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ATIVIDADES PRTICAS
Jaragu do Sul
Abril/2005
AIRIMUV : AR E INFECCIOLOGIA
Durante muito tempo, a ideia que a vida possa emergir do mundo inerte manteve-se espalhada, dando
corpo teoria da gerao espontanea . Foi smente em 1862 que o cientista Louis Pasteur varreu
esta teoria demonstrando que o desenvolvimento de organismos num meio prviamente esterilizado
nicamente devido a uma contaminao por microorganismos contidos no ar ambiente. Existem portanto
microorganismos flutuando no ar que nos rodeia e que respiramos. Estes microorganismos sero
capazes de se replicarem e de proliferarem desde que encontrem um meio favorvel ao seu
desenvolvimento. Pasteur demonstrou que estes micrbios podem ser destruidos e que o aquecimento a
uma temperatura elevada permite igualmente interromper toda a proliferao destes microorganismos.
A flora encontrada no ambiente em geral no patognica. No entanto, certos microorganismos em
suspenso no ar ambiente so potncialmente agentes infecciosos e vo vecular as doenas por
transmisso do tipo aerotransportada . De acordo com o seu tamanho e modo de reproduo, so
classificados como vrus (organismos muito pequenos, necessitando de uma clula hospedeira para se
multiplicarem) como bactrias (visveis ao microscpio, multiplicando-se em meios inertes nutritivos) ou
ainda em leveduras (organismos de tamanho superior, com um nivel muito importante de resistncia no
meio
exterior).
Existe uma fonte muito importante destes microorganismos: as mucosas nasais e orais em caso de
infeco ( constipao , gripe, ) produzem em grande quantidade microorganismos. Os espirros e a
emisso de perdigotos projectam gotculas aerotransportadas de secrees naso-faringeas ( gotculas de
Flgge, com um tamanho roda de 5 m.) potncialmente infectantes. A mo levantada frente do nariz
e da boca do sujeito que tosse ou espirra no faz mais que desviar a trajectria destas gotculas que se
encontram em suspenso no ar ambiente e vo ser inaladas pelas pessoas na vizinhana imediata (os
sujeitos atingidos so infectados por inalao do aerossol produzido pelas pessoas contaminadas ou
infectadas a uma distncia que pode ir at aos 2 m.).
Este modo de transmisso pode ser responsvel por epidemias, mesmo pandemias (a uma mais larga
escala) como a gripe ou a SARS (sindroma agudo respiratrio severo) no sudeste da sia e trata-se
ento de um problema escala da sade publica. A crena actual que a transmisso do vrus H5N1
(vrus responsvel pela gripe aviria) que circula actualmente no mundo animal, no passa ao homem.
Aps certas transformaes, este vrus poderia tornar-se transmissivel por via area, de humano a
humano. Estas transformaes (por recombinao gentica entre vrus ou por mutao gentica )
so presentemente sempre hipotticas e tericas mas so um risco potncial a levar em considerao,
produzindo as medidas de preveno executadas pelos poderes pblicos.
Imagina-se sem dificuldade que o ar hospitalar no fuja a esta propagao de microorganismos. O ar
ambiente pode ser a origem para o homem de infeces especficas, infeces nosocomiais
contraidas especificamente no recinto hospitalar. Em certas zonas do hospital pode mesmo produzir-se
uma concentrao de germens potencialmente patognicos e que por vezes adquirem um poder de
resistncia aos tratamentos anti-infecciosos. Sabe-se de facto a gravidade de uma infeco tal como a
aspergilose devida a uma levedura (Aspergillus flavus ou niger a mais frequente) contraida atravs das
vias respiratrias (por inalao) por pessoas hospitalizadas e desde j enfraquecidas por uma outra
afeco que motivou a sua hospitalizao. Por vezes certas bactrias esto em contacto com tecidos
abertos (sem proteco da pele) durante intervenes cirrgicas encontram ai um meio propcio ao seu
desenvolvimento. Estes riscos impem ao meio hospitalar normas muito rgidas relativas qualidade do
ar, e tambm para a da gua.
O estudo do ar exterior mostra que contm partculas inertes, as mais frequentes de natureza mineral ou
orgnica. Calcula-se que a massa total destas partculas inertes no ultrapassar 1g/m 3 (ou seja roda
de 100 a 300.000 partculas/mm3). A presena destas partculas inertes variavel em funo da poluio
e dos fenmenos metereolgicos. O exterior contm igualmente como vimos, partculas vivas
podendo originar o nascimento de microorganismos tais como bactrias ou leveduras. Os
microorganismos s vivem raramente em estado livre no ar. O seu transporte areo necessita
frequentemente de um suporte, talvez uma poeira ou atravs da transmisso inter-humana das gotculas
de
saliva
(gotculas
de
Flgge).
