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Caracterizao de enzimas
Introduo:
Enzimas so protenas especificas para catalisar reaes qumicas, principalmente
reaes biolgicas, elas aceleram significativamente as reaes e no sendo consumidas
durante o processo. As enzimas so bem especificas, interagem com um ou alguns
poucos substratos e catalisam apenas um tipo de reao qumica.
Essa especificidade se explica pelo modelo de Emil Fischer, proposto em 1984,
chamado modelo chave fechadura.
Objetivo:
Demonstrar a natureza proteica das enzimas.
Determinar qualitativamente a atividade enzimtica, usando a urase como exemplo.
Exemplificar inibio enzimtica.
Demonstrar a especificidade da ao enzimtica.
MATERIAIS:
REAGENTES:
Tubos de ensaio
Soluo de urase
Estante para
tubos
Pipeta
Reativo de biureto
Bico de bunsen
Pina de madeira
Piceta
Pera
gua destilada
Procedimentos:
Reao de Biureto:
Colocou se em um tubo marcado A, 2 gotas da soluo de urase, juntou se 2 ml de
gua. Agitou se e adicionou se 2 ml de reativo de biureto. Misturou se. Em tubo
marcado B, colocou se 2 ml de gua destilada e 2 ml do reativo biureto. Misturou se. E
em seguida comparou se a cor nos dois tubos.
Reao de Heller:
Em um tubo de ensaio colocou se 4 gotas de soluo de urase e 2 ml de gua destilada.
Agitou se. Mantendo o tubo inclinado juntou se pela parede 1 ml de cido ntrico
concentrado, sem agitar e de modo que se formem fases.
Especificidade da enzima
Tomou se dois tubos de ensaio e identificou os 1 e 2. No tubo 1 colocou se 3 ml de
tampo fosfato 0,001M, pH 7,0 (contendo 1% de ureia) e 2 gotas de urase. No tubo 2
juntou se 3 ml de tampo fosfato 0,001 M, pH 7,0 (contendo 1% de tioureia) e 2 gotas
de urease. A ambos os tubos adicionou se 1 gota de soluo vermelho de fenol.
Misturou se aps 5 minutos observou se mudana de colorao.
Resultado e Discusses:
Reao de Biureto:
Sendo o biureto um indicador prottico, depois de adicionado ao tubo que continha
urase a soluo adquiriu a colorao violeta, indicando presena de ligaes peptdicas.
No tubo que continha apenas o biureto e a gua no houve mudana significativa de cor,
apenas a cor azul proveniente do biureto, mostrando que a soluo no apresentava
ligaes peptdicas.
Reao de Heller:
Com adio de cido ntrico ao tubo contendo urase, ocorreu uma precipitao da
protena por um cido forte. Formando um anel branco e abaixo soluo de cor amarela.
Especificidade da enzima:
No tubo contendo a soluo tampo com ureia, apresentou tonalidade rosa, j que a
urase catalisa a reao promovendo a liberao de amnia e torna a soluo alcalina.
No tubo com a tioureia, no ocorreu mudana de cor, uma vez que a urase especfica
para catalise de reaes com ureia e no reagem da mesma forma com tioureia.
Concluso:
As enzimas em geral tem uma aplicabilidade muito diversificada em vrios ramos da
indstria, pois so protenas que permitem uma interferncia na matria prima de forma
desejvel e prtica.
Com a prtica realizada conclui-se que, para a aplicao de enzimas em processos
indstrias requer tambm um total controle das condies e aplicao dos mtodos
enzimticos, j que em condies extremas como de pH, temperatura, e a presena de
inibidores influenciam significadamente no processo, na qualidade e na quantidade do
produto.
Bibliografia:
KIELING, D. D.; Enzimas aspectos gerais; Universidade Federal de Santa Catarina;
Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia de Alimentos; Florianpolis; 2002