 21 dias em MD2. J na 2 campanha, o aumento significativo da atividade enzimtica nas brnquias ocorreu no 21 e 28 dias apenas em MD1.

2 campanha
0.8

1 campanha
0.6
pmol.min -1.mg-1 proteina

* *
MD1 Branquias MD1 Glandula MD2 Branquias MD2 Glandula

pmol.min -1.mg-1 proteina

0.4

**

0.6 MD1 Branquias

0.2

*
0.0

*
14 21

* *
28

MD1 Glandula MD2 Branquias 0.4 MD2 Glandula

0.2

* *

0.0
0 7

14

21

Dias

Dias

Figura 5 Atividade enzimtica da EROD nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo. *= diferena significativa de T0 (p<0,05).

28

63

A atividade enzimtica da GST nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo apresentada na Figura 6. Na 1 campanha, possvel observar um aumento significativo da atividade enzimtica nas brnquias comparada ao tempo 0 (Icapu) em MD1 nos dias 7, 21 e 28 e em MD2 nos dias 7 e 28. Nas glndulas digestivas o aumento significativo ocorreu apenas em MD1 nos dias 14 e 21 de exposio. Na 2 campanha, houve um aumento significativo da atividade enzimtica nas brnquias apenas no 21 dia em MD1 e no 28 dia em MD2. No foi observado aumento significativo na atividade da GST nas glndulas digestivas em ambas as estaes.

1 campanha
mol.min -1.mg-1 de proteina mol.min -1.mg-1 de proteina

2 campanha

30

*
*

30

*
*

20

MD1 Branquias MD1 Glandula MD2 Branquias 20 MD2 Glandula

10

MD1 Branquias MD1 Glandula MD2 Branquias MD2 Glandula

10

14

21

14

21

28

Dias

Dias

Figura 6 - Atividade enzimtica da GST nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo. *= diferena significativa de T0 (p<0,05).

A atividade enzimtica da GPx nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo apresentada na Figura 7. Na 1 campanha, houve o aumento significativo da atividade enzimtica nas brnquias comparada ao tempo 0 (Icapu) em MD1 no 28 dia e em MD2 nos 7 e 28 dias de exposio. Na 2 campanha, foi observado o aumento significativo da atividade enzimtica nas brnquias em MD1 e MD2 no 28 dia. No foi observado aumento significativo na atividade enzimtica nas glndulas em nenhuma das estaes.

28

64

1 campanha
25
mol .mg pro tei na

2 campanha

mol .mg pro tei na

20 15 10 5 0

* *

25

MD1 Branquias MD1 Glandula 20 MD2 Branquias 15 MD2 Glandula

10 5 0

MD1 Branquias MD1 Glandula MD2 Branquias MD2 Glandula

-1

*
0 7 14 21

28

-1

14

21

Dias

Dias

Figura 7 Atividade enzimtica da GPx nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo. *= diferena significativa de T0 (p<0,05).

Atividade enzimtica da GR nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo apresentada na Figura 8. Na 1 campanha houve o aumento significativo da atividade enzimtica nas brnquias comparada ao tempo 0 (Icapu) em MD1 no 7 dia e em MD2 no 21 dia. Nas glndulas digestivas o aumento significativo ocorreu apenas em MD1 no 28 dia. Na 2 campanha, pode ser observado o aumento significativo da atividade enzimtica apenas nas brnquias em MD1 nos 21 e 28 dias de exposio.

28

65

1 campanha
mol.min -1.mg-1 de proteina

2 campanha
mol.min -1.mg-1 de proteina

8 6 4 2 0

MD1 Branquias MD1 Glandula 6 MD2 Branquias MD2 Glandula

4 2 0

MD1 Branquias MD1 Glandula MD2 Branquias MD2 Glandula

*
14 21 0 7

*
28

*
14 21

Dias

Dias

Figura 8 Atividade enzimtica da GR nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo. *= diferena significativa de T0 (p<0,05).

Os resultados da peroxidao lipdica (LPO) nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo so apresentados na Figura 9. Na 1 campanha pode ser observado o aumento significativo (p<0,05) em relao ao tempo 0 (Icapu) da LPO nas brnquias dos organismos da estao MD1 nos dias 7 e 28. Nas glndulas digestivas aumento significativo foi observado apenas em MD1 no 28 dia. Na 2 campanha houve o aumento significativo apenas nas brnquias dos organismos expostos em MD1 no dia 28.

28

66

1 campanha
8
g TBARS.mg -1 proteina g TBARS.mg -1 proteina

2 campanha
MD1 Branquias MD1 Glandula 6 MD2 Brnquias MD2 Glandula
4 2 0 8

6 4 2 0

*
*
14 21 28 0 7

MD1 Branquias MD1 Glandula MD2 Brnquias MD2 Glandula

14

21

Dias

Dias

Figura 9 Peroxidao lipdica nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo. *= diferena significativa de T0 (p<0,05).

Os resultados dos danos em DNA (quebra das fitas) nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo so apresentados na Figura 10. Na 1 campanha pode ser observado o aumento significativo (p<0,05) dos Danos em DNA em relao ao tempo 0 (Icapu) apenas nas glndulas digestivas dos organismos expostos em MD1 no 28 dia. Na 2 campanha, houve o aumento significativo dos danos em DNA nas glndulas digestivas dos organismos expostos em MD1 em todos os tempos de exposio (dias 7 14, 21 e 28).

28

67

1 campanha
g DNA.mg -1 de proteina g DNA.mg -1 de proteina

2 campanha

180 150 120 90 60 30 0

180

MD1 Branquias

150 MD1 Glandula

MD2 Branquias 120 MD2 Glandula

90 60 30 0

*
*

MD1 Branquias MD1 Glandula MD2 Branquias MD2 Glandula

14

21

28

14

21

Dias

Dias

Figura 10 Danos em DNA (quebra das fitas) nas brnquias e glndulas digestivas de A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em campo. *= diferena significativa de T0 (p<0,05).

matriz

de

correlaes

de

Pearson

com

as

respostas

28

dos

biomarcadores nas brnquias de A. brasiliana expostas em campo apresentada na Tabela 3. Correlaes positivas significativas (p<0,05) so observadas entre a atividade da GST com EROD e GPx, indicando a induo dos mecanismos de detoxificao (Fase 1) e conjugao (Fase 2). possvel observar tambm uma correlao significativa da atividade da GPx com a GR, o que indica tambm a ativao do sistema de defesa contra o estresse oxidativo. Por outro lado, as correlaes encontradas entre a atividade da GR com a LPO e com os danos em DNA apontam que esses efeitos podem ser associados ao estresse oxidativo, induzido pela exposio a contaminantes durante os perodos de exposio. J a matriz de correlaes de Pearson com as respostas dos biomarcadores nas glndulas digestivas de A. brasiliana expostas em campo apresentada na Tabela 4. Correlaes positivas significativas (p<0,05) so observadas para a atividade enzimtica da GST com a GPx, GR e com os danos em DNA, indicando efeitos induzidos pelo estresse oxidativo. Pode ser observada tambm correlao significativa entre a atividade da EROD com a LPO, indicando que o efeito pode ser atribudo exposio de contaminantes orgnicos.

68

Tabela 3 Matriz de correlaes de Pearson com as respostas dos biomarcadores

nas brnquias de A. brasiliana expostas em campo. Correlaes significativas em negrito. Dano Biomarcador Pearson EROD GPx GR GST LPO em DNA Coeficiente 0,3971 0,2111 0,6402 0,2440 0,1084 EROD Valor de p p=0,083 p=0,372 p=0,002 p=0,300 p=0,649 Coeficiente 0,3971 0,6782 0,2408 0,0756 0,5014 GPx Valor de p p=0,083 p=0,024 p=0,001 p=0,306 p=0,751 Coeficiente 0,2111 0,0042 0,5014 0,7268 0,5088 GR Valor de p p=0,372 p=0,024 p=0,986 p=0,000 p=0,022 Coeficiente 0,6402 0,0042 -0,0075 -0,1508 0,6782 GST Valor de p p=0,002 p=0,001 p=0,986 p=0,975 p=0,526 Coeficiente 0,2440 0,2408 0,7268 -0,0075 0,5547 LPO Valor de p p=0,300 p=0,306 p=0,000 p=0,975 p=0,011 Coeficiente 0,1084 0,0756 -0,1508 0,5088 0,5547 Dano em DNA Valor de p p=0,649 p=0,751 p=,022 p=0,526 p=0,011

Tabela 4 - Matriz de correlaes de Pearson com as respostas dos biomarcadores

nas glndulas digestivas de A. brasiliana expostas em campo. Correlaes significativas em negrito. Biomarcador EROD GPx GR GST LPO Dano em DNA Pearson Coeficiente Valor de p Coeficiente Valor de p Coeficiente Valor de p Coeficiente Valor de p Coeficiente Valor de p Coeficiente Valor de p EROD GPx 0,0809 p=0,735 GR 0,2394 p=0,309 0,3476 p=0,133 GST LPO Dano em DNA 0,3291 p=0,157 0,2874 p=0,219 0,1759 p=0,458 0,4562 p=0,043 0,1073 p=0,653

0,2057 0,5112 p=0,384 p=0,021 0,0809 0,7350 -0,3372 p=0,735 p=0,000 p=0,146 0,2394 0,3476 0,5067 -0,0430 p=0,309 p=0,133 p=0,023 p=0,857 0,2057 0,0277 0,7350 0,5067 p=0,384 p=0,000 p=0,023 p=0,908 0,5112 -0,3372 -0,0430 0,0277 p=0,021 p=0,146 p=0,857 p=0,908 0,3291 0,2874 0,1759 0,1073 0,4562 p=0,157 p=0,219 p=0,458 p=0,043 p=0,653

69

3.2.2. Exposio em laboratrio A atividade enzimtica da AChe em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio apresentada na Figura 11. Na 1 campanha, houve o aumento significativo (p<0,05) da atividade comparada ao T0 (Icapu) em MD1 no 14 dia e em MD2 no 7 dia. Na 2 campanha houve o aumento significativo da atividade da AChe em MD1, MD2 e nos animais expostos ao sedimentos do Icapu.

1 campanha
mol.min -1.mg-1 de proteina mol.min -1.mg-1 de proteina

2 campanha
Icapui MD1 MD2 MD3
0.4 0.3 0.2 0.1 0.0

0.4 0.3 0.2 0.1 0.0

Icapui MD1 MD2 MD3

14

21

28

14

21

28

Dias

Dias

Figura 11 Atividade enzimtica da AChe nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio. Diferena significativa de T0 (p<0,05) em: a=MD1 no dia 14; b= MD2 no dia 7 e C = MD1, MD2 e Icapu no dia 28.

A atividade enzimtica da EROD em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio apresentada na Figura 12. Diferentemente das campanhas de exposio em campo, no houve diferenas significativas na atividade enzimtica da EROD nos animais expostos s amostras de todas as estaes nas duas campanhas.

70

1 campanha
0.05
pmol.min-1.mg-1 proteina
pmol.min-1.mg-1 proteina

2 campanha
Icapui MD1 MD2 MD3
0.05 0.04 0.03 0.02 0.01 0.00

0.04 0.03 0.02 0.01 0.00

Icapui MD1 MD2 MD3

14

21

28

14

21

28

Dias

Dias

Figura 12 - Atividade enzimtica da EROD nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio.

A atividade enzimtica da GST em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio apresentada na Figura 13. Na 1 campanha, houve o aumento significativo (p<0,05) da atividade enzimtica em relao a T0 em MD1 nos dias 7 e 28. Na segunda campanha, o aumento significativo pode ser observado apenas em MD1 no dia 28.

1 campanha
mol.min -1.mg-1 de proteina

mol.min -1.mg-1 de proteina

4 3

b
Icapui MD1 MD2 MD3

2 campanha
4 3 2 1 0

a
2 1 0

Icapui MD1 MD2 MD3

14

21

28

14

21

28

Dias

Dias

Figura 13 Atividade enzimtica da GST nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio. Diferena significativa de T0 (p<0,05) em: a= MD1 no dia 7; b = MD1 no dia 28 e c= MD1 no dia 28.

71

A atividade enzimtica da GPx em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio apresentada na Figura 14. Na 1 campanha, possvel observar o aumento significativo (p<0,05) da atividade enzimtica em relao a T0 em MD1 no 28 dia de exposio. Na 2 campanha, o aumento significativo em relao a T0 pode ser observado em MD3 no 28 dia de exposio.
1 campanha
5
mol.mg -1 proteina

2 campanha

3 2 1 0

mol.mg -1 proteina

Icapui MD1 MD2 MD3

5 4 3 2 1 0

Icapui MD1 MD2 MD3

14

21

28

14

21

28

Dias

Dias

Figura 14 - Atividade enzimtica da GPx nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio. Diferena significativa de T0 (p<0,05) em: a= MD1 no dia 28 e b= MD3 no dia 28.

A atividade enzimtica da GR em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio apresentada na Figura 15. Na 1 campanha, no houve o aumento significativo (p<0,05) da atividade enzimtica em relao a T0 em nenhuma das amostras durante todo o perodo de exposio. J na 2 campanha, foi possvel observar o aumento significativo da atividade enzimtica em MD1, MD2 e MD3 no dia 28.

72

1 campanha
mol.min -1.mg-1 de proteina mol.min -1.mg-1 de proteina

2 campanha
Icapui MD1 MD2 MD3
0.3

0.3

0.2

0.2

Icapui MD1 MD2 MD3

0.1

0.1

0.0

14

21

28

0.0

14

21

28

Dias

Dias

Figura 15 Atividade enzimtica da GR nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio. Diferena significativa de T0 (p<0,05) em: a= MD1, MD2 e MD3 no dia 28.

Os Resultados da peroxidao lipdica em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio so apresentados na figura 16. Na 1 campanha houve o aumento significativo (p<0,05) nos animais expostos a amostra MD3 no dia 28. Na 2 campanha, ouve o aumento significativo da LPO nos animais expostos a amostra Icapu nos dias 7 e 14.

1 campanha
6
g TBARS.mg -1 proteina

2 campanha
g TBARS.mg -1 proteina

5 4 3 2 1 0 0 7 14 21

Icapui MD1 MD2 MD3

6 5 4 3 2 1 0 0 7 14 21 28

Icapui MD1 MD2 MD3

28

Dias

Dias

Figura 16 Peroxidao lipdica nas A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio. Diferena significativa de T0 (p<0,05) em: a= MD3 no dia 28; b= Icapu no dia 7 e c= Icapu no dia 14.

73

Os Resultados dos Danos em DNA em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio so apresentados na Figura 17. Na 1 campanha, houve o aumento significativo (p<0,05) dos danos em DNA em comparao ao T0 nos animais expostos a amostra MD1 e MD3 no dia 28. Na segunda campanha, houve o aumento significativo dos danos em DNA em MD3 no 21 dia e em MD1 no 28 dia.

