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RESUMO
Este teste revista Guideline 413 (TG 413) foi projetado para caracterizar completamente
artigo toxicidade teste por inalao por um perodo subcrnica (90 dias), e para fornecer
dados robustos para avaliaes quantitativas de risco de inalao. Grupos de 10 do sexo
masculino e 10 do sexo feminino roedores so expostos 6 horas por dia durante um perodo
de 90 dias (13 semanas) para a) o artigo de teste em trs ou mais nveis de concentrao,
b) o ar filtrado (controlo negativo), e / ou c) o veculo (veculo de controlo). Os animais so
expostos geralmente 5 dias por semana, mas a exposio durante 7 dias por semana,
tambm permitido. Os machos e as fmeas so sempre testados, mas eles podem ser
expostos a diferentes nveis de concentrao que se saiba que um dos sexos mais
susceptvel a um determinado artigo de teste. Essa diretriz permite que o diretor de estudo a
flexibilidade para incluir grupos satlite (reversibilidade), sacrificar, lavado bronco-alveolar
(BAL), os testes neurolgicos e patologia clnica adicional e avaliaes histopatolgicas, a
fim de melhor caracterizar a toxicidade de um artigo de teste.
INTRODUO
1. Bem-estar animal 1. Diretrizes da OCDE so revistos periodicamente luz do
progresso
cientfico
consideraes
evoluo
das
necessidades
de
regulamentao. O Test Guideline inalao subcrnica originais 413 (TG 413) foi
aprovada em 1981 (1). TG 413 foi revisto para refletir o estado da cincia e atender
s necessidades regulatrias atuais e futuras.
2. Os estudos de toxicidade por inalao subcrnicos so usados principalmente
para obter concentraes de regulamentao para avaliar o risco do trabalhador em
ambientes de ocupao. Eles tambm so utilizados para avaliar residencial
humano, transporte, e risco ambiental. Esta orientao permite a caracterizao de
efeitos adversos sequncia de exposies repetidas inalao diria para um artigo
de teste durante 90 dias aproximadamente 10% do tempo de vida de um rato). Os
dados obtidos a partir de estudos de toxicidade por inalao subcrnicos pode ser
utilizado para avaliaes de risco quantitativas e para a seleo das concentraes
em estudos crnicos. Este teste Orientao no se destina especificamente para o
teste de nanomateriais. Definies utilizadas no contexto deste mtodo de ensaio
podem ser encontradas no Documento de Orientao 39 (2).
CONSIDERAES INICIAIS
Inalao Chambers
9. A natureza do artigo de teste e o objeto do teste deve ser considerado na escolha
de uma cmara de inalao. O modo preferido de exposio de nariz-only (termo
que inclui a cabea-only, nariz-only, ou focinho-only). Exposio apenas do nariz-se
geralmente preferido para estudos de aerossis lquidos ou slidos e para os
vapores que podem condensar para formar aerossis. Objetivos especiais do estudo
pode ser melhor alcanado atravs de um modo de corpo inteiro de exposio, mas
isso deve ser justificada no relatrio do estudo. Para assegurar a estabilidade
atmosfera quando se utiliza uma cmara de todo o corpo, o volume total dos animais
de ensaio no deve exceder 5% do volume da cmara. Princpios do nariz apenas e
integrais tcnicas de exposio do corpo e suas vantagens e desvantagens
especficas so abordadas no GD 39 (2).
OS ESTUDOS DE TOXICIDADE
Limitar as concentraes
10. Ao contrrio dos estudos de toxicidade aguda, no h concentraes-limite
definidos em estudos de toxicidade por inalao subcrnicos. A concentrao
mxima testada deve considerar: 1) a concentrao mxima alcanvel, 2) o "pior
caso" nvel de exposio humana, 3) a necessidade de manter um suprimento
adequado de oxignio e / ou 4) as consideraes de bem-estar animal. Na ausncia
de limites base de dados, podem ser utilizados os limites agudas do sistema global
harmonizado de classificao e rotulagem de produtos qumicos das Naes Unidas
(isto , at uma concentrao mxima de 5 mg / L para aerossis, 20 mg / L para os
vapores e 20.000 ppm para gases); referem-se a GD 39 (2). Dever ser
devidamente justificada se for necessrio para ultrapassar esses limites ao testar
gases ou artigos de teste altamente volteis (por exemplo, refrigerantes). A
concentrao limite deve provocar toxicidade inequvoca, sem causar estresse
indevido aos animais ou que afetem a sua longevidade (3).
