Universidade Federal de Pelotas CDTec - Graduao em Biotecnologia Disciplina de Biologia Celular

Mitocndria e Cloroplasto
Priscila M. M. de Leon
Mdica Veterinria, Msc Doutoranda em Biotecnologia

Maio, 2011

Origem e evoluo de Mitocndrias e Cloroplastos

Teoria da Endossimbiose
teoria formulada por Lynn Margulis da Universidade de

Massachusetts em 1981;

Lynn Margulis

Mitocndrias e Cloroplastos so organelas supostamente derivadas de bactrias primitivas

que foram englobadas por clulas eucarioticas estabelecendo assim uma relao de Endossimbiose (interao biolgica mutualmente benfica) clula ofertando proteo e nutrientes & microrganismo favorecendo maior rendimento e aproveitamento energtico atravs do processo de respirao celular

Origem e evoluo de Mitocndrias e Cloroplastos

Fundamentao da Teoria da Endossimbiose:

1. Existncia de material gentico prprio - caracterstico de organismos ancestrais pelo DNA circular; 2. Presena de RNA ribossmico estruturalmente diferenciado - com menor teor proteico e menor tamanho dos ribossomos em relao aos da clula hospedeira; 3. Existncia de duas membranas - sendo a interna do microrganismo englobado e a externa do organismo da clula hospedeira;

Mitocndria

Mitocndrias
Conceito: so organelas complexas que desempenham uma srie de funes essenciais nas clulas eucariticas
Onde maior parte do ATP celular produzido; As mitocndrias contm seu prprio DNA e RNA possuindo um sistema completo de transcrio e traduo; A sobrevivncia das clulas depende da integridade das mitocndrias;

Clula Vegetal

Mitocndrias: caractersticas fundamentais

so organelas grandes, visveis ao microscpio ptico; esto presentes na maioria dos eucariontes (exceto num grupo de protistas chamado Archezoa) O seu nmero varia entre as clulas - sendo proporcional atividade metablica (500 a 10.000) Possuem caractersticas morfolgicas reconhecveis, apesar de exibir variabilidade morfolgica Ocupam aproximadamente 15% a 25% do volume do citoplasma de uma clula de mamfero So organelas que mudam de forma e posio constantemente; So mais prevalentes em cls. Musculares (ATP contrao muscular) Localizadas prximas aos pontos contrateis no msc. Cardaco, Ocupam a pea intermediria dos espermatozides - flagelo motor (ATPmovimentos espermticos)

Mitocndrias: microscopia eletrnica

Mitocndrias: localizao celular

Mitocndrias: Estrutura
Membrana Externa Membrana Interna Cristas Espao Intermembrnico Matriz Ribossomos Grnulos DNA Partculas sintetizadoras de ATP

Mitocndrias: Estrutura

Mitocndrias: Estrutura
1. Membranas Mitocondriais
Externa e Interna possuem propriedades diferentes

Externa:
membrana fosfolipdica semelhante membrana plasmtica; composta 50% por lipdios e 50% protenas; Possuem protenas de transporte: Porinas, que so canais permeveis a molculas menores de 5.000 dltons (ATP, NAD e coenzima A);

Interna:
100 diferentes polipeptdeos, possui 20% de lipdeos e 80% de protenas; desprovida de colesterol e rica em fosfolipdeos; Se dobra formando vilosidades e ondulaes Cristas; Altamente impermevel (ons e pequenas molculas); Permevel piruvato e cidos graxos; Protenas transportadoras envolvidas na reteno ou liberao de ons; Fundamental na atividade bioenergtica da mitocndria devido a sntese de ATP (Cadeia de Transporte de Eltrons e ATP-sintetase);

Mitocndrias: Estrutura
2. Cristas:
Tem finalidade de aumentar a rea de superfcie da membrana interna Quanto maior o aporte de energia pela clula maior so estas ondulaes; Exemplo: O nmero de Cristas em uma clula muscular cardaca trs vezes maior que em uma clula heptica;

