Tcnica de Inoculao e Identificao de

Bactrias





Discentes:

Danilo Oliveira

Juciene Bomfim



Docente:
Amanda Teixeira








Ilhus, BA

Setembro, 2014

Universidade Estadual de Santa Cruz UESC
Departamento de Cincias Agrrias e Ambientais-DCAA
Curso de Medicina Veterinria
Disciplina: Microbiologia Veterinria


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Sumrio


INTRODUO ...................................................................................... 03
OBJETIVO ............................................................................................. 03
OBJETIVO GERAL ................................................................................ 03
OBJETIVO ESPECFICO ...................................................................... 03
MATERIAIS E MTODOS ..................................................................... 04
MATERIAIS ........................................................................................ 04
REAGENTES ...................................................................................... 04
MTODOS .......................................................................................... 04
RESULTADOS ...................................................................................... 05
DISCUSSO ......................................................................................... 05
CONCLUSO...........................................................................................07
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ..................................................... 07















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INTRODUO
Para a tcnica de inoculao de bactria ser eficiente, antes preciso ter bons
meios de cultura para o crescimento destas, que consiste em meios ricos em
nutrientes como carbono, nitrognio, sais minerais, gua e outros. Estes meios
tambm podem ser slidos, semi-slidos e lquidos. A inoculao das bactrias
nessas culturas exige cuidados com a contaminao. Flambar alas, tubos e
fazer os procedimentos prximos a chama do bico de Bunsen ajudam a evitar a
perda das culturas por contaminao com outras bactrias. Todo esse processo
ir acarretar em boas amostras de bactrias que permitir a identificao por
formato, tamanho, colorao, turbidez entre outros (Soares et al., 1987). Nesta
aula prtica que foi dividida em duas etapas, a primeira inoculao e a segunda
identificao, mostrou os vrios meios onde possvel semear bactrias e a
partir dos resultados visualizados, chegar a uma identificao destas. Para isso
foi necessrio conhecer sobre cada meio de cultura, e qual efetivo no
crescimento de determinada bactria.



OBJETIVO
OBJETIVO GERAL

Inocular e identificar bactrias.


OBJETIVO ESPECFICO

Aprender a utilizar as principais tcnicas de semeadura de bactrias em
vrios meios.
Identificar tipos de bactrias pelas caractersticas que elas produzem
nos meios.





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MATERIAL

Ala de platina;
Estante para tubos;
Papel filme;
Bico de Bunsen;
Estufa;

REAGENTES

Placas de Petri com meios: TSA, EMB e XLD;
Tubos com meios: TSB, TSI e CVB;
Eppendorfs com bactrias 1, 2 e 3;

MTODOS
Bactria 1: flambou-se a ala de platina no bico de Bunsen e mergulhou no
eppendorf, depois foi feito estrias em um canto da placa de XLD e flambou-se a
ala novamente e puxou outros riscos em outra direo na placa, seguindo por
mais duas direes e terminando com riscos no meio. Depois flambou-se uma
Ala de platina e esfregou no eppendorf e aps ter flambado o tubo com TSI,
introduziu-se a agulha no centro da cultura at o meio, retirando a agulha a
ala foi passada sobre a superfcie da cultura.
Bactrias 2 e 3: Os mtodos de inoculao dessas bactrias nas culturas foram
iguais. Flambou-se a ala de platina e mergulhou no eppendorf da bactria
dois, depois como no procedimento com a placa de XLD, foram feitas estrias
na superfcie da placa de EMB do mesmo modo, flambando-se a ala depois
de cada estria. E por fim, com a ala de platina flambada, esfregou no
eppendorf com a bactria dois e colocou no tubo com CVB, flambou-se a ala
novamente e passou no eppendorf e esfregou no tubo com CVB, fechando o
tubo logo em seguida. Todos esses passos foram feitos com a bactria trs na

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placa de TSA e no tubo com TSB. Por fim, levaram-se todas as placas e tubos
inoculados para o crescimento em estufa bacteriolgica a 37 C por 24 horas.

