UNIVERSIDADE TUIUTI DO PARAN

FICHA DE AULAS PRTICAS

LABORATRIOS - FCBS
Professora Daniela Maluf

ALT/GPT LIQUIFORM
INDICAO MDICA DO EXAME
A determinao da alanina aminotransferase ou transaminase glutmico pirvica (ALT/GPT) em
amostras de sangue til na avaliao da funo heptica, sendo mais sensvel na deteco de leso
hepatocelular que de obstruo biliar.
PRINCPIO
A ALT catalisa a transferncia de grupos amina da alanina para o cetoglutarato, com formao de
glutamato e piruvato. Este reduzido a lactato por ao da lactato desidrogenase (LDH), enquanto que
a coenzima NADH oxidada a NAD. A conseqente reduo da absorbncia em 340 ou 365 nm,
monitorizada espectrofotometricamente, diretamente proporcional atividade da enzima na amostra.
ALT
L-Alanina + Cetoglutarato

Piruvato + L-Glutamato

LDH
Piruvato + NADH

L-Lactato + NAD

AMOSTRA
Preparo do paciente
Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas.
Tipos de amostra
Usar soro ou plasma (EDTA, heparina).
Armazenamento e estabilidade da amostra
A atividade enzimtica estvel por 4 dias entre 2 8 C e por 2 semanas a 10 C negativos.
Volume mnimo
(Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise)
Volume ideal
(Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise)
Critrios para rejeio da amostra
Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material.
PRODUTO UTILIZADO
ALT/GPT Liquiform, Catlogo 108-4/30
Labtest Diagnstica
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600
Lagoa Santa, MG, 33400-000

ANVISA - 10009010029

Reagente 1: Armazenar entre 2 - 8 C.

Reagente 2: Armazenar entre 2 - 8 C.
Reagente 3: Armazenar entre 2 - 8 C
Preparo do Reagente com Piridoxal fosfato
Transferir 0,300 mL do Reagente 3 para um frasco do Reagente 1 (24 mL) e homogeneizar suavemente.
Opcionalmente pode-se preparar um volume menor da mistura (Reagente 1 + Reagente 3) adicionandose 1 parte do Reagente 3 a 80 partes do Reagente 1 (exemplo: adicionar 0,010 mL do Reagente 3 a
0,800 mL do Reagente 1).
Indicar o modo de preparao a ser utilizado no laboratrio e o modo de identificao do Rreagente de
Trabalho.
Estvel por 21 dias entre 2 - 8 C e 24 horas entre 15 - 25 C.
Preparo do Reagente de Trabalho
O conjunto de um frasco de Reagente 1 e de um frasco de Reagente 2 permite preparar o Reagente de
Trabalho.
Opcionalmente pode-se preparar menor volume do Reagente de Trabalho utilizando a proporo de 4
(quatro) volumes do Reagente 1 e (um) volume do Reagente 2.
Indicar o modo de preparao a ser utilizado no laboratrio e o modo de identificao do Rreagente de
Trabalho.
Estvel por 5 dias entre 15 - 25 C e 14 dias entre 2 - 8 C;

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Precaues e cuidados especiais
1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer
referncia ao manual ou POP de segurana.
2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a
data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos
contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da
estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais.
3. Os reagentes contm azida sdica, que txica. Deve-se tomar cuidado para evitar a
ingesto e, no caso de contato com os olhos, lav-los imediatamente com grande quantidade
de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com
tubulaes de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de gua para descartar o reagente.
Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.
4. Se a absorbncia (340 nm) do reagente de trabalho, imediatamente aps a reconstituio, for
menor que 0,800, o reagente no dever ser utilizado porque provavelmente estar
deteriorado.
EQUIPAMENTOS
Procedimento manual
1. Fotmetro com cubeta termostatizada a 37 C capaz de medir a absorbncia em 340 nm com
exatido.
2. Pipetas para medir amostras e reagentes.
3. Cronmetro.
Procedimento automatizado
Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual
ou POP para utilizao do mesmo.
Procedimento alternativo
Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as
diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados.
CONTROLE DA QUALIDADE
Materiais
Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo),
instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos.
Limites de tolerncia
Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do
mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de valores
que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos materiais de
controle.
Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes
Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes.
Gerenciamento dos dados
Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados.
Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade.
PROCEDIMENTO
Condies de Reao: comprimento de onda de 340 nm; cubeta termostatizada a 37 C com 10 mm de
espessura de soluo; banda de passagem de 8 nm ou menos e luz espria menor que 0,1%.
Determinao da Atividade Enzimtica Utilizando o Piridoxal Fosfato
Para obteno de resultados rastreveis ao mtodo de referncia IFCC, necessrio utilizar o
procedimento bi-reagente, para que a enzima seja totalmente ativada pelo piridoxal fosfato.
Procedimento do Teste
1. Em um tubo rotulado Teste ou Calibrador, pipetar 0,800 mL da mistura Reagente 1 + Reagente 3.
2. Adicionar 0,100 mL de amostra ou calibrador de enzimas, homogeneizar e incubar em banho- maria
a 37 0,2 C por 5 minutos. Aps essa incubao, pode-se esperar at 30 minutos para iniciar a
medio cintica com a adio do reagente 2.
3. Ajustar o zero do fotmetro em 340 nm com gua destilada ou deionizada.
4. Adicionar 0,200 mL do Reagente 2, homogeneizar e transferir imediatamente para a cubeta
termostatizada a 37 0,2 C. Esperar 1 minuto.