1 campanha
g DNA.mg -1 de proteina

a
g DNA.mg -1 de proteina

2 campanha
Icapui MD1 MD2 MD3
100 80 60 40 20 0 0 7 14 21 28

100 80 60 40 20 0 0 7 14 21 28

Icapui MD1 MD2 MD3

Dias

Dias

Figura 17 Danos em DNA (quebra das fitas) em A. brasiliana expostas aos sedimentos do Porto do Mucuripe em laboratrio. Diferena significativa de T0 (p<0,05) em: a= MD1 no dia 28; b= MD3 no dia 21 e c=MD1 no dia 28.

matriz

de

correlaes

de

Pearson

com

as

respostas

dos

biomarcadores em A. brasiliana expostas as amostras do Porto do Mucuripe em laboratrio apresentada na Tabela 5. Correlaes positivas significativas (p<0,05) so observadas entre as atividades das enzimas GST com a AChe, EROD e GR, indicando a exposio a contaminantes e induo de estresse oxidativo. Corroborando esse comportamento, a atividade da GPx esta correlacionada significativamente com a GR e com os Danos em DNA, corroborando que a exposio de contaminantes pode estar induzindo efeitos sobre os organismos nas duas campanhas de exposio.

74

Tabela 5 Matriz de correlaes de Pearson com as respostas dos biomarcadores em A. brasiliana expostas em laboratrio. Correlaes significativas em negrito. Dano Biomarcador Pearson Ache EROD GST GPx GR LPO em DNA Coeficiente 0,2095 0,0145 0,2893 -0,1290 0,2588 0,6155 Ache Valor de p p=0,275 p=0,000 p=0,940 p=0,128 p=0,505 p=0,175 Coeficiente 0,2095 0,2517 0,0122 -0,0287 -0,0044 0,3827 EROD Valor de p p=0,275 p=0,040 p=0,188 p=0,950 p=0,883 p=0,982 Coeficiente 0,3323 0,2560 0,2694 0,6155 0,3827 0,5179 GST Valor de p p=0,078 p=0,004 p=0,180 p=0,158 p=0,000 p=0,040 Coeficiente 0,0145 0,2517 0,3323 0,1043 0,4564 0,4646 GPx Valor de p p=0,940 p=0,188 p=0,078 p=0,013 p=0,590 p=0,011 Coeficiente 0,2893 0,0122 -0,0057 0,0669 0,5179 0,4564 GR Valor de p p=0,128 p=0,950 p=0,004 p=0,013 p=0,977 p=0,730 Coeficiente -0,1290 -0,0287 0,2560 0,1043 -0,0057 0,1723 LPO Valor de p p=0,505 p=0,883 p=0,180 p=0,590 p=0,977 p=0,372 Coeficiente 0,2588 -0,0044 0,2694 0,0669 0,1723 0,4646 Dano em DNA Valor de p p=0,175 p=0,982 p=0,158 p=0,011 p=0,730 p=0,372

3.3.

Integrao dos Resultados

Os Resultados da integrao dos resultados atravs da anlise dos componentes principais (PCA) para os dados da exposio em campo com as variveis ambientais so apresentados na Tabela 6. Os 3 primeiros eixos explicam 87,94% da varincia dos dados e atravs deles possvel observar as seguintes associaes: (I) O primeiro eixo explica 60,6% da varincia total e representa atravs de correlaes negativas a distribuio dos teores de MPS, sedimentos finos, TOC, N, metais (com exceo do Cd e Cr) e dos contaminantes orgnicos. Na segunda matriz, esto correlacionadas a essa distribuio a toxicidade aguda e as resposta das enzimas GR e EROD (nas brnquias e glndulas) e da LPO e dos danos em DNA nas glndulas digestivas. (II) O eixo 2 explica 13,91% da varincia e representa atravs de correlaes negativas a distribuio do MPS com CaCO3, Cd e Cr e atravs de correlaes negativas a distribuio dos LAB. Na segunda matriz esto correlacionados negativamente a atividade

75

da GR, EROD e LPO nas glndulas, contrastando com a LPO nas brnquias, que apresentou correlao positiva. (III) O eixo 3 representa 13,44% da varincia e representam atravs de correlaes positivas o MPS e Cr, e correlaes negativas entre CaCO3, N e P. Na segunda matriz so observadas apenas correlaes positivas entre a toxicidade crnica e a atividade das GPx e GST.
Tabela 6 Integrao dos dados da exposio em campo baseada nos resultados da PCA. Correlaes das variveis e efeitos biolgicos com os eixos e % de contribuio de cada eixo na varincia dos dados. Matriz 1 Matriz 2 Varivel Eixo 1 Eixo 2 Eixo 3 Efeito biolgico Eixo 1 Eixo 2 Eixo 3 MPS Toxicidade Aguda -0,23 -0,31 -0,54 -0,56 0,62 -0,71 Finos 0,33 0,22 Toxicidade Crnica -0,09 -0,27 -0,82 0,85 CaCO3 -0,26 GRBr 0,66 -0,22 -0,54 -0,78 -0,54 TOC 0,14 -0,21 GRGl 0,25 -0,94 -0,68 -0,58 N -0,21 GPxBr -0,38 0,22 -0,72 -0,55 0,58 P 0,52 -0,05 GPxGl -0,07 0,13 -0,54 0,52 Al -0,07 0,06 GSTBr -0,30 -0,14 -0,94 0,70 Fe 0,05 0,02 GSTGl 0,05 -0,13 -0,99 0,72 Cd 0,10 -0,36 ERODBr 0,00 0,45 -0,74 -0,74 Cr -0,48 ERODGl 0,17 -0,61 0,54 -0,76 -0,50 Cu -0,01 -0,02 LPOBr -0,45 -0,09 -0,99 0,59 Ni 0,30 -0,20 LPOGl -0,61 0,21 -0,92 -0,67 Pb 0,36 0,15 DNAdBr -0,41 0,27 -0,16 -0,66 Zn -0,07 -0,03 DNAdGl -0,11 -0,06 -1,00 -0,93 AH -0,18 -0,02 Eixo 1 Eixo 2 Eixo 3 -0,97 HPA -0,20 -0,01 Varincia (%) 60,6 13,91 13,44 -0,97 LAB -0,33 Varincia total (%) 60,6 74,51 87,94 -0,58 0,59

A ordenao Bi-dimensional dos Eixos 1 e 2 apresentada na figura 18. Nela possvel observar a separao da estao MD1 nas duas campanhas das demais estaes, incluindo a rea referncia. No caso desta estao a associao da distribuio dos contaminantes com as respostas dos biomarcadores foi mais significativa. possvel observar tambm a separao das campanhas pela projeo negativa no eixo 2 das estaes da 1 campanha e pela projeo positiva das estaes da 2 campanha.

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MD1'
LAB

GR Br LPO Br

Axis 2

1 DNAd Br GPx Br

MD2' MD3'

TOC

Ni

EROD Br -6 -5
AH HPA Cr

GPx finos Gl Fe Pb 0 Crnico -1

CaCO3

Axis 1
P

DNAd-4 Gl

Zn

Cu

-3

Agudo

-2

Al N -1 GST Br

0 GST Gl Cd

MD2 2 MD3

EROD Gl

MPS

GR Gl

MD1
LPO Gl

Icapui
-2

Figura 18 Ordenao bidimensional dos Eixos 1 e 2 baseado nos resultados da PCA com os dados da exposio em campo.

Os Resultados da integrao dos resultados atravs da anlise dos componentes principais (PCA) para os dados da exposio em laboratrio com as variveis ambientais so apresentados na Tabela 7. Os 3 primeiros eixos explicam 87,85% da varincia dos dados e atravs deles possvel observar as seguintes associaes: (I) Eixo 1 explicando 63,15% da varincia dos dados e representando atravs de correlaes negativas reas mais profundas (deposio) com distribuio do TOC, N, metais (exceto Cd e Cr) e dos contaminantes orgnicos, contrastando com a distribuio do P que apresentou correlao positiva. Na segunda matriz esto correlacionados a essa distribuio a toxicidade aguda de sedimento integral e interface sedimentogua, e as respostas das enzimas GST, GPX e os danos em DNA, alm da correlao positiva da EROD.

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(II)

O eixo 2, que explica 15,27% da varincia e representa atravs de correlaes positivas a distribuio dos CaCO3, N, e Cd. Na segunda matriz, os danos em DNA esto correlacionados a esta distribuio, contrastando com as respostas das enzimas AChe e Gr, que apresentaram correlaes positivas ao eixo 2.

(III)

O eixo 3 explicando 9,42% da varincia e representa atravs de correlaes negativas a distribuio de P, LAB e baixos teores de Cr (correlao positiva). Na segunda matriz so observadas correlaes negativas para a toxicidade crnica de interface sedimento-gua e das respostas das enzimas AChe e GR, contrastando com a resposta da correlao positivas ao eixo3. EROD, que apresentou

Tabela 7 Integrao dos dados da exposio em laboratrio baseada nos resultados da PCA. Correlaes das variveis e efeitos biolgicos com os eixos e % de contribuio de cada eixo na varincia dos dados. Matriz 1 Matriz 2 Varivel Eixo 1 Eixo 2 Eixo 3 Efeito biolgico Eixo 1 Eixo 2 Eixo 3 Profundidade -0,09 SI agudo -0,14 0,44 -0,81 0,51 -0,87 finos 0,31 0,03 SI crnico 0,01 0,09 -0,13 -0,85 CaCO3 -0,23 -0,32 ISA agudo 0,40 -0,15 -0,90 -0,57 TOC -0,08 -0,16 ISA crnico -0,23 -0,21 -0,95 -0,76 N -0,33 Ache -0,23 -0,72 -0,50 0,64 -0,50 P -0,26 EROD 0,07 0,50 -0,54 0,50 0,65 Al -0,09 0,14 GST 0,11 -0,02 -0,95 -0,60 Fe -0,03 0,04 GPx -0,11 0,43 -0,99 -0,53 Cd 0,16 0,19 GR -0,25 -0,85 0,68 -0,51 Cr -0,41 -0,19 LPO 0,27 -0,28 0,07 0,80 Cu -0,07 0,05 Danos em DNA 0,30 -0,99 -0,65 -0,50 Ni 0,07 -0,27 -0,94 Pb 0,41 -0,10 -0,70 Zn -0,13 0,08 -0,99 AH -0,21 0,14 Eixo 1 Eixo 2 Eixo 3 -0,96 HPA -0,21 0,15 Variancia (%) 63,15 15,27 9,42 -0,95 LAB 0,21 Variancia total (%) 63,15 78,42 87,85 -0,63 -0,50

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A ordenao Bi-dimensional dos Eixos 1 e 2 apresentada na figura 19. Nela possvel observar um agrupamento das estaes similar ao agrupamento das estaes na exposio em campo, com a estao MD1 nas duas campanhas separadas das demais estaes incluindo a rea referncia, atravs de projees negativas no eixo1. Para esta estao os efeitos biolgicos associados distribuio dos contaminantes foram mais significativos.

GR 2 Ache

Axis 2

MD1'
LAB

1 ISA agudo
profundidade Cu TOC Ni

MD3' MD2 MD2'

GST Fe
Al GPx Cr

fines Pb

-5
HPA AH

-4
Zn

-3 SI agudo

-2

-1 0 ISANcrnico Cd
CaCO3

SI crnico EROD
P

Axis 1

MD3 2

LPO

MD1

dano DNA

-1

-2

Icapu
-3

Figura 19 Ordenao bidimensional dos Eixos 1 e 2 baseado nos resultados da PCA com os dados da exposio em laboratrio.

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4. Discusso 4.1. Efeitos da dragagem sobre a qualidade ambiental.

Eventos de dragagens e ressuspenso de sedimentos so complexos e em reas que apresentam fontes difusas de contaminao, diferentes impactos ambientais podem ser associados a essas atividades. A remoo dos sedimentos afeta diretamente os habitats bentnicos pela remoo do substrato e da biota bentnica, levando a defaunao (Bemvenuti, et al., 2005). Durante a dragagem ocorre a formao e lanamento do overflow, que uma mistura de gua e sedimentos finos que no so retidos na draga, o qual freqentemente devolvido ao ambiente e que leva ao aumento da concentrao de material em suspenso e como conseqncia, os nveis de nutrientes e elementos traos so alterados, causando a diminuio da zona euftica e comprometendo a produtividade primria (NRC, 1985). Torres et al. (2009) observaram que a formao do overflow durante a dragagem do canal do Porto de Santos formou uma pluma contaminada, com altas concentraes de Hg e HPA. Num contexto geoqumico, basicamente ocorrem tambm alteraes no potencial redox dos sedimentos, onde processos de oxidao e mudanas no pH promovem mudanas na especiao qumica dos contaminantes, como os metais por exemplo, aumentando a sua disponibilidade (Cantwell & Burgess, 2004; Eggleton & Thomas, 2004; Machado et al., 2011) e a formao da pluma, associada a esses processos representam os principais vetores dos riscos de contaminao para a biota. Cantwell et al. (2002) atravs de experimentos de ressuspenso com sedimentos de Rhode Island em laboratrio mostraram um aumento nas concentraes de Cu, Ni e Zn na coluna dgua adjacente na cmara de exposio, alm do enriquecimento de Cd, Cu, Ni, Pb e Zn no MPS e de acordo com os autores a desoro dos metais das partculas de sedimento em detrimento das mudanas do meio e da energia de ressuspenso foram significativas para esse aumento nas concentraes. No Brasil, durante as dragagens do Porto de Santos, Torres et al. (2009) observaram o aumento das

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concentraes de As, Hg, Zn e HPA no material coletado nas dragas e no material particulado em suspenso provocado pelo overflow, relacionando essas concentraes aos stios dragados. No caso do Porto do Mucuripe, na 1 campanha durante as dragagens os nveis de MPS foram altos, o que j era esperado, e considerando os indcios de contaminao discutidos no Capitulo 1 deste estudo, possvel que a ressuspenso dos sedimentos possa ter contribudo para a liberao de compostos na coluna dgua. Tal hiptese pode ser corroborada com as correlaes encontradas na PCA entre o MPS com a frao fina, as concentraes dos contaminantes nos sedimentos e a toxicidade da gua. Comparando as concentraes dos contaminantes com as reportadas no capitulo 1 para um perodo pr-dragagem possvel observar tambm baixos valores durante a dragagem, exceto para o Pb, AH e HPA em MD1, indicando a remoo dos sedimentos com maiores concentraes de contaminantes. No entanto, os testes de toxicidade evidenciam potencial txico dos sedimentos mesmo em baixos nveis de contaminao. Estes resultados diferem dos resultados de Torres et al. (2009), que no encontraram toxicidade nos sedimentos de stios recm dragados. Porm, Choueri et al. (2009a) propuseram a faixa de efeitos biolgicos para nveis de contaminao nos sedimentos do sistema estuarino de Santos e So Vicente e observaram que os efeitos biolgicos ocorrem mesmo em baixas concentraes. 4.2. Resposta dos biomarcadores