Range-Finding Estudo
11. Antes de comear com o estudo principal, geralmente necessria a realizao
de um estudo para determinao da gama. Um estudo para determinao da gama
mais abrangente do que um estudo de observao, pois no se limita a seleo
16. Se planear sacrificar, o nmero de animais em cada nvel de exposio deve ser
aumentado pelo nmero de ser sacrificado antes da concluso do estudo. Deve ser
apresentado o justificativa para o uso de sacrifcios intermdios, e as anlises
estatsticas devem corretamente responsveis por eles.
Satellite (reversibilidade) Estudo
17.
Um
estudo
satlite
(reversibilidade)
pode
ser
usado
para
observar
CONDIES DE EXPOSIO
A administrao de concentraes
19. Os animais so expostos para o artigo de teste como um gs, vapor, aerossol,
ou uma mistura dos mesmos. O estado fsico para ser testado depende das
propriedades fsico-qumicas do produto em estudo, as concentraes selecionadas,
e / ou a forma fsica provavelmente presente durante o manuseamento e utilizao
do teste artigo. Artigos de teste higroscpico e quimicamente reativos devem ser
testados em condies de ar seco. Cuidados devem ser tomados para evitar a
gerao de concentraes explosivas. Materiais em partculas podem ser
submetidas a processos mecnicos para reduzir a dimenso das partculas. Outras
orientaes so fornecidas no GD 39 (2).
Distribuio do Tamanho das Partculas
20. dimensionamento de partculas deve ser realizada em todos os aerossis e para
os vapores que podem se condensam para formar aerossis. Para permitir a
exposio de todas as regies relevantes do tracto respiratrio, os aerossis com
dimetros aerodinmicos mdios de massa (DAMM) que variam de 1 a 3 um com
um desvio padro geomtrico (g) na gama de 1,5 a 3,0 so recomendadas (4).
Apesar de um esforo razovel deve ser feito para cumprir esta norma, o julgamento
de peritos deve ser fornecido, se no puder ser alcanado. Por exemplo, partculas
de fumos metlicos ser menor do que esse padro, e de partculas carregadas e
fibras podem ultrapass-lo.
Artigo em teste num veculo Preparao
21. Idealmente, o artigo de teste devem ser testados sem um veculo. Se for
necessrio utilizar um veculo para gerar uma concentrao de artigo de teste e o
tamanho da partcula, deve ser dada preferncia gua apropriado. Sempre que um
produto de teste dissolvida num veculo, a sua estabilidade deve ser demonstrada.
MONITORAMENTO DAS CONDIES DE EXPOSIO
Cmara Airflow
para
demonstrar
estabilidade
das
condies
de
exposio.
Concentrao real cmara deve ser medido pelo menos 3 vezes durante cada dia de
exposio para cada nvel de exposio. Se no for possvel devido a taxas de fluxo
de ar limitadas ou baixas concentraes, uma amostra por perodo de exposio
aceitvel. Idealmente, esta amostra deve, ento, ser recolhidos ao longo de todo o
perodo de exposio. Amostras de concentrao de cmara individuais devem
desviar-se da cmara de concentrao mdia de no mais do que 10% para os
gases e vapores, e por no mais do que 20% para aerossis lquidos ou slidos.
Tempo para atingir o equilbrio cmara (t95) devem ser calculados e comunicados. A
durao da exposio estende o tempo em que o artigo de teste gerada. Isso leva
em conta os tempos necessrios para atingir o equilbrio cmara (t95) e decadncia.
Orientao para estimar t95 pode ser encontrado em GD 39 (2).
