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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

CENTRO DE CINCIAS RURAIS


PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM MEDICINA VETERINRIA

ALTERAES NO ENCFALO DE BOVINOS


SUBMETIDOS VIGILNCIA DAS ENCEFALOPATIAS
ESPONGIFORMES TRANSMISSVEIS

TESE DE DOUTORADO

RAQUEL RUBIA RECH

Santa Maria, RS, Brasil


2007

ALTERAES NO ENCFALO DE BOVINOS SUBMETIDOS


VIGILNCIA DAS ENCEFALOPATIAS ESPONGIFORMES
TRANSMISSVEIS

por

Raquel Rubia Rech

Tese apresentada ao Curso de Doutorado do Programa de


Ps-Graduao em Medicina Veterinria, rea de Concentrao em
Patologia Veterinria, Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS), como
requisito parcial para obteno do grau de
Doutor em Medicina Veterinria.

Orientador: Claudio Severo Lombardo de Barros

Santa Maria, RS, Brasil


2007

Universidade Federal de Santa Maria


Centro de Cincias Rurais
Programa de Ps-Graduao em Medicina Veterinria
A Comisso Examinadora, abaixo assinada,
aprova a Tese de Doutorado

ALTERAES NO ENCFALO DE BOVINOS SUBMETIDOS


VIGILNCIA DAS ENCEFALOPATIAS ESPONGIFORMES
TRANSMISSVEIS
elaborada por
Raquel Rubia Rech

como requisito parcial para obteno do grau de


Doutor em Medicina Veterinria

COMISSO EXAMINADORA:

Claudio Severo Lombardo de Barros, PhD


(Presidente/Orientador)

Corrie Cabell Brown, PhD


(UGA)

Dominguita Lhers Graa, PhD


(UFSM)

David Driemeier, Dr.


(UFRGS)

Ricardo Antonio Amaral de Lemos, Dr.


(UFMS)

Santa Maria, fevereiro de 2007.

RESUMO
Tese de Doutorado
Programa de Ps-Graduao em Medicina Veterinria
Universidade Federal de Santa Maria
ALTERAES NO ENCFALO DE BOVINOS SUBMETIDOS
VIGILNCIA DAS ENCEFALOPATIAS ESPONGIFORMES
TRANSMISSVEIS

AUTORA: Raquel Rubia Rech


ORIENTADOR: Claudio Severo Lombardo de Barros
Data e Local da Defesa: Santa Maria, 23 de fevereiro de 2007.
Este estudo derivou do exame macroscpico e microscpico de 3.338 encfalos de bovinos, realizado
entre 2001-2005, como parte do programa de vigilncia para a encefalopatia espongiforme bovina (BSE) do
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA). Este trabalho foi realizado no Laboratrio de
Patologia Veterinria da Universidade Federal de Santa Maria (LPV/UFSM), que o laboratrio de referncia
nacional para o diagnstico da BSE e outras encefalopatias espongiformes transmissveis e foi dividido em
quatro partes. Inicialmente, so descritos os principais eventos relacionados etiologia, epidemiologia, sinais
clnicos, patologia e controle da BSE para dar ao leitor uma idia da situao que levou o MAPA a implantar
esse programa de vigilncia. Na segunda parte, explicado em detalhes o funcionamento do programa de
vigilncia para a BSE no Brasil, com as principais instrues determinadas pelo MAPA relacionadas a esse
programa includas em anexos. A terceira parte descreve os achados macro e microscpicos observados nos
3.338 encfalos examinados. No exame macroscpico foram considerados os seguintes aspectos: distribuio,
cor, tamanho e consistncia e outros aspectos gerais de alteraes particulares. A anlise macroscpica tambm
incluiu descries de no-leses (estruturas anatmicas normais que podem ser interpretadas como leses),
leses de pouco significado clnico, alteraes postmortem e outros artefatos. Todas essas alteraes podem
confundir o patologista durante o exame do sistema nervoso central (SNC). Essa mesma metodologia foi
utilizada para descrever os achados microscpicos, incluindo a descrio de componentes normais do SNC e
suas reaes leso. A quarta seo constituda pelos trabalhos publicados que resultaram do exame
histolgico desses 3.338 encfalos durante o programa de vigilncia para a BSE nesses 5 anos. Os trabalhos
foram divididos em dois grupos: o primeiro grupo inclui os trabalhos que so parte direta desta tese e nos quais a
autora da tese (Rech R.R.) o primeiro autor. Estes trabalhos so: 1) Rech R.R. et al. 2004. Meningoencefalite
granulomatosa em bovinos em pastoreio de ervilhaca (Vicia spp). Pesq. Vet. Bras. 24:169-172, 2) Rech R.R. et
al. 2005. Febre catarral maligna em bovinos no Rio Grande do Sul: epidemiologia, sinais clnicos e patologia.
Pesq. Vet. Bras. 25:97-105, 3) Rech R.R. et al. 2006. Histomorfologia do gnglio de Gasser, da rete mirabile
carotdea e da hipfise de bovinos: estudo de 199 casos. Pesq. Vet. Bras. 26:105-111, 4) Rech R.R. et al. 2006.
Intoxicao por Solanum fastigiatum (Solanaceae) em bovinos: epidemiologia, sinais clnicos e morfometria das
leses cerebelares. Pesq. Vet. Bras., 26:183-189, 5) Rech et al. 2006. Raiva em herbvoros: 27 casos. Encontro
Nacional de Laboratrios de Diagnstico Veterinrio, Campo Grande, p. 43-44, e 6) Rech R.R. et al. 2007.
Poisonous plants affecting the central nervous system (CNS) of cattle in Brazil, p. 238-243. In: Panter K.E.;
Wierenga T.L. & Pfister J.A. (ed.). Poisonous Plants: Global Research and Solutions. Wallingford: CAB
International. O segundo grupo inclui trabalhos onde foi utilizado material do programa de vigilncia da BSE,
mas que foram desenvolvidos por outro estudante de ps-graduao do LPV/UFSM e no qual a autora da tese
co-autora. Estes trabalhos so: 1) Rodrigues A. et al. 2005. Babesiose cerebral em bovinos: 20 casos. Cincia
Rural 35:121-125, 2) Barros R.R. et al. 2006. Intoxicao por Ramaria flavo-brunnescens (Clavariaceae) em
bovinos. Pesq. Vet. Bras. 26:87-96, 3) Rissi D.R. et al. 2006. Epidemiologia, sinais clnicos e distribuio das
leses enceflicas em bovinos afetados por meningoencefalite por herpesvrus bovino-5. Pesq. Vet. Bras.
26:123-132, e 4) Barros R.R. et al. 2006. Carcinoma de clulas escamosas no olho de bovino com invaso
cerebral atravs dos nervos cranianos. Cincia Rural 36:1651-1654. Durante parte do programa de doutorado, a
autora realizou o programa de intercmbio com bolsa-sanduche da CAPES por 10 meses (03/2006 a 12/2006)

na The University of Georgia em Athens, Estados Unidos. Durante esse perodo, foi desenvolvido um protocolo
de imunoistoqumica para a deteco de antgeno da raiva em blocos de parafina com encfalos fixados em
formol. A descrio desse protocolo e os resultados parciais desse trabalho esto includos nesta tese. A maioria
das concluses desta tese esto nos trabalhos acima citados. Concluses adicionais so que o MAPA programou
e colocou em funcionamento um sistema de vigilncia para a BSE relativamente eficiente. No entanto, pontos
fracos do programa incluem um insuficiente nmero de encfalos encaminhados aos laboratrios credenciados
de bovinos que testaram negativo para raiva nos laboratrios oficiais de diagnstico de raiva no Brasil, de
bovinos importados e de bovinos submetidos ao abate de emergncia em frigorficos com servio de inspeo
federal. Do material examinado durante esses 5 anos, as doenas inflamatrias mais freqentes na regio de
abrangncia do LPV/UFSM foram raiva, meningoencefalite por herpesvrus bovino-5 e febre catarral maligna, e
as doenas degenerativas mais comuns so encefalopatia heptica e intoxicao por Solanum fastigiatum.
Palavras-chave: doenas de bovinos, neuropatologia veterinria.