A concentrao destas partculas vivas foi calculada em menos de 2000/mm 3 no ar ambiente. Esta
concentrao varia igualmente em funo da estao e das condies.
Em situao fechada (por exemplo num compartimento) o numero de partculas emitidas muito mais
importante na presena de vrios individuos. Com efeito, uma pessoa em repouso (sentada num
escritrio) emite volta de 100.000 partculas/mn, e uma pessoa em actividade emitir de 5 milhes
(deslocamento vivo) a 30 milhes de partculas (actividades desportivas em local fechado). Estas
partculas sero de natureza diferente: partculas inertes (produzidas pelo compartimento ele prprio,
detritos de txteis ou diferentes materiais), microorganismos principalmente produzidos pela ou pelas
pessoas presentes no local. Estes microorganismos tm um poder patognico varivel. Estes
microorganismos tm tambm uma durao de vida muito heterognea (de alguns minutos para um
vrus a vrias semanas para certos esporos). Para tomar o exemplo do hospital, a presena de partculas
provocando a nascena de microorganismos diferente em qualidade e em quantidade de um hospital
para outro e, no seio de um mesmo hospital, de um quarto de doente para outro.
A relao entre ar e infeco no sempre fcil de estabelecer porque a contaminao do ar no implica
forosamente uma infeco. Com efeito a infeco depender em parte da natureza do microorganismo
(concentrao do agente, virulencia e capacidade patognica), dos modos de contaminao, por
exemplo a porta de entrada cutnea durante uma interveno cirrgica e por outro lado a receptividade
do hospedeiro, estado imunitrio, leso das barreiras naturais (por exemplo perda de substncia no caso
de um grande queimado).
Os agentes responsveis pelas infeces transmissveis por via area so: as micobactrias, as
legionelas, certos vrus, vrus da varicela, da gripe, VRS (vrus respiratrio sincitial, responsvel pelas
epidemias invernais de bronquiolite na criana jovem), vrus do sarampo e vrus da rubeola, CMV
(cytomgalovrus) e certos cogumelos e parasitas (aspergillus e Pneumocystis carini). Ao por-se em
causa estes microorganismos especificos implica com frequencia o isolamento dos pacientes
contaminados para evitar a transmisso inter-humana. Algures, no meio hospitalar, em certas situaes
(bloco operatrio, quarto de paciente enxertado imuno-deprimido) a qualidade do ar deve ser prxima do
meio estril. Os controlos particulares e microbiolgicos do ar so praticados regularmente para dominar
e prevenir a contaminao aerotransportada.
O ar torna-se um vector de partculas e de microorganismos, particularmente nos locais fechados e de
ajuntamento humano. Estes elementos so potencialmente responsveis por situaes de risco
patognico e a vigilncia e o dominio da qualidade do ar tornam-se cada vez mais importantes na nossa
poca de epidemias potencialmente identificadas (SRAS, gripe aviria, legionelose), de grandes
ajuntamentos de populao (transmisso local em zonas de fortes concentraes humanas) e da
migrao rpida de pessoas atravs de meios de transporte modernos (difuso geogrfica).
EXERCCIO N1
PREPARAO DO MATERIAL DE LABORATRIO
Material
- Placas de Petri
- Tubos de cultura
- Pipetas
- Papel de filtro, tesoura, pina, papel de embrulho, fita crepe, caneta
- Algodo
Mtodo
1- Cortar um disco de papel de filtro com o dimetro um pouco maior que o
da tampa da placa de Petri, colocar na parte interna da tampa. Fechar a
placa e embrulhar, fechar com fita crepe e levar para ser esterilizada em
forno de Pasteur por 180C 90minutos.
2- Fazer um tampo de algodo que se ajuste firmemente ao tubo de
cultura. Em seguida, enrolar o conjunto de tubos em papel de embrulho
de modo a proteger o algodo e esterilizar em forno de Pasteur por
180C 90minutos.
3- Introduzir com um pina, uma mecha de algodo na boquilha da pipeta.
Embrulhar individualmente, fechar com fita crepe, anotar o volume e
esterilizar em forno de Pasteur por 180C 90minutos.