Frente a essa situao de ressuspenso de sedimentos foram realizadas exposies em campo e em laboratrio para avaliar os riscos de efeitos biolgicos pela exposio a eventuais contaminantes atravs das respostas dos biomarcadores, que so mtodos mais sensveis a esses baixos nveis de contaminao. No caso da exposio em campo, atravs do uso de animais transplantados possvel avaliar os atuais efeitos de forma a reduzir as limitaes dos resultados obtidos apenas por ensaios em laboratoriais (anlises qumicas e testes ecotoxicolgicos) e tambm variveis biolgicas como variabilidade gentica, perodos reprodutivos e metabolismo adaptado que

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podem ter uma influncia significativa sobre os efeitos avaliados em populaes nativas (Regoli & Orlando, 1995; Burton et al. 2005). Sobre as respostas dos biomarcadores, a ativao dos mecanismos de biotransformao (Fase 1) foi avaliada atravs da atividade da EROD, pertencente ao grupo das oxigenases de funo mista (MFO). A atividade da EROD tem sido reportada em espcies marinhas, como poliquetos (MoralesCaselles, 2008), mexilhes (Pereira et al. 2011) e berbiges (Silva et al., 2012) como resposta a exposio a contaminantes orgnicos, especificamente os hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA), bifenilas policloradas (PCB) e compostos de petrleo (Gadhgbui,et al., 1996). Sol et al. (1994) observaram em mexilhes e ostras provenientes da costa espanhola a induo da atividade da EROD com elevadas concentraes de HPA. Neste estudo, a atividade da EROD na 1 campanha apresentou um aumento significativo nas duas estaes. No 28 dia de exposio, a resposta foi elevada em MD1 e MD2 nas brnquias e em MD1 nas glndulas digestivas. Na segunda campanha a resposta foi significativa apenas em MD1 nas brnquias. Estes resultados indicam que a contribuio de contaminantes orgnicos de acordo com a forma de exposio, pois nos experimentos em laboratrio no foi observado aumento significativo da atividade da EROD em nenhuma das amostras. Em relao a atividade da GST, ela foi mais significativa durante a 1 campanha em MD1 e MD2, correlacionando com atividade da EROD, indicando uma resposta maior durante a exposio aos sedimentos ressuspensos (efeito da dragagem). J na exposio em laboratrio o aumento da atividade foi significativo em MD1 nas duas campanhas e que tambm apresentou uma correlao significativa com a EROD. Pereira et al. (2011) salientam que a induo da atividade de enzimas da Fase 1 (EROD) juntamente com as da Fase 2 (GST) indicam uma adaptao fisiolgica a exposio em ambientes que apresentam contaminantes orgnicos, pois a atividade da GST ao utilizar a glutationa (GSH) como substrato permite conjugao e a excreo dessas substncias (Schlenk et al.

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2008), o que explica a alta atividade encontrada, uma vez que nos bivalves as brnquias representam uma importante via para excreo. Alm disso, de acordo com Vieira et al., (2009), as brnquias tambm representam a primeira barreira contra a entrada de compostos txicos no organismo e no caso a atividade da GST pode ser a primeira tentativa de conter o efeito pela exposio a no apenas contaminantes orgnicos mas tambm aos metais, pois a biotransformao de conjugados da glutationa reduzida (GSH) catalisada pela atividade da GST, tem a capacidade de se ligar aos metais por conta da sua grande afinidade a essa molcula, diminuindo a sua concentrao no meio e evitando a absoro pelo organismo e consequentemente os efeitos txicos (Regoli & Principato, 1995). Estes estudos explicam as correlaes entre a atividade da GST com as concentraes de metais na exposio em laboratrio. Por outro lado, a induo da atividade da GPx nas brnquias foi significativa nas duas campanhas em MD1 e MD2, enquanto que a atividade da GR apresentou aumento apenas na segunda campanha nas brnquias em MD1. Para a exposio em laboratrio, o aumento da atividade da GPx foi significativo em MD1 na 1 campanha e em MD3 na 2 campanha enquanto que a atividade da GR foi induzida todas as estaes, exceto Icapu. Estes resultados indicam tambm uma resposta frente ao estresse oxidativo, pois a GPx age na reduo do H2O2, um dos principais reativas de oxignio (ROS) evolvidas nesse processo (Di Giulio & Meyer, 2008). Na matriz de correlao, a atividade da GPx correlacionou positivamente com a atividade da GR nas brnquias e nos organismos expostos em laboratrio, corroborando a ativao dos mecanismos de defesa antioxidantes. Metais e contaminantes so contaminantes conhecidos por induzir efeitos pr-oxidantes e no caso dos metais, o mecanismo mais importante na gerao de ROS esta associado a capacidade deste elementos de perder eltrons e do seu potencial de catlise das Reaes de Haber Weiss e Fentom (Regoli & Giuliani, 2013). Essas reaes levam a formao do radical hdroxila atravs da reduo de metais oxidados na presena de perxido de hidrognio (Shi et al., 2004).

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Durante a exposio ao ambiente atmosfrico, quando ocorre o fechamento da concha pelos msculos adutores, o metabolismo dos bivalves submetido a uma condio anxica e o sistema de enzimas antioxidante ativado como resposta de preveno ou compensao dos efeitos causados pelas ROS (Regoli & Principato, 1995). Porm no presente estudos os animais foram transplantados na regio de interface sedimento-gua e permaneceram submersos, descartando essa possvel resposta como falso-positivo. Alm desses mecanismos descritos acima, foi avaliada a atividade da Ache nos organismos expostos aos sedimentos em laboratrio. A inibio da atividade da Ache tem sido considerada um dos biomarcadores mais antigos empregado como resposta seletiva pela exposio a pesticidas (organofosforados e carbamatos) e que posteriormente foi descrita tambm como resposta a outros contaminantes orgnicos, associada a atividade da EROD (Payne et al., 1996; Fulton & Key, 2001). J a atividade da Ache ao promover a formao de tiocolina e acetato, leva ao aumento do consumo de oxignio, eu por sua vez aumenta a gerao de ROS, especificamente o H2O2 (Monserrat et al. 2007). Neste estudo, essa associao entre a atividade da Ache e as respostas bioqumicas ao estresse oxidativo ficou evidenciada pela correlao da Ache com a GST (na anlise de correlao) e com a GR (no eixo 2 da PCA). Por outro lado, Pereira et al. (2007) salientam a hiptese de que em exposies agudas, os metais podem interagir com os receptores colinrgicos e comprometer sua eficincia na ligao com os neurotransmissores, levando a uma induo na sntese da colinesterases. Tal hiptese corroborada atravs de estudos conduzidos em mexilhes (Perna perna e Mytilus galloprovincialis), que mostram a induo da Ache pela exposio aos metais Cd, Pb e Zn (Najimi et al., 1997; Bainy et al., 2006). No presente estudo, durante a 1 campanha a atividade da Ache apresentou uma induo significativa em MD1 no 14 dia e MD2 no 7 dia, com reduo (inibio) nos dias seguintes enquanto que na 2 campanha houve a induo apenas em todas as estaes no 28dia de exposio, com uma resposta similar a atividade da GR. Com isso, possvel afirmar que os

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resultados encontrados indicam que h uma resposta da AChe a mistura de contaminantes (especialmente metais), com uma contribuio a gerao do estresse oxidativo, especialmente em MD1 que apresentou as maiores concentraes dos contaminantes. Em relao aos biomarcadores de efeito, na exposio em campo, nveis de peroxidao lipdica (LPO) e os danos em DNA estiveram correlacionados com a atividade da GR nas brnquias enquanto que nas glndulas digestivas os niveis de LPO correlacionaram com a EROD e os Danos em DNA com a GST. Na exposio em laboratrio, os Danos em DNA correlacionaram com a atividade da GPx. Em condies de estresse oxidativo, quando as ROS e RNS sobrepem os mecanismos de defesa antioxidantes, diferentes componentes celulares so oxidados (Almeida et al., 2007). Altos nveis de peroxidao lipdica so reportados como biomarcadores de efeito do estresse oxidativo induzido pela exposio a contaminantes e/ou metabolitos formados por essa exposio, como as ROS (Valavanidis et al., 2006). Nesse processo, as membranas celulares so os principais alvos das ROS que iniciam uma reao autocataltica de oxidao nessas membranas, gerando hidroperxido de lipdios como metablito e que no interior da clula, podem levar a formao de adutos no DNA (Almeida et al., 2007) e comprometer o seu metabolismo, podendo resultar em morte celular (Girotti, 1998). J a quebra das fitas de DNA representa um dos principais efeitos do estresse oxidativo sobre esta molcula, pois a hidroxila (uma das ROS) tem a capacidade de sequestrar um tomo de hidrognio do grupamento acar do DNA, o que resulta na instabilidade e consequentemente quebra das fitas (Ravanat, 2005; Almeida et al., 2007). 4.3. Anlise Integrada.

Estabelecer relaes de causa-efeito entre os contaminantes e os efeitos biolgicos nos ecossistemas constitui os principais desafios nos estudos ecotoxicolgicos e avaliaes de risco ecolgico (Walker et al., 2012). Adams et al. (1989) sugerem que para alcanar esse objetivo importante avaliar os efeitos dessa exposio em diferentes nveis de organizao biolgica. Bartell

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(2006) salienta que o uso dos biomarcadores como indicadores de efeito em nvel de sub-organismo o seu uso integrado com indicadores em outros nveis de organizao como mortalidade e reproduo, por exemplo, pode fornecer subsdios significativos para aperfeioar a caracterizao dos riscos ecolgicos, reduzindo incertezas quanto significncia das concentraes dos contaminantes. Nesse contexto, mtodos multivariados para integrao de variveis fsicas e qumicas e dados biolgicos tm sido utilizados por diferentes autores em avaliaes de efeitos de dragagem e ressuspenso de sedimentos sobre a toxicidade (Torres et al., 2009), resposta de biomarcadores em animais nativos e transplantados (Pereira et al., 2007, 2012; Bocchetti et al., 2008) e respostas de biomarcadores em organismos expostos a sedimentos em laboratrio (Morales-Caselles, 2008). No presente estudo foi empregada anlise multivariada (PCA) com objetivo de observar associaes entre os nveis de contaminao com as respostas dos biomarcadores e testes de toxicidade. Nos resultados da PCA para os dados da exposio em campo, possvel observar a correlao significativa do MPS e dos contaminantes nos sedimentos (Cu, Ni, Pb, Zn e orgnicos) com a toxicidade aguda das amostras de gua e com os biomarcadores de exposio (GR e EROD em ambos os tecidos) e efeito (LPO e DNA nas glndulas). Da mesma forma, para a exposio em laboratrio os resultados da PCA apresentaram correlaes similares entre os sedimentos finos e dos contaminantes (Cu, Ni, Pb, Zn e orgnicos) com a toxicidade aguda e as respostas dos biomarcadores de exposio (GST e GPx) e efeito (Danos em DNA). Tais resultados indicam claramente que os mecanismos dos biomarcadores discutidos ocorreram como respostas iniciais s formas de exposio, tanto em campo como em laboratrio e que tal exposio foi traduzida em efeitos agudos, medidos atravs da mortalidade dos anfpodos e misdeos nos testes de toxicidade. Dentre as estaes anaisadas, MD1 que esta sobre maior influncia das atividades antrpicas (efluentes industriais e fluxo de embarcaes), alm de sofrer uma maior deposio de sedimentos finos, apresentou as maiores respostas frente aos nveis de contaminao em ambas as campanhas e

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formas de exposio. J as demais estaes, de forma pouco expressiva, porm relevante, tambm apresentaram respostas e indcios de efeitos e que podem representar importantes indicadores da qualidade ambiental da regio do Porto. 5. Concluses De modo geral, o uso dos biomarcadores em A. brasiliana como linha de evidncia de contaminao permitiu identificar a existncia de impactos associados as operaes de dragagem do Porto do Mucuripe, principalemnte em relao ao potencial txico dos sedimentos. Embora a dragagem tenha sido mais intensa durante a 1 campanha e tambm os efeitos (resposta dos biomarcadores e toxicidade), durante a 2 campanha os efeitos biolgicos persistiram, indicando que alm dos efeitos da remobilizao e disponibilizao de contaminantes provocados pela dragagem, houve tambm a contribuio de outras fontes para os efeitos biolgicos como o lanamento de efluentes, atividades nuticas e drenagem urbana superficial. Alm disso, foi possvel observar tambm que esses efeitos biolgicos significativos ocorreram mesmo em exposio a concentraes mais baixas, comparadas as concentraes encontradas na situao pr-dragagem, indicando a necessidade de entendimento da relao concentrao x efeito alm do estabelecimento da faixa de concentrao para efeitos biolgicos para a regio.

