UESC Universidade Estadual de santa Cruz

Departamento de Cincias Agrrias e Ambientais-DCAA

Curso de Medicina Veterinria
Disciplina: Microbiologia Veterinria






TCNICA DE COLORAO DE GRAM



















Ilhus, Ba
22/08/2014

DISCENTES
Danilo Oliveira
Luanna Nery

MESTRANDA
Amanda Teixeira

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Sumrio


Introduo ......................................................................................................... 3
Objetivo ............................................................................................................. 4
Objetivo Geral .................................................................................................... 4
Objetivo Especfico ............................................................................................. 4
Materiais e Mtodos ......................................................................................... 3
Materiais ............................................................................................................. 3
Reagentes .......................................................................................................... 3
Mtodos ............................................................................................................. 4
Resultados e Discusses ................................................................................ 4
Concluso ......................................................................................................... 5
Referncias ....................................................................................................... 5















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INTRODUO
A colorao de Gram foi desenvolvida pelo mdico dinamarqus Hans
Christian Gram em 1884, ao corar cortes histolgicos com violeta de gencina,
atravs do mtodo de EHRLICH. Ele fez essa descoberta quando estava
testando novos mtodos de colorao de matrias de autpsia e bipsia. Ele
notou que com determinados mtodos, algumas bactrias se coravam de forma
diferente que os tecidos ao redor, e provavelmente a tcnica de colorao
mais utilizada at hoje. Neste mtodo os microrganismos respondem de formas
diferentes, os que retm o pigmento do cristal violeta (gram positivos), e os que
no retm o pigmento do cristal violeta (gram negativos), (SOARES et al.,
1987).
Est tcnica tem uma grande importncia clnica, uma vez que muitas das
bactrias associadas s infeces so prontamente observadas e
caracterizadas.
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OBJETIVO
OBJETIVO GERAL
Aplicar a tcnica de colorao de Gram em lminas com bactrias para
identificao de bactrias Gram positivas e Gram negativas.

OBJETIVO ESPECFICO
Aprender a utilizar a colorao de Gram.
Reconhecer bactrias Gram positivas e Gram negativas atravs da
visualizao em microscpio de luz.


MATERIAIS E MTODOS
Papel toalha;
Piseta com gua destilada;
Bico de Bunsen;
Swab estril;
Ala de platina;
Placa com colnia de bactrias;
Lminas;
Cronmetro;
REAGENTES:
Soluo de NaCl 0,85%;
lcool absoluto;
Fucsina;
Lugol;
Cristal violeta;

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MTODOS
O procedimento foi iniciado separando duas lminas e mergulhando-as em
lcool absoluto para retirar possveis sujidades e desengordura-las, logo aps,
foi pipetado uma gota de gua destilada sobre uma das lminas. Depois,
usando o bico de Bunsen e uma ala de platina que foi esterilizada ao fogo,
tomou-se a colnia de bactrias e retirou-se uma pequena amostra que foi
esfregada na lmina com gua destilada.
Na segunda lmina, foi retirada uma amostra da saliva que foi coletada com um
swab estril que antes foi mergulhado em soluo de NaCl a 0.85% e depois
de ter colhido a amostra de saliva, ele foi esfregado sobre a lmina. As
mesmas foram deixadas sobre a bancada para secarem a temperatura
ambiente. Para a fixao das bactrias na lmina, foi passada trs vezes sobre
o fogo e ento se continuou com o procedimento.
Para colorao, primeiro foi usado cristal violeta, onde foi colocado sobre toda
a superfcie das duas lminas, e com o cronmetro foi contado um minuto e
depois desse tempo as lminas foram lavadas com gua destilada.
Na segunda etapa da colorao, usou-se o lugol que foi passado sobre as
lminas e deixado por trs minutos e aps ter passado esses tempo, lavou-se
as lminas com gua destilada. Em seguida foi adicionado lcool sobre as
lminas e deixado por 20 segundos e aps isso, foram lavadas com gua
destilada.
Em ultima etapa usou-se a Fucsina sobre as duas lminas deixando sobre elas
por dois minutos, e depois desse tempo as lminas foram lavadas com gua
destilada. E foram colocadas verticalmente sobre o papel toalha para secarem
e serem observadas em microscpio.



RESULTADOS E DISCUSSO
Na lmina com amostra da saliva foi possvel observar alguns cocos e bacilos,
sendo Gram positivas por estarem com uma colorao roxa, o que o
indicativo que houve a desidratao da parede celular, e na lmina com
bactrias da placa, foram observados cocos e alguns artefatos.
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CONCLUSO
Todas as partes do procedimento que foram mostradas pela orientadora foram
feitas com sucesso, desde ao modo de pegar a ala de platina e a placa de
bactrias at a colorao. Apesar de todas as etapas terem sido feitas
corretamente, no se obteve bons esfregaos para a observao em
microscpio.



BIBLIOGRAFIA
BLACK, Jacquelyn G. Microbiologia: fundamentos e perspectivas. 4. ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, c2002. 829 p.
SOARES, J.; CASIMIRO, A & AGUIAR, L. Colorao de Gram. Microbiologia
Bsica. Fortaleza: EUFC, 1987. 174p.
DEPARTAMENTO DE BIOMEDICINA. Colorao Diferencial Gram. Disponvel
em: <http://www.icb.ufmg.br/mic/index.php?secao=material&material=19>.
Acesso em: 15 de ago. 2014.