ABSTRACT
Doctoral Thesis in Veterinary Medicine
Programa de Ps-Graduao em Medicina Veterinria
Universidade Federal de Santa Maria, RS, Brazil
CHANGES OBSERVED IN THE BRAINS OF CATTLE SUBMITTED TO
THE BRAZILIAN SURVEILLANCE PROGRAM FOR THE
TRANSMISSIBLE SPONGIFORM ENCEPHALOPATHIES

AUTHOR: Raquel Rubia Rech


ADVISER: Claudio Severo Lombardo de Barros
Santa Maria, February 23, 2007
This study stems from the findings during the gross and histopathological exam of 3,338 cattle brains as
part of the bovine spongiform encephalopathy (BSE) active surveillance program of the Brazilian Ministry of
Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) from 2001-2005. The work was carried out in the Veterinary
Pathology Laboratory (LPV) of the Federal University of Santa Maria (UFSM) which is the national reference
laboratory for the diagnosis of BSE and other transmissible spongiform encephalopathies. This work is presented
in four parts. Initially the key events about the significance, etiology, epidemiology, clinical signs, pathology,
and control of BSE are presented in order to provide the reader with the background that led the MAPA to
develop this surveillance program for BSE. In the second part, the mechanics of the surveillance program are
explained in detail and most of the written rules and ordinances issued by MAPA in order to strength the
surveillance for BSE are included as annexes. The third part deals with the gross and histopathological
examinations of the 3,338 cattle brains. Both gross and histopathological methodologies are described. Gross
exam considered distribution, color, form, size, consistency and other general aspects of any particular change.
Gross examinations included also non-lesions (anatomical normal structures that may be interpreted as lesions),
lesions of limited or no clinical significance, postmortem changes and other artifacts. All these are considered
pitfalls in the examination of the central nervous system (CNS). Accordingly equivalent pitfalls were described
in the histopathological examination; additionally the normal CNS components are described together with their
general reactions to injury. In the fourth part of the work, copies of papers that resulted from the systematic
examination of 3,338 cattle brains during the BSE active surveillance program are included. The papers are
allotted to two groups: the first group includes those primary papers that are a direct part of this thesis and in
which the thesis author is the senior author. These papers are: 1) Rech R.R. et al. 2004. Granulomatous
meningoencephalitis in cattle grazing vetch (Vicia spp). Pesq. Vet. Bras. 24:169-172, 2) Rech R.R. et al. 2005.
Malignant catarrhal fever in cattle in Rio Grande do Sul, Brazil: Epidemiology, clinical signs and pathology.
Pesq. Vet. Bras.25:97-105, 3) Rech R.R. et al. 2006. Histomorphology of the Gasserian ganglion, carotid rete
mirabile and pituitary gland in cattle: A study of 199 cases. Pesq. Vet. Bras. 26:105-111, 4) Rech R.R. et al.
2006. Poisoning by Solanum fastigiatum (Solanaceae) in cattle: Epidemiology, clinical signs and morphometry
of cerebellar lesions. Pesq. Vet. Bras., 26:183-189, 5) Rech et al. 2006. Rabies in herbivores: 27 cases.
Proceedings of the Annual National Meetings Veterinary Diagnostic Labs in Brazil, March 2006 (Abstract) and
6) Rech R.R. et al. 2007. Poisonous plants affecting the central nervous system (CNS) of cattle in Brazil, p. 238243. In: Panter K.E.; Wierenga T.L. & Pfister J.A. (ed.). Poisonous Plants: Global Research and Solutions.
Wallingford: CAB International. The second group of papers includes those that derived from the surveillance
BSE program but were developed by another Graduate Student of the LPV/UFSM and in which this thesis
author (RR) is a co-author. These papers are: 1) Rodrigues A. et al. 2005. Cerebral babesiosis in cattle: 20 cases.
Cincia Rural.35:121-125, 2) Barros R.R. et al. 2006. Ocular squamous cell carcinoma in a cow with cerebral
invasion through cranial nerves. Cincia Rural 36:1651-1654, 3) Barros R.R. et al. 2006. Poisoning by Ramaria
flavo-brunnescens (Clavariaceae) in cattle. Pesq. Vet. Bras. 26:87-96 and 4) Rissi D.R. et al. 2006.
Epidemiology, clinical signs and distribution of the encephalic lesions in cattle affected by meningoencephalitis
caused by bovine herpesvirus-5. Pesq. Vet. Bras. 26:123-132. During part of the Graduate Program that led to
this Thesis the author stayed for 10 months in a CAPES-Sandwich-Fellowship in The University of Georgia at

Athens, USA where a protocol for immunohistochemistry (IHC) for detection of rabies antigen in formalin fixed
paraffin blocks from bovine brain was established under the supervision of Prof. Corrie Brown. The description
of this protocol and the partial results of the IHC diagnosis for rabies in cattle are included in the text of this
Thesis. Most of the conclusions drawn from the work presented here are detailed in the papers listed above.
Additionally conclusions are that the MAPA design and implemented an adequate system for BSE surveillance.
Weak points in the program are that not enough samples from cattle that tested negative in the official
laboratories for rabies diagnosis in Brazil, from imported cattle and from cattle submitted to emergence slaughter
in abattoirs under federal Meat Inspection are arriving at the LPV/UFSM. From the material examined, it was
also concluded that the more frequent inflammatory diseases in the brain of cattle are rabies,
meningoencephalitis by bovine herpesvirus 5 and malignant catarrhal fever and the more frequent degenerative
diseases are hepatic encephalopathy and poisoning by Solanum fastigiatum.
Key words: diseases of cattle, veterinary neuropathology.

LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Nas encefalopatias espongiformes transmissveis (ou doenas prinicas), a PrP
(PrPc), uma protena normal de neurnios, convertida em uma isoforma anormal composta
de placas -plissadas (PrPsc) atravs da interao de PrPsc com PrPc. (Reproduzido de Zachary
J.F. 2007. Nervous system, p.833-971. In: McGavin M.D. & Zachary J.F. (ed.) Pathologic
Basis of Veterinary Disease. 4th ed. Mosby Elsevier, St Louis. 1476p)...................................21
FIGURA 2 Sinais clnicos, alteraes histolgicas no crebro e infectividade tecidual em
intervalos aps o desafio com o agente da BSE por via oral durante um estudo experimental
sobre patognese (reproduzido de Bradley R. 2002. Bovine spongiform encephalopathy.
Update. Acta Neurobiol. Exp. 62:183-195)..............................................................................24
FIGURA 3 Evoluo da epidemia no Reino Unido. Nmero total de casos: 184.453. Fonte:
www.oie.int. *Dados colhidos at setembro de 2006...............................................................27
FIGURA 4 Nmero de casos de BSE (1989-2006) relatados em bovinos ao redor do mundo
(excluindo o Reino Unido). Nmero total de casos: 5.601. Fonte: www.oie.int..................... 27
FIGURA 5 GBR (Geographical BSE Risk). No nvel I, representados pela cor verde, so
includos Argentina, Austrlia, Islndia, Nova Zelndia, Nova Calednia, Panam, Paraguai,
Cingapura, Uruguai e Vanuatu. No nvel II, representados pela cor verde-clara, so includos,
Botsuana, Brasil, Costa Rica, Crocia, El Salvador, ndia, Qunia, Colmbia, Maurcia,
Nambia, Nicargua, Nigria, Noruega, Paquisto, Suazilndia e Sucia. No nvel III,
representados pela cor azul, esto frica do Sul, Albnia, Alemanha, Andorra, ustria,
Bielorrssia, Blgica Bulgria, Canad, Chile, Dinamarca, Eslovquia, Eslovnia, Espanha,
Estados Unidos, Estnia, Finlndia, Frana, Holanda, Hungria, Irlanda, Israel, Itlia, Japo,

Letnia, Liechtenstein, Litunia, Luxemburgo, Macednia, Malta, Mxico, Polnia,


Repblica Tcheca, Romnia, So Marinho, Sua, Turquia e Chipre. No nvel IV esto Reino
Unido e Portugal. Fonte: www.efsa.eu.int................................................................................32
FIGURA 6 Organograma do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA)
com nfase nos servios veterinrios. Cortesia: Coordenao da Raiva dos Herbvoros e
outras Encefalopatias MAPA.................................................................................................37
FIGURA 7 Organograma do Departamento de Sade Animal (DSA) do Ministrio da
Agricultura, Pecuria e Abatecimento (MAPA) do Brasil. Cortesia: Coordenao da Raiva
dos Herbvoros e outras Encefalopatias MAPA.....................................................................38
FIGURA 8 Rede dos laboratrios credenciados pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento (MAPA) para o diagnstico das encefalopatias espongiformes transmissveis
em ruminantes. Os estados com a mesma cor pela qual representada um laboratrio, devem
enviar seus materiais para diagnstico naquele laboratrio. Cortesia: Coordenao da Raiva
dos Herbvoros e outras Encefalopatias - MAPA.....................................................................40
FIGURA 9 Programa de computador DXSNC. A. Pgina de tela de abertura do programa.
B. Pgina de cadastro da amostra. ............................................................................................43
FIGURA 10 Condio da amostra que chega ao laboratrio para o exame histolgico. Essa
amostra catalogada como partes anatmicas pertinentes no includas devido ausncia
do bulbo na altura do bex, local anatmico onde se realiza o diagnstico de BSE................47
FIGURA 11 Nmero de encfalos de bovinos examinados de 2001-2005 durante o
programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis, no Laboratrio de
Patologia Veterinria da Universidade Federal de Santa Maria.............................................215
FIGURA 12 Porcentagem de encfalos com e sem alteraes histolgicas examinados entre
2001-2005,

durante

programa

de

vigilncia

das

encefalopatias

espongiformes

transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal de Santa


Maria.......................................................................................................................................215

