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RESUMO
Uma das tcnicas de separao mais utilizadas da qumica, a cromatografia. Este
mtodo de separao realizado atravs da distribuio de componentes ao longo
de duas fases que esto em contato, fase estacionria e fase mvel. Podendo ser
acoplado com identificadores de compostos, a cromatografia tem grande aplicao
industrial para separao de compostos e em seguida identificao (atravs dos
identificadores). Considerando sua importncia, a prtica realizada foi a Separao
de o-nitrofenol e p-nitrofenol por cromatografia em coluna cromatogrfica.

INTRODUO
Utilizando caractersticas intermoleculares de cada molcula, como
polaridade, a cromatografia vem sendo modernizada, aprimorada e cada vez mais
amplamente utilizada em suas mais variadas vertentes, como a cromatografia gasosa,
porm seus princpios de separao continuam sendo o mesmo. (ENGEL, 2009).
Sendo uma fundamental tcnica fsico-qumica de separao, alguns
autores trazem definies dos princpios utilizados para a realizao da separao por
cromatografia (WAL, ARAUJO, ALMEIDA, 2004).
Segundo Dias, Costas e Guimares, (2004), p.107
Fundamentalmente, um fluido contendo um conjunto de substncias
dissolvidas (fase mvel) passa atravs de um slido ou um lquido
adsorvido num slido (fase estacionria).

O processo cromatogrfico pode ter classificaes diferentes devido

as variadas formas de interaes possveis entre a fase mvel e estacionria, e
tambm pela natureza da fase, como seu estado fsico, polaridade. (DEGANI, CASS,
VIERA, 1998).
Os fenmenos que fazem a separao so os de adsoro, partio,
troca inica e excluso, j os estados fsicos da fase, classificam a cromatografia
quanto ao estado fsico da fase mvel, sendo, cromatografia lquida e cromatografia
gasosa (NOGUTI, NAKAMURA, VIEIRA, 2002).

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Segundo Andrade et.al., 1995. p.1, A grande variedade de
combinaes entre fases mveis e estacionrias torna a cromatografia uma tcnica
extremamente verstil e de grande aplicao.
Uma dessas variedades de combinao a cromatografia em coluna,
que composta de uma coluna de vidro, contendo duas fases, a estacionria sendo
geralmente slica e a mvel sendo solventes orgnicos variados A coluna ento
eluda, deixando que o solvente (fase mvel) selecionado para a separao passe
atravs dela (MUHLEN, LANAS, 2004).

Desta forma, o experimento realizado foi a separao do o-nitrofenol

e p-nitrofenol atravs de cromatografia por coluna cromatogrfica.

PARTE EXPERIMENTAL

Materiais e Reagentes:
Cubas cromatogrficas
Papel de filtro
Slica gel
Placas cromatogrficas
Coluna cromatogrfica
Tubo capilar
Basto de vidro
Bquer de 100 mL
Algodo hidrfilo
Fenol
gua Destilada
cido Ntrico Aquoso (1:1)
P-nitrofenol PA
O-nitrofenol PA

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Diclorometano
Acetato de etila
Hexano
Metanol

Procedimento:
1- Preparao da Coluna
Colocou-se uma fina camada de algodo hidrfilo na base inferior
da coluna com o auxlio de um basto de vidro e introduziu-se o primeiro eluente
ou mistura de eluente na coluna at cerca de da sua altura total.
Verificou o funcionamento da torneira.
Pesou-se aproximadamente 10g de slica-gel para um bquer de
100 mL, a este adicionou-se o suficiente para formar uma papa homognea
(slica-solvente), misturou-se com basto de vidro.
Foi aberto um pouco a coluna, deixando-a gotejar para dentro de
um erlenmeyer durante o processo de enchimento.
Com a ajuda do basto de vidro, deitou-se de modo contnuo a
suspenso de slica na coluna.
Deixou-se gotejar o solvente 5 minutos aps o enchimento da
coluna para facilitar a sedimentao dos grnulos de slica (empacotamento).
Feche a torneira deixando o solvente cobrir a parte superior da coluna
preenchida.
2- Preparao e Aplicao da amostra
Foi adicionado cerca de 0,5 mL da soluo de mistura de
nitrofenis em um bquer pequeno, adicionou-se uma quantidade pequena de
slica e mexeu-se at a slica incorporar toda a mistura de nitrofenis.
Adicionou-se o solvente at o topo da coluna e deixou-se gotejar.
3- Eluio dos componentes da amostra

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Deixou-se gotejar o eluente, e recolheu-se aproximadamente 8
mL de eludo em tubos de ensaio de 10 mL, previamente numerados.
Foi realizado o monitoramento da separao cromatogrfica, em
CCD.
As fraes eludas contendo o-nitrofenol puros e p-nitrofenol
foram reunidas.
Aps a reunio deixou-se secar as fraes, acondicione os
slidos puros em frascos.