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CAPTULO 3: Valores de qualidade stio-especficos para sedimentos superficiais da regio do Porto do Mucuripe. 1. Introduo Em reas porturias, diferentes impactos ambientais podem ser observados como a instalao de cais, beros de atracao e retro-portos em reas de relevncia ecolgica e a construo de quebra-mares, que alteram os processos de balano sedimentar e dinmica costeira (NRC, 1997). Este ltimo resulta na criao de zonas de baixa energia que possibilitam a atracao de embarcaes, e como consequncia, passa a ocorrer uma maior deposio de sedimentos finos, provocando assoreamento e reduo na batimetria. Por isso, passa a ser necessria, com frequncia, a realizao de dragagens, que consistem na remoo desse material depositado no fundo, mantendo o calado e a profundidade dos canais de navegao em condies ideais para as operaes porturias (USEPA, 2004). O problema que, alm disso, dada a proximidade e associao dos portos com grandes centros urbanos e industriais por causa das condies de infraestrutura e logstica, as atividades de operao porturia promovem tambm o risco de contaminao por mltiplas fontes como: (1) pela liberao de lixo, esgotos e outros efluentes; (2) petrleo e seus derivados (pela combusto nos motores das embarcaes); (3) por acidentes ou por perdas durante operaes de carga e descarga; (4) pelo runoff urbano e (5) por substncias presentes em tintas anti-incrustantes. Como resultado da liberao de contaminantes, geralmente ocorre o seu acmulo nos sedimentos (ou na biota), causando problemas ambientais. Entre os grupos de contaminantes relacionados com esses episdios, esto os metais, as bifenilas policloradas (PCB), os hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA), os pesticidas organoclorados, leos e graxas, radionucldeos e os compostos organoestnicos (Casado-Martnez et al., 2006; Torres et al., 2009; Buruaem et al., 2012; Castro et al., 2012), alm da emisso de nutrientes (que podem levar eutrofizao) e deposio de matria

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orgnica. No ambiente marinho os contaminantes qumicos so adsorvidos ao material em suspenso, ou interagem com sais, carbono orgnico e argilas entre outros processos geoqumicos, depositando-se nos sedimentos, que geralmente apresentam concentraes mais altas em relao coluna dgua; e assim, esse compartimento ambiental pode constituir no apenas o destino final, mas tambm fonte secundria de contaminao (Burton e Johnston, 2010). Diante deste quadro, a contaminao dos sedimentos em ambientes costeiros representa um problema para a gesto ambiental porturia, pois os impactos diretos e indiretos relacionados s atividades de dragagens afetam diretamente duas regies distintas: as reas dragadas, impactadas pela remoo de sedimentos, e os stios de disposio, que so impactados ao receber o material dragado, em especial quando este se encontra contaminado. Durante as operaes de dragagem, a remoo do material afeta diretamente os habitats bentnicos pela remoo do substrato e da biota (Bemvenuti et al., 2005). Alm disso, a ressuspenso de sedimentos e o lanamento do overflow (mistura de gua e sedimentos finos que no so retidos na draga, o qual frequentemente devolvido ao ambiente) formam plumas onde muitos contaminantes esto remobilizados e podem se tornar biodisponveis (Torres et al., 2009). Machado et al. (2011) demonstraram atravs de experimentos em laboratrio que a ressuspenso de sedimentos da Baia de Guanabara promoveu a mudana na mobilidade do Cu, gerando formas mais reativas deste metal, aumentando a sua biodisponibilidade. Essa pluma constituda de sedimentos finos, provocando um aumento da concentrao de material em suspenso e consequentemente a diminuio da zona euftica - em funo da alta turbidez comprometendo a produtividade primria (Choueri, 2008) e a qualidade da gua. Essa situao faz com que reas dragadas sejam inicialmente desprovidas de fauna, havendo em geral rpida recolonizao por espcies oportunistas ou um decrscimo na diversidade e/ou abundncia das espcies (Cruz-Motta & Collins, 2004).

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Por outro lado, o descarte do material em stios de disposio marinhos geralmente a soluo final adotada em grande parte dos planejamentos de dragagem, principalmente no Brasil. A possvel contaminao dos sedimentos e o soterramento do assoalho representam os principais impactos aos quais essas reas so submetidas, e dessa forma, tambm merecem uma ateno especial quanto avaliao dos seus impactos (Casado Martinez et al., 2006; Sousa et al., 2007; Torres et al., 2009), assim como nos monitoramentos vinculados ao licenciamento das operaes (Bertoletti et al., 2008). Recentemente, Legorburu et al. (2013) demonstraram atravs de ferramentas de Sistema de Informao Geogrfica (SIG) a contribuio significativa da disposio de material dragado para o enriquecimento de metais (especialmente Cd, Hg e Pb) em sedimentos superficiais da plataforma continental do Mar Cantbrico (Baia de Biscay) no Pas Basco, ressaltando a importncia do monitoramento dessas fontes para avaliao da extenso dos riscos. Tendo em vista que grande parte das dragagens realizada em reas de alta importncia ecolgica e econmica, tais como baas, canais, enseadas e esturios que provm bens e servios ecolgicos e/ou ambientais, a contaminao desses novos stios acaba sendo tambm um problema de gesto ambiental. A preocupao com os passivos ambientais envolvendo a gesto de sedimentos e material dragado surge na dcada de 1970, por meio da Conveno de Londres em 1972 (http://www.londonconvention.org) - a qual o Brasil signatrio e a Conveno de Oslo-Paris (OSPAR http://www.ospar.org), que tinham como objetivo principal a regulamentao da disposio de substncias nocivas nos oceanos. Porm, como a situao mundial apontava que o volume de material dragado disposto no mar superava qualquer outro material, essas convenes foram estendidas tambm regulao dos sedimentos dragados e com isso, medidas preventivas e leis e regulamentaes comearam a ser estabelecidas em funo dos riscos ecolgicos, alm da atribuio dos custos da preveno e controle.

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1.1. No

Critrios e valores-guias de qualidade de sedimentos em reas costeiras caso de sedimentos dragados, obedecendo s leis e

regulamentaes, feita a caracterizao dos sedimentos considerando apenas o critrio qumico-especifico que consiste na comparao das concentraes encontradas com os valores propostos, os chamados valores de qualidade de sedimentos (VQS). Os VQS visam estabelecer uma relao direta entre as concentraes dos contaminantes com os efeitos biolgicos adversos associados exposio da biota a esse material, estabelecendo nveis de contaminao e qualidade para cada amostra. Esse tipo de abordagem importante, pois fornece bases para identificar contaminantes e concentraes ambientalmente relevantes que podem causar efeitos biolgicos adversos (Long et al., 2006). Alm disso, essa abordagem tambm amplamente utilizada devido a sua facilidade e simplicidade de aplicao por parte dos tomadores de deciso, gestores e/ou rgos reguladores (Chapman et al 1999a, 1999b; Burton, 2002). Os valores de qualidade de sedimento podem ser obtidos atravs de trs abordagens principais: (1) terica ou mecanstica, baseada na teoria do Equilbrio de Partio (EqP), que consiste no equilbrio dinmico entre os compostos dissolvidos na gua intersticial e aqueles adsorvidos ao material particulado, fino e/ou matria orgnica do sedimento (DiToro et al., 1991); (2) as abordagens empricas, com a obteno dos valores atravs de banco de dados de concentraes de contaminantes e a correspondncia dessas concentraes com efeitos biolgicos adversos (Batley et al, 2005); e por fim (3) os valores de qualidade stios-especficos obtidos por anlises multivariadas de dados de concentraes de contaminantes e efeitos txico (Choueri et al., 2009a). H ainda a abordagem baseada no consenso entre os VQS (Consensusbased) proposto por MacDonald et al. (2000) para ambientes dulccolas e por isso no ser abordada nesse estudo. Essa abordagem consiste no estabelecimento de valores gerados pela mdia dos diferentes VQS e seus

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respectivos limiares, uma vez que os diferentes mtodos de obteno geram discrepncias entres os VQS. Dentre as abordagens empricas, diferentes metodologias so adotadas dentre as quais podem ser citadas as que determinam intervalos de concentraes de efeitos limiares e provveis, utilizadas pelas agncias ambientais canadenses e americanas (Long et al., 1998; MacDonald et al., 1996).

1.2.

Critrios de qualidade de sedimentos obtidos por abordagens tericas ou mecanstica

1.2.1. Equilbrio de Partio (EqP) para metais Conforme citado acima, a principal abordagem terica para obteno de valores de qualidade de sedimentos fundamentada na teoria do EqP, que foi primeiramente desenvolvida e implementada pela agncia ambiental americana (USEPA) visando gerar as concentraes preditivas de toxicidade sobre organismos bentnicos para os metais Cd, Cu, Ni, Pb, Ag e Zn (USEPA 2000, 2005). O modelo visou descrever procedimentos para o desenvolvimento de concentraes de riscos, ou seja, aquelas que predizem a toxicidade ou a ausncia dela (Di Toro et al., 1990) considerando a partio dos metais entre sedimento e a gua intersticial, que primeiramente sintetizada na seguinte equao (1): Cs= Kp. CL50 (1)

Onde Cs= concentrao que causa 50 % de mortalidade (CL50) do metal em sedimentos expressa em g/Kg; Kp = coeficiente de partio entre a gua intersticial e o sedimento (L/Kg); CL50= CL50 do metal determinada em gua do mar g/L. O modelo assume que os sulfetos representam a principal fase de controle da biodisponibilidade de metais txicos por meio da sua partio sua na gua intersticial. Atravs da anlise dos sulfetos volatilizveis por acidificao (AVS) e dos metais extrados simultaneamente (SEM), onde os

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AVS se ligam a esses metais, formando sulfetos insolveis (DiToro et al., 1990; USEPA, 2005). Portanto, quando a concentrao molar dos AVS excede a soma molar dos SEM no esperada a toxicidade e com isso, a aplicao da razo AVS/SEM tem sido utilizada para avaliar o potencial txico: quando ela for 1 h grande probabilidade da amostra no apresentar toxicidade 1, h a probabilidade da amostra ser txica (Ankley et al., 1996). A partir disso o modelo assume que como os SEM so aqueles extrados por meio de cido fraco (HCl 1N), essa frao corresponde aos metais biodisponveis, levando integrao desse conceito equao, que agora passa a considerar a razo SEM/AVS (2): SEM= AVS + Kp. CL50 (2)

Porm, como o carbono orgnico (COT) tambm representa uma fase importante na partio de contaminantes em sedimentos, o coeficiente de partio gua-carbono orgnico (KOC) e as concentraes de COT substituem o Kp, e ento a equao segue conforme item (3). Movendo os termos da equao, quando os valores de KOC ou CL50 so conhecidos, a seguinte equao (4) pode ser utilizada para predio da toxicidade. Para validar essa teoria, os dados foram determinados por experimentos de exposio de anfpodos e poliquetos a amostras fortificadas com metais (Di Toro et al., 1990; Pesch et al., 1995; Berry et al., 1996) e como muitos deles correspondem a um nico metal, situao que no acontece no ambiente, a equao final dada a seguir (5), considerando a somatria dos SEM. Em suma, se a soma molar dos SEM for menor ou igual concentrao de AVS, para os metais Cd, Cu, Ni, Pb, Ag e Zn as concentraes dessa mistura so aceitveis para a proteo da vida aqutica, e a toxicidade no esperada. SEM = AVS + COT. KOC .CL50 (SEM AVS/COT) = KOC .CL50 SEM AVS/COT . (3) (4) (5)

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1.2.2. Equilbrio de Partio (EqP) para hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA) Embora mais complexa, a obteno de VQS atravs do EqP para HPA leva em considerao apenas parmetros de toxicidade estabelecidos por ensaios com fases lquidas. A base terica principal desse modelo fundamentada na Teoria de narcose, que basicamente descreve o comportamento da toxicidade de substncias narcticas (incluindo os HPA), com base na ideia de que no organismo os lipdios so os principais stios alvos desses compostos (DiToro et al., 2000a,b). Com isso, o modelo utiliza uma base de dados de CL50 para 33 espcies aquticas expostas a mais de 156 compostos e demonstra que: (1) a toxicidade dependente da partio qumica; (2) que o comportamento das curvas de dose-resposta basicamente o mesmo entre as espcies (atravs do slope); (3) atravs da normalizao dos dados pelo Kow=1.0 (solubilidade da gua) possvel estabelecer as espcies sensveis bem como os nveis de carga corporal e (4) a toxicidade para estes compostos sempre aditiva (USEPA, 2003). Nos sedimentos, os HPA ocorrem em misturas, que por sua vez tambm dependem da partio qumica. Alm disso, existe tambm a limitao da solubilidade, que nos sedimentos limitada pelos nveis de carbono orgnico (USEPA, 2003). Considerando esses princpios, resumidamente, o clculo dos valores de referncia para qualidade de sedimento feito primeiramente atravs do clculo de referncia para um HPA isoladamente atravs da equao (6): COC,HPAi, FCVi= KOC..FCVi (6)

Onde da COC,HPAi, FCVi a concentrao critica (ou valor de referncia) de um HPA isoladamente, KOC o coeficiente de partio carbono orgnico:gua e FCV, que o valor de efeito crnico do HPA em questo, cujos procedimentos para obteno so apresentados em DiToro et al. (2000a,b). Por fim, o clculo do valor de qualidade de sedimentos para as misturas de HPA em unidades txicas (ESBTUFCV) feito pela seguinte equao (7), na qual feita a soma

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das razes das concentraes de cada HPA na mistura pelo valor crnico de referncia de cada uma: ESBTUFCV= COC,HPAi /COC,HPAi, FCVi (7)

Onde COC,HPAi a concentrao de um HPA especfico no sedimento normalizado pelo carbono orgnico. Com isso, o valor de referncia para qualidade de sedimento para misturas de HPA considerado de acordo com o valor da equao (7), se a somatria calculada para uma determinada amostra for 1,0 (ESBTUFCV 1,0) a concentrao das misturas de HPA nessa amostra considerada aceitvel para a proteo da vida aqutica e do contrrio( 1,0), os efeitos txicos so esperado.

1.3.

Critrios de qualidade de sedimentos obtidos por abordagens empricas

Os critrios de qualidade de sedimentos obtidos por abordagens empricas consistem basicamente na obteno de valores atravs de extensos bancos de dados de concentraes de contaminantes em sedimentos e a correspondncia dessas concentraes com efeitos biolgicos adversos. Pases como os Estados Unidos (USEPA, 1991), Canad (EC 2008), Austrlia (EA, 2002) e pases da Europa (OSPAR, 2008) tm desenvolvido critrios de qualidade de sedimentos baseados em abordagens empricas, porm os dois principais e que merecem maior destaque so os Estados Unidos e o Canad, que estabeleceram valores de qualidade baseados em bancos de dados de efeito biolgico para sedimento. 1.3.1. Valores de qualidade baseados em bancos de dados de efeito biolgicos para sedimento (BDEB). Desenvolvido por Long et al. (1995) junto ao NOAA (National Oceanic Atmospheric Administration), agncia federal americana, os valores foram originalmente propostos para nove metais trao, bifenilas policloradas totais

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(PCB) e treze HPA. Sobre o banco de dados, ele foi composto por dados disponveis em aproximadamente 350 publicaes cientficas e relatrios tcnicos, todos conduzidos nos Estados Unidos, toxicidade de sedimentos fortificados com contaminantes (spiked-sediments), bioensaios em laboratrio e em campo, conduzidos em amostras coletadas simultaneamente para as anlises qumicas e estudo de efeitos biolgicos, o que possibilitou a correspondncia dos efeitos com os nveis de contaminao avaliados (Long et al., 1995). Buscando uma maior abrangncia em termos de relevncia ecolgica, parmetros de efeito biolgicos em diferentes nveis de organizao foram considerados no BDEB, como alteraes na estrutura da comunidade bentnica (riqueza de espcies e abundncia); toxicidade significativa e/ou elevada em diferentes endpoints1; CE50 e/ou CL50 determinadas nos ensaios com sedimentos fortificados; distrbios histopatolgicos em peixes demersais e toxicidade prevista pelo modelo de EqP (Long & Morgan, 1990; Long et al. 1995). Sobre as atribuies das concentraes, elas foram basicamente classificadas como efeito e no efeito onde o efeito foi caracterizado por diferenas significativas e tambm por correlaes dos efeitos com as concentraes analisadas. Long & Morgan (1990) apresentam detalhadamente a compilao desses trabalhos, bem como a descrio dos parmetros de efeito biolgicos. Os principais critrios para incluso de dados no banco so: (1) metodologia bem descrita; (2) estudos sem problemas no ensaio de toxicidade (congelamento de amostra, validao de controles); (3) resultados que caracterizam gradientes de contaminao e (4) procedimentos analticos aceitveis (5) associao de concentraes ambintais de contaminantes com efeitos txicos. Feito isso, a partir dos nveis de contaminao a tabela foi organizada de forma ascendente para subseqente determinao dos valores ou limiares de efeito.
1

Endpoint valores derivados em testes de toxicidade que correspondem a medidas especificas feitas ao final do teste, como por exemplos, mortalidade, reproduo, crescimento (Adams & Rowland, 2002).