FIGURA 13 Nmero de encfalos de bovinos examinados em cada categoria da amostra


(em azul) e de encfalos com leses (em cor vinho), entre 2001-2005 durante o programa de
vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis no Laboratrio de Patologia da
Universidade Federal de Santa Maria.....................................................................................216
FIGURA 14 Categoria de leses encontradas em 279 encfalos de bovinos com alteraes
histolgicas examinados entre 2001-2005, durante o programa de vigilncia das
encefalopatias espongiformes transmissveis no Laboratrio de Patologia da Universidade
Federal de Santa Maria...........................................................................................................216
FIGURA 15 Nmero de encfalos de bovinos examinados entre 2001-2005, em cada
categoria da condio da amostra, durante o programa de vigilncia das encefalopatias
espongiformes transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade
Federal de Santa Maria...........................................................................................................219
FIGURA 16 Nmero de encfalos de bovinos examinados a cada ano (2001-2005), em cada
categoria da condio da amostra, durante o programa de vigilncia das encefalopatias
espongiformes transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade
Federal de Santa Maria...........................................................................................................219
FIGURA 17 Nmero de encfalos de bovinos examinados entre 2001-2005, por categoria
da amostra, durante o programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes
transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal de Santa
Maria.......................................................................................................................................220

LISTA DE QUADROS
QUADRO 1 Encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) em pessoas...................18
QUADRO 2 Encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) em animais..................19
QUADRO 3 Nomenclatura das diferentes isoformas da protena pron...............................22
QUADRO 4 Resumo dos testes rpidos para deteco postmortem de isoformas alteradas de
PrP no encfalo de bovinos.......................................................................................................31
QUADRO 5 Laboratrios credenciados para a vigilncia das encefalopatias espongiformes
transmissveis (EETs) e respectivos estados de atuao..........................................................40
QUADRO 6 Categorias de amostras recebidas pelos laboratrios credenciados como parte
do programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis..........................42
QUADRO 7 Lista de diagnsticos de doenas ou leses do sistema nervoso central de
ruminantes utilizada no programa DXSNC..............................................................................49
QUADRO 8 Procedimentos para explicar erros de registros em cadernos de anotaes, de
acordo com listagem numrica.................................................................................................51

LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Diagnsticos realizados em 279 encfalos de bovinos examinados entre 20012005, durante o programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis, no
Laboratrio

de

Patologia

Veterinria

da

Universidade

Federal

de

Santa

Maria.......................................................................................................................................217

TABELA 2 Diagnsticos por categoria da amostra realizados em 3.338 encfalos de


bovinos examinados entre 2001-2005, durante o programa de vigilncia das encefalopatias
espongiformes transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade
Federal de Santa Maria............................................................................................................217

SUMRIO

RESUMO...........................................................................................................................

ABSTRACT.......................................................................................................................

LISTA DE FIGURAS.......................................................................................................

LISTA DE QUADROS...................................................................................................... 11
LISTA DE TABELAS....................................................................................................... 12
1. INTRODUO.............................................................................................................

15

2. REVISO DE LITERATURA..................................................................................... 17
2.1 Encefalopatia espongiforme bovina (BSE)...............................................................

17

2.2 Servio de Vigilncia para BSE no Brasil................................................................. 37


3. ALTERAES MACROSCPICAS E MICROSCPICAS DO SISTEMA
NERVOSO CENTRAL DE BOVINOS (PROGRAMA DXSNC 2001-2005)..............

93

3.1 Exame macroscpico................................................................................................. 94


3.2 Exame microscpico.................................................................................................

102

3.3 Neurocitopatologia....................................................................................................

126

4. TRABALHOS E RESUMO PUBLICADOS............................................................... 143


4.1 Meningoencefalite granulomatosa em bovinos em pastoreio de ervilhaca (Vicia
spp.)................................................................................................................................

147

4.2 Febre catarral maligna em bovinos no Rio Grande do Sul: epidemiologia, sinais
clnicos e patologia.........................................................................................................

151

4.3 Histomorfologia do gnglio de Gasser, da rete mirabile carotdea e da hipfise de


bovinos: estudo de 199 casos.........................................................................................

160

4.4 Intoxicao por Solanum fastigiatum (Solanaceae) em bovinos: epidemiologia,


sinais clnicos e morfometria das leses cerebelares...................................................... 167
4.5 Poisonous plants affecting the central nervous system (CNS) of cattle in Brazil

174

4.6 Raiva em herbvoros: 27 casos.

180

14

4.7 Outros trabalhos ligados ao Programa DXSNC.......................................................

186

4.7.1 Babesiose cerebral em bovinos: 20 casos......................................................... 186


4.7.2 Intoxicao por Ramaria flavo-brunnescens (Clavariaceae) em bovinos........

191

4.7.3 Epidemiologia, sinais clnicos e distribuio das leses enceflicas em


bovinos afetados por meningoencefalite por herpesvrus bovino-5..........................

201

4.7.4 Carcinoma de clulas escamosas no olho de bovino com invaso cerebral


atravs dos nervos cranianos.....................................................................................

211

5. RESULTADOS DO PROGRAMA DXSNC (2001-2005)..........................................

215

6. DISCUSSO..................................................................................................................

221

7. CONCLUSES.............................................................................................................. 226
8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS........................................................................

227

15

1 INTRODUO
Em 1986, casos de uma doena com sinais clnicos peculiares e leses
histolgicas caractersticas no encfalo foram observados em bovinos por veterinrios
ingleses e pesquisadores do Central Veterinary Laboratory de Weybridge, na Inglaterra.
Essa doena foi rapidamente classificada como uma nova encefalopatia espongiforme
(Wells et al. 1987) e foi denominada como encefalopatia espongiforme bovina (BSE). O
que de incio era apenas mais uma curiosidade do restrito nmero de doenas
neurolgicas de bovinos, transformou-se, nos anos subseqentes, em uma epidemia
catastrfica. A percepo negativa da epidemia atingiu seu clmax quando, em 1996,
foram relatados, no Reino Unido, os 10 primeiros casos de uma nova forma de
encefalopatia espongiforme em pessoas (a variante da doena de Creuztfeldt-Jakob vCJD) (Will et al. 1996) que apresentava slidas evidncias de ser relacionada
ingesto de alimentos oriundos de bovinos infectados pelo agente da BSE; a doena dos
bovinos passava ento a ser percebida no s como uma doena epidmica, mas
tambm como uma zoonose.
O Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento do Brasil (MAPA)
reconheceu em seguida que teriam de ser adotadas medidas de vigilncia que
impedissem a entrada da BSE no pas e, ao mesmo tempo, permitissem seu rpido
reconhecimento e controle caso essa introduo ocorresse. O Laboratrio de Patologia
Veterinria (LPV) do Departamento de Patologia (DP) da Universidade Federal de
Santa Maria (UFSM) foi um colaborador de primeira hora do MAPA e j em janeiro de
1991 um docente do LPV/UFSM (Prof. Claudio Barros) fez parte de uma misso
Inglaterra para avaliar a situao da BSE. Em 2001, o LPV/UFSM comeou a liderar a
organizao de uma rede de laboratrios para diagnstico diferencial de doenas do
sistema nervoso central (SNC) de bovinos (incluindo BSE), ministrando cursos em
vrios locais do Brasil e editando manuais sobre a doena. O LPV/UFSM tornou-se o
laboratrio de referncia nacional do MAPA para o diagnstico das encefalopatias
espongiformes transmissveis. Isso levou a um aumento no nmero de encfalos
examinados pelo laboratrio e criou uma oportunidade para que assuntos relacionados
patologia do SNC de bovinos fossem estudados de maneira criteriosa e sistemtica. Este
trabalho o resultado desse estudo realizado em cinco anos (2001-2005).

16
De janeiro de 2001 at dezembro de 2005, foram examinados no LPV/UFSM,
3.338 encfalos de bovinos. Esse material formou o ncleo central deste estudo. Todos
os encfalos foram avaliados para determinar a morfologia, a distribuio e a freqncia
de alteraes do SNC de bovinos, a fim de fornecer dados teis que facilitem a
interpretao dessas alteraes por patologistas que tm a tarefa de examinar o SNC de
bovinos para fins de diagnstico. Alm disso, pretendeu-se fazer uma breve reviso
histrica da BSE para coloc-la no contexto desse estudo e descrever os mtodos de
vigilncia adotados pelo governo brasileiro para evitar a introduo da doena no pas.
O trabalho foi ento dividido em quatro partes: 1) reviso bibliogrfica sobre a BSE; 2)
descrio do programa de vigilncia para BSE institudo pelo MAPA; 3) descrio e
interpretao das alteraes relacionadas s doenas, no-leses e alteraes incidentais
do SNC dos bovinos examinados desde 2001 at 2005, e 4) publicao de trabalhos
cientficos de algumas doenas e leses observadas durante o servio de vigilncia, com
nfase na descrio de achados epidemiolgicos, clnicos e anatomopatolgicos que
facilitem o diagnstico diferencial das doenas que afetam o SNC de bovinos na rea de
abrangncia do LPV/UFSM.

