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CENTRO UNIVERSITRIO ESTCIO FIC

AULA PRTICA 1:
NOES DE BIOSSEGURANA E MATERIAIS DE LABORATRIO





DILA VASCOCELOS CAVALCANTE
ALBERT CAQUE DE OLIVEIRA
MARLIA MARQUES GOMES
JULIANA LIMA DE FREITAS







FORTALEZA
Maro 2014
INTRODUO

Para o uso correto das aulas prticas de laboratrio de extrema importncia o
conhecimento sobre a biossegurana e os materiais utilizados que so as vidrarias.
A biossegurana o conjunto de medidas tcnicas, administrativas,
educacionais, mdicas e psicolgicas, empregadas para prevenir acidentes em
ambientes biotecnolgicos. Est centrada na preveno de acidentes em ambientes
ocupacionais. A palavra biossegurana, tambm aparece em ambientes onde a moderna
biotecnologia no est presente, como indstrias, hospitais, laboratrios de sade
pblica, laboratrios de anlises clnicas, hemocentros, universidades, etc., no sentido
da preveno dos riscos gerados pelos agentes qumicos, fsicos e ergonmicos,
envolvidos em processos onde o risco biolgico se faz presente ou no. J as vidrarias
por serem muitas vezes expostos a reagentes qumicos esses instrumentos necessitam
ser compostos por materiais inertes, para que no reajam com as substancia sem que
entram em contanto, por isso so feitos na maioria das vezes por vidro, cristal ou
temperados que so matrias inertes e de baixa porosidade. Por serem as principais
ferramentas da maioria dos laboratrios de suma importncia o conhecimento sobre
suas funes e as particularidades de cada vidraria, conhecimento esse que tornara o
aluno apto ao trabalho em laboratrio.


METODOLOGIA

A aula prtica de Microbiologia por motivo de fora maior no pode ser
realizada no laboratrio; sendo realizada na sala de aula onde houve aula expositiva em
slides sobre noes de biossegurana e materiais de laboratrio. A aula teve como
principal objetivo a apresentao dos equipamentos e tcnicas de segurana utilizadas
em laboratrio para que os alunos pudessem participar das aulas prticas.

Noes de Biossegurana

A biossegurana o conjunto de aes voltadas para a preveno, proteo do
trabalhador, minimizao de riscos inerentes s atividades de pesquisa, produo,
ensino, desenvolvimento tecnolgico e prestao de servios, visando sade do
homem, dos animais, a preservao do meio ambiente e a qualidade dos resultados"
(Teixeira & Valle, 1996).
Riscos

Existem 3 tipos de risco que esto inerentes aos laboratrios de estudo,
pesquisa ou analise, os riscos: biolgicos, qumicos e fsicos.
Os riscos biolgicos esto relacionados ao contato com bactrias, fungos,
parasitos, vrus, entre outros. Os riscos fsicos, quanto s diversas formas de energia a
que o individuo possa estar exposto tais como: rudo, vibraes, presses anormais,
temperaturas extremas, radiaes ionizantes, radiaes no ionizantes, ultra-som,
materiais cortantes e ponteagudos, etc. Os riscos qumicos se referem s substncias,
compostas ou produtos que possam penetrar no organismo pela via respiratria, nas
formas de poeiras, nvoas, neblinas, gases ou vapores, ou que, pela natureza da
atividade de exposio, possam ter contato ou ser absorvido pelo organismo atravs da
pele ou por ingesto. Estas substncias podem ser:
Corrosivas: causam destruio de tecidos humanos
Txicas: causam danos biolgicos aps sua inalao, ingesto ou contato com a
pele.
Cancergenas: causam tumores malignos
Explosivas: substncias reativas e instveis que sofrem alteraes qumicas
violentas
Ignificveis: substncias que podem queimar (inflamveis).


Equipamentos de Proteo Individual EPIs

EPIs so empregados para proteger o pessoal da rea de sade do contato com
agentes infecciosos, txicos ou corrosivos, calor excessivo, fogo e outros perigos. A
roupa e o equipamento servem tambm para evitar a contaminao do material em
experimento ou em produo. So exemplos:
Luvas: so usadas como barreira de proteo prevenindo contra contaminao
das mos ao manipular material contaminado, reduzindo a probabilidade de que
microrganismos presentes nas mos sejam transmitidos durante procedimentos.
O uso de luvas no substitui a necessidade da lavagem das mos porque elas
podem ter pequenos orifcios inaparentes ou danificar-se durante o uso, podendo
contaminar as mos quando removidas.