3. Espao Intermembrana
Espao entre as membranas Externa e Interna

Possui vrias enzimas que utilizam o ATP proveniente da matriz para fosforilar outros nucleotdeos;

Membrana Mitocondrial Interna

Mitocndrias: Estrutura
4. Matriz Mitocondrial
Contm protenas, ribossomos (menores que os encontrados no citosol) e DNA circular (tpico de bactrias); Possui enzimas necessrias para a Oxidao do Piruvato e cidos Graxos, no Ciclo do cido Ctrico; DNA codifica para 37 genes utilizados na sntese proteica mitocondrial:
13 polipeptdios mitocondriais 2 RNAs ribossomais 22 tRNAs

* DNA mitocondrial tem elevado ndice de mutaes, 10 vezes maior que o DNA nuclear; * Somente o DNA mitocondrial da me herdado;

Mitocndrias: Funes
1. Produo de Energia
Atravs da dupla membrana fosfolipdica formado um gradiente eletroqumico de prtons e produo de ATP

Fosforilao Oxidativa

2. Unidades independentes no interior das clulas

DNAmt e ribossomos para a sntese de RNA e protenas mitocondriais

3. Sobrevivncia celular
Mitocndria participa do processo de Morte Celular Programada - Apoptose

Funo Mitocondrial: Fosforilao Oxidativa

Conceito: Fosforilao Oxidativa uma via metablica que utiliza energia liberada pela oxidao de nutrientes na produo de adenosina trifosfato (ATP)
O processo refere-se fosforilao do ADP em ATP, utilizando para isso a energia libertada nas reaes de oxidao-reduo (NADH e FADH2); Dependendo do transporte de eltrons na membrana interna mitocondrial Cadeia Transportadora de Eltrons; Principal fonte de ATP: enquanto que a Gliclise produz 2 ATPs a Fosforilao Oxidativa produz 30 ATPs/glicose oxidada.
Fosforilao Oxidativa = Cadeia Transportadora de Eltrons + ATP-sintetase

Ciclo do cido Ctrico ou Ciclo de Krebs

O ciclo executado na matriz mitocondrial como parte do metabolismo aerbio. Fonte combustvel: Piruvato (acares) e cidos Graxos (gorduras) Estas molculas so transportadas pela membrana mitocondrial interna; Na matriz mitocondrial so convertidas em acetil-CoA; O Ciclo do cido Ctrico gera eltrons de alta energia transportados por NADH e FADH2 Ciclo de Krebs fornece eltrons para a Fosforilao Oxidativa

Ciclo de Krebs:
Gliclise: ocorre no citoplasma celular Ciclo de Krebs: ocorre na matriz mitocondrial Fosforilao Oxidativa: membrana interna mitocondrial

Cadeia Transportadora de Eltrons

Ocorre na Membrana Interna Mitocondrial, tambm chamada de Cadeia Respiratria; NADH e FADH2 doam seus eltrons de alta energia para a cadeia transportadora de eltrons, sendo oxidadas em NAD+ e FAD; Os e- so passados rapidamente pela cadeia at o O2 para formar H2O; A transferncia de eltrons libera energia que utilizada para bombear os prtons (H+) atravs da membrana interna; Gerando um gradiente eletroqumico de prtons que promove a sntese de ATP (a partir de ADP e fosfato inorgnico);

Fosforilao Oxidativa:

Cadeia Transportadora de Eltrons

Formada por mais de 40 protenas Complexos Enzimticos Respiratrios: so stios do bombeamento de prtons atravs da membrana medida que os eltrons so transferidos por ela.
I. Complexo NADH-desidrogenase: aceptora de eltrons de NADH, catalisando a primeira reao II. Complexo do Citocromo b-c1: os eltrons perdem energia a medida que evoluem na cadeia; III. Complexo Citocromo-Oxidase: eltrons so combinados com molcula de O2 para formar H2O; * Carreadores de eltrons mveis transportam os eltrons entre os complexos enzimticos respiratrios.