17

2 REVISO DA LITERATURA

2.1 ENCEFALOPATIA ESPONGIFORME BOVINA (BSE)

2.1.1 BSE, uma ausncia marcante


Desde seu reconhecimento oficial em novembro de 1986 (Wells et al. 1987) a
BSE tem assombrado pessoas de vrios pases por diferentes razes. Mesmo em pases
como o Brasil, onde existe uma vigilncia relativamente eficiente para a BSE e onde
essa doena jamais foi diagnosticada, os consumidores de carne, as autoridades
sanitrias, os profissionais da veterinria e outros segmentos da sociedade convivem
com o espectro ameaador da BSE, mormente agora em que se sabe que a doena uma
zoonose (Will et al. 1996, Almond & Pattison 1997, Hill et al. 1997). Embora ausente
do pas, sua ameaa constante tem levado os governos brasileiros a investir
considerveis somas de dinheiro em mtodos de vigilncia e controle da BSE. Em razo
disso, durante os quase 20 anos de seu reconhecimento, a doena levou pesquisadores e
veterinrios em geral a olhar com mais interesse e cuidado para as doenas do sistema
nervoso central (SNC) em bovinos.
Sem dvida, uma grande parte do material apresentado nesta tese o subproduto
da perseguio a uma doena que nunca foi encontrada. No entanto, pelo caminho
encontraram-se outras enfermidades e leses que enriqueceram a nossa casustica de
doenas do SNC de bovinos e a nossa compreenso da anatomia, histologia e patologia
desse sistema to complexo. Esses acrscimos ao nosso conhecimento sobre o normal e
o alterado no SNC de bovinos so relatados nas sees seguintes. Mas, pelo exposto
acima justificvel que, antes disso, se faa uma breve reviso sobre a BSE.

2.1.2 Definio
A BSE uma doena neurodegenerativa progressiva de bovinos (Stevenson et
al. 2000). Casos foram observados pela primeira vez em 1985-86 na Inglaterra, em
bovinos que provavelmente haviam se infectado quando bezerros no inverno de 19811982 (Collee & Bradley 1997a). A BSE caracterizada clinicamente por nervosismo,

18
reao exagerada a estmulos externos, dificuldade de locomoo, principalmente nos
membros plvicos (Wells et al. 1987), e recebeu logo de incio a denominao
coloquial de doena da vaca louca. Pertence a um grupo de doenas denominadas
encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) ou doenas prinicas, i.,
causadas por prons (Woolhouse & Anderson 1997, Foster et al. 2001, Weissman et al.
2002, Soto 2004, Weissman 2004, Johnson 2005, Mabbot & McPherson 2006, Sa et
al. 2006). As TSEs ocorrem em seres humanos (Quadro 1) e animais (Quadro 2) e
caracterizam-se por serem doenas neurolgicas progressivas e invariavelmente fatais,
apresentarem um longo perodo de incubao (meses ou anos), desenvolver leses
(alteraes espongiformes) restritas ao SNC, serem transmissveis natural ou
experimentalmente e no induzirem resposta imune-inflamatria.
Quadro 1. Encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) em pessoas
Doena espordica
Doena de Creutzfeldt-Jakob (CJD).
(sem antecedentes prvios conhecidos)
Ocorre em todo o mundo com uma
incidncia de cerca de um caso por um
milho de pessoas
Doena adquirida pela contaminao com Kuru (canibalismo, epidmica na
o agente infeccioso
populao For de Papua-Nova Guin)
CJD iatrognica (transplantes,
administrao de hormnios)
Nova variante da CJD (vCJD, ingesto de
alimentos contaminados pelo agente da
BSE)
Doena familiar
CJD familiar. Representa 10%-15% de
(herdada geneticamente)
todos os casos de CJD
Sndrome de Gerstmann-StrusslerScheinker (GSS). Incidncia de cerca de
um caso por 10 milhes de pessoas
Insnia fatal familiar
Doenas prinicas atpicas. No se ajustam
facilmente aos critrios diagnsticos das
TSEs
Reproduzido de Ridley R.M. & Baker H.F. 1998. Fatal protein. The story of CJD, BSE and other prion
diseases, p. 3. Oxford University Press, Oxford, England. 249p.

19
Quadro 2. Encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs) em animais
Doena endmica rara de ovinos e caprinos.
Scrapie
Considerada o prottipo das TSEs
Encefalopatia transmissvel dos
Doena de visons criados para fins comerciais
visons (TME)
(pele). Provavelmente causada pela
alimentao dos visons com carne de ovelha
contaminada com scrapie
Doena depauperante crnica
Doena de origem obscura que afeta alces
(CWD)
selvagens e em cativeiro nos Estados Unidos e
Canad
Encefalopatia espongiforme dos
Doena epidmica em bovinos de leite,
bovinos (BSE)
principalmente no Reino Unido. Causada
provavelmente pela alimentao de bovinos
com raes contendo restos de ovinos
infectados por scrapie, de bovinos infectados
por BSE ou de ambos
Encefalopatia espongiforme felina Doena observada em gatos domsticos e em
(FSE)
alguns outros feldeos selvagens em cativeiro
(puma, guepardo e ocelote). Causada
provavelmente pela alimentao desses
animais com rao contendo material
contaminado por BSE
Encefalopatia espongiforme em
Identificada em vrios ruminantes de zoolgico
outras espcies
(por ex., kudu, rix rabe e cimitar). Causada
provavelmente pela alimentao desses
animais com rao contendo material
contaminado por BSE
Reproduzido de Ridley R.M. & Baker H.F. 1998. Fatal protein. The story of CJD, BSE and other prion
diseases, p. 8, Oxford University Press, Oxford, England. 249p.

2.1.3 Etiologia
A primeira transmisso de uma TSE foi conseguida por cientistas franceses
(Cuill & Chelle 1936), que inocularam um ovino intraocularmente com material de
crebro de outro ovino afetado por scrapie. O animal do experimento desenvolveu a
doena, mas somente 18 meses aps a inoculao, o que suscitou dvidas entre causa e
efeito. No entanto, no ano seguinte a transmissibilidade das TSEs foi acidentalmente
confirmada quando um veterinrio inoculou 18.000 ovinos na Esccia com uma vacina
contra uma doena viral daquela regio, a louping ill (Ridley & Baker 1998). Essa
vacina era feita com um extrato de crebro inativado com formol e uma partida fora
feita com crebros de ovinos afetados por scrapie. Surpreendentemente, 2-3 anos aps
a vacinao, 35% do rebanho vacinado desenvolveu scrapie, naquela poca j uma
conhecida encefalopatia espongiforme de ovinos. Subseqentemente, a scrapie foi

20
experimentalmente transmitida para ovinos e camundongos. A semelhana das leses
morfolgicas de scrapie com uma TSE de humanos (Hadlow 1959) denominada Kuru,
que ocorria na Nova Guin em pessoas que praticavam canibalismo ritualstico, levou
suspeita da natureza infecciosa da doena humana. Isso foi comprovado com a
reproduo da Kuru em chimpanzs pela inoculao de homogenados de crebros de
pessoas mortas por Kuru (Gajdusek et al. 1966). A confirmao da transmissibilidade
de outra TSE humana, a doena de Creutzfeldt-Jakob (CJD), foi um seguimento bvio
dessas pesquisas sobre a transmissibilide das TSEs (Gibbs et al. 1968). Assim essas
enfermidades comearam a ser percebidas como um grupo distinto de doenas.
No entanto, a natureza do agente etiolgico era desconhecida e controversa e
permanece controversa at os dias de hoje. O agente foi inicialmente denominado
vrus lento (Cho 1976) devido ao longo tempo decorrido entre a infeco e o
desenvolvimento dos sinais clnicos. Doenas produzidas por vrus lentos no traziam
a cognio de doena crnica, mas de doena em que os eventos patogenticos
desenvolvem-se em cmara lenta. A teoria viral, embora desacreditada por muitos,
no foi ainda totalmente abandonada por alguns pesquisadores. No entanto, o agente
difere dos vrus e de outros agentes convencionais. J em 1967, pesquisadores
relataram que o agente da scrapie era extremamente resistente a tratamentos que
normalmentre destruam os cidos nuclicos, como a luz ultravioleta e radiao (Alper
et al. 1967). Os achados desses autores indicavam que cidos nuclicos no eram
necessrios para a replicao do agente e conduziram a hipteses alternativas. Uma
delas que o agente fosse um virino, i., uma molcula de informao (muito
provavelmente um fragmento de cido nuclico) protegida por uma capa protica
(Kimberlin 1982). As dimenses diminutas do cido nuclico e a forte capa protica
poderiam explicar a resistncia aos procedimentos que normalmente destroem os
cidos nuclicos. Apesar disso, nenhum fragmento de cido nuclico foi encontrado
em mais de 30 anos de pesquisa que se seguiram.
J em 1967 foi proposto pela primeira vez que o agente responsvel pela
transmisso da scrapie era apenas uma protena capaz de replicar no organismo
(Griffith 1967). Esse trabalho lanou a hiptese conhecida hoje como hiptese de
apenas protena (protein only-hypothesis) que foi levada adiante pelos trabalhos de
Stanley Prusiner, que batizou a protena de pron, sigla em ingls para (proteinaceous
infectious particle) (Prusiner 1982) ou PrP. As evidncias para a hiptese de apenas
uma protena se acumularam ao longo dos anos subseqentes e geraram a hiptese

21
quase universalmente aceita como etiologia das TSEs. Foi demonstrado tambm que a
PrP pode existir em duas formas: a isoforma normal, um polipeptdeo de 33-35 kd,
encontrada principalmente em neurnios (denominada PrPc, c de clula) e uma
isoforma anormal, um polipeptdio de 27 a 30 kd denominado de PrPsc (sc de scrapie, a
doena prottipo das TSEs) que uma desfigurao na estrutura tridimensional da
protena normal (PrPc). Embora o mecanismo de formao da PrPsc no seja
completamente entendido, uma transformao ps-translacional da PrPc sugerida
(Figura 1). Esse mecanismo prope que a PrPsc atue como um molde sobre o qual a
estrutura da PrPc alterada: a disposio espacial de aminocidos em -hlice
predominante em PrPc alterada para uma disposio em placas -plissadas,
caractersticas da PrPsc. Um glossrio dos vrios tipos de prons est no Quadro 3 (Soto
2004).

