Qumica Analtica Instrumental

3 Mdulo: Cromatografia.

Mtodos Cromatogrficos:

Baseados em propriedades fsicas cromatogrficas propriedades mistas.
- separao: interaes fsico-qumicas
-identificao/quantificao: propriedades pticas ou eltricas

Cromatografia um mtodo de separao, identificao e quantificao de seus componentes.
- a separao depende dos componentes da mistura com a fase mvel e com a fase
estacionria. por influncia de diferentes foras intermoleculares, incluindo inica, dipolar,
apolar, e especficos efeitos de afinidade e solubilidade.
- a identificao se d mediante das interaes de padres com a fase estacionria.
-a quantificao feita tambm por comparaes de concentraes de padres conhecidas,
usando a curva analtica.
-no tem titulao cromatogrfica.
-entre tempo e resoluo: ficamos com a resoluo sempre.


Classificao das tcnicas cromatogrficas:
- de acordo com o sistema cromatogrfico:
Em coluna:
o Cromatografia lquida
o Cromatografia gasosa
Planar:
o Cromatografia em camada delgada
o Cromatografia em papel
- de acordo com a fase mvel:
Utilizao de gs
Utilizao de lquido
- de acordo com a fase estacionria:
Liquida
Slida
Quimicamente ligadas
- de acordo com o modo de separao:
Adsoro
Partio
Troca inica
Afinidade



- para uma mistura, a simples troca de fase estacionria pode ser suficiente para alterar a
ordem de eluio dos componentes da mistura.

-Princpio bsico: a separao das misturas por diferenas nas interaes dos componentes
com a fase estacionria e uma fase mvel.


Cromatografia em camada delgada:
- uma anlise qualitativa.
- por Rf = S mancha / S solvente
- fase estacionria pode ser slica, alumina, celulose ou poliamida.
- analisa por comparao de Rf tabelado, comparao com padro eludo em conjunto,
extrao e aplicao de mtodos instrumentais.
-quando h incertezas, deve-se eluir a amostra em outros solventes.


Cromatografia de anlise:
-fase mvel a soluo-branco.
-os componentes que esto no meio da coluna eluem mais rpido do que aqueles que esto na
periferia implica o formato do grfico.
- do cromatograma tira-se 3 informaes importantes:
Tempo de reteno do 0 ao pico.
rea do pico quantidade de matria da substncia, e no concentrao.
Qualidade de separao uma boa resoluo aquela em que os picos esto bem
separados no menor tempo possvel. 1,5.
- importante termos uma boa resoluo, seletividade e eficincia.
- a anlise quantitativa baseada na rea do pico do sinal analtico.
-utilizando padro interno, montamos curva analtica e adio de padro.
Padro interno: utiliza-se relao de rea analito/rea padro. O uso do padro
interno melhora o sinal analtico, pois a razo das reas ser sempre a mesma j que
erro do volume ocasiona erro de medida de matria.
- 2 grandes problemas: tempo e injeo da amostra.




Cromatografia gasosa:
Para uma amostra ser separada por CG, ela tem de dissolver-se no gs mvel os
constituintes devem ser volteis!
- Necessrio que a amostra tenha p. Ebulio de at 300C e seja termicamente estvel.
-fator crucial: TEMPERATURA!!!


Esquema de aparelhagem de CG.