Jalecos: so usados para fornecer uma barreira de proteo e reduzir a
oportunidade de transmisso de microrganismos. Previnem a contaminao das
roupas do pessoal, protegendo a pele da exposio a sangue e fluidos corpreos,
salpicos e derramamentos de material infectado.


Outros equipamentos: culos de Proteo e Protetor Facial (protege contra
salpicos, borrifos, gotas, impacto). Mscara (tecido, fibra sinttica descartvel,
com filtro hepa, filtros para gases, p, etc.). Avental impermevel. Uniforme de
algodo, composto de cala e blusa. Luvas de borracha, couro, algodo e
descartveis. Dispositivos de pipetagem (borracha peras, pipetadores
automticos, etc.).


Equipamentos de Proteo Coletiva EPCs

EPCs so equipamentos que possibilitam a proteo do pessoal do laboratrio,
do meio ambiente e da pesquisa desenvolvida. So exemplos:

Capela: cabine construda de forma aerodinmica cujo fluxo de ar ambiental
no causa turbulncias e correntes, assim reduzindo o perigo de inalao e
contaminao do operador e ambiente.

Chuveiro de Emergncia: chuveiro de aproximadamente 30 cm de dimetro,
acionado por alavancas de mo, cotovelos ou joelhos. Deve estar localizado em
local de fcil acesso.

Lava Olhos: dispositivo formado por dois pequenos chuveiros de mdia
presso, acoplados a uma bacia metlica, cujo ngulo permite direcionamento
correto do jato de gua. Pode fazer parte do chuveiro de emergncia ou ser do
tipo frasco de lavagem ocular.

Manta ou Cobertor: confeccionado em l ou algodo grosso, no podendo ter
fibras sintticas. Utilizado para abafar ou envolver vtima de incndio.


Extintor de incndio.



Requisitos Gerais para Segurana

Nunca pipetar com a boca, nem mesmo gua destilada. Usar dispositivos de
pipetagem mecnica.
No comer, beber, fumar, mascar chiclete ou utilizar cosmticos no laboratrio.
Evitar o hbito de levar as mos boca, nariz, olhos, rosto ou cabelo, no laboratrio.
Lavar as mos antes de iniciar o trabalho e aps a manipulao de agentes qumicos,
material infeccioso, mesmo que tenha usado luvas de proteo, bem como antes de
deixar o laboratrio.
Objetos de uso pessoal no devem ser guardados no laboratrio.
Utilizar jalecos ou outro tipo de uniforme protetor, de algodo, apenas dentro do
laboratrio. No utilizar essa roupa fora do laboratrio.
No devem ser utilizados sandlias ou sapatos abertos no laboratrio.
Utilizar luvas quando manusear material infeccioso.
No devem ser usados jias ou outros adornos nas mos, porque podem impedir uma
boa limpeza das mesmas.
Manter a porta do laboratrio fechada. Restringir e controlar o acesso do mesmo.
No manter plantas, bolsas, roupas ou qualquer outro objeto no relacionado com o
trabalho dentro do laboratrio.
Descontaminar todas as superfcies de trabalho diariamente e quando houver
respingos ou derramamentos. Observar o processo de desinfeco especfico para
escolha e utilizao do agente desinfetante adequado.
Colocar todo o material com contaminao biolgica em recipientes com tampa e a
prova de vazamento, antes de remov-los do laboratrio para autoclavao.
Descontaminar por autoclavao ou por desinfeco qumica, todo o material com
contaminao biolgica, como: vidraria, caixas de animais, equipamentos de
laboratrio, etc..., seguindo as recomendaes para descarte desses materiais.
Descontaminar todo equipamento antes de qualquer servio de manuteno.
Saber a localizao do mais prximo lava olhos, chuveiro de segurana e extintor de
incndio. Saber us-los.


Nveis de Biossegurana

Os laboratrios so classificados de acordo com os riscos biolgicos:
Classe de Risco I - Escasso risco individual e comunitrio. O Microrganismo
tem pouca probabilidade de provocar enfermidades humanas ou enfermidades de
importncia veterinria. Ex: Bacillus subtilis.