Figura 1. Nas encefalopatias espongiformes transmissveis (ou doenas prinicas), a PrP


(PrPc), uma protena normal de neurnios, convertida em uma isoforma anormal
composta de placas -plissadas (PrPsc) atravs da interao de PrPsc com PrPc.
(Reproduzido de Zachary J.F. 2007. Nervous system, p.833-971. In: McGavin M.D. & Zachary J.F. (ed.)
Pathologic Basis of Veterinary Disease. 4th ed. Mosby Elsevier, St Louis. 1476p.

22

Quadro 3. Nomenclatura das diferentes isoformas da protena pron


PrP
Refere-se a todas as protenas pron e no distingue entre as diferentes isoformas.
PrPc
A isoforma celular normal que est presente em pessoas e animais sadios. Essa forma
rica em conformao em -hlice, solvel e sensvel s proteases.
PrPsc
A protena pron mal dobrada associada doena e que est presente em indivduos
afetados por TSEs. infecciosa, ocorre em grande parte com conformao em placas
-plissadas. insolvel e, na sua maior parte, resistente s proteases.
PrPres
Refere-se protena pron, resistente protease, rica em -plissada, que pode ou no
ser idntica PrPsc. Em particular esse termo se refere protena resistente protease
que produzida in vitro e que no foi comprovada experimentalmente como sendo
infecciosa.
PrP 27-30
o ncleo resistente protease que permanence aps o tratamento da PrPsc ou PrPres.
Consiste dos ltimos dois teros da protena.
Adaptado de Soto C. 2004. Diagnosing prion diseases: needs, challenges and hopes. Nature Reviews,
Microbiology 2:809-819.

A BSE tem sido transmitida experimentalmente, via parenteral, de bovinos para


camundongos, bovinos, sunos, ovinos e caprinos, visons, sagis, macaco cynomolgus,
e cobaias, mas no para hamsters e galinhas (Collee & Bradley 1997a, Wells &
Wilesmith 2004). Pela via oral o agente j foi transmitido (em alguns casos com doses
bastante altas) para bovinos, ovinos, cabras, camundongos e lmures (Microcebus
murinus) (Wells & Wilesmith 2004). Um grama de crebro de bovino infectado por
BSE suficiente para transmitir a doena por via oral para outro bovino (Wells 2003).
Algumas espcies, notavelmente sunos, ces e veados criados em fazenda no se
infectam. Sunos no foram afetados pelo menos at 6,5 anos depois do desafio por via
oral (Wells 2003).

2.1.4 Patognese
As TSEs so causadas pela transformao da PrPc em PrPsc e essas doenas so
caracterizadas por vacuolizao de neurnios, astrogliose, apoptose neuronal e
acmulo da protena corrompida no SNC. Esse acmulo assume, por vezes, a
conformao do amilide, i., placas - plissadas (Soto 2004).

23
Nas TSEs, na maioria das vezes, a infeco ocorre por via oral. Estudos em
humanos e em ovinos com scrapie indicam que os prons ingeridos por via oral so
absorvidos no intestino, principalmente nas placas de Peyer, e transportados pelo sangue
e pela linfa. Aps replicar em rgos do sistema reticuloendotelial (SRE) como bao,
apndice e tonsilas ou outros tecidos linfides, os prons so transportados para o
encfalo, principalmente pelos nervos perifricos (Aguzzi 2003). A penetrao no
encfalo atravs da barreira hematoenceflica tambm possvel (Mabbott &
MacPherson 2006).
Um estudo da patognese da BSE em bovinos (Wells et al. 1998, Wells 2003)
examinou o desenvolvimento espacial e temporal da infeco e as alteraes
patolgicas em bezerros de 4 meses aps inoculao oral com 100 g de homogenado
de crebro de bovino afetado por BSE. Os bezerros foram mortos seqencialmente em
intervalos de 4 meses e um grande nmero de tecidos foi colhido para ensaios
convencionais de infectividade em camundongos. O bezerro que mostrou os sinais
clnicos mais cedo adoeceu 35 meses aps a dosagem. A infectividade em tecidos noneurais esteve confinada poro distal do leo (6-18 meses e 36-40 meses aps a
dosagem). No SNC o aparecimento mais precoce da PrP anormal (32 meses aps
dosagem) coincidiu com a infectividade mais precoce e ocorreu antes de serem
observadas as alteraes histolgicas no crebro, aos 36, 38 e 40 meses aps a
dosagem. A infectividade foi tambm demonstrada em gnglios sensoriais do sistema
nervoso perifrico 32-40 meses aps a dosagem. Traos de infectividade foram
observados na medula ssea de bovinos sacrificados 38 meses aps a exposio. A
patognese da BSE em bovinos, embora parea em muitos aspectos semelhante da
scrapie e de outras TSEs de animais aps exposio oral (Soto 2004), difere pelo fato
de apresentar um mnimo envolvimento do SRE (Wells 2003).
Na Figura 2 (Bradley 2002) esto representados os intervalos de aparecimento,
sinais clnicos, alteraes histolgicas no encfalo e infectividade tecidual aps o
desafio com BSE por via oral.

24

Intervalo (meses aps o desafio)


10 14 18 22 26 32 35 36

2
6
38 40
Sinais clnicos
Alteraes no encfalo
leo distal
Bulbo
Medula espinhal
Gnglio da raiz dorsal
Gnglio trigeminal
Crtex frontal
Medula ssea
Figura 2. Sinais clnicos, alteraes histolgicas no crebro e infectividade tecidual em
intervalos aps o desafio com BSE por via oral durante um estudo experimental sobre
patognese (Reproduzido de Bradley R. 2002. Bovine spongiform encephalopathy. Update. Acta
Neurobiol. Exp. 62:183-195).

2.1.5 Epidemiologia
A BSE disseminou-se na populao bovina atravs da alimentao com raes
de farinha de carne ou de osso contaminadas pelo pron. A ingesto de 1 grama de
encfalo de um animal infectado suficiente para produzir a doena. No h evidncia
de que a BSE se dissemine horizontalmente, mas sugere-se que a transmisso maternal
ou vertical possa acontecer em nveis baixos (Wilesmith et al. 1997).
A fonte da infeco pode ter sido a entrada na cadeia alimentar (farinha de carne
e osso) de ovinos infectados com scrapie ou bovinos afetados por uma forma espordica
da doena, at ento no detectada. Alternativamente, ruminantes exticos de
zoolgicos afetados por uma TSE no detectada podem ter sido a fonte da infeco,
quando suas carcaas foram processadas para alimentao animal (Ridley & Baker
1998). Para testar a hiptese de que a BSE se originou de ovinos infectados por scrapie,
vrias fontes de scrapie em ovinos e caprinos foram transmitidas para bovinos por
injeo intracerebral ou outras vias parenterais, mas a transmisso no foi conseguida
por via oral e o agente no se alterou na sua primeira passagem de bovino para bovino
por inoculao intracerebral. Dessa forma, acredita-se que o isolado de BSE um
agente de TSE, que aps vrias passagens, tornou-se adaptado em bovinos. No se
exclui a possibilidade de que uma cepa de scrapie poderia ter produzido o fentipo da
BSE atravs de passagens seriadas em bovinos (Wells & Wilesmith 2004). A entrada
dos primeiros bovinos infectados na cadeia alimentar desencadeou a epidemia.

