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Cianobactria
Invasora
Aspectos moleculares e toxicolgicos de Cylindropermopsis raciborskii no Brasil
Renato Molica
Coord. do Lab. de Ecofisiologia de Microalgas (LEMI),
Instituto de Tecnologia de Pernambuco (ITEP).
renato@itep.br
Ilustraes cedidas pelos autores
Toxinas de cianobactrias
As cianobactrias produzem diferentes metablitos secundrios, sendo
alguns deles possuidores de ao
txica sobre diferentes organismos e
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O que so cianobactrias?
Cianobactrias so microrganismos procariotos, de origem extremamente remota, geralmente aquticos, que realizam fotossntese
com liberao de oxignio, diferente de outras bactrias fotoautotrficas.
Devido ao fato de serem fotossintetizantes, aquticas e possurem um
pigmento azulado (ficocianina), so tradicionalmente chamadas de
algas azuis, apesar da distante relao filogentica com outros
grupos de organismos tambm denominados de algas. Acredita-se
que elas foram as responsveis pelo incio da formao da atmosfera
atual, rica em oxignio, e pela evoluo de todos os organismos
fotossintetizantes, visto que formas relacionadas s atuais cianobactrias,
provavelmente, originaram os cloroplastos atravs de um evento
endossimbitico.
As cianobactrias so predominantes no fitoplncton de guas
continentais, alcanando uma ampla diversidade de formas, devido s
adaptaes morfolgicas, bioqumicas e fisiolgicas adquiridas durante sua longa estria evolutiva. Algumas cianobactrias, tais como os
gneros Microcystis, Cylindrospermopsis, Anabaena, Aphanizomenon
e Planktothrix formam floraes onde h a liberao de toxina atravs
da lise celular.
Tab ela 1. C aractersticas gerais d as to xin as pro d u zid as po r cian o b actrias e o s gn ero s em q u e fo ram
en co n trad as.
To xin a
C o mo e o n d e age
Gnero
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a, Planktothrix (Oscillatoria),
a
Microcistina
2A - Fgado (hepatcitos)
Nostoc, Hapalosiphon e Anabaenopsis
Inibidora das enzimas fosfatases 1 e
a
Nodularina
Nodu laria
2A - Fgado (hepatcitos)
Cylindrosper mopsis, Umezakia, Aphanizomenon
a
Cilindrospermopsina IFngibaiddoo.ra de sntese proteica e Raphidiopsis
L
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phanizomenon, L yngbya e
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Saxitoxina
Membrana do axnio
Cylindrosper mopsis
Liga-se ao receptor da acetilcolina Anabaena, Plankt ot hrix (Oscillat oria),
a
Anatoxina-a
sinapse nervosa
Aphanizomenon, Raphidiopsis
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Anatoxina-a(s)
Anabaena
Sinapse nervosa
a
Existem variantes estruturais com diferentes toxicidades
Fonte: Sivonen & Jones (1999), Li et al. ( 2001), Namikoshi et al. (2003).
___________________________________________________________
1
Dos 131 pacientes da clnica, 116 apresentaram sintomas de intoxicao. Destes, 100 desenvolveram problemas hepticos e 76
faleceram ao longo do estudo, que durou at outubro 1997. Destes 76, foram analisadas 52 amostras de fgado de 39 pacientes (todas
positivas para microcistina) (Carmichael et al. 2001).
Revista Biotecnologia Cincia e Desenvolvimento - Edio n 30 - janeiro/junho 2003
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Cepas brasileiras de
Cylindrospermopsis
raciborskii produzem
saxitoxinas
A espcie Cylindrospermopsis
raciborskii (ordem Nostocales) um
componente importante entre as espcies formadoras de floraes, pois
pode produzir hepatotoxinas,
neurotoxinas e citotoxinas (Chorus &
Bartram 1999).
O primeiro caso de intoxicao
humana provocada por esta espcie
ocorreu em 1979, na Austrlia, quando 141 pessoas, sendo a maioria crianas, aps consumirem gua de um
reservatrio que havia sido tratado
com algicida para eliminar uma
florao, apresentaram sintomas de
hepatoenterite (Hawkins et al 1985).
At ento, essa espcie era considerada como no-txica. Anlises posteriores demonstraram que o composto
responsvel pela intoxicao havia
sido a cilindrospermopsina (Ohtani
et al 1992). Tambm na Austrlia, em
1992, uma florao de C. raciborskii
produtora de cilindrospermopsina
causou a morte de bovinos. Apenas as
cepas australianas e uma tailandesa
de C. raciborskii, at hoje, demonstraram produzir cilindrospermopsina
e um anlogo no txico, denominado deoxicilindrospermopsina.