Ubiquinona: tambm chamada de Coenzima Q10, componente da cadeia transportadora de eltrons, livremente mvel na bicamada lipdica, transfere um H+ por par de eltrons que transportar; Citocromo: uma protena solvel associada a membrana mitocondrial interna essencial na cadeia transportadora de eltrons. transfere um H+ para cada eltron que transportar;

O bombeamento de prtons gera um gradiente de pH atravs da membrana interna mitocondrial (pH=7,5) Membrana Mitocondrial Interna na face interna negativa e a face externa positiva como resultado do fluxo de sada de H+; * O gradiente de pH e o potencial de membrana agem juntos para criar um elevado gradiente eletroqumico de prtons, tornando favorvel o fluxo de H+ de volta para a matriz mitocondrial Fora Prton-Motriz

ATP-sintetase
Enzima que se encontra embebida na membrana mitocondrial interna que responsvel pela sntese de ATP; ATP-sintetase permite que os prtons possam fluir de volta atravs da membrana, a favor do gradiente eletroqumico;

* A medida que os prtons passam pela enzima est favorecida a reao de ADP + Pi para produzir ATP;

Fosforilao Oxidativa
Fosforilao Oxidativa: pois envolve o consumo de O2 e adio de grupo fosfato em ADP; Acoplamento Quimiosmtico: cls aproveitam energia da transferncia de eltrons para a sntese de ATP

Cadeia Transportadora de Eltrons:

Sntese de ATP:

Mitocndria - Reproduo
Antes que a clulas se divida, todos os seus componentes so duplicados, incluindo as mitocndrias. A reproduo das mitocndrias ocorre por fisso binria, onde acontece um aumento de tamanho da organela preexistente para a fisso. Nem todas as mitocndrias existentes na clula sofrem fisso, e para compensar isso, algumas se dividem repetidas vezes. A transcrio e replicao do DNA mitocondrial e a sntese proteica ocorrem na matriz das mitocndrias, porm as maiorias das protenas que medeiam esses processos so codificadas no genoma nucleares e importadas para dentro da organela. Apesar das mitocndrias produzirem suas protenas, a maioria provm do citosol, onde so sintetizadas por ribossomos citoslicos.

Mitocndria - Reproduo

Fisso Binria mitocondrial

Reproduo das mitocndrias por Fisso Binria DNA circular mitocondrial

Mitocndria - Apotose
Apoptose: conhecida como "morte celular programada, um tipo de "autodestruio celular" que ocorre de forma ordenada e demanda energia, relacionada com a manuteno da homeostase e com a regulao fisiolgica. Mitocndria x Apoptose: mitocndria o principal mediador na ativao da via intrnseca da apoptose; atravs da permeabilizao mitocondrial e liberao de molculas pr-apoptticas (Smac/DIABLO e Citocromo c). * A homeostasia mantida pelo controle da quantidade de protenas antiapoptticas e pr-apoptticas. A expresso de Bcl-2 (antiapopttico) capaz de estabilizar o potencial de membrana da mitocndria (inibe a permeabilizao da membrana externa da mitocndria). Estmulos, como dano ao DNA, levam ao aumento na expresso das protenas pr-apoptticas, como Bax que promove a apoptose atravs da interao com a mitocndria (permeabilizao da membrana mitocondrial e sada de Smac/DIABLO e Citocromo c);

Mitocndria - Apotose
Durante a apoptose, as IAP (Inhibitor of Apoptosis Protein) so removidas por protena liberada da mitocndria : Smac/DIABLO; Aps dano mitocondrial, a Smac/DIABLO e citocromo c so liberados do espao intermembrana para o citoplasma,;