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O primeiro deles corresponde ao 10 percentil, definido como intervalo de menor efeito ou ERL (do ingls effects range-low) e o segundo corresponde ao 50 percentil, definido como intervalo de efeito mdio ou ERM (do ingls effects range-median). A metodologia de aplicao de percentil em dados ecotoxicolgicos permite a minimizao da influncia de anomalias e/ou outliers na obteno desses valores (Klapow & Lewis, 1979). Com isso, o principio dessa abordagem estabelecer diferentes nveis de qualidade com base nestes valores, caso a concentrao do contaminante se enquadre abaixo do limiar onde ocorrem os menores efeitos (ERL) ela aceitvel, e caso ela se enquadre acima do limiar onde os efeitos mdios ocorrem (ERM), ela no aceitvel (Fig 1).

Figura 1. Exemplo hipottico de um BDEB com os respectivos valores de ERL e ERM. J para o critrio canadense, Macdonald et al. (1996) questionaram a no utilizao de dados no associados aos nveis de contaminao, alegando que esses dados traduzem informaes importantes sobre a relao dos contaminantes com os efeitos biolgicos (biodisponibilidade, vias e formas de

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exposio) e adaptaram a metodologia descrita acima, considerando tambm esses resultados no BDEB. A partir disso, o primeiro nvel da faixa corresponde ao limiar de efeito ou TEL (do ingls threshold effect level), que a mdia geomtrica do 15 percentil dos dados categorizados como efeito associado e 50 percentil dos dados categorizados como no efeito associado. Da mesma forma, o segundo valor corresponde ao nvel de efeito provvel PEL (probable effect level), que a mdia geomtrica do 50 percentil dos dados categorizados como efeito associado e 85 percentil dos dados categorizados como no efeito associado. Com isso, as categorias de qualidade so determinadas por esses valores, onde a concentrao abaixo de TEL corresponde faixa na qual no so observados efeitos; enquanto que acima de PEL efeitos adversos freqentemente ocorrem, e entre esses dois valores, efeitos adversos ocasionalmente ocorrem ou h a possibilidade de ocorrncia (Fig 2).

Incidncia de efeitos txicos (%)

100 80 60 40
TEL PEL

limiar de efeito mnimo

possvel efeito

limiar de efeito provvel

20 0 0.01

0.1

10

100

1000

10000

Concentrao em mg/Kg

Figura 2 Curva hipottica de concentraes de contaminantes x incidncia de efeitos txicos (modificado de Macdonald et al., 1996).

98

1.4.

Valores de qualidade stio-especficos obtidos por anlise multivariada.

Enquanto as abordagens tericas apresentam limitaes em questes como partio geoqumica e medidas de biodisponibilidade, o uso das abordagens empricas necessita da compilao de extensos bancos de dados, e no caso de pases como o Brasil os estudos de sedimentos possuem objetivos e metodologias distintas, limitando a compilao de dados. Em funo disso, DelValls & Chapman (1998) desenvolveram uma abordagem para derivar VQS baseados em dados gerados por estudos integrados com amostras coletadas simultaneamente, como a trade da qualidade dos sedimentos, por exemplo, utilizando dados obtidos para o Golfo de Cdiz (Espanha) e para a Baa de So Francisco (EUA). Segundo os autores, as principais consideraes que formam a base dessa abordagem correspondem a: (1) que os compostos txicos tm uma influncia sobre os efeitos biolgicos medidos e que esta influncia controlada por fatores ambientais; (2) a princpio, os compostos analisados so os responsveis pelos efeitos adversos, mas, no entanto compostos no medidos tambm podem causar esses efeitos; (3) como os contaminantes ocorrem em misturas complexas, uma forma de sintetizar essas relaes atravs da anlise exploratria dos dados como, por exemplo, a anlise dos componentes principais (PCA). O fundamento da utilizao da PCA de que o uso de relaes lineares (correlaes, por exemplo) em estudos de qualidade ambiental em zonas costeiras, associa os nveis de contaminao a uma nica fonte, mas na realidade os nveis de contaminao provm de fontes mltiplas, e com isso as anlises multivariadas podem discriminar as influncias dos distintos vetores atravs de diferentes agrupamentos e distribuies espaciais (DelValls et al., 1998b). A partir disso os dados do Golfo de Cdiz foram organizados em uma matriz contendo as concentraes de 14 metais e alquilbenzenos sulfonados

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lineares (LAS), alm de carbono orgnico total (TOC) e 6 endpoints de diferentes bioensaios com sedimentos como parmetro de efeito biolgico, incluindo mortalidade de anfpodos, larvas de peixes e bivalves, soterramento de bivalves bentnicos e declnio de populao de rotferos, alm de parmetros de comunidade bentnica como riqueza e abundncia de espcies, % de poliquetos e diversidade. Para os dados da Baia de So Francisco a matriz foi composta por 9 metais, HPA de baixo e alto peso molecular, coprostanol, DDT e bifenilas policloradas (PCB) e TOC, 4 endpoints de bioensaios incluindo mortalidade de anfpodos, reproduo de coppodos, soterramento de bivalves bentnicos e desenvolvimento larval de bivalves, alm de parmetros de comunidade bentnica, incluindo riqueza, abundncia, dominncia, % de anfpodos, de moluscos e de poliquetos. Em seguida os dados foram submetidos anlise de PCA do tipo fatorial. Nessa anlise, atravs de associaes das distribuies espaciais dos dados, o conjunto de dados foi sintetizado em grupos de variveis que correspondem aos fatores, e que explicaram mais de 90% da variao dos dados originais da matriz original. Para cada fator, coeficientes de correlaes foram obtidos para cada caso (estao de coleta). Com isso, considerando que um coeficiente de correlao de 0,4 (positivo ou negativo) corresponde a uma aproximao de mais de 65% da correlao com a matriz original, esse valor foi ento utilizado para associar os efeitos biolgicos aos nveis de contaminao. Como nesse tipo de anlise um ndice de contribuio dos fatores gerado para cada estao, os chamados scores, esse ndice o parmetro principal para obteno dos valores de qualidade: quando o score do fator que apresentar correlaes entre contaminantes e efeitos biolgicos for menor que zero ou menor que os fatores que no apresentam tais correlaes, as maiores concentraes de contaminantes dessa estao representaram as concentraes no associadas a efeitos, ou seja, o limiar abaixo do qual os efeitos biolgicos no so esperados. De maneira semelhante, os limiares

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acima dos quais so esperados efeitos corresponderam s menores concentraes das estaes que apresentaram scores acima de 1 para os fatores que representaram contaminao e efeitos biolgicos associados. No caso da Espanha, Riba et al. (2004b) derivaram VQS stio especficos para portos da regio Atlntica da costa da Espanha utilizando o mtodo da PCA do tipo fatorial, e posteriormente Casado-Martnez et al. (2006) salientaram que embora a regulamentao para material dragado fosse feita desde 1994, a utilizao de abordagens ecotoxicolgicas no foi levada em considerao para a tomada de deciso e alm disso, os autores compararam o uso de diferentes VQS, no caso o Canadense (ERL e ERM), nveis de ao 1 e 2 da legislao espanhola (CEDEX 1994) e os valores stio especficos para sedimentos da costa Atlntica da Espanha obtidos por Riba et al. (2004b). Nesta comparao os autores mostraram a aplicabilidade dos valores stio especficos para classificao dos sedimentos, levando em considerao as limitaes do mtodo, tornando essa abordagem uma alternativa interessante ausncia de extensos bancos de dados para obteno dos VQS com base em uma anlise mais criteriosa.

1.5.

Valores de qualidade de sedimentos no Brasil: histrico das regulaes.

No Brasil, a questo da qualidade dos sedimentos no foi historicamente considerada como sendo de grande relevncia, de modo que os sedimentos, incluindo aqueles de reas porturias, vm recebendo grande quantidade e variedade de contaminantes. A partir dos estudos de Abessa (1996), Casarini et al. (1997) e, segundo Abessa (2002), da divulgao na mdia da ocorrncia de alta incidncia de peixes com alteraes morfolgicas e tumores na regio do Porto de Santos, no fim da dcada de 1990, essa questo comeou a ser considerada com mais ateno. Tal fato levou paralisao das dragagens do Porto de Santos em funo de disposio no controlada do material, por meio

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de uma ao civil publicada e perpetrada pelos Ministrios Pblicos Estadual e Federal, sendo retomada posteriormente em 2005 (Choueri, 2008). Os conflitos iniciados na esfera econmica e scio-ambiental geraram discusses importantes, que acabaram levando elaborao da Resoluo CONAMA 344/04 (Brasil, 2004), que tratava do gerenciamento de sedimentos dragados no pas e de protocolos para o licenciamento dessas atividades. De acordo com essa resoluo, aspectos geoqumicos deveriam ser levantados para a caracterizao preliminar dos sedimentos em questo, sendo exigida a anlise qumica de uma srie de substncias. Os resultados obtidos devem ser comparados com os VQS apresentados na resoluo, que correspondem a 2 valores limiares (Nveis 1 e 2, respectivamente), que indicam 3 categorias de contaminao para cada substncia analisada: (1) concentrao abaixo do Nvel 1 que indica boa qualidade em relao ao contaminante avaliado, com baixa probabilidade de efeitos adversos biota; (2) concentrao acima do Nvel 2 que indica grande probabilidade de efeitos adversos biota; e (3) concentrao entre os nveis 1 e 2 que indica possibilidade da contaminao causar efeitos adversos (Brasil, 2004). Porm, a simples comparao dos dados qumicos com valores orientadores, conforme exigido pela legislao, no suficiente para uma estimativa real dos efeitos biolgicos dos contaminantes, por isso mesmo tais valores tm carter apenas orientativo e no mandatrio na gesto de sedimentos. Alm disso, a principal limitao dessa legislao so os VQS, que correspondem aos valores aplicados por rgos ambientais canadenses e norte-americanos (ERL e ERM), e conforme j discutido, tais valores foram obtidos com base nas concentraes dos sedimentos dessas regies, que possuem condies ambientais distintas do litoral brasileiro, o que leva a necessidade da obteno dos VQS com base em estudos produzidos nacionalmente. Uma das conseqncias disso a falha da legislao em prever impactos relacionados com a toxicidade. Abessa et al. (2006) mostraram que para o Esturio de Santos, mais de 75% das amostras de sedimentos cujas

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concentraes de contaminantes estavam acima do nvel 1 foram txicas e sugeriram a necessidade de estudos complementares durante a fase de caracterizao dos sedimentos, o que reafirma uma ateno especial na aplicao desses valores para a costa brasileira, onde existe a particularidade regional na composio dos sedimentos das plataformas internas e externas. Lacerda & Marins (2005), por exemplo, apontam diferenas na composio dos sedimentos da plataforma do Nordeste e Sudeste do Brasil, havendo a dominncia de sedimentos ricos em material clstico na regio Sudeste em relao a Nordeste, a qual particularmente rica em carbonatos de clcio e sedimentos arenosos; sendo que diferenas como essas so importantes para a compreenso dos processos que atuam sobre a distribuio dos contaminantes nos sedimentos e sua relao com processos biolgicos de exposio e disparo de efeitos. Outro estudo importante relacionado aos VQS no Brasil foi realizado por Choueri et al. (2009a) que gerou valores sitoespecficos para o sistema Estuarino de Santos e So Vicente, Baa de Paranagu e Golfo de Cdiz (Espanha), atravs de anlises multivariadas de dados de concentraes de contaminantes e efeitos biolgicos (toxicidade e comunidade bentnica). Neste estudo, os VQS foram consideravelmente menores que os reportados na Resoluo CONAMA 344/04, o que mais uma vez remete a falha desses valores em prever os efeitos txicos. Recentemente foi publicada a Resoluo CONAMA 454/12 (Brasil, 2012) que substituiu a Resoluo 344/12. A resoluo apresenta importantes avanos no que diz respeito especificao de aspectos que at ento eram incipientes na antiga resoluo, como as exigncias para caracterizao do meio fsico, informaes sobre batimetria e georreferenciamento da rea e tambm a definio do volume a ser dragado. Alm disso, recomendaes dos mtodos de extrao e deteco a serem utilizados para caracterizao qumica, incluindo exigncias de limite deteco tambm so mencionados. aberta ainda a possibilidade de incluso de grupos de contaminantes no

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contemplados na resoluo, com os respectivos VQS a serem estabelecidos pelo rgo ambiental licenciador. Porm sobre a caracterizao do material dragado atravs dos VQS, a resoluo apresenta apenas a seguintes atualizaes: a elevao do nvel 1 do As (de 8,2 para 19 mg/Kg); elevao dos Nveis 1 e 2 para o Hg (de 0,15 a 0,71 para de 0,3 a 1,0 mg/kg); elevao do valor alerta para soma dos HPA (de 3000 para 4000 g/Kg) alm da incluso do Tributilestanho (TBT) na relao dos contaminantes em potencial. importante ressaltar que essas atualizaes contrariam as recomendaes para criao de valores nacionais feitas por Abessa et al. (2006) e Choueri et al. (2009a), e portanto a resoluo apresenta um carter mais permissivo quanto a eventuais riscos ecolgicos associados a esses nveis de contaminao. A partir desses valores, a caracterizao ecotoxicolgica dever ser feita apenas nas seguintes situaes: (1) quando a concentrao de HPA de alto peso molecular, As, Cd, Pb ou Hg for superior ao Nvel 1; (2) quando a concentrao de HPA de baixo peso molecular estiver entre os Nveis 1 e 2, desde que a soma das concentraes individuais de todos os HPA presentes na amostra seja maior que o valor orientador para a soma dos HPA; (3) a concentrao de qualquer contaminante for superior ao Nvel 2. Alm disso, o rgo ambiental pode requerer a caracterizao ecotoxicolgica em conjunto com a descrio qumica, se considerar necessrio. Embora a nova resoluo permita a incluso de diferentes linhas de evidncia para caracterizao ecotoxicolgica como os estudos histolgicos, ecolgicos e de biomarcadores (ver Chapman & Hollert, 2006), o critrio qumico-especfico ainda prevalece sobre os critrios ecolgicos nessa nova resoluo. E ainda, quanto aos efeitos txicos, eles s so considerados significativos quando a toxicidade afetar mais do que 50% dos organismos expostos durante os ensaios de toxicidade. Essa recomendao contraria a utilizao do teste de hiptese para caracterizao de efeitos txicos de sedimentos, metodologia que

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amplamente utilizada e recomendada inclusive pelas normas nacionais (Long et al., 1998; ABNT 2006, 2007). Em termos prticos isso pode significar uma flexibilizao do critrio, uma vez que as justificativas para recomendao no so claras e contraria o conhecimento tcnico-cientfico sobre a significncia dos dados ecotoxicolgicos. importante mencionar tambm que a tomada de decises privilegiando aspectos econmicos frente a recomendaes tcnico-cientficas preocupante. No Canad esse retrocesso tem sido caracterizado pelo desmonte das legislaes e reduo no oramento de verbas destinadas a centros de pesquisas e ONG, no sentido de atender (sob o pretexto de impulsionar) a expanso da explorao dos recursos naturais por corporaes multinacionais, colocando em risco os recursos hdricos e a biodiversidade do Pas, conforme alertado por Wells (2013). .Por fim, a resoluo apresenta recomendaes para realizao de estudos de bioacumulao considerando apenas como subsdios para aprofundamento do conhecimento sobre o material a ser dragado, e no como linha de evidncia, alm do monitoramento da rea de disposio, para casos de disposio ocenica dos sedimentos.