25
Com freqncia aparecem vrias teorias, impossveis de comprovar, mas
tambm difceis de refutar, sobre a origem do agente da BSE. Por exemplo,
recentemente (Colchester & Colchester 2005) foi sugerido que o agente da BSE tenha
se originado de restos de cadveres humanos provenientes do subcontinente indiano.
Nessa rea, por motivos religiosos, os restos de pessoas que morrem devem ser lanados
num rio, preferencialmente o Rio Ganges. Nas dcadas de 1960 e 1970, o Reino Unido
importou centenas de milhares de toneladas de ossos inteiros e modos e parte de
cadveres de mamferos. Cerca de 50% dessas importaes vieram da ndia e Paquisto
e foram comercializadas no Reino Unido como fertilizante e como alimento animal.
Muito desse material foi dragado de rios no subcontinente indiano e consistia de restos
humanos, que, segundo os autores, poderiam conter o pron (de uma pessoa com a
doena de Creutzfeldt-Jakob) que deu origem epidemia na Inglaterra. Essa teoria
bastante contestada (Shankar & Satishchandra 2005), mas foi publicada num peridico
cientfico (The Lancet) de prestgio.
Alteraes nos processos de fabricao das raes de farinha de carne e de osso
podem ter contribudo para o aparecimento da doena. Essas mudanas foram as
seguintes (Collee & Bradley 1997b): a farinha de carne e de osso era produzida na
Inglaterra a partir de carcaas de animais rejeitados para consumo ou mesmo mortos na
fazenda. Esse processo era feito por um tipo de indstria conhecido no Reino Unido e
nos Estados Unidos como rendering plants, que pode ser traduzido livremente por
graxaria, mas que so fbricas que recebem restos de animais de fazenda mortos,
doentes e em outras condies no-adequadas para consumo. O uso dessa farinha de
carne na alimentao de bovinos foi iniciado na Inglaterra em 1940 e interrompido
pela lei em julho de 1988, aps o surgimento da BSE. Nessa poca havia 46 graxarias
no Reino Unido. O material era fragmentado e processado em vrios sistemas em
temperaturas que variavam de pouco abaixo de 100C at 150C. O sebo derretido
(tallow) quando separado dos slidos ricos em protenas (greaves o resduo noderretido que sobra aps a gordura animal ser processada e, portanto pode ser
traduzido livremente por torresmo). A farinha de carne e de osso era feita moendo-se o
torresmo. Nesse estgio, o torresmo bruto poderia conter cerca de 14% de gordura,
mas o processamento do torresmo tradicionalmente inclua ainda mais um passo,
visando aumentar o ndice de gordura derretida extrada no processo atravs de calor
adicional prolongado (cerca de 8 horas a 70C) na presena de solvente de
hidrocarboneto. Aps esse processo, o torresmo continha menos que 1% de gordura. O

26
resduo de solvente no torresmo era recuperado por tratamento de vapor sob presso.
No final da dcada de 1970 e incio da dcada de 1980 esses dois passos no processo
(remoo da gordura do torresmo por solvente e recuperao do solvente por vapor)
foram omitidos por razes comerciais (o preo do sebo tinha cado) e de segurana (o
solvente de hidrocarbonetos era cancergeno). Assim, o agente da BSE que estivesse
presente nesse material, no seria mais submetido ao do solvente e tenderia a ficar
mais protegido no torresmo com porcentagem maior de gordura. Em 198182, a ltima
graxaria retirou o solvente do processo da fabricao de farinha de carne e osso, o que
estaria de acordo com o aparecimento da BSE em 198586.
Os primeiros casos de BSE ocorreram pela primeira vez na Inglaterra em 19851986 e 97% dos casos ocorreram no Reino Unido (Bradley 2002), embora a doena j
tenha se espalhado por 24 pases (Alemanha, ustria, Blgica, Canad, Dinamarca,
Eslovquia, Eslovnia, Espanha, Estados Unidos, Finlndia, Frana, Grcia, Holanda,
Irlanda, Israel, Itlia, Japo, Liechtenstein, Luxemburgo, Polnia, Portugal, Repblica
Tcheca, Sucia, Sua), num nmero relativamente pequeno de bovinos nativos.
Acredita-se que nesses casos o agente infeccioso foi adquirido por via oral na rao de
farinha de carne e de osso importada da Gr-Bretanha. altamente provvel que a alta
incidncia de BSE no Reino Unido tenha ocorrido pela concatenao de diversas
circunstncias, que ocorreram somente nessa rea e incluem: alta taxa de ovinos em
relao aos bovinos, alta prevalncia de scrapie na populao ovina, e a massiva
alimentao dos bovinos com farinha de carne e osso e as mudanas no seu processo
de fabricao (Wells & Wilesmith 2004). A evoluo da epidemia pode ser
acompanhada nas Figuras 3 e 4. O uso dessa farinha de carne e osso para animais de
produo foi banido em janeiro de 2001 em toda a Unio Europia. Por isso
improvvel que grandes epidemias, como a que ocorreu no Reino Unido, ocorram em
outros pases.
No curso da epidemia da BSE, at dezembro de 2002, 43 e 93 casos de
encefalopatia espongiforme foram diagnosticados em ruminantes selvagens mantidos
em cativeiro e em gatos (domsticos e selvagens), respectivamente. Estudos
epidemiolgicos demostraram que esses animais foram expostos com a mesma
alimentao usada para bovinos ou a rao comercial utilizada na indstria pet que
continha tecidos bovinos considerados de alto risco (ex.: cabeas) (Wells e Wilesmith
2004). Em relao vCJD, 146 pessoas foram diagnosticadas com a doena no Reino
Unido e mais 10 no resto do mundo (Prusiner 2004).

27

40000

37280
35090

35000
30000
25359

25000

24438

20000
14407

14562

15000
8149

10000
5000

7228
4393
3235
2301
144312021144 611
343 225 83

2514
446

0
87
19

s 8 9 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 1 2 3 4 5 *
nte 198 198 199 199 199 199 199 199 199 199 199 199 200 200 200 200 200 200 006
a
2
e

Figura 3. Evoluo da epidemia no Reino Unido. Nmero total de casos: 184.453.


Fonte: www.oie.int. *Dados colhidos at setembro de 2006.

1600

1587

1400
1200
996 976
1000
800
600

654
464 404

400
200
0

134 131

80 49

31 24 23 15 10

A ia el ia
da al a ha a ha lia ca da ia o ca uia rca d ia ria go ein
an rtug ran pan Su man It lgi olan oln Jap che vq ma ana ovn ust bur enst EU lnd Isra rc
l
r
G
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F Es
a
I Po
n
em ht
e
C sl
B H
P
p. Eslo Din
Fi
c
E
x
Al
Re
Lu Lie

Figura 4. Nmero de casos de BSE (1989-2006) relatados em bovinos ao redor do


mundo (excluindo o Reino Unido). Nmero total de casos: 5.601. Fonte: www.oie.int

28
Menos que 50 casos de BSE em bovinos importados do Reino Unido foram
relatados em outros pases. Considerando que mais que 50.000 bovinos foram
exportados pela Inglaterra no perodo crtico aps 1985, surpreendente que um
nmero to pequeno de casos tenham sido relatados em outros pases. tambm
surpreendente que relativamente poucos casos de BSE tenham sido relatados em
bovinos de outros pases da Europa e da Amrica do Norte, uma vez que grande
quantidade de farinha de carne e de osso (> de 71.000 toneladas) tenha sido exportada
pelo Reino Unido para esses pases at 1990 (Collee & Bradley 1997a).
A idade mdia de ocorrncia da BSE 5 anos; a idade do bovino mais novo
afetado era 20 meses e a do mais velho 18 anos. No foi detectada predileo por raa
ou sexo. Bovinos adultos de leite eram principalmente afetados na epidemia porque
essa categoria recebia, quando bezerro, farinha de carne e de osso que continha o
agente e porque geralmente bovinos dessa categoria vivem mais e alcanam a idade de
desenvolvimento da doena. Na Inglaterra, bezerros machos paridos por vacas leiteiras
so abatidos para consumo ao redor de dois anos de idade. Poucos animais so
afetados por rebanho. Trinta e cinco por cento das fazendas tiveram apenas um caso e
69% tiveram 4 casos ou menos (Collee & Bradley 1997a). A baixa incidncia por
rebanho (<3% em qualquer determinado perodo de 6 meses desde que a epidemia no
Reino Unido comeou) atribuda baixa exposio dos bovinos a pacotes de
infectividade que eram amplamente espaados em diferentes partidas de rao
(Kimberlin & Wilesmith 1994).

2.1.5 Sinais clnicos


O perodo de incubao da BSE , em mdia 5 1,6 anos (Wells & Wilesmith
2004). Aps o aparecimento dos sinais clnicos, a doena evolui invariavelmente para
a morte num curso de 3 semanas a 6 meses. Bovinos afetados por BSE sofrem de
degenerao progressiva do SNC e podem apresentar alteraes do comportamento, da
sensibilidade e da locomoo (Davis et al. 1991, Wells et al. 1987).
Os distrbios do comportamento incluem nervosismo, medo ou agressividade,
postura anormal, incoordenao e dificuldade em levantar. Bovinos com BSE so
freqentemente muito nervosos, alertas e excitveis, alteraes que podem se
manifestar por um tipo de movimento espasmdico de todo o corpo. Esses distrbios

29
no comportamento so mais evidentes quando o bovino perturbado. Lamber
freqente do focinho, franzir do nariz e ranger de dentes so sinais clnicos comuns.
Outros sinais clnicos possveis de ocorrer so salivao e um olhar assustado com
olhos esbugalhados. Alguns bovinos exibem movimentos nervosos das orelhas. Nos
estgios terminais da BSE, o bovino apresenta dificuldade em levantar-se ou pode
permanecer em decbito permanente. Sinais clnicos relacionados com distrbios da
sensibilidade incluem reao exagerada ao toque (a mais comum), ao som e luz. Os
distbios da locomoo comumente observados so andar rgido, incoordenao,
hipermetria e ataxia generalizada. A hipermetria mais acentuada nos membros
plvicos e confere aos bovinos um passo alto, semelhante ao observado em cavalos
com harpejamento. A ataxia grave evolui para quedas e finalmente paresia dos
membros plvicos e decbito.