Em anlises realizadas pelo Laboratrio de Ecofisiologia de
Microalgas, do Instituto Tecnolgico
do Estado de Pernambuco, com amostras de floraes de C. raciborskii
que ocorreram entre 10 de abril e 24
de maio de 2002 no reservatrio
Tapacur (So Loureno da Mata,
PE) que abastece cerca de 1,3 milho
de habitantes na Regio Metropolitana de Recife, foi demonstrado efeitos
neurotxicos em bioensaios com camundongos. Anlises realizadas por
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) indicaram a presena de
Figura 4. Anlise de saxitoxinas por cromatofrafia lquida de alta eficincia (CLAE) com detector
de fluorescncia e derivatizao ps-coluna de acordo com mtodo descrito por Oshima (1995).
Amostra de 8 de maio de 2002 da florao de C. raciborskii do reservatrio Tapacur (a). Foram
identificados trs picos, cujos tempos de reteno coincidem com os tempos de reteno dos
padres (b e c). Neosaxitoxina (NeoStx), saxitoxina (Stx) e dc-saxitoxina (dc-Stx).
Figura 5: Ocorrncia de C. raciborskii no mundo segundo Padisk (1997). 1. Indonsia. 2. Filipinas. 3. Bruma. 4. China. 5. ndia. 6. Sri Lanka. 7. Austrlia.
8. Repblica Democrtica do Congo, Malaui, Qunia, Ruanda, Zambia, Zimbabue, Uganda. 9. frica do Sul. 10. Nigria. 11. Rio Nilo. 12. Moldvia,
Turquimenisto, Afeganisto, Cazaquisto, Rssia, Usbequisto, Mar Cspio. 13. Alemanha, ustria, Frana. 14. Espanha. 15. Grcia. 16. Hungria. 17.
Minenesota, EUA. 18. Kansas, Estados Unidos 19. Texas, Estados Unidos. 20. Flrida, Estados Unidos. 21. Mxico. 22. Nicargua. 23. Cuba. 24. Venezuela.
25. Brasil. a. Lago Parano, DF; b. Lago da Pampulha, MG; c. Reservatrio de Itaip, PR; d. Lagoa dos Patos, Lago Chins e Lago Gacho, RS.
Revista Biotecnologia Cincia e Desenvolvimento - Edio n 30 - janeiro/junho 2003
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Referncia*
Branco & Senna (1991)
Fernandes (2003)
Bazza et al. (1999)
Jardim et al. (2001)
Mendes et al. (2003)
Borges et al. (2003)
Bouvy et al. (2000)
Huszar et al. (2000)
Panosso et al. (2003)
Proena et al. (2002)
Komkov et al. (1999)
Souza et al. (1998)
Silva et al. (2003)
* Citou-se apenas uma referncia por estado, porm a maioria possui mais
de um registro.
A invaso de
Cylindrospermopsis
raciborskii
A espcie Cylindrospermopsis
raciborskii (Woloszynska) Seenayya et
Subba Raju foi descrita pela primeira
vez em Java e adjacncias e tornou-se
extremamente invasiva, ocorrendo tanto em guas de regies tropicais e
subtropicais como temperadas (Padisk
1997, Bouvy et al. 2000) (Figura 5).
Apesar de poderem ser dominantes
durante o ano todo, so mais comumente
encontrados em perodos restritos, geralmente secos e de baixa pluviosidade.
Esta cianobactria possui mltiplas estratgias adaptativas, tais como resistncia herbivoria, tolerncia s baixas
irradiaes, possibilidade de migrao
na coluna dgua buscando estratos
ricos em nutrientes e luz, tolerncia s
altas concentraes inicas, armazenamento e utilizao de reservas
intracelulares de fsforo, alta afinidade
ao NH4+ que a forma energeticamente
mais acessvel de nitrognio, ou na sua
falta, podem fixar o N2 atmosfrico e
flexibilidade s grandes variaes de
condutividade eltrica.
Nas duas ltimas dcadas documenta-se a freqente ocorrncia de C.
raciborskii nas guas dos reservatrios
e audes em diversos estados do Brasil
(Tabela 2). Uma das regies com intensos registros de sua presena a
Nordeste, mais especificamente o estado de Pernambuco (Bouvy et al. 1999,
2000; Huszar et al. 2000). Os reservatrios desta regio possuem excelentes
condies para o desenvolvimento
desta espcie, tais como, corpos dgua
rasos, estabilidade na coluna dgua
devido pluviosidade baixa, longo
tempo de reteno da gua (ou ausncia de renovao), irradiaes e temperatura altas alm de valores de pH
acima de 8,0 (Bouvy et al. 2000).
Segundo Bouvy et al. (2000), dos 39
reservatrios amostrados por todo estado de Pernambuco, entre setembro e
novembro de 1998, 31 apresentaram
floraes de C. raciborskii e, em 17
destes, esta cianobactria representou
50% da densidade do fitoplncton total. No mesmo perodo, situao semelhante foi relatada na Austrlia no
estado de Queensland entre outubro
de 1997 e junho de 1999. Dos 47
reservatrios de gua amostrados, 35
apresentaram populaes de C.