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2. Objetivos Considerando a necessidade do avano do conhecimento sobre os efeitos biolgicos associados exposio a sedimentos contaminados ao longo do litoral brasileiro, e no exclusivamente em reas porturias, o objetivo principal deste estudo apresentar valores de qualidade stioespecficos para amostras coletadas no Porto do Mucuripe de forma a gerar dados sobre a associao entre as concentraes ambientais de contaminantes e efeito txicos. Para atender a este objetivo, foram estabelecidos os seguintes objetivos especficos: Amostragem de sedimentos na regio do Porto do Mucuripe aps as operaes de dragagem, para avaliao das concentraes de contaminantes e toxicidade dos sedimentos; Obteno dos VQS atravs da anlise integrada das concentraes encontradas com os efeitos biolgicos (toxicidade) utilizando anlise multivariada, conforme item 1.4., a partir de dados obtidos em todas as campanhas de coletas apresentadas neste estudo: pr, durante e ps dragagem.

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3. Materiais e Mtodos 3.1. Coleta de sedimentos

Ao final das operaes de dragagem, foi realizada uma campanha para amostragem de sedimentos, em 22 de agosto de 2010, considerando 9 estaes correspondentes s estaes de M1 a M9 da campanha prdragagem (captulo 1). As amostras de sedimento foram coletadas com auxlio de um amostrador do tipo van Veen para realizao de testes de toxicidade, caracterizao sedimentolgica e anlise qumica dos contaminantes. A coleta foi realizada a bordo da embarcao SOLDADO I e os procedimentos de coleta e armazenamento das amostras so os mesmos descritos no Captulo 1 desta tese. 3.2. Anlises sedimentolgicas e qumicas dos sedimentos.

A determinao das fraes granulomtricas foi feita atravs do peneiramento mido das amostras secas (50g) em malha de 63 m para separao da frao fina (silte+argila). A estimativa dos teores de carbonato de clcio (CaCO3) foi feita seguindo o mtodo de digesto e gravimetria descrito por Gross (1971). J a determinao dos teores de matria orgnica (MO) foi feito atravs do mtodo de combusto e gravimetria (Luczak et al., 1997). Os resultados foram expressos em %. A concentrao de carbono orgnico total (TOC) das amostras foi obtida atravs do analisador de carbono orgnico total (TOC V CPH Shimadzu) acoplado com mdulo para amostras slidas (SSM 5000 Shimadzu). As anlises de nitrognio total (N) e fsforo total (P) foram feitas atravs do mtodo colorimtrico descrito por Grasshoff et al. (1999), quantificados em espectrofotometria. As anlises das concentraes de metais em sedimentos foram realizadas no Laboratrio de Biogeoqumica Costeira do LABOMAR, sob a coordenao da Prof. Dr. Rozane Valente Marins. Os teores de metais foram determinados na frao total das amostras secas atravs do mtodo de Digesto Assistida por Microondas EPA 3051A (USEPA, 1996). A leitura da concentrao dos metais Al, Fe, Cd, Cr, Cu, Ni, Pb e Zn nos extratos foi feita

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em um Espectrofotmetro de Absoro Atmica em Chama modelo com correo com lmpada de deutrio para anlise de Pb, Ni e Hg. Para validao do procedimento de extrao e leitura foram analisadas, em triplicatas, amostras do material de Referncia SRM 2704 (Buffalo River Sediment) e SRM-1646a (Estuarine sediments BRC 667). Anlises das concentraes hidrocarbonetos alifticos (AH), policclicos aromticos (HPA) e alquilbenzenos lineares (LAB) foram realizadas no Laboratrio de Qumica Orgnica Marinha do Instituto Oceanogrfico da Universidade de So Paulo (IOUSP), coordenado pela Prof. Dr. Mrcia Caruso Bcego. Nesta anlise, extratos das amostras de sedimento foram preparados em Soxhlet com uma mistura 50% diclorometano/n-hexano, seguindo a metodologia descrita em UNEP (1992). Os extratos foram ento fracionados por cromatografia em coluna de slica-gel e alumina. As concentraes de AH foram determinadas por cromatografia gasosa 6890 da Agilent Technologies com detector de ionizao de chama (GC-FID), enquanto as concentraes de LAB e HPA foram quantificadas em um cromatgrafo a gs Agilent 6890 acoplado a um espectrmetro de massa 5973N (GC/MS) no modo de monitoramento seletivo de ons (SIM). 3.3. Testes de toxicidade com sedimentos

Nos testes de toxicidade com sedimentos, foram empregadas duas formas de exposio: teste agudo de sedimento integral e teste crnico com interface sedimento-gua. O teste de toxicidade de agudo com sedimento integral empregado consistiu na utilizao do anfpodo escavador Tiburonella viscana como organismo-teste segundo a Norma tcnica NBR 15638 (ABNT, 2002), cujo procedimento foi descrito no capitulo 1 deste estudo. J o teste crnico empregado foi o de curta durao com as larvas do ourio-do-mar Lytechinus variegatus, conforme a Norma Tcnica NBR 15350 (ABNT, 2006) utilizando o sistema-teste proposto por Anderson et al. (2001) e adaptado por Cesar (2003) para realizao em pequenos volumes, conforme descrito no capitulo 1 deste estudo.

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Para anlise estatstica, os dados foram comparados com o sedimento controle empregando o teste tStudent. Antes da aplicao, os dados foram submetidos avaliao do tipo de distribuio (normalidade) pelo teste do Chiquadrado e, homogeneidade de varincias, pelo teste de Fisher. Para estas anlises, foi utilizado o software TOXSTAT - verso 3.5 (West & Gulley, 1996). As amostras diferentes significativamente do controle foram consideradas txicas (p<0,05) e as que no apresentaram diferena significativa foram consideradas no txicas. 3.4. Organizao dos dados e anlise multivariada para obteno dos VQS. Resultados das campanhas foram organizados um uma nica matriz de dados de acordo com a seguinte denominao: amostras de M1 a M10 (amostras coletadas em 08/2007), MD1 a MD3 (coletadas em 01/2011) e MD1 a MD3 (coletadas em 07/2011) e M1b a M9b (coletadas em 08/2011). A localizao das estaes apresentada na figura 3. Os dados fora organizados em uma matriz contendo a frao fina dos sedimentos, os teores de carbonatos, os nveis de COT, N e P, concentraes dos metais Al, Fe, Cd, Cr, Cu, Ni, Pb e Zn alm das concentraes de AH, HPA e LAB. Os dados expressos em % foram transformados atravs da funo arco-seno possibilitando a comparao com os dados contnuos e em seguida todos os dados da matriz foram normalizados pela funo log(x+1)10 visando reduzir diferenas de grandeza entre as variveis. Em seguida os dados foram submetidos anlise de componentes principais do tipo fatorial (PCA-AF). As anlises foram feitas atravs do programa STATISTICA 8.0 (StatSoft, 2007).

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Mucuripe
Oceano Atlantico

Brasil

Cear

Figura 3 Estaes de coleta de sedimentos para obteno dos VQS do Porto de Mucuripe.

Nesta anlise, o conjunto de dados foi sintetizado em grupos fatores, utilizando o mtodo de Anlise de Componentes Principais (PCA). Foram extrados os 3 primeiros fatores e que explicaram mais de 85 % da variao dos dados. Com esse procedimento, coeficientes de correlao das variveis com cada fator foram obtidos, o que possibilitou observar associaes entre as variveis. Em seguida, com o objetivo de simplificar a reduo das variveis em fatores foi aplicada a rotao do tipo varimax, que alterna as coordenadas no plano multidimensional. A partir desse procedimento foi feita a projeo das correlaes das variveis para cada estao em valores denominados scores que podem ser interpretados como contribuio de cada fator para a varincia dos dados.

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Para obteno dos VQS foi adotado o procedimento similar ao descrito por DelValls & Chapman (1998) e Choueri et al. (2009a), no qual foi adotado o nvel de corte de 0,38 nas correlaes das variveis com os fatores, para identificar associaes entre as concentraes dos contaminantes e efeitos biolgicos (Tabachnic & Fidell, 1996). Com isso, os fatores que representaram essas associaes e que tiveram um score negativo ou menor que os fatores que no apresentam tais associaes (correlao 0,38), as maiores concentraes dessa estao representaram o nvel 1, onde abaixo dele efeitos biolgicos no so esperados. De maneira semelhante, o nvel 2 so valores acima dos quais os efeitos so esperados, e corresponderam s menores concentraes que apresentaram scores acima de 1 para os fatores que representaram contaminao e efeitos biolgicos. 4. Resultados e Discusso Os resultados das anlises sedimentolgicas, qumicas e ecotoxicolgicas das amostras do Porto do Mucuripe para obteno dos VQS so apresentados na tabela 1. Nela possvel observar que para as amostras coletadas aps a dragagem, houve um aumento na quantidade de sedimentos finos de M1 a M8, provavelmente associada deposio do material particulado ressuspenso durante as operaes de dragagem (ou do overflow). A mesma distribuio pode ser observada para N e o P, detectados em nveis relativamente altos, comparados com aqueles detectados na campanha de 2007. Em relao aos metais, no houve uma variao significativa das concentraes de Al, Fe, Cd e Ni, enquanto que as concentraes de Cr e Zn detectadas foram menores. Por outro lado, houve um aumento das concentraes de Pb, AH, HPA e LAB. Os resultados dos testes de toxicidade de sedimento integral indicaram efeito txico agudo sobre a sobrevivncia dos anfpodos nas amostras de M1 a M6 e efeitos crnicos na interface sedimentogua sobre o desenvolvimento das larvas de ourio nas amostras de M1 a M8, indicando que apesar da reduo das concentraes de alguns metais, associados com a toxicidade no capitulo 1, a induo de efeitos txicos pela exposio as amostras persistiu.

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Tabela 1- Resultados das anlises sedimentolgicas, qumicas e toxicidade das amostras do Porto do Mucuripe para obteno dos VQS.
Estao M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10 MD1 MD2 MD3 MD1' MD2' MD3' M1b M2b M3b M4b M5b M6b M7b M8b M9b Finos (%) 24,03 7,86 22,74 2,42 15,56 16,74 5,45 0,59 0,08 0,00 62,16 19,08 10,02 63,51 44,40 13,36 90,18 68,89 78,67 88,18 95,36 73,02 56,86 45,83 1,86 CaCO3 (%) 18,28 30,26 25,05 34,96 15,72 26,60 22,19 9,41 5,74 8,58 25,29 5,45 18,44 17,61 7,64 13,56 23,22 19,33 22,38 13,36 31,92 19,60 21,14 14,05 9,79 COT (%) 0,94 1,43 0,96 1,40 0,44 1,11 0,85 0,16 0,18 0,22 0,49 0,07 0,06 0,69 0,04 0,06 1,91 1,38 0,47 0,93 1,53 0,16 0,57 0,27 0,04 N (%) NM NM NM NM NM NM NM NM NM NM 0,60 0,19 0,43 0,51 0,37 0,36 0,86 0,68 0,50 0,60 0,61 0,39 0,19 0,32 0,26 P (%) 0,23 0,25 0,42 0,40 0,48 0,35 0,27 0,11 0,09 0,10 2,76 2,08 4,01 2,50 3,52 3,60 2,50 2,98 2,19 2,68 2,81 2,31 2,70 3,30 2,54 Al (%) 2,90 2,42 2,49 3,13 0,87 3,36 1,70 0,30 0,16 0,20 0,96 0,24 0,25 0,96 0,06 0,08 2,03 1,89 1,94 1,89 2,09 0,83 1,02 0,66 0,08 Fe (%) 1,94 2,39 1,85 2,47 0,80 1,99 1,66 0,29 0,13 0,28 1,06 0,25 0,26 1,08 0,14 0,21 1,39 1,25 1,17 1,47 1,64 0,91 1,01 0,75 0,14 Cd (g/g) 0,90 0,85 1,41 0,64 <0,60 0,60 <0,60 <0,60 <0,60 <0,60 0,16 0,16 0,15 0,15 0,14 0,14 0,17 0,18 0,18 0,55 0,28 0,23 0,14 0,18 0,15 Cr (g/g) 38,00 38,10 32,32 50,13 13,45 41,48 26,89 5,23 3,33 5,16 25,94 15,51 13,43 2,51 2,00 2,00 13,96 11,73 13,22 13,55 4,31 <2,00 15,81 <2,00 <2,00 Cu (g/g) 13,82 15,46 11,20 16,76 3,71 12,13 9,77 0,49 0,40 1,01 13,64 1,41 1,56 11,11 2,03 2,18 20,44 16,86 7,66 12,10 9,91 5,54 7,42 6,64 3,18 Ni (g/g) 16,54 19,89 16,66 21,49 6,95 17,78 15,24 7,20 2,00 5,29 8,04 1,57 2,23 10,06 4,24 3,52 15,25 11,52 10,75 12,77 14,49 7,19 8,60 6,73 2,29 Pb (g/g) 2,59 6,69 3,58 2,60 <2,00 2,54 2,06 <2,00 <2,00 <2,00 21,99 15,93 19,44 22,92 13,89 22,43 21,37 65,89 13,21 17,04 20,53 23,28 24,51 10,54 8,42 Zn (g/g) 469,33 535,82 399,58 583,51 199,46 420,90 365,65 62,64 25,03 41,98 25,79 2,45 2,84 20,97 1,10 2,14 27,71 25,05 12,13 16,54 18,60 9,08 11,17 8,71 1,03 AH (g/g) 25,36 19,09 17,60 21,15 1,06 2,46 13,48 1,01 0,46 0,34 655,53 0,99 0,76 408,47 0,54 0,48 219,26 586,45 22,74 22,96 27,96 16,97 8,95 1,44 0,95 BPMHPA 17,96 41,57 15,70 34,01 3,51 9,03 5,90 <1,00 <1,00 <1,00 303,65 <1,00 <1,00 295,21 <1,00 <1,00 152,42 1592,83 23,33 27,32 69,64 7,56 5,38 10,75 <1,00 APMHPA 59,91 66,21 43,95 53,91 24,44 27,70 37,54 <1,00 <1,00 <1,00 856,78 2,96 <1,00 395,67 <1,00 <1,00 414,06 2450,01 38,81 73,22 82,42 39,59 24,59 25,15 <1,00 HPA (ng/g) 77,87 107,78 59,65 87,92 27,95 36,73 43,44 <1,00 <1,00 <1,00 1160,43 2,96 <1,00 690,88 <1,00 <1,00 566,48 4042,84 62,14 100,54 152,06 47,15 29,97 35,90 <1,00 LAB (ng/g) <0,85 <0,85 <0,85 5,84 <0,85 1,35 <0,85 <0,85 <0,85 <0,85 <0,85 <0,85 <0,85 91,62 <0,85 <0,85 42,32 110,90 <0,85 8,68 11,10 <0,85 3,87 <0,85 <0,85 SI (%) *66,67 *66,67 *43,33 *50,00 *40,00 *30,00 *26,67 26,67 16,67 6,67 *93,33 *56,67 36,67 *70,00 16,67 26,67 *56,67 *90,00 *53,33 *90,00 *53,33 *86,67 36,67 26,67 26,67 ISA (%) *78,25 *90,50 *92,00 *97,50 *75,75 *96,75 *82,25 23,50 8,00 8,50 *99,00 *63,25 *87,00 *100,00 *100,00 *100,00 *100,00 *100,00 *100,00 *100,00 *100,00 *100,00 *100,00 11,69 19,50