2.1.6 Patologia
No h leses macroscpicas diretamente relacionadas doena, mas as leses
microscpicas da BSE so bastante especficas (Wells et al. 1989, Wells et al. 1991,
Simmons et al. 1996). So leses degenerativas, simtricas e bilaterais e localizam-se
em certas regies da substncia cinzenta do tronco enceflico (Wells et al. 1989, Wells
et al. 1991). Qualitativamente essas alteraes consistem de alterao espongiforme,
vacuolizao neuronal, reao astrocitria e degenerao neuronal (Wells & Wilesmith
2004). Duas apresentaes de vacuolizao neuronal so observadas. Na neurpila, h
vacolos nos neuritos de at 20 m de dimetro (alterao espongiforme). No
pericrio, ocorrem vacolos maiores, solitrios ou mltiplos, que chegam a 30-40 m
de dimetro. Esses vacolos distendem o pericrio, produzindo neurnios balonosos
que conservam apenas uma fina margem de citoplasma. A presena de vacolos na
neurpila da substncia cinzenta e no pericrio dos neurnios so os critrios para o
diagnstico positivo de BSE, no exame histolgico (Wells et al. 1991).
A distribuio das leses bastante regular. As reas mais afetadas so o
ncleo do trato solitrio, trato espinhal do nervo trigmeo, ncleo vestibular, formao
reticular do bulbo, substncia cinzenta periaqueductal do mesencfalo, rea
paraventricular do tlamo e septo talmico. A densidade de vacolos maior no bulbo,
mesencfalo e tlamo. A medula espinhal foi avaliada em apenas 10 casos confirmados

30
da doena e as alteraes vacuolares foram confinadas ao corno dorsal da substncia
cinzenta nas regies cervical, torcica e lombar (Wells & Wilesmith 2004).
O mapeamento das leses em 684 crebros afetados por BSE revelou que, em
99,6% dos casos, o corte do bulbo no nvel do bex apresentou as alteraes
caractersticas da doena, principalmente as alteraes espongiformes no ncleo do
trato solitrio e no trato espinhal do nervo trigmeo, indicando que esse o corte do
encfalo mais importante para o diagnstico (Wells et al. 1991). Estudos em
camundongos e ovinos tm demonstrado que h dois principais determinantes para o
padro da leso observada nas TSEs: o gentipo do hospedeiro (principalmente em
relao ao gene PRNP) e o agente ou cepa do pron. A uniformidade das leses da BSE
sugere que h pouca variao no gentipo do hospedeiro e que h um nico agente ou
cepa de pron (Wells & Wilesmith 2004). Em 2004, surgiram casos de BSE na Itlia
que demonstraram padro de localizao do PrPsc na imunoistoqumica diferente do
padro observado em casos antes observados, que consistem de depsitos granulares
no pericrio e na neurpila. Esses casos atpicos caracterizavam-se por depsitos de
placas amilides, depsitos gliais e granulares extracelulares no tlamo, substncia
branca subcortical e camadas profundas do crtex cerebral. O padro bioqumico foi
similar ao encontrado nos casos espordicos de CJD (Casalone et al. 2004). Esse novo
fentipo de BSE ficou conhecida com BASE (bovine amyloidotic spongiform
encephalopathy encefalopatia espongiforme amiloidtica bovina). Trs casos
atpicos de BSE tambm foram observados na Frana e um no Japo (Biacabe et al.
2004, Yamakawa et al. 2003).
Ultra-estruturalmente, a BSE caracterizada por numerosos vacolos nos
processos neuronais, reao astrocitria caracterizada por processos com abundantes
filamentos gliais, distrofia neuroaxonal e estruturas tubulovesiculares. Vacolos
intracelulares com membrana foram observados predominantemente nos dendritos e
dentro de poucos axnios mielinizados. Esses vacolos continham fragmentos de
membrana circulares, cmaras secundrias, vesculas e material amorfo (Liberski et al.
1992).

2.1.7. Diagnstico
No h ainda teste para diagnosticar BSE no bovino vivo. A doena clnica pode
ser confirmada postmortem pelo exame microscpico do tecido enceflico ou pela

31
deteco da isoforma anormal do pron (PrPsc), que pode ser feita por microscopia
eletrnica ou por mtodos imunolgicos. Quando extratos de crebros de animais
afetados com TSEs so examinados ao microscpio eletrnico, as PrPsc aparecem como
estruturas em forma de bastonete denominadas SAFs (scrapie associated fibrils).
Mtodos imunolgicos incluem a deteco da protena (PrPsc) por imunoistoqumica,
por western immunoblotting (Farquar et al. 1989, Grassi et al. 2001), pelos chamados
testes rpidos baseados em ELISA ou em immunoblotting (Quadro 4). Alguns desses
testes podem fornecer resultados acurados e rpidos (alguns em menos de duas horas) e
testar grande nmero de animais com relativamente pouca mo-de-obra tcnica.
Quadro 4. Resumo dos testes rpidos para deteco postmortem de isoformas alteradas
de PrP no encfalo de bovinos
Tcnica
Princpio
Limite de
Vantagens
Desvantagens
deteco
Prionics-Check Eletroforese em
5.020
Boa
Poucos testes
Western test
gel e Western
pmol
reproducibilidade, por unidade de
blot
baixos ndices de
tempo, baixa
falsos positivos
sensibilidade
Enfer test
ELISA simples
1.010
Rpido e simples
Potencial para
pmol
falsos positivos
CEA/Biorad test ELISA
sanduche
usando dois
anticorpos
diferentes
Prionics-Check ELISA
LIA test
sanduche
usando dois
anticorpos
diferentes

0.52.0
pmol

Alta sensibilidade

1.05.0
pmol

Rpido,
automatizado e
simples

Conformational- Ligao
dependent
diferencial de
immunoassay anticorpo a PrP
nativo e
desnaturado

0.55.0
pmol

Independente da
digesto da
protease, alta
sensibilidade

Mais demorado
e mais
trabalhoso;
potencial para
falsos positivos
Variabilidade
dependendo da
preparao da
amostra;
potencial para
falsos positivos
Complicado e
envolve mais
passos que os
outros testes

Reproduzido de Soto C. 2004. Diagnosing prion diseases: needs, challenges and hopes. Nature Reviews,
Microbiology 2:809-819.

2.1.8 Avaliao de risco dos pases e controle da BSE

32
A avaliao de risco de um pas em relao BSE feito atravs do GBR
(Geographical BSE Risk) que um indicador qualitativo da probabilidade da presena
de um ou mais bovinos infectados com BSE, num determinado momento, num pas.
Essa forma de avaliao foi criada pela Unio Europia. Nesse sistema, os pases so
includos em uma das quatro categorias do GBR que determinam o risco de cada pas.
No nvel I so includos pases em que a ocorrncia de BSE altamente improvvel; no
nvel II, pases em que a possibilidade da BSE improvvel mas no excluda; no nvel
III, pases em que a possibilidade de BSE provvel, mas no confirmada ou
confirmada em baixos nveis e no nvel IV, pases em que a BSE confirmada em altos
nveis. A Figura 5 mostra os pases classificados e os respectivos nveis para o GBR.

Figura 5. GBR (Geographical BSE Risk). No nvel I, representados pela cor verde, so
includos Argentina, Austrlia, Islndia, Nova Zelndia, Nova Calednia, Panam,
Paraguai, Cingapura, Uruguai e Vanuatu. No nvel II, representados pela cor verdeclara, so includos, Botsuana, Brasil, Costa Rica, Crocia, El Salvador, ndia, Qunia,
Colmbia, Maurcia, Nambia, Nicargua, Nigria, Noruega, Paquisto, Suazilndia e
Sucia. No nvel III, representados pela cor azul, esto frica do Sul, Albnia,
Alemanha, Andorra, ustria, Bielorrssia, Blgica Bulgria, Canad, Chile, Dinamarca,
Eslovquia, Eslovnia, Espanha, Estados Unidos, Estnia, Finlndia, Frana, Holanda,
Hungria, Irlanda, Israel, Itlia, Japo, Letnia, Liechtenstein, Litunia, Luxemburgo,
Macednia, Malta, Mxico, Polnia, Repblica Tcheca, Romnia, So Marinho, Sua,
Turquia e Chipre. No nvel IV esto Reino Unido e Portugal. Fonte: www.efsa.eu.int