RESULTADOS
Resultados encontrados nos meios de cultura inoculados com as bactrias 1, 2
e 3.
Bactria 1: Meio XLD: Crescimento: sim; Caracterstica: colnias pequenas;
Colorao: colnias vermelhas com centro preto; Meio que estava a bactria
mudou de cor: no.
Meio TSI: Crescimento: sim; Caracterstica: preto; Colorao: base amarela e
pice vermelho; Meio que estava a bactria mudou de cor: sim.
Bactria 2: Meio EMB: Crescimento: sim; Caracterstica: colnias pequenas;
Colorao: colnias verde metlicas; Meio que estava a bactria mudou de
cor: no.
Meio CVB: Crescimento: sim; Caracterstica: turvo com produo de gs;
Colorao: verde; Meio que estava a bactria mudou de cor: sim.
Bactria 3: Meio TSB: Crescimento: sim; Caracterstica: turvo; Colorao: no;
Meio que estava a bactria mudou de cor: no.
Meio TSA: Crescimento: sim; Caracterstica: apresentava diversos tipos de
colnias; Colorao: amarela; Meio que estava a bactria mudou de cor: no.


DISCUSSO
Sobre a bactria 1 e seus resultados obtidos, foi possvel determinar atravs de
pesquisa que se trata da bactria Salmonella, e que ocorreu o enegrecimento
no tubo de TSI principalmente na sua zona intermdiaria devido ao fato da
bactria em estudo ser capaz de transformar sulfeto de hidrognio (H
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S), que
se conjuga com um composto de ferro existente no meio, dando origem ao
sulfeto de ferro, um sal preto que por ser insolvel, precipita. A maioria das
estirpes de Salmonella iro produzir colnias cor de vermelho com um centro
preto neste meio.
A bactria 2 pelas caractersticas apresentadas e pelo que foi pesquisado,
demonstrou ser a bactria Escherichia Coli. As colnias de Escherichia coli
apresentam um reflexo verde metalizado caracterstico em meio EMB, devido

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rpida fermentao da lactose. Em meio CVB o extrato de levedura e duas
peptonas fornecem os nutrientes; a lactose e a sacarose, juntamente com o
vermelho de fenol, fornecem um sistema de diferenciao que exclui os
fermentadores da lactose ou sacarose como a E. Coli que tem colorao verde-
clara neste meio, enquanto que as Salmonellas no produzem cido a partir
destes acares.
O eppendorf 3, continha as duas bactrias anteriores. E o mesmo serviu para
inocular os meios de enriquecimento, penas para vocs visualizarem o
crescimento. E sem as provas bioquimicas no tem como indentificar um tipo
de bactria nestes dois meios (TSA e TSB).



Imagem 1. Meios de cultura (XLD, TSA e EMB).














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Imagem 2. Meios de cultura (TSB, CVB e TSI)




CONCLUSO
Os meios de cultura so excelentes para a semeadura das bactrias que tem o
seu crescimento acelerado com os nutrientes presentes nos meios. Esse
rpido crescimento permite a identificao de bactrias que apresentam
caractersticas em cada meio que inoculada, mas para isso ela deve ser
cultivada em meios especficos, para cada caracterstica apresentada como
colorao, formato dentre outros. Todos os procedimentos desta prtica foram
realizados e observados de maneira satisfatria. No ocorrendo contaminao
por outras bactrias.




REFERENCIA BIBLIOGRFICA

BLACK, Jacquelyn G. Microbiologia: fundamentos e perspectivas. 4. ed. Rio
de Janeiro: Guanabara Koogan, c2002. 829 p.

SOARES, J.; CASIMIRO, A & AGUIAR, L. Colorao de Gram. Microbiologia
Bsica. Fortaleza: EUFC, 1987. 174p.


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BD Brilliant Green Agar Disponvel em:<
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=9059 >. Acesso em: 17 de set. 2014.

AGAR TRIPTONA DE SOJA (TSA) Disponvel em:<
http://www.kasvi.com.br/pdf/8433f8657bc4450afe85042c57a46ad5_arquivo.pdf
>. Acesso em: 17 de set. 2014.

CALDO TRIPTONA DE SOJA (TSB) Disponvel em:<
http://www.kasvi.com.br/pdf/8433f8657bc4450afe85042c57a46ad5_arquivo.pdf
>. Acesso em: 17 de set. 2014.