*=amostra txica (p<0,05).NM= no medido

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J para a obteno dos VQS stio-especficos, os resultados da anlise de PCA do tipo fatorial e as correlaes de Pearson das variveis com cada fator so apresentados na tabela 2. Os trs primeiros fatores explicam 87,06% da varincia total dos dados, onde cada um representa as seguintes associaes: (i) Fator 1 explicando 55,43% das varincias, representando atravs de correlaes positivas a deposio de matria orgnica, COT os metais Al, Fe, Cu e Ni, alm da distribuio dos AH, LAB e HPA (de alto e baixo peso molecular) e correlacionados a esses sedimentos, os testes de toxicidade de SI. (ii) Fator 2 explicando 24,46% das varincias e representa atravs de correlaes positivas a deposio de sedimentos finos, nutrientes (N e P) com o Pb e com a toxicidade aguda e crnica. (iii) Fator 3 explicando apenas 7,17% das varincias e representa atravs de correlaes positivas a distribuio de matria orgnica, CaCO3, COT, Al, Fe,Cd, Cr e Zn associados com a toxicidade aguda e crnica. A projeo dos fatores calculados para cada estao (scores) apresentada na Tabela 3. O Fator 1, que representa a associao da toxicidade com as concentrao de contaminantes, foi importante na distribuio dos dados da campanha de 2007 de M1 a M7 (maiores valores de scores), com contribuio tambm para as amostras coletadas em 2011 de M1b a M7b, sendo essas com contribuio maior dos fatores que representam altas concentraes de contaminantes como os metais no Fator 2 (de MD1 a MD3 e de M3b a M9b) e os contaminantes orgnicos no Fator 3 (MD1, M1b,M2b e M5b). A partir desses resultados foi possvel obter os VQS stio-especficos para o Porto do Mucuripe, apresentados na Tabela 4. Para o COT e nutrientes, a faixa de efeito no foi considerada, uma vez que as concentraes observadas podem ser associadas como co-ocorrncia com os contaminantes e, alm disso, as normas internacionais tambm no contemplam esses

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elementos nos respectivos critrios, apresentando apenas recomendaes de valores de referncia (Long et al., 1995; OSPAR, 2008). Para os metais o Fator 1 possibilitou obter a faixa de concentrao atravs dos resultados das amostras de M1 a M7. No caso dos contaminantes orgnicos, como o fator 3 foi maior que 1 em MD3, M1b e M2b e estas estaes apresentaram toxicidade nas duas campanhas, as concentraes de AH, HPA e LAB destas estaes foram importantes para o estabelecimento da faixa de efeito.

Tabela 2 - Resultado da anlise de PCA do tipo fatorial e correlaes de Pearson das variveis com cada fator. Correlaes em negrito Variveis Fator 1 Fator 2 Fator 3 finos 0,29 0,39 0,80 OM 0,21 0,61 0,66 CaCO3 0,39 0,14 0,77 COT -0,18 0,70 0,64 N 0,26 -0,25 0,90 P 0,06 -0,14 0,96 Al -0,08 0,54 0,80 Fe -0,03 0,53 0,83 Cd -0,03 -0,03 0,80 Cr 0,11 -0,26 0,79 Cu 0,24 0,71 0,59 Ni -0,16 0,77 0,52 Pb 0,30 -0,17 0,90 Zn 0,26 -0,67 0,68 AH 0,31 0,29 0,85 LAB 0,28 -0,08 0,82 BPM-HPA 0,20 0,30 0,91 APM-HPA 0,19 0,41 0,86 HPAs tot 0,21 0,43 0,86 SI 0,49 0,52 0,45 ISA 0,19 0,62 0,59 Varincia % 55,43 24,46 7,17 Varincia cumulativa % 55,43 79,89 87,06

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Tabela 3 Projees dos fatores (scores) calculados para cada estao de coleta. Estao Fator 1 Fator 2 Fator 3 Estao Fator 1 Fator 2 Fator 3 M1 -0,13 -0,71 1,38 MD1' 2,00 0,51 -0,91 M2 0,02 -0,66 1,53 MD2' -1,47 1,07 -0,72 M3 -0,55 -0,53 1,73 MD3' -1,43 1,12 -0,52 M4 0,31 -0,97 1,37 M1b 1,64 0,55 -0,05 M5 -0,22 -0,80 0,13 M2b 2,52 0,67 -0,66 M6 -0,44 -0,79 1,50 M3b -0,12 0,76 0,49 M7 0,21 -1,16 0,58 M4b 0,29 0,89 0,58 M8 -0,32 -1,45 -0,93 M5b 0,73 0,75 0,28 M9 -0,07 -1,79 -1,83 M6b -0,26 1,13 0,13 M10 -0,03 -2,16 -1,58 M7b -0,22 0,69 0,27 MD1 0,96 0,79 0,15 M8b 0,04 0,16 -0,68 MD2 -1,13 0,67 -0,63 M9b -0,79 0,23 -1,34 MD3 -1,54 1,01 -0,27 Tabela 4 Valores de qualidade de sedimentos stio-especficos (VQS) calculados para sedimentos do Porto do Mucuripe. efeito no esperado efeito provvel Varivel Nvel 1 Nvel 2 -1 Cd (gg ) 0,6 1,41 Cr (gg-1) 25,94 26,89 Cu (gg-1) 12,10 -1 Ni (gg ) 14,49 Pb (gg-1) 22,43 65,89 -1 Zn (gg ) 62,64 365,65 AH (gg-1) 25,36 219,26 -1 BPM-HPA (gg ) 5,84 42,32 APM-HPA (gg-1) 41,57 152,42 HPA (ngg-1) 66,21 395,67 -1 LAB (ngg ) 107,78 566,48

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Nesta etapa do estudo, os valores de qualidade de sedimentos (VQS) stio especficos foram obtidos para amostras do Porto do Mucuripe e estes valores determinam o intervalo de concentrao de efeitos (esperado e provvel) para os compostos em questo, baseados em efeitos txicos medidos em laboratrio. A tabela 5 apresenta uma compilao dos VQS aplicados para ambientes costeiros a partir das legislaes de diferentes pases como os EUA (Long et al., 1995) e Canad (Macdonald et al.,1996; EC, 2008), Espanha (CEDEX, 1994), UK, Irlanda, Alemanha, Blgica e Holanda (OSPAR, 2008) alm da China (Chapman et al., 1999a), Austrlia (EA, 2002) e Brasil (valores da nova resoluo Brasil, 2012). A tabela apresenta tambm os VQS stio-especficos obtidos para a Baa de So Francisco e Golfo de Cdiz (DelValls & Chapman, 1998), alm dos Esturios de Santos-So Vicente e Paranagu (Choueri et al., 2009a). Uma breve comparao dos valores permite observar uma variao nas faixas de concentrao. Boa parte dos VQS das legislaes internacionais (inclusive a brasileira) gera faixas similares aos valores americanos e canadenses como o caso da Austrlia, Irlanda e China. Por outro lado, as legislaes dos pases europeus (Espanha, UK, Alemanha e Blgica) apresentam intervalos maiores. Conforme mencionado neste texto, diferentes metodologias podem ser empregadas para obteno de VQS e a variao encontrada pode ser considerada um reflexo da utilizao de diferentes abordagens (MacDonald, 2000; Choueri et al., 2009a). Os valores americanos e canadenses (ERL/ERM e TEL /PEL) foram gerados a partir dos BDEB citados na seo 1.3. No Caso da Frana, dados geoqumicos gerados por amostras coletadas entre 1986-1990 foram organizados em distribuio de Gaussiana e os VQS gerados pelas medianas: 2 vezes a mediana para AL1 e 4 vezes a mediana para AL2 (OSPAR, 2008). De forma similar, o critrio Espanhol tambm leva em considerao os aspectos geoqumicos (DelValls et al., 2004; OSPAR, 2008). Para Alemanha, a obteno desses valores foi similar, onde dados de sedimentos contaminados coletados entre 1982 e 1992 e a media das concentraes dos metais foram

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multiplicadas por 1,5 e o 90 percentil para orgnicos, foram estabelecidos como valores de referncia, correspondendo ao AL1. O valor AL2 ento determinado multiplicando o AL1 por 5 para os metais e multiplicando por 3 para os orgnicos. J no Reino Unido (UK) e Irlanda para metais, os nveis de background foram usados para estabelecimento do AL1 e os limiares de AL2 validados atravs de ensaios Ecotoxicolgicos. J para os HPA, os valores estabelecidos foram arbitrados (OSPAR, 2008). Na Holanda, os valores de AL1 correspondem aos valores mximos de concentraes naturais dos sedimentos do Mar do Norte, enquanto que os valores de AL2 foram gerados atravs de ensaios ecotoxicolgicos e anlises qumicas. Quando a comparao feita entre os VQS e os VQS stio-especficos, as diferenas so ainda maiores, o que indica um carter mais permissivo das legislaes internacionais contrastando com os VQS stio-especficos que so mais restritivos, pois produzem limiares com valores menores ao integrar os efeitos biolgicos. Alm disso, conforme discutido acima, os VQS aplicados em legislaes em pases principalmente da Europa so gerados por anlises qumicas de sedimentos contaminados, o que contribui na produo dessas altas faixas. A comparao dos VQS stio-especficos obtidos para o Porto do Mucuripe apresenta aspectos importantes. O Primeiro deles a concordncia entre os valores obtidos para os metais Cd, Cr, Cu e Pb por Choueri et al. (2009a) para sedimentos do Sistema Estuarino de Santos - So Vicente e Paranagu. Porm, no caso dos metais Ni e Zn, os valores so similares aos apresentados na Resoluo CONAMA 454/12. No caso dos HPA, a faixa de efeito prxima a faixa obtida para Santos, onde as fontes de contaminao so similares (atividades nuticas, porturias e efluentes industriais).

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Tabela 5 - Compilao dos VQS aplicados em diferentes pases.

Local EUA Canad Brasil Valores guias de qualidade de sedimento Austrlia China Frana Espanha UK Irlanda Alemanha Blgica Holanda EUA Espanha Cdiz Santos Paranagu Mucuripe Limiar ERL ERM TEL PEL Nvel 1 Nvel 2 Nvel 1 Nvel 2 AL1 AL2 AL1 AL2 AL1 AL2 AL1 AL2 AL1 AL2 AL1 AL2 AL1 AL2 AL1 AL2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 Nvel 1 Nvel 2 Cd (gg-1) 1,2 9,6 0,68 42,8 1,2 7,2 1,5 10 1,5 9,6 1,2 2,4 1 5 0,4 2 0,7 4,2 2,5 12,5 2,5 7 0,8 4 0,51 0,96 0,65 1,2 0,75 0,60 1,41 Cr (gg-1) 81 370 52,3 160 81 370 80 370 80 370 90 180 200 1000 40 400 120 370 150 750 60 220 100 120 110 134 65,8 27,85 48,8 25,94 26,89 Cu (gg-1) 34 270 18,7 108 34 270 65 270 65 270 45 90 100 400 40 400 40 110 40 200 20 100 36 60 68 98 209 979 20,8 169 69 6,55 6,55 12,1 Pb (gg-1) 46,7 218 30,2 112 46,7 218 50 220 75 218 100 200 120 600 50 500 60 218 100 500 70 350 85 110 49 115 260 270 21,6 76 10,3 22,1 17,63 17,63 22,43 65,89 Ni (gg-1) 20,9 51,6 15,9 42,8 20,9 51,6 21 52 40 37 74 100 400 20 200 21 60 50 250 70 280 35 45 88 94 8,9 42,3 3,89 21,2 10,98 19,1 14,49 Zn (gg-1) 150 410 124 271 150 410 200 410 200 410 276 552 500 3000 130 800 160 410 350 1750 160 500 140 365 156 225 513 1310 138 360 37,9 110,4 26,95 41,33 62,64 365,65 HPA (ngg-1) 4022 44792 870 8040 4000 4000 45000 4022 44792 100000 4000 1000 3000 70000* 180000* 8000 97 100 163 950 20 30 107,78 566,48 autor Long et al. (1995) MacDonald et al. (1996) Brasil, (2012) EA (2002) Chapman et al. (1999) Ospar (2008) Ospar (2008) Ospar (2008) Ospar (2008) Ospar (2008) Ospar (2008) Ospar (2008) DelValls & Chapman (1998) DelValls & Chapman (1998) Choueri et al. (2009a) Choueri et al. (2009a) Choueri et al. (2009a) Este estudo

VQS stio-especficos.