33
At 2005, o Brasil era includo no nvel I do GBR. Em meados de 2005, aps
um relatrio oficial da Unio Europia, o Brasil foi rebaixado para o nvel II. Segundo
esse documento (EFSA scientific report, 2005), a vigilncia brasileira em relao
BSE foi passiva de 1980 a 2000 e a partir de 2001 comeou a vigilncia ativa.
No h tratamento ou vacina para impedir o aparecimento da BSE. A proteo
dos pases que ainda no possuem casos de BSE depende da execuo de medidas para
prevenir a introduo da doena no pas que inclui no importar bovinos de pases com
casos de BSE ou de pases cuja situao epidemiolgica seja desconhecida; se
ocorrerem importaes, determinar medidas para que o agente no se recicle, banindo
a alimentao de ruminantes com protena de origem animal ou com cama de frango e
impedir a permanncia de cadveres no campo.
H a possibilidade da ocorrncia de casos espordicos de BSE quando prons
patognicos se originam espontaneamente em uma populao bovina, e esses bovinos
podem no ser detectados na amostragem de testes convencionais (histopatologia e
imunoistoqumica). Por isso, recomendvel o uso dos testes rpidos em frigorficos
para aumentar a amostragem dos bovinos a serem testados. No entanto, esses testes
possuem limitaes, pois dependem de altos nveis de PrPsc acumulados no crebro do
bovino. So ideais para serem usados em bovinos velhos (Prusiner 2004). Para
deteco de bovinos assintomticos jovens, pesquisas para amplificar PrPsc no sangue
in vivo tm sido desenvolvidas. Dessa forma, um teste sangneo poderia ser utilizado
para deteco da PrPSc antes do sacrifcio do animal (Sa et al. 2006).
A mais nova tecnologia publicada para o controle e utpica erradicao da BSE
a produo de bovinos knockout para PrPc (PRNP-/-). Bezerros produzidos dessa
maneira,

estavam

clinicamente,

fisiologicamente,

histopatologicamente,

imunologicamente e reprodutivamente normais at os 20 meses de idade. Clulas do


crebro dos bovinos PRNP-/- foram resistentes propagao in vitro de duas diferentes
cepas de pron, PrPBSE e PrPTME. Esses bovinos poderiam ser usados na produo de
leite, gelatina, colgeno, soro e plasma. Alm disso, esses bovinos tornariam
impossvel a ocorrncia de casos espontneos de BSE, devido falta de PrPc
endgena; j que h indcios de que os casos de BSE do Alabama e Texas (EUA)
sejam casos atpicos (Richt et al. 2007).

2.1.9 Referncias bibliogrficas

34
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37
2.2 SERVIO DE VIGILNCIA PARA A BSE NO BRASIL
2.2.1 Programa Nacional de Controle da Raiva dos Herbvoros e outras
Encefalopatias (PNCRH)
O PNCRH um dos programas da rea da sade animal do Ministrio da
Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) (Figura 6) vinculado ao Departamento
de Sade Animal (DSA). Esse programa, que at o advento da BSE era dedicado
exclusivamente ao controle da raiva dos herbvoros, foi ampliado em 09/12/97, pela
Portaria Ministerial 516, (Anexo 1) para atender s exigncias da vigilncia da BSE e da
scrapie. Essa portaria foi alterada pela Instruo Normativa (IN) 005, de 1. de maro de
2002 (Anexo 2). O PNCRH coordenado pela Coordenao da Raiva dos Herbvoros e
outras Encefalopatias (CRHE) que foi criada em fevereiro de 2005, e faz parte da
Coordenao Geral de Combate s Doenas (Figura 7) do DSA, da Secretaria de Defesa
Agropecuria (SDA).
Ministro

Assistncia Direta

Secretaria
Executiva

Secretarias Especiais

Secretaria de

Secretaria de
Poltica

Produo e
Agroenergia

Secretaria de
Superintendncias
Federais de
Agricultura, Pecuria
e Abastecimento em
cada Estado (SFAs)

Desenvolvimento

Secretaria de Relaes
Internacionais do
Agronegcio

Agropecurio e
EMBRAPA
Empresa Brasileira
de Pesquisa
Agropecuria

Cooperativismo

Secretaria de Defesa
Agropecuria

Departamento de

Departamento

Departamento

Inspeo de Produtos

de Sade

de Fiscalizao

de Origem Animal

Animal

de Insumos

Coordenao
Geral de Apoio
Laboratorial
(CGAL)

Figura 6. Organograma do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento


(MAPA) com nfase nos servios veterinrios. Cortesia: Coordenao da Raiva dos
Herbvoros e outras Encefalopatias MAPA.

38
Nessa rea, h mais oito programas: Programa Nacional de Educao Sanitria
Animal (PNESA), Programa Nacional de Sanidade Avcola (PNSA), Programa
Nacional de Sanidade dos Caprinos e Ovinos (PNSCO), Programa Nacional de
Sanidade Sudea (PNSS), Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e
da Tuberculose (PNCEBT), Programa Nacional de Sanidade dos Eqinos (PNSE),
Programa Nacional de Erradicao da Febre Aftosa (PNEFA) e Programa Nacional de
Sanidade dos Organismos Aquticos (PNSOA).

Figura 7. Organograma do Departamento de Sade Animal (DSA) do Ministrio da


Agricultura, Pecuria e Abatecimento (MAPA) do Brasil. Cortesia: Coordenao da
Raiva dos Herbvoros e outras Encefalopatias MAPA.
As principais atribuies da CRHE podem ser verificadas acessando o stio
oficial do MAPA (www.agricultura.gov.br). Este stio tambm inclui noes bsicas
para o diagnstico da BSE, os laboratrios credenciados para a vigilncia da BSE no
pas e a verso online de formulrios, procedimentos e manuais, incluindo a segunda
edio do Manual de Procedimentos para o Diagnstico das Doenas do Sistema
Nervoso Central de Bovinos de autoria do professor Claudio Barros, do Departamento
de Patologia da UFSM, e do Coordenador Geral de Combate s Doenas, Dr. Guilherme
Marques. Esse manual, editado em portugus, espanhol e ingls, inclui informaes
bsicas sobre a BSE e as doenas do SNC de bovinos mais freqentes no Brasil, a
tcnica de coleta do encfalo de bovinos para exame laboratorial e o processamento do
encfalo para o diagnstico histolgico das doenas do SNC de bovinos. A verso

39
impressa do manual tambm distribuda gratuitamente a mdicos veterinrios do
MAPA e a todos os mdicos veterinrios da iniciativa privada que participam do curso
para padronizao das atividades do PNCEBT e noes bsicas sobre BSE.

2.2.2 Laboratrios brasileiros credenciados para o diagnstico das encefalopatias


espongiformes transmissveis (EETs)
Para realizar a vigilncia epidemiolgica das doenas do SNC de bovinos, o
MAPA por meio da IN SDA n. 15, de 15 de fevereiro de 2002 (Anexo 3), credenciou
trs laboratrios de Patologia Veterinria no Brasil: o da Universidade Federal de Santa
Maria (UFSM) sob a coordenao do Prof. Claudio Severo Lombardo de Barros, o da
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (SPV/UFRGS), sob a coordenao do Prof.
David Driemeier e o da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul (UFMS) sob a
coordenao do Prof. Ricardo Antnio Amaral de Lemos, posteriormente substitudo
pelo Prof. Eurpedes Batista Guimares. O Laboratrio de Patologia Veterinria da
UFSM o laboratrio de referncia que tem como atribuies receber casos suspeitos
de BSE e de scrapie de outros laboratrios. Conforme as leses histolgicas observadas,
realizado o diagnstico ou o envio do material em blocos de parafina para o
SPV/UFRGS para a realizao de imunoistoqumica.
Em 2003, por meio da mesma instruo normativa, foram incorporados ao
programa mais trs laboratrios: o da Universidade Federal de Campina Grande
(UFCG) sob a coordenao do Prof. Franklin Riet-Correa, o do Instituto Mineiro de
Agropecuria (IMA/MG) sob a coordenao do Prof. Anilton Csar Vasconcelos e o do
Instituto Biolgico de So Paulo (IB/SP) sob a coordenao do Dr. Romeu Macruz,
posteriormente substitudo pela Dra. Claudia del Fava. Em 2005, o Laboratrio
Nacional Agropecurio (LANAGRO) do Recife/PE sob a coordenao da Dra. Ana
Karina Cunha Callado assumiu as funes antes realizadas pelo laboratrio da UFCG.
Os atuais laboratrios e respectivos estados de atuao esto no Quadro 5 e Figura 8.
Alm de receber materiais dos estados listados no Quadro 5, cada laboratrio faz a
vigilncia das doenas em bovinos na sua rea regional de abrangncia, atravs da
realizao de necropsias e recebimento de material de mdicos veterinrios da regio. O
endereo completo e contato dos laboratrios com os respectivos responsveis esto
listados no Anexo 4 e tambm podem ser acessados no stio do MAPA.

40
Quadro 5. Laboratrios credenciados para a vigilncia das
encefalopatias
espongiformes transmissveis (EETs) e respectivos estados de atuao.
Laboratrio
Estados de procedncia do material para exame histopatolgico
UFSM
RS, SC, PR, GO
UFRGS
RS, MT, RJ, ES
UFMS
MS, RO, AC
LANAGRO/PE Regio Nordeste, AM, PA, RR, TO, AP
IMA/MG
MG
IB/SP
SP

Figura 8. Rede dos laboratrios credenciados pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e


Abastecimento (MAPA) para o diagnstico das encefalopatias espongiformes
transmissveis em ruminantes. Os estados com a mesma cor pela qual representada um
laboratrio, devem enviar seus materiais para diagnstico naquele laboratrio. Cortesia:
Coordenao da Raiva dos Herbvoros e outras Encefalopatias - MAPA