Classe de Risco II - Risco individual moderado, risco comunitrio limitado. A
exposio ao agente patognico pode provocar infeco, porm, se dispe de
medidas eficazes de tratamento e preveno, sendo o risco de propagao
limitado. Ex: Schistosoma mansoni.

Classe de Risco III - Risco individual elevado, baixo risco comunitrio. O
agente patognico pode provocar enfermidades humanas graves, podendo
propagar-se de uma pessoa infectada para outra, entretanto, existe profilaxia e/ou
tratamento. Ex: Mycobacterium tuberculosis.

Classe de Risco IV - Elevado risco individual e comunitrio. Os agentes
patognicos representam grande ameaa para as pessoas e animais, com fcil
propagao de um indivduo ao outro, direta ou indiretamente, no existindo
profilaxia nem tratamento. Ex: Vrus Ebola.

Materiais de Laboratrio

Vidrarias

Tubos de ensaio


Utilizado no cultivo de microrganismos em pequeno volume de meio e na conservao de
culturas puras de microrganismos. O tubo de ensaio uma das peas mais comuns usadas no
laboratrio. Trata-se de um recipiente com forma cilndrica, longo e estreito, normalmente de
vidro ou plstico, aberto no topo e com a base em forma de calote esfrica. Existem tubos de
ensaio de diversos tamanhos, geralmente com 1 a 2 cm de dimetro e 5 a 20 cm de altura.


Tubos Durham



So utilizadas em microbiologia para detectar a produo de gs por microorganismos. Eles so
simplesmente pequenos tubos de ensaio inserido de cabea para baixo em outro tubo de
ensaio. Este pequeno tubo inicialmente preenchido com a soluo em que o micro-organismo
est a ser cultivada. Se o gs produzido depois da inoculao e incubao, uma bolha de gs
visvel sero presos no interior do pequeno tubo.

Becker

de uso geral em laboratrio. Serve para fazer reaes entre solues, dissolver
substncias slidas, efetuar reaes de precipitao e aquecer lquidos. Pode ser
aquecido sobre a tela de amianto.

Placas de Petri

uma pea de vidro ou plstico, de formato idntico a pequeno prato de bordas
verticais. Estas placas usam-se principalmente para desenvolver meios de
cultura bacteriolgicos e para realizar reaes em escala reduzida.
Podem tapar-se com outra placa ligeiramente maior, constituindo uma caixa de Petri.
Facilita o isolamento de microrganismos devido grande superfcie de crescimento que
apresenta, possibilitando o aparecimento de colnias separadas.

Pipeta Graduada

um instrumento em vidro que permite a medio e transferncia de volumes variveis
de lquidos. um tubo longo e estreito, aberto nas duas extremidades, marcado com
linhas horizontais que constituem uma escala graduada. As pipetas graduadas utilizam-
se para a transferncia de volumes variveis de lquidos, e apresentam uma preciso
inferior pipeta volumtrica. Na utilizao da pipeta graduada o lquido aspirado para
o interior da pipeta por suco, com a ajuda de uma pompete, tambm conhecida como
propipeta ou pra enchedora. Efetua-se a leitura que corresponde ao volume inicial,
transfere-se para o recipiente o volume de lquido necessrio, utilizando a pompete, e
efetua-se a leitura final. O volume transferido para o recipiente calculado atravs da
diferena entre as leituras final e inicial.

Pipeta Pasteur

um utenslio semelhante a um conta-gotas, geralmente formado por um tubo de
vidro de ponta afilada. Serve para efetuar a transferncia de pequenas pores de
lquidos. Ao contrrio das outras pipetas, esta pipeta no apresenta um volume
determinado. Possui apenas a abertura inferior para entrada de lquido. Em sua ponta
superior, possui um "balo" que, quando pressionado expele o ar. A ponta inferior
mergulhada no lquido a transferir e em seguida soltando o balo, o lquido sugado
para a pipeta. As pipetas de Pasteur so utilizadas em casos onde no
necessria grande preciso do volume transferido.

Pipetas Automticas


Utilizada para medir volumes reduzidos, na ordem do microlitro, de forma precisa e
reprodutvel. So de volumes fixos ou variveis. Utilizam-se pontas (ou ponteiras) descartveis
em plstico, de modo que o lquido aspirado no entre no corpo principal da pipeta. So sempre
de dois estgios onde o primeiro usado para sugar o lquido e o segundo para descart-lo.