RECORDANDO A TCNICA PARA PIPETAR SOLUO
Material
- Becker de 150ml
- Soluo de azul de metileno
- Pipetas de 10ml; 5ml; 2ml; 1ml; 0,5ml.
Mtodo
1- Pipetar o volume integral de cada pipeta e transferir para o beckerrepetir a operao 3 vezes.
2- Com a pipeta de 10 ml, pipetar 5ml; 2,5ml e 0,5ml, transferir para o
becker.
3- Com a pipeta de 5ml, pipetar 4ml; 2ml e 0,1ml, transferir para o becker.
4- Com a pipeta de 2ml, pipetar 1ml; 0,5ml e 0,1ml, transferir para o becker.
5- Com a pipeta de1ml, pipetar 0,5ml; 0,3ml e 0,1ml, transferir para o
becker.
6- Com a pipeta de 0,5ml, pipetar 0,4ml, 0,2ml e 0,1ml, trnasferir para o
becker.
Questes
1- Por que colocado papel de filtro na tampa da placa de Petri?
2- Por que se coloca algodo na boquilha da pipeta em microbiologia?
3- Por que se deve ter tantos cuidados com a assepsia, quando se trabalha
com microrganismos?
EXERCCIO N2
PREPARAO DE MEIOS DE CULTURA
MEIOS DE CULTURA E CULTIVO DE MICRORGANISMOS
Para o cultivo e identificao de microrganismos, usam-se solues e
substncias nutritivas denominadas meios de cultura, que devem atender s
exigncias nutricionais das espcies de microrganismos a ser cultivada.
Esses meios quanto s substncias nutritivas podem ser:
1- Meios sintticos - quando os componentes so quimicamente
definidos;
2- Meios complexos - quando se adiciona ao meio substncias complexas
por exemplo: extrato de carne, peptona, sangue, etc.
Em relao ao estado fsico, os meios de cultura podem ser:
1- Meios lquidos tambm denominados de caldos;
2- Meios slidos quando se adiciona ao caldo 1,5 a 2% de gar.
Quanto fora seletiva e diferencial, podem ser:
1- Meios enriquecidos quando se acrescentam substncias como
sangue, soro, etc; para microrganismos com exigncias nutritivas mais
complexas;
2- Meios seletivos quando so adicionados ao meio de cultura
substncias que impedem o crescimento de certos microrganismos e
possibilita o crescimento de outros. Ex: meio de SS, meio de Mac
Conkey, etc
Questes
1- Para que serve o meio de cultura?
2- Qual a temperatura e tempos ideais para esterilizao de meios de
cultura na autoclave?
EXERCCIO N3
MICRORGANISMOS DO AR E AMBIENTE
Microrganismos encontram-se em praticamente todos os ambientes; ar, gua e
principalmente no solo, deste passam ao ar pelo vento sendo arrastados por
partculas de poeira. Do ar passam para nossa superfcie contaminando gua e
alimentos.
As condies que favorecem a sobrevivncia e o crescimento de muitos
microrganismos (nutriente, umidade e temperatura adequada) so as mesmas
sob as quais vivem as populaes humanas, assim inevitvel que vivamos
entre grande quantidade de germes.
Material
- Placas de Petri contendo Nutriente Agar (NA) e Agar Sabouraud (AS)
- Cotonete
Mtodo
a) Presena de microrganismos no ar
Retirar a tampa de uma placa de Petri com NA e outra com AS e deixar abertas
no ambiente determinado por 15 minutos. Fechar e incubar a placa de NA a
37C por 24h e a AS na temperatura ambiente por 5 dias.
b) Presena de microrganismo no laboratrio
Utilizando placas de NA inocular da seguinte forma:
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EXERCCIO N5
COLORAO DE GRAM
O exame microscpico de bactrias pode ser feito a partir de uma suspenso
de clulas em meio lquido ou desenvolvidas em meio slido, atravs de
coloraes. Essa tcnica possibilita observar as caractersticas morfolgicas de
bactrias e sua melhor visualizao, alm de poder evidenciar tambm
diferenas entre clulas de diferentes espcies ou dentro da mesma espcie
pelo uso de corantes apropriados.
A colorao de Gram bastante utilizada pois a maioria das bactrias se cora
por este mtodo, permitindo que sejam obtidas informaes relacionadas a sua
morfologia, principalmente no que diz respeito a parede celular, por esta
vantagem esta colorao um dos procedimentos utilizados na taxonomia das
bactrias.