Fase mvel:
o Deve ser inerte no interagir com a amostra, nem com a fase estacionria e
nem com superfcie (exemplo: nenhum oxidante, como gua e oxignio, pois
so impurezas).
o Apenas ao mecnica carrega amostra na coluna.
o Fluxo altera separao, que pode aumentar ou diminuir o tempo.
o Compatvel com o detector.
o Deve ser pura!
Amostra:
o Voltil e termicamente estvel
o No pode degradar na coluna
o Alterar modo de injeo pode variar a quantidade de matria injetada
(sempre em microlitro).
o Grande volume diminui eficincia de separao
o Pequeno volume prejudica preciso e deteco.
o Quanto menor o volume menor o tempo, maior a resoluo, menor a
seletividade.
Dispositivos/ injetores:
o Devem promover injeo instantnea de amostra na coluna.
o A temperatura controlada para que a amostra vaporize-se imediatamente,
mas sem decompor! temp. em 50 acima do p. ebulio do componente
menos voltil.
Fase estacionria:
o Lquida.
o Em coluna capilar maior superfcie de contato.
o Maior volume melhora interao, mas aumenta o tempo.
Detectores:
o Examina continuamente o material eludo, gerando sinal grfico. Cada
substncia analisada gera um pico pode haver superposies de pico caso
haja impureza na mistura ou a resoluo no seja boa.
o Tem que ter temperatura maior que a temperatura da coluna, para que a
amostra continue gasosa e saia da coluna sem voltar.
o Podem ser:
-universais geram sinal para qualquer substncia eluda.
-seletivos detectam apenas substncias com determinada caracterstica
fsico-qumica.
-especficos detectam substncias que possuam caractersticas do elemento
ou grupo funcional em suas estruturas.
o Demanda gs de arraste especfico.
o Tipos:
- de condutividade trmica: depende da vazo do gs de arraste. No
destrutivo.
-de ionizao em chama: eluente na coluna misturado com gs hidrognio e
gs oxignio, posteriormente queimado. Estvel e bem seletivo. Degrada
amostra.
-de captura de eltrons: resposta seletiva. Pouco estvel e necessita de
temperatura rigidamente controlada.
-Parmetros que afetam a eficincia cromatogrfica em CG:
Eficincia cromatogrfica:
Aumento de separao no menor tempo, com resoluo 1,5.
Amostra: (voltil e termicamente estvel)
o Injeo instantnea.
o Grande volume diminui eficincia de separao
o Pequeno volume diminui tempo e aumenta eficincia de separao, mas
pode comprometer sensibilidade.
Fase mvel: (pura e inerte)
Baixo fluxo aumenta eficincia de separao, pois aumenta pratos tericos
aumenta tempo.
Coluna: (inerte)
o Muito grande aumenta eficincia de separao, mas aumenta o tempo.
o Grande dimetro diminui a eficincia de separao.
o Uso da coluna capilar aumenta eficincia de separao, pois aumenta o
contato/interao entre amostra e fase estacionria.
o Empacotada usada exclusivamente na cromatografia lquida! na gasosa,
prejudica a resoluo.
Fase estacionria:
o Aumento do volume aumenta eficincia de separao, mas aumenta o
tempo.
o Aumento da viscosidade diminui eficincia da separao.


- feita programao linear de temperatura a temperatura do forno pode ser variada
linearmente durante a separao melhora a resoluo
- a temperatura o fator crucial da separao!
o Separao feita por ponto de ebulio! temperatura da coluna tem que ser maior
que o ponto de ebulio da amostra, e menor que o ponto de ebulio da fase
estacionria.
o Quanto maior a temperatura diminui a resoluo. Pois o aumento da temperatura
aumenta a energia cintica, o que diminui as interaes entre a coluna e a amostra
(amostra sai rpido demais).
o O ideal a programao.

- quanto maior o nmero de pratos tericos (equilbrio entre amostra e fase estacionria)
maior a eficincia aumenta interao, aumenta separao.
-alm da interao com a fase estacionria, o tempo que um analito demora a percorrer a
coluna depende da sua presso de vapor quanto maior a temperatura na coluna, maior a
presso de vapor, maior a velocidade, menor tempo e menor reteno.


Cromatografia lquida:

- para amostras cujos componentes sejam solveis na fase mvel
-fator crucial: FASE ESTACIONRIA !!!!
- VANTAGENS:
Grande variedade de propriedades das fases estacionrias e detectores
Boa resoluo e seletividade
Usa coluna empacotada pequena e mesmo assim d boas resolues.
Comprimento pequeno, mas as interaes lquido/slido ou lquido/lquido so mais
favorveis que as interaes gs/slido da cromatografia gasosa.


-Componentes
Fase mvel:
o lquida. No inerte!! Interage com a amostra, dissolvendo-a.
o Pura.
o No deve dissolver e nem decompor a fase estacionria.
o Baixa viscosidade e compatvel com detector.
o Polaridade adequada para separao.
o Impulsionada pela bomba
o Fase mvel + amostra desgaseificadas com ultra-som + vcuo.
o Quanto maior o fluxo pior a eficincia de separao.
Injetor: localizado na ala de amostragem, com volume definido.
Fase estacionria:
o Interage com os solutos para separ-los.
o Tem que ter polaridade diferente da fase mvel. (fase mvel tem que ter a
mesma polaridade que a amostra).
o Fase reversa: polaridade da amostra = polaridade da fase mvel, e ambas
diferentes da polaridade da fase estacionria.
o OBS: analito tem que ter mais afinidade pela fase estacionria do que pela fase
mvel
Amostra:
o Tudo que no voltil em temperatura ambiente
o Tem que estar solubilizada na fase mvel.
Detectores:
o ndice de refrao
o Absorbncia
o Fluorescncia
o Condutividade
o Espectrometria de massa
o Entre outros ( menos turbidimetria e nefelmetria, pois a amostra deve ser
lmpida, sem suspenses).