Citocromo c liga-se APAF-1 e ativa diretamente a caspase-9; Smac/DIABLO remove as IAP de sua ligao inibitria com as caspases;

Mitocndria - Apotose

Cloroplasto

Cloroplastos
Conceito: so as maiores organelas das clulas vegetais, algas verdes e cianobactrias (organismos fotossintetizadores);
O Cloroplasto a organela onde se realiza a Fotossntese; Cloroplastos possuem a Clorofila, pigmento responsvel pela sua cor verde, que captura a luz; Todas as partes verdes de um vegetal possuem cloroplastos folhas so o principal local de fotossntese; Herana Citoplasmtica Materna;

Cloroplastos: caractersticas fundamentais

Composio: 50% de protenas, 35% de lipdeos, 5% de clorofila, gua e carotenides; possuem RNA, DNA e ribossomos, podendo assim sintetizar protenas e multiplicar-se; Variam em tamanho e forma entre as diferentes clulas; Os cloroplastos realizam fotossntese durante as horas diurnas; clulas que realizam fotossntese contm cerca de 40 a 200 cloroplastos, que se movimentam em funo da intensidade de luz; Cloroplastos assemelham-se a mitocndrias, porm so maiores. No entanto, no h cadeia de transporte de eltrons na membrana interna dos cloroplastos;

Cloroplastos: Estrutura
Membrana Externa Membrana Interna Tilacides Lmen Clorofila Grana ou Granum Lamela Estroma DNA circular

Cloroplastos: Estrutura

Cloroplastos: Estrutura
1. Membranas dos Cloroplastos
Externa:
Membrana lipoproteica; Altamente permevel; contm Porinas, canais permeveis a molculas inferiores a 13.000 dltons;

Interna:
Menos permevel (impermevel a ons e metablitos); Possui protenas de membrana embebidas; Possui protena transportadora do Fosfato inorgnico (Pi); Circunda o espeo interno determinado como Estroma; No possui cadeia transportadora de eltrons e no possui cristas;

* Envelope do Cloroplasto: espao entre as membranas externa e interna;

Cloroplastos: Estrutura
2. Estroma:
Correspondente a matriz mitocondrial; Possui enzimas metablicas, gros de amido, ribossomos e DNA circular;

3. Tilacide:
sacos chatos em forma de disco; Os Tilacide so envoltos por uma terceira membrana, Membrana do Tilacide; Tilacides so arranjados em forma de pilhas, que so Grana ou Granum; O espao interno de cada tilacide conectado, Lamelas;

Cloroplastos: Estrutura
4. Membrana do Tilacide: contm todos os sistemas geradores de energia
Sistemas captadores de luz (Fotossistemas) Cadeias Fotossintticas Transportadoras de Eltrons Ribulose (Fixao dos Carbonos) ATP-sintetase;

Fotossistemas: Complexo Protenas-Clorofila ligados na membrana do Tilacide (Fotossistema I e Fotossistema II); * 3 membranas nos cloroplastos: Membrana Externa; Membrana Interna; Membrana do Tilacide; * 3 compartimentos internos nos cloroplastos: Espao Intermembranas (envelope do cloroplasto); Estroma; Espao do Tilacide (lmen);

Cloroplastos: Estrutura
5. DNA: DNA circular, com caractersticas muito semelhantes com das mitocndrias e das bactrias. O DNA em maior quantidade e mais complexo que em mitocndria. Existem 30 a 200 cpias de DNA por organela contendo aproximadamente 120 genes. Genes codificam: 20 protenas ribossmicas, 30 protenas que funcionam na fotossntese e algumas subunidades de RNA polimerase (protenas envolvidas na expresso gnica); Mas mesmo sintetizando suas prprias protenas, cerca de 90% das protenas dos cloroplastos so codificadas pelos genes nucleares que so importadas do citosol para a organela;

Funo dos Cloroplastos: Fotossntese

* Cloroplastos capturam a energia da luz solar e a utilizam para fixar carbono;
Conceito: Fotossntese um processo fisioqumico realizado pelos vegetais clorofilados. Estes seres sintetizam dixido de carbono e gua, obtendo glicose, celulose e amido atravs de energia luminosa. * A fotossntese ocorre em duas etapas separadas.