28. Para misturas muito complexas consistindo de gases/vapores e aerossis (por
exemplo, atmosferas de combusto e artigos de teste propulsionadas de produtos
de uso final com propsitos/dispositivos), cada fase pode se comportar de maneira
diferente em uma cmara de inalao. Por conseguinte, pelo menos uma substncia
indicadora (analito), normalmente o princpio ativo na formulao do produto testado,
de cada uma das fases (gs / vapor e aerossol) deve ser selecionado. Quando o
artigo de teste uma mistura (por exemplo, uma formulao), a concentrao
analtica deve ser reportada para a formulao total, e no apenas para o
ingrediente ativo ou do componente (analito). Informaes adicionais sobre as
concentraes reais podem ser encontrados em GD 39 (2).
Artigo de Teste: Distribuio de Tamanho de Partculas
29. A distribuio do tamanho das partculas dos aerossis deve ser determinada
pelo menos semanalmente para cada nvel de concentrao usando um impacto em
cascata ou um instrumento alternativo, tal como um dimensionador de partcula
aerodinmico (APS). Se equivalncia dos resultados obtidos por um impacto em
cascata e a alternativa
instrumento pode ser mostrado, em seguida, o instrumento alternativo pode ser
usado durante todo o estudo.
30. Um segundo dispositivo tal como um filtro gravimtrico ou um borbulhador
impinger / gs, deve ser usado em paralelo com o instrumento principal para
Hematologia
A contagem total de leuccitos
Contagem diferencial de leuccitos
A contagem de plaquetas
Potencial de coagulao (escolher um):
O tempo de protrombina
O tempo de coagulao
Tempo de tromboplastina parcial
Qumica Clnica
alanina aminotransferase
aspartato aminotransferase
fosfatase alcalina
potssio
Sdio
Clcio
Fsforo
Cloreto
determinao
de
citoquinas
pr-inflamatrias/quimiocinas.
Medies
LBA
Prstata
Reto
Glndulas salivares
Vesculas seminais
Pele
Medula espinhal (cervical, mdio-torcico, e lombar)
Bao
Esterno
Estmago
Teeth
Testes
Thymus
Tireides
[Lngua]
Traquia (pelo menos 2 nveis, incluindo uma seco longitudinal atravs do carina e
uma seo transversal)
[Ureter]
[Uretra]
Bexiga urinria
tero
Os rgos-alvo
Todas as leses macroscpicas e massas
43. Os pulmes devem ser removidos intactos, pesados, e instilado com um fixador
adequado, a uma presso de 20-30 cm de gua para assegurar que mantida a
estrutura do pulmo (5). Sees devem ser recolhidos para todos os lobos em um
nvel, incluindo brnquios principais, mas se a lavagem pulmonar realizada, o lobo
unlavaged deveria ser seccionada em trs nveis (no cortes seriados).
44. Pelo menos quatro nveis de os tecidos da nasofaringe deve ser examinado,
uma das quais dever incluir a conduta da nasofaringe (5) (6) (7) (8) (9) para permitir
o exame adequado do escamoso, de transio (no-ciliado respiratrio),
respiratrias (respiratria ciliadas) e epitlio olfativo, eo tecido drenagem linftica
(NALT) (10) (11). Trs nveis da laringe devem ser examinados, e um destes nveis
deve incluir a base da epiglote (12). Pelo menos dois nveis de traqueia deve ser
examinado, incluindo uma seco longitudinal atravs da carina da bifurcao da
seco transversal e uma brnquios extrapulmonares.
HISTOPATOLOGIA
seguinte
concentrao
mais
baixa
deve
ser
examinada
10) Kuper C.F., Koornstra P.J., Hameleers D.M.H., Biewenga J., Spit B.J., Duijvestijn
A.M., Breda Vriesman van P.J.C. and Sminia T. (1992) The role of nasopharyngeal
lymphoid tissue. Immunol. Today 13, 219-224.
11) Kuper C.F., Arts J.H.E. and Feron V.J. (2003) Toxicity to nasal-associated
lymphoid tissue. Toxicol. Lett. 140-141, 281-285.
12) Lewis D.J. (1981). Mitotic Indices of Rat Laryngeal Epithelia. Journal of Anatomy
132(3). 419-428.