Ala de Drigalsky

Obtida a partir de uma pipeta Pasteur longa, dobrada em ngulo reto e depois em 45C
na chama. utilizada para espalhar microrganismos em meio de cultura slidos.

Lmina de vidro

Para examinar microrganismos ao microscpio. Podem ter sua superfcie serigrafada
com numerosas variaes de "clulas" e divises, com finalidades em anlises em
diversas aplicaes, como a microscopia de fluorescncia, a bacteriologia e a virologia.
Lamnula

Utilizada para recobrir preparaes microscpicas in vivo.

Termmetro

um aparelho usado para medir a temperatura. um instrumento composto por uma
substncia que possua uma propriedade termomtrica, uma propriedade que varia com a
temperatura.

Balo de Fundo Chato

Utilizado como recipiente para conter lquidos ou solues, ou mesmo, fazer reaes
com desprendimento de gases. Armazena grandes quantidades de meio de cultura

Erlenmeyer

Frascos de vidro, empregados na dissoluo de substncias, em titulaes, aquecimento
de lquidos e em reaes qumicas. Sua capacidade varivel. Podem ter ou no rolha
esmerilhada, podendo tambm ser graduados ou no. Seu diferencial em relao ao
bcker que este permite agitao manual, devido ao seu afunilamento, sem que haja
risco de perda do material agitado.
Frascos de Cultivo Microbiano

De vidro borossilicato e tampa rosqueada de polipropileno, autoclavvel. So vidrarias
utilizadas para anlises de gua e alimentos.


Acessrios

Bico de Bunsen

um dispositivo usado para efetuar aquecimento de solues em laboratrio. Este
aquecedor, muito usado no laboratrio, formado por um tubo com orifcios laterais, na
base, por onde entra o ar, o qual se vai misturar com o gs que entra atravs do tubo de
borracha.

Cabo de Kolle

Ideal para manipulao microbiana, o cabo de kolle contm material isolante trmico na
extremidade para garantir 100% de preciso em diversas anlises laboratoriais, j que
no h interferncia de temperatura no contato com as amostras em questo.

Ala de Platina e Agulhas

um fio de platina ou outra liga metlica, medindo aproximadamente cinco
centmetros, recurvado em uma de suas extremidades. adaptado ao cabo de Kolle.
Este material utilizado para transferir inculos slidos ou em suspenso. A agulha
um fio de platina ou de outra liga, que fixado ao cabo de Kolle, utilizada para semear
microrganismos em meio slido em profundidade.

Esptulas e Pinas


Estes utenslios so normalmente produzidos em ao inoxidvel. A esptula utilizada
para pesagem de pequenas massas, enquanto a pina para manipulao de lminas,
lamnulas, etc...


Equipamentos

Contador de Colnias

Um contador de colnia um instrumento usado para contagem de colnias de bactrias
ou outros microorganismos que crescem em uma placa de gar.
Estufa Incubadora

um dispositivo utilizado para manter e fazer crescer culturas
microbiolgicas ou culturas de clulas. A incubadora mantm a temperatura,
humidade e outras condies ideais, tais como o contedo de nvel de dixido de
carbono (CO
2
) e oxignio atmosfera interior. Incubadoras so essenciais para uma
grande quantidade de trabalho experimental em biologia celular, as de
Microbiologia e de biologia molecular e de culturas de clulas so utilizadas tanto
para bactrias, bem como as clulas eucariticas.

Incubadora de Banho de gua (Banho-Maria)

um equipamento indispensvel para realizaes dos ensaios de coliformes
termotolerantes (44,5C 0,2C). O mesmo dotado de um termmetro, termostato e
tampa para o controle de temperatura do banho.

Estufa de Esterilizao

Tipo especfico de estufa que apresenta um sistema de aquecimento controlado por
resistncia eltrica munida de termostato e termmetro para o controle de temperatura.
Em geral este equipamento utilizado para esterilizar vidrarias.

PHMetro

um equipamento muito utilizado no laboratrio de Microbiologia para se determinar o
pH dos diferentes tipos de meios de culturas e solues tampo. constitudo por
eletrodos, botes de ajuste e dotado de um sistema eletrnico capaz de fornecer
leituras diretas com exatido de 0,1 unidades de pH. Verifica-se a exatido do
diariamente usando-se solues-padro tamponadas.

Balanas

So destinadas a pesagens das diferentes substncias usadas no preparo dos vrios tipos
de meios de cultura, solues e corantes. Podem ser analgicas ou digitais. As balanas
devem ser mantidas sobre uma base slida protegidas de vibraes, e tambm de
umidade e mudanas bruscas de temperatura.