RESULTADOS E DISCUSSO

Para a escolha do eluente adequado foram feitas quatro placas

cromatogrficas, onde em cada uma foi aplicada uma amostra de o-nitrofenol padro,
p-nitrofenol padro e a mistura das duas substncias com o auxlio de um tubo capilar.
A primeira placa foi eluida com diclorometano, a mancha do onitrofenol subiu bastante, enquanto que o p-nitrofenol no subiu muito. Concluindo
que diclorometano no um bom eluente, pois a distncia entre as manchas foi muito
grande, o que demoraria muito e gastaria muito eluente.
A segunda placa foi eluida com hexano, a mancha de o-nitrofenol e a
mancha de p-nitrofenol subiram pouco e quase na mesma altura, desta forma, o
hexano no um eluente bom, pois seria difcil de separar as duas substncias da
mistura.
A terceira placa foi eluida com metanol, a mancha de o-nitrofenol e de
p-nitrofenol subiram muito e praticamente na mesma altura, desta forma, o metanol
no um bom eluente, j que no separaria as substncias da mistura.
A quarta placa foi eluida em uma mistura de hexano e acetato (75/25),
a mancha de o-nitrofenol subiu bastante, enquanto que a mancha de p-nitofenol subiu
at ao meio da placa, mostrando que houve uma diferena boa de interao entre os
compostos e o eluente e gastaria menos solvente.

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Como a fase estacionria polar (slica), no devem ser usados
solventes pouco polares, pois no removeriam o composto da fase estacionria, nem
muito polar, pois removeriam os dois compostos ao mesmo tempo. Desta forma, os
melhores resultados so obtidos com a mistura de solventes, pois obtm-se uma
polaridade mdia que separa os compostos em momentos diferentes (DEGANI, CASS
E VIEIRA,1998, p. 22).
De acordo com os resultados da placa cromatogrfica e da literatura,
o eluente escolhido foi a mistura de hexano e acetato (75/25).
Aps a escolha do eluente adequado, foi realizada a coluna
cromatogrfica, com a adio de algodo na base inferior da coluna, mistura de
hexano e acetato (75/25) como fase mvel, om 10,03 g de slica-gel como fase
estacionria, amostra com a mistura de compostos em forma de pastilha.
Foi retirada muitas fraes da coluna cromatogrfica, onde foi
realizada uma placa cromatogrfica com o padro do o-nitrofenol, p-nitrofenol e as
fraes 8, 12 e 16 retiradas da coluna.
Aps a eluio da placa cromatogrfica e revelao em cuba de iodo,
foram medidas as alturas das manchas dos compostos e realizados os clculos de
reteno utilizando a equao 1:
=

A mancha de o-nitrofenol atingiu uma altura de 5,1 cm.

=

5,1
= 0,6
8,5

A mancha de p-nitrofenol atingiu uma altura de 3,5 cm.

=

3,5
= 0,412
8,5

A mancha da frao 8 atingiu uma altura de 4,8 cm.

=

4,8
= 0,565
8,5

A mancha da frao 12 atingiu uma altura de 5 cm.

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=

5
= 0,588
8,5

A mancha da frao 16 atingiu uma altura de 5 cm.

=

5
= 0,588
8,5

Segundo Guimares (2004, p. 114), o clculo de reteno

empregado para auxiliar a identificao de uma substncia em relao a um padro,
onde os Rf das mesmas substncias so semelhantes.
Desta forma, as fraes 8, 12 e 16 so constitudas por o-nitrofenol,
pois possuem um fator de reteno mais prximo ao fator de reteno da amostra
padro de o-nitrofenol.

CONCLUSO
Os compostos o-nitrofenol e p-nitrofenol so compostos levemente
polares, e possuem um elemento eletronegativo em suas composies (oxignio),
desta forma, fazem ligaes de hidrognio com a slica (fase estacionria) que polar.
O o-nitrofenol alm de fazer ligaes de hidrognio com a slica, faz
ligao de hidrognio intramolecular entre o grupamento nitro com a hidroxila, assim
o o-nitrofenol sai primeiro com o eluente.

QUESTIONRIO
1- Segundo Guimares (2004, p. 110), o poder de eluio paralelo polaridade.
As separaes ocorrem atravs de interaes eletrostticas, o composto ter uma
maior ou menor adsoro dependendo das foras de interao, que variam na ordem,
formao de sais> coordenao> pontes de hidrognio> dipolo-dipolo> Van der
Waals.

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2- Solventes polares so usados para substncias que adsorvem fortemente, e solventes
apolares so utilizados para substncias fracamente adsorvidos na fase estacionria.
3- Deve-se colocar papel filtro na parede da cuba cromatogrfica para saturar o meio
com o vapor do eluente, o que facilita a corrida da amostra.
4- Devem ser reveladas por irradiao com luz ultravioleta, associao reversvel com
iodo (mtodo mais comum) e uso de reagentes especficos.
5- O Rf empregado para auxiliar na identificao de substncias desconhecidas, caso
se desconfie de qual substncia se trata.
Rf a razo entre a distncia percorrida por um componente e a distncia percorrida
pelo solvente.
6- utilizada para determinar nmero de componentes da mistura a ser analisada,
determinar a pureza do composto, identificar componentes em uma mistura
comparando-os com padres, acompanhar o curso de uma reao e isolar
componentes puros de uma mistura.
7- A slica gel polar, o tolueno apolar, desta forma para diminuir o fator de reteno
deve-se diminuir a distncia percorrida pela amostra, consequentemente deve-se
substituir o tolueno por clorofrmio que mais polar.
8- A) O eluente um tipo de solvente, porm no dissolve ou reage com as amostras, e
sim interage com elas. a fase mvel que separa os componentes.
B) 1 =
2 =
3 =
4 =

0,6
3
2,1
3
1,1
3

2,5
3

= 0,83

= 0,2
= 0,7
= 0,37

C) Provavelmente no, j que todas amostras possuem fator de reteno bem

distintos.
9- (E)

REFERNCIAS

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MUHLEN, V.C; LANAS M.F. Cromatografia Unificada. Qum. Nova vol.27 no.5 So
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