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Determinao da Atividade Enzimtica sem a Utilizao do Piridoxal Fosfato
Procedimento do Teste
1. Em um tubo rotulado Teste ou Calibrador, pipetar 1,0 mL do reagente de trabalho.
2. Ajustar o zero do fotmetro em 340 nm com gua destilada ou deionizada.
3. Adicionar 0,100 mL de amostra ou calibrador de enzimas, homogeneizar e transferir imediatamente
para a cubeta termostatizada a 37 0,2 C. Esperar 1 minuto.
4.
Registrar a absorbncia inicial (A1) e disparar simultaneamente o cronmetro. Aps 2 minutos
registrar a absorbncia (A2).
Procedimento automatizado
Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de
aplicao dos reagentes para o sistema automtico.
Precaues e cuidados especiais
1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas
de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.
2. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade
dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de
limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais.
3. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para
preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou
condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos <0,1 mg/L (gua tipo II). Para o
enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou
condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna
deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com
liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo
que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de
modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade
da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente.
4. Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura
de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos.
5. Absorbncia inicial (A1) igual ou menor que 0,800 um indicativo de que a amostra tem
atividade elevada da ALT. Neste caso diluir a amostra e repetir a medio (ver linearidade).
Os fotmetros semi-automticos podem fornecer a mensagem: substrato esgotado.
CLCULOS
uma prtica habitual calcular os resultados de atividade enzimtica utilizando um fator obtido em
condies timas de reao que incluem:
comprimento de onda: 340 nm
cubeta termostatizada a 37 0,2 C com 1,0 cm de espessura de soluo.
banda de passagem 2 nm.
luz espria 0,1%.
Como na maioria das vezes no possvel trabalhar sob essas condies, as boas prticas de
laboratrio recomendam realizar a calibrao do ensaio utilizando calibrador de enzimas indicado pelo
fabricante do reagente. A Labtest indica a linha Calibra para calibrao do sistema ALT/GPT Liquiform.
A/minuto Teste ou Calibrador = (A1 A2)/2
Atividade do Calibrador
Fator = _____________________
A/min Calibrador
ALT (U/L) = A/min Teste x Fator
RESULTADOS
Unidade de medida

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U/L
Converso: Unidades Convencionais (U/L) x 16,7 = Unidades SI (nkat/L).
Intervalo de Referncia
Estes valores devem ser usados apenas como orientao. Recomenda-se que cada laboratrio
estabelea seu prprio intervalo de referncia na populao atendida.
Idade
1 - 30 dias
1 - 6 meses
7 - 12 meses
1 - 3 anos
4 - 11 anos
12 - 15 anos
Adultos

Masculino (U/L)
20 - 54
26 - 55
26 - 59
19 - 59
24 - 49
24 - 59
11 - 45

Feminino (U/L)
21 - 54
26 - 61
26 - 55
24 - 59
24 - 49
19 - 44
10 - 37

LIMITAES DO PROCEDIMENTO
Linearidade
Quando o A/minuto for maior que 0,220 em 340 nm, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L e repetir a
determinao. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Indicar o procedimento de diluio
utilizado no laboratrio.
Interferncias
1- Valores de Bilirrubina at 19 mg/dL, hemoglobina at 180 mg/dL e Triglicrides at 650 mg/dL no
produzem interferncias significativas.
2- Amostras fortemente lipmicas e ictricas possuem absorbncia elevada em 340 nm. Quando a
atividade enzimtica nestas amostras estiver muito aumentada, pode ocorrer consumo bastante rpido
do substrato sem haver diminuio significativa na absorbncia. Portanto, na ocorrncia de valores
baixos de atividade enzimtica nessas amostras deve-se repetir a determinao utilizando amostra
diluda com NaCl 0,85%.
3- A hemlise prejudica o teste devido a elevada concentrao de ALT nas hemcias, fornecendo
valores falsamente elevados.
4- Para reviso das formas fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na
metodologia, sugere-se consultar Clin Chem 1975; 21:1D-432D.
SIGNIFICADO CLNICO
Elevaes das transaminases ocorrem nas hepatites (viral e txica), na mononucleose, cirrose,
colestase, carcinoma heptico primrio ou metasttico, pancreatite, traumatismo extenso e no choque
prolongado.
Valores de ALT so iguais ou superiores aos de AST na maioria dos pacientes com hepatite viral,
ictercia ps-heptica ou colestase intra-heptica. Nos casos de cirrose heptica, hepatite alcolica ou
carcinoma metasttico, os valores de ALT so inferiores aos de AST.
Elevaes de ALT tambm so relatadas na polimiosite, dermatomiosite e rabdomilise.
No infarto agudo do miocrdio os valores de ALT encontram-se dentro do intervalo de referncia ou
ligeiramente aumentados.