Autoclave

Cmara de vapor com parede dupla, equipada com dispositivos que permitem o
enchimento da cmara com vapor saturado e sua manuteno em determinadas
temperatura e presso por quaisquer perodos de tempo. O autoclave um equipamento
indispensvel ao laboratrio de microbiologia na esterilizao de meios de cultura,
gua, suspenses etc.
Geladeiras e Congeladores (Freezers)

As geladeiras so utilizadas para a conservao de meios de cultura estreis, solues e
amostras de contra-prova. As culturas microbianas e solues no devem ser colocados
nos mesmos equipamentos que as amostras. Jamais poder guardar refeies, lanches,
bebidas ou qualquer outro alimento que ir ser consumido. Se contiver material com
risco biolgico dever ser identificada com o pictograma adequado. Culturas vivas no
devem ser congeladas.

Agitador Magntico


Tambm chamado de placa agitadora magntica, formado por uma placa metlica que
possui um im giratrio por baixo. usado para misturar solues em recipientes que
permitam a colocao de uma barra magntica. Alm de ser possvel regular a
velocidade de rotao do im, alguns modelos tambm possuem a funo de
aquecimento.

Microscpio tico

O microscpio talvez o equipamento mais comum em qualquer laboratrio de
microbiologia, uma vez que ele permite aos alunos e profissionais examinarem
microrganismos e estruturas invisveis a olho nu. H microscpios com vrios nveis de
aumento, desde centenas at milhares de centenas de dimetro.

Cabines de Fluxo Laminar Horizontal e Vertical

Cria um ambiente estril em seu interior, permitindo o trabalho com materiais
que no podem ser contaminados e/ou que possam contaminar o manipulador. O ar
entra no aparelho num fluxo unidirecional, passa por um filtro microbiolgico antes de
entrar em contato com o material e antes da sua liberao para o meio externo. Tambm
possui uma lmpada capaz de emitir luz ultravioleta, usada para esterilizar o ambiente
antes e aps o trabalho. No entanto, todo o material de trabalho deve estar estril antes
de ser colocado dentro do fluxo; este no deve ser usado para esterilizar material. Alm
disso, o fluxo laminar tambm no deve ser usado como capela de exausto, pois gases
txicos podem danificar o aparelho. Existem cabines com nveis de segurana classes I,
II e III, que diferem no funcionamento, na trajetria do ar e na aplicabilidade.


RESULTADOS
Atravs da exposio e explicao de cada material de laboratrio e das
tcnicas de segurana que devem ser utilizadas nas aulas prticas, tornou-se eficiente o
uso do laboratrio, fonte de estudo para elevar o aprendizado em microbiologia. O
conhecimento adquirido ser eficiente nas aulas prticas em laboratrio. Teremos
habilidade em fazer o uso correto das vidrarias e a manipulao de microorganismo de
maneira correta; ficaremos mais atentos aos riscos inerentes aos laboratrios.

CONCLUSES

Com nossa primeira aula prtica, j temos a noo de quanto so importantes
s regras a serem seguidas dentro do laboratrio, para garantir nossa segurana e
tambm dos nossos colegas. Foram-nos apresentados muitos materiais que sero
utilizados nas nossas prximas aulas, que ser o complemento para o bom entendimento
das aulas tericas.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

NORMAS GERAIS PARA USO DE LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA. Disponvel em:
http://recife.ifpe.edu.br/. Acessado em 28.03.14 as 19:32 h.
VIDRARIAS E UTENSLIOS DE LABORATRIO. Disponvel em: http://www.uff.br/. Acessado
em 28.03.14 as 20:03 h.
EQUIPAMENTOS BSICOS DE LABORATRIO. Disponvel em:
http://www.uff.br/gcm/GCM/atividades/fuly/izabel.htm. Acessado em 28.03.14 em
28.03.14 as 20:05 h.
MANUAL DE LABORATORIO MICROBIOLOGIA. Disponvel em:
http://www.ebah.com.br/content/ABAAABeMgAA/microbiologia-manual-laboratorio
Acessado em 28.03.14 as 20:07 h.
VIDRARIA DE LABORATORIO. Disponvel em http://www.vidrariadelaboratorio.com.br/
Acessado em 28.03.14 as 21:10 h.