Morfologia de
Cylindrospermopsis
raciborskii
Segundo os critrios morfolgicos tradicionais, a forma do filamento
um carter taxonmico que distingue espcies diferentes. Segundo
Komarkov (1998), as formas retas
so identificadas como C. raciborskii
e as espiraladas C. philippinensis
(Taylor) Komrek e C. catemaco
Komarkov-Legnerov et Tavera. No
entanto, admite-se atualmente que
prprio de C. raciborskii apresentar
uma extensa plasticidade fenotpica
refletindo-se em filamentos retos,
sigmides ou espiralados que podem
ocorrer simultaneamente (Figura 6).
Filamentos espiralados de C.
raciborskii, apesar de distribuio mais
restrita no mundo, so freqentemente relatados para o norte da Austrlia,
em Queensland (Fabbro et al 1996,
McGregor & Fabbro 2000, Saker et al.
1999, Dyble et al. 2002) e sudeste da
Amrica do Norte, na Flrida. No Brasil, do nosso conhecimento, populaes de C. raciborskii com filamentos
espiralados apenas foram registrados
para a regio Nordeste (Bouvy et al.
1999, 2000) (Figura 6).
Populaes com filamentos retos
e espiralados de um lago na Austrlia
foram caracterizadas geneticamente
atravs das anlises de seqncias do
16SrRNA (Saker et al. 1999). Formas
retas e espiraladas apresentaram-se
com alta similaridade gentica (99,8%)
indicando que se tratava de uma nica
espcie, apesar dos seus comportamentos levemente diferenciados em
testes ecofisiolgicos (Saker et al. 1999,
Saker & Neilan 2001). Wilson et al.
(2000), utilizando uma tcnica mais
discriminatria do que a anterior, encontraram resultados semelhantes atravs de seqncias do rpoC1, que codifica para a subunidade da RNA
polimerase, obtidas por iniciadores
desenhados especificamente para
Cylindrospermopsis. Entretanto, as cepas com morfologia espiralada foram
agrupadas utilizando-se RAPD (random
amplified polymorphic DNA) e STRR
(short-sequence tandem repeat region)
O uso de seqncias de
DNA como ferramenta
bsica no entendimento da
disperso e produo de
toxinas
Genes que codificam para a cficocianina como o cpcB e cpcA esto
presentes em todas as cianobactrias
e ausentes em outras bactrias e
microalgas. As regies espaadoras
entre estes genes tm se tornado uma
alternativa para a utilizao daquelas
altamente conservadas. A regio do
locus da ficocianina possui seqncias com taxas de substituies mais
altas do que aquelas do 16S rDNA
(Nelissen et al 1996, Ishida et al. 1997,
Lyra et al. 2001).
Neste estudo foram utilizadas seqncias inditas obtidas do espaador
intergnico do operon da ficocianina
(cpcBA-IGS) de cepas C. raciborskii
com morfologias reta e espiralada de
dois corpos dgua do nordeste do
Brasil. Alm destas, foram utilizadas
seqncias de cepas australianas, europias e americanas disponveis no
GenBank. Nmero de acesso s seqncias esto na Figura 7.
As 19 cepas analisadas apresentaram-se com alta similaridade gentica
mostrando tratar-se de uma nica espcie (Figura 7). Porm, foram claramente distribudas em dois grupos:
Grupo 1) com cepas australianas,
produtoras de cilindrospermopsina, e
europias (Alemanha, Hungria e Portugal), no-produtoras de cilindrospermopsina, mas sim de um composto
txico ainda no caracterizado (Neilan
et al. 2003); e Grupo 2) com cepas
americanas (EUA e Brasil). No grupo 1
no foram evidenciadas distines entre
regies geogrficas, toxinas produzidas e morfologias reta e espiralada.
O grupo 2 apresentou cepas distribudas segundo a regio geogrfica
(Flrida e Brasil) e morfologia do
filamento (espiralado ou reto). Con-
Consideraes finais
As seqncias do cpcBA-IGS possibilitaram, de uma forma geral, a distino entre regies geogrficas e
morfologias espiralada e reta entre as
cepas americanas, mas no entre as
australianas e europias. Isto poderia
indicar que h outros fatores refletidos
nas informaes moleculares que estariam influenciando na topologia do
cladograma. Apesar da necessidade de
maior detalhamento e nmero de isolados de C. raciborskii analisados em
relao aos seus aspectos moleculares,
toxicolgicos e ecofisiolgicos, h indcios que haja uma ligao entre o
composto txico produzido e sua distribuio geogrfica. Baseado nisto,
pode-se propor que populaes australianas, europias e americanas evoluram separadamente aps a separao dos continentes, contrariando as
especulaes de Padisk (1997), segundo as quais, a Austrlia e frica
seriam os centros de radiao de C.
raciborskii para Europa e Amrica por
possurem ambientais mais favorveis
ao desenvolvimento destas populaes.
Segundo um modelo evolutivo
proposto para eucariotos com reproduo sexuada (Brussard 1984), populaes geneticamente diversas esto no
centro da variao de uma espcie,
enquanto que aquelas s margens apresentam-se mais homogneas. Para Dyble
et al. (2002), a grande diversidade gentica encontrada entre as cepas americanas quando comparadas com as austra-
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Referncias
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