Material:
- Culturas:
- Corantes especficos para o mtodo de colorao
Mtodo:
a) Preparo do esfregao.
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EXERCCIO N8
ANTIBIOGRAMA
A prova da sensibilidade a drogas antimicrobianas utilizada para orientar o
tratamento clnico (principalmente no caso daqueles que adquiriram
resistncia), para investigao epidemiolgica, testes de novos antibiticos e
identificao preliminar de algumas bactrias. Basicamente dois mtodos so
utilizados para avaliar a sensibilidade dos microrganismos s drogas: mtodo
da diluio e difuso
a) Mtodo da diluio: pela tcnica da diluio em tubos, pode-se determinar
a menor quantidade de antimicrobiano para inibir o crescimento de um
organismo (CIM= concentrao mnima inibitria)
b) Mtodo da difuso: se fundamenta na capacidade de difuso do antibitico
atravs de um meio slido, inibindo ou no o crescimento do microrganismo.
Este mtodo mais comumente empregado e consiste na utilizao de discos
de papel impregnados com quantidades conhecidas de drogas, as quais so
colocadas na superfcie de uma placa inoculada. O halo de inibio pode ser
influenciado pela composio do meio de cultura, densidade do inoculo,
concentrao do antibitico no disco, difusibilidade do antibitico no meio e
perodo de incubao.
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Material
Cultura de:
Agar Mueller-Hinton (MH)
Discos de antibiticos:
Mtodo
Em uma placa de Petri contendo meio de MH, inocular 0,1 ml da cultura
bacteriana fornecida e espalhar o inculo com a ala de Drigasky.
Colocar os biodiscos de antibiticos na superfcie do meio com uma pina
estril, pressionando levemente e mantendo um espaamento de modo que
fiquem suficientemente separados uns dos outros para evitar a superposio
dos halos de inibio.
Anotar o nome do antibitico, sua sigla e sua concentrao no biodisco.
Incubar a 37C por 48horas.
Resultado
A leitura da placa dever ser feita medindo-se o dimetro dos halos de inibio
(incluindo o dimetro do biodisco) e comparando com os dados da tabela e
anexo. Classificar como resistente, sensvel e intermedirio).
Intermedirio Sensvel
14 a 18
19 ou +
14 a 18
19 ou +
12 a 13
21 a 28
16 a 21
15 a 16
14 ou +
29 ou +
22 ou +
17 ou +
14 a 16
--14 a 17
20 a 22
15 a 17
15 a 17
15 a 22
14 a 20
15 a 17
15 a 17
15 a 17
17 ou +
29 ou +
18 ou +
23 ou +
18 ou +
18 ou +
23 ou +
21 ou +
18 ou +
18 ou +
18 ou +
17
Ciprofloxacina
Clindamicina
Cloranfenicol
Eritromicina
Estreptomicina
Gentamicina
Imipenem
Lincomicina
Neomicina
Netilmicina
Nitrofurantoina
Norfloxacina
Oxacilina
Penicilina G
Enterococos
Staphycoccus
Polimixina B
Rifampicina
Sulfazotrin
Sulfonamida
Tetraciclina
Tobramicina
Vancomicina
5mcg
2mcg
30mcg
15mcg
10mcg
10mcg
10mcg
2mcg
30mcg
30mcg
300mcg
10mcg
1mcg
10 unid.
300 UI
30mcg
25mcg
300mcg
30mcg
10mcg
30mcg
15 ou 14 ou 12 ou 13 ou 11 ou 12 ou 13 ou 14 ou 12 ou 12 ou 14 ou 12 ou 9 ou -
16 a 20
15 a 20
13 a 17
14 a 22
12 a 14
13 a 14
14 a 15
15 a 16
13 a 16
13 a14
15 a 16
13 a 16
10 a 13
21 ou +
21 ou +
18 ou +
23 ou +
15 ou +
15 ou +
16 ou +
17 ou +
17 ou +
15 ou +
17 ou +
17 ou +
14 ou +
14 ou 28 ou 8 ou 11 ou 10 ou 12 ou 14 ou 12 ou 9 ou -
--9 a 11
12 a 18
11 a 15
13 a 16
15 a 18
13 a 14
10 a 11
15 ou +
29 ou +
12 ou +
19 ou +
16 ou +
17 ou +
19 ou +
15 ou +
12 ou +
18