Fotossntese
Estgio I: Reaes na Luz
Produo de energia pelas reaes fotossintticas de transferncia de eltrons Reaes Luminosas; Ocorrem inteiramente dentro da membrana do tilacide; dependente da luz; A energia da luz solar capturada e transientemente armazenada em ligaes de alta energia da ATP e da molcula carreadora ativada NADPH * Energia da luz solar energiza um eltron da clorofila, capacitando o eltron a mover-se pela cadeia transportadora de eltrons da membrana do tilacide; * Durante o transporte de eltrons , o H+ bombeado pela membrana tilacide, o gradiente eletroqumico de prtons promove a sntese de ATP no estroma; * Os eltrons de alta energia so movidos para o NADP+, convertendo-o em NADPH;

Fotossntese
Luz do sol absorvida pelas molculas de clorola; Luz: forma de radiao eletromagntica, unidade: ftons; Quando a luz solar absorvida por uma molcula do pigmento verde clorofila, os eltrons da clorofila interagem com os ftons da luz e so excitados a um nvel mais alto de energia; As molculas excitadas de clorola direcionam a energia a um centro de reao; Nas membranas tilacides vegetais, as clorofilas capazes de absorver luz esto em complexos multiproteicos: Fotossistemas; Fotossistemas possuem: um Complexo Antena (captura a energia luminosa) e Centro de Reao (converte energia luminosa em energia qumica);

Fotossistemas:
Antena (complexos antena) coleta energia de eltrons que foram excitados pela luz e direciona para clorofila no centro de reao; Centro de reao produz eltron de alta energia, que transferido para a cadeia transportadora de eltrons na membrana tilacide, via Quinona;

Fotossntese
Estgio II: Reaes no Escuro
Reaes de fixao do carbono Ciclo de Fixao do Carbono; Rubisco: enzima que faz a fixao de carbono nos cloroplastos, 50% das protenas do cloroplasto; Estas reaes correm no estroma do cloroplasto e continuam no citosol; Independente de luz ATP e NADPH produzidos pelas reaes fotossintticas de transferncia de eltrons (estgio I) servem como fonte de energia e fora redutora, promovendo a converso de CO2 em carboidratos (Sacarose); Sacarose transportada para outros tecidos como fonte de molculas orgnicas e energia para o crescimento;

Fases da Fotossntese
Estgio 1: gua oxidada e o oxignio liberado nas reaes fotossintticas de transferncia de eltrons que produz ATP e NADPH; Estgio 2: dixido de carbono assimilado para produzir acares e outras molculas orgnicas nas reaes de fixao do carbono. Inicia no estroma do cloroplasto e segue no citosol;

Cadeia Transportadora de Eltrons

gerar ATP e produzir molcula carreadora avada NADPH necessrio a Cadeia transportadora de eltrons (semelhante a mitocndria); 2 ftons precisam ser absorvidos no Fotossistema II e 2 ftons absorvidos pelo Fotossistema I para gerar um molcula NADPH; Carreadores mveis: Plastoquinona, Plastocianina e Ferredoxina; Fotofosforilao: a cada 3 H+ que retornam produzido 1 ATP (biossntese de carboidratos);

 Nos vegetais os cloroplastos e mitocndrias colaboram para suprir

as clulas com metablitos e ATP;

ATP e NADPH so produzidos durante reaes luminosas da fotossntese; ATP e NADPH so direcionadas para o Ciclo de Fixao do Carbono, produzindo acares; Acares so armazenados no cloroplasto na forma de Amido; Acares entram na produo de energia que termina na produo de ATP pela mitocndria;