AL1 = valor alerta 1, limiar efeito possvel; AL2 = valor alerta 2, limiar efeito provvel; V1 = VQS 1, limiar efeito possvel; V2 = VQS 2, limiar efeito provvel. *= valores normalizados pelos valores de COT.

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O objetivo da aplicao dos VQS a caracterizao dos sedimentos quanto ao seu nvel de contaminao e potencial txico. Considerando que os contaminantes ocorrem em misturas complexas, Fairey et al. (2001) propuseram o uso dos quocientes dos VQS, como mtodo para representar a ocorrncia dessas misturas com base nas violaes dos VQS, correlacionandoos com a ocorrncia de efeitos txicos. Esse mtodo consiste na normalizao das concentraes encontradas pelo respectivo valor limiar de efeito txico provvel (ERM, PEL, Nvel 2) para cada contaminante, sendo em seguida calculada a mdia desses valores gerando um ndice, o mVQS. Os autores observaram uma variao de 0,002 a 100, e que ndices acima de 1 apresentam toxicidade para 68% das amostras e quando o ndice esteve acima de 3,5 a toxicidade foi observada em 100% das amostras, o que indica uma relao de aumento do efeito txico associado ao aumento das concentraes. A partir desse ndice a classificao das amostras quanto ao nvel de contaminao proposta pelo mtodo a seguir: (i) (ii) Contaminao mnima: sedimentos no contaminados, com valores de mVQS entre 0 e 0.1; Contaminao Moderada: nveis de contaminao que podem ocasionalmente induzir efeitos txicos, com valores de mVQS entre 0.1 e 0.25; (iii) Forte contaminao: nveis de contaminao que provavelmente induzem efeitos txicos com valores de mVQS acima de 0,25. Ainda segundo os autores, a aplicao dessa abordagem feita assumindo as seguintes condies: (1) que a toxicidade se d por processos aditivos, no considerando sinergismo e antagonismo, embora reconhecendo que h evidencias desses processos no ambiente; (2) que todos os compostos tm mesmo mecanismo de toxicidade, pois so validados pelo mesmo endpoint, no sendo possvel a sua aplicao para prever bioacumulao; (3) casualidade, quanto natureza da contaminao (contaminante prioritrio) e (4) risco relativo de toxicidade, pois esse mtodo assume que locais com

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caractersticas ambientais distintas tenham a mesma probabilidade de apresentarem efeitos txicos. J em relao s limitaes do uso dessa abordagem, as questes principais so: (1) difcil estabelecer um nvel de corte, ou seja, encontrar uma concentrao correspondente toxicidade para 100% das amostras, ou at mesmo um valor a partir do qual a toxicidade se manifeste; (2) a utilizao dos mVQS deve ser acompanhada de outras linhas de evidncia e seu uso no deve ser feito isoladamente; (3) o uso limitado apenas para os contaminantes que apresentam VQS e (4) os mVQS no so considerados critrios de qualidade, e por isso, no so considerados em normativas ou protocolos para avaliao da qualidade de sedimentos (Long et al., 2006). A Figura 4 contm a projeo dos valores de mVQS calculados para as amostras do Porto do Mucuripe x toxicidade (% de mortalidade dos anfpodos), utilizando os valores contidos na resoluo CONAMA 454/12 e VQS stio especficos e aplicando o critrio de classificao das amostras segundo Fairey et al. (2001). A partir da comparao dos grficos possvel observar uma linearidade dos dados com a aplicao dos VQS stio-especficos, onde os baixos valores de mVQS correspondem as amostras no txicas, evidenciando o aumento do potencial txico com o aumento das concentraes alm da aplicabilidade dos VQS stio-especficos. J em relao aos valores contidos na Resoluo CONAMA 454/12 possvel observar a falha em prever a toxicidade, pois parte das amostras txicas foram agrupadas entre os nveis de contaminao de baixa a moderados. Long et al. (1998) compararam a eficincia dos VQS obtidos por bancos de dados cruzando os mVQS com os resultados dos teste de toxicidade de 1068 amostras e mostraram que os limiares possuem uma boa aplicabilidade. Posteriormente, Long et al. (2006) apontaram que, por relacionar o grau de complexidade das misturas qumicas, a aplicao dos mVQS oferece a vantagem de indicao de contaminantes em nveis preocupantes e magnitude das violaes, o que pode auxiliar na identificao de reas prioritrias para tomada de deciso, bem como em planos de remediao.

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CONAMA 454/12
contaminao

% de mortalidade de anfipodos

100 80 60 40 20

baixa

moderada

forte

M4b M6b MD1' MD2 M3b M5b

MD1

M2b

M1 M1b

M2

M4 M3 M6 M7

MD3M7b M5 M9b M8b MD3' M8 M9 MD2' M10

y= 78,98x + 38,51 R2= 0,0945

0 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8

mVQS

VQS stio-especficos
contaminao

% de mortalidade de anfipodos

100 80

baixa

moderada

forte

M6b

M4b

MD1' M1 M2 M1b M4 M3 M6 M7

60 40 20
M9b MD2'

MD2

M3b M5

M5b

MD3 MD3'M8 M8b M9 M10

M7b

0 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8

mVQS

am ostras txicas

y= 39,45x + 30,25 R2= 0,3856

Figura 4 Disperso das mVQS x % de mortalidade de anfpodos nas amostras coletadas no Porto o Mucuripe.

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5. Concluses Uma vez que os critrios qumico-especficos so amplamente utilizados, os principais mtodos para obteno de VQS foram apresentados, assim como as caractersticas de cada um. Enquanto as abordagens tericas possuem a limitao de considerar apenas o EqP como controlador da disponibilidade de contaminantes, as abordagens empricas so restritas a quantidade de dados disponveis na literatura para compor os BDEB. Em caso de pases que possuem grandes volumes de dados como os EUA e Canad, essa abordagem representa uma boa alternativa para caracterizar no apenas o material dragado, mas tambm sedimentos contaminados enquanto que a adoo de valores de outros pases pode no ser a soluo mais interessante, pois ela produz uma interpretao inacurada (e potencialmente incorreta) a respeito dos riscos relacionados a contaminao, o que pode levar uma tomada de deciso com base em informaes errneas. Para pases em desenvolvimento como o Brasil, a necessidade de obteno de valores baseados em estudos locais ainda mais prioritria. Nesta etapa do estudo, VQS stio-especficos foram obtidos para o Porto do Mucuripe atravs da associao das concentraes de contaminantes com resultados de testes de toxicidade atravs de anlises multivariadas. Os valores obtidos foram comparados com legislaes nacionais e internacionais e apresentaram nveis de efeito muito mais baixos, demonstrando um carter mais restritivo em relao aos padres internacionais. Por fim, os VQS auxiliam no avano do conhecimento das questes em toxicidade de sedimentos ao longo do litoral brasileiro, onde ainda existe uma grande carncia de estudos e diagnsticos da qualidade dos sedimentos no apenas das reas porturias. Com um maior conhecimento dos nveis de contaminao ao longo da costa, bem como os efeitos biolgicos relacionados a eles, possvel ento a gerao de um BDEB para o Brasil e consequentemente a obteno de valores locais e/ou stio-especficos, de forma subsidiar as atualizaes dos valores nacionais, tornando-os mais efetivos.

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Anexo 1 Lista de espcies identificadas nas estaes de coleta de sedimentos do Porto do Mucuripe
Txon Corbula caribea Abra aequalis Temnoconcha brasiliana Lucina pectinata Cerithiopsis latum Mellita quinquiesperforata Melinna cristata Aphelochaeta sp. Chaetozone sp. Timarete sp. Cossura candida Grubeulepis fimbriata Pareulepis multibranchiata EUNICIDAE Glycera lapidum Glycera sp1. Glyceridae sp1. Glycinde sp. Magelona papillicornis Magelona posterolongata Magelona sp. Ceratocephale sp. Laeonereis acuta Scoloplos sp1. PARAONIDAE Eulalia sp SABELLIDAE Sthenolepis grubei Polydora cf. ligni Polydora sp. Prionospio pinnata Prionospio cf. pygmaea Prionospio sp. Sternaspis capillata Nicolea sp. Terebellidae sp1. NEMATODA CHAETOGNATA PENAEIDAE DECAPODA Larvae CUMACEA Psammokalliapseudes sp. TANAIDACEA Ampelisca sp. GAMMARIDEA Jassa sp. Ericthonius sp. M1 M2 M3 0 0 0 0 0 0 18 0 12 0 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 18 0 0 0 0 6 6 0 0 0 0 0 0 0 0 67 0 24 0 0 0 0 6 0 24 0 0 18 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 48 48 6 0 0 0 0 0 12 0 6 0 0 0 0 6 0 0 6 12 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 6 0 6 0 0 0 0 0 0 0 M4 0 0 0 0 0 0 6 6 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 6 0 0 0 12 0 0 0 0 12 6 12 24 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 M5 M6 M7 0 0 0 0 0 0 48 12 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 12 6 0 48 0 0 6 6 6 0 0 0 6 0 0 0 12 0 48 0 0 0 0 0 0 0 6 0 6 0 24 12 55 30 0 0 6 0 0 0 6 0 36 6 0 6 0 0 12 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 0 12 0 0 0 0 12 6 0 42 0 6 0 0 0 0 18 0 0 0 0 0 12 0 0 0 0 0 6 0 0 6 0 0 6 0 0 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 24 0 0 85 0 0 M8 M9 M10 6 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 48 18 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 18 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 0 0 12 0 0 0 0 0 0 6 0 18 0 0 0 0 0 0 0 0

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Anexo 2 Hidrocarbonetos policclicos aromticos detectados nas estaes de coleta no Porto do Mucuripe.
Composto naftaleno metilnaftaleno bifenil etilnaftaleno dimetilnaftaleno acenaftileno acenafteno trimetilnaftaleno fluoreno dibenzotiofeno fenantreno antraceno metilfenantreno fluoranteno pireno metilfluoranteno reteno metilpireno benzo(c)fenantreno benzo(a)antraceno criseno metilcriseno benzo[b]fluoranteno benzo[j]fluoranteno benzo[k]fluoranteno benzo[e]pireno benzo[a]pireno perileno indeno[1,2,3-c,d]pireno dibenzo[a,h]antraceno benzo[b]criseno benzo[g,h,i]perileno coroneno M1 1.78 1.68 <1.30 <2.60 2.72 <3.70 <1.30 1.58 <1.30 <1.30 <2.60 <1.10 3.56 6.64 6.11 <LDM <1.30 1.88 <1.20 3.57 4.79 4.57 3.44 2.81 2.17 4.71 4.8 7.49 4.54 1.14 <1.10 5.86 2.03 M2 4.41 6.75 <1.30 <2.60 10.57 <3.70 <1.30 3.83 <1.30 <1.30 3.12 <1.10 6.99 5.9 6.62 3.75 <1.30 4.86 <1.20 4.16 5.03 8.82 3.12 1.97 1.9 4.38 5.47 3.7 3.39 1.35 <1.10 5.64 2.05 M3 1.75 <1.30 <1.30 <2.60 <2.60 <3.70 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 2.9 <1.10 3.08 7.97 5.98 2.49 <1.30 1.55 <1.20 3.07 4.34 2.79 2.59 1.68 1.43 3.2 3.6 4.24 3.32 <1.00 <1.10 3.67 <1.20 M4 4.18 3.93 <1.30 <2.60 6.87 <3.70 <1.30 3.2 <1.30 <1.30 3.41 <1.10 4.42 8 6.36 2.9 <1.30 2.25 <1.20 3.2 4.84 4.26 3.02 2.04 1.8 4.01 4.11 6.01 4.26 <1.00 <1.10 4.85 <1.20 M5 <1.60 <1.30 <1.30 <2.60 <2.60 <3.70 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <2.60 <1.10 <2.20 3.51 2.85 1.32 <1.30 <1.30 <1.20 2.14 2.65 1.48 1.99 1.35 <1.30 2.14 2.45 1.31 2.23 <1.00 <1.10 2.53 <1.20 M6 2.2 <1.30 <1.30 <2.60 <2.60 <3.70 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <2.60 <1.10 2.68 4.15 3.3 1.72 <1.30 <1.30 <1.20 1.73 2.95 2.76 2.09 <1.30 <1.30 2.31 2.54 3.88 2.12 <1.00 <1.10 2.3 <1.20 M7 <1.60 <1.30 <1.30 <2.60 <2.60 <3.70 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <2.60 <1.10 3.1 2.8 2.44 1.69 <1.30 2.23 <1.20 1.27 1.98 2.01 1.43 <1.30 <1.30 1.64 1.89 17.55 1.61 <1.00 <1.10 1.8 <1.20 M8 <1.60 <1.30 <1.30 <2.60 <2.60 <3.70 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <2.60 <1.10 <2.20 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.20 <1.20 <1.20 <1.20 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.10 <1.20 <1.00 <1.00 <1.10 <1.20 <1.20 M9 <1.60 <1.30 <1.30 <2.60 <2.60 <3.70 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <2.60 <1.10 <2.20 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.20 <1.20 <1.20 <1.20 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.10 <1.20 <1.00 <1.00 <1.10 <1.20 <1.20 M10 <1.60 <1.30 <1.30 <2.60 <2.60 <3.70 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <2.60 <1.10 <2.20 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.20 <1.20 <1.20 <1.20 <1.30 <1.30 <1.30 <1.30 <1.10 <1.20 <1.00 <1.00 <1.10 <1.20 <1.20 M1B 8.67 10.11 1.39 <2,60 13.26 <3,70 1.32 13.57 2.19 5.56 16.04 3.89 31.3 36.74 34.76 18.99 8.38 25.27 2.95 19.97 34.73 45.57 37.15 15.05 15 32.53 32.15 25.05 30.48 9.79 5.87 25.2 3.55 M2B 24.67 31.35 3.26 5.58 51.2 5.78 16.27 49.17 26.6 34.52 461.11 90.07 172.34 603.39 383.19 122.63 17.52 105.05 23.53 209.05 288.34 176.21 211.77 97.93 85.6 173.71 193.38 57.7 139.06 45.5 30.05 98.5 8.81 M3B 2.21 2.84 <1,30 <2,60 4.95 <3,70 <1,30 2.2 <1,30 <1,30 2.98 <1,10 4.34 3.81 3.25 1.86 <1,30 1.78 <1,20 1.72 3.36 4.6 2.81 <1,30 <1,30 2.61 2.63 9.36 2.49 <1,00 <1,10 2.34 <1,20 M4B 1.94 1.99 <1,30 <2,60 3.43 <3,70 <1,30 2.47 <1,30 <1,30 2.73 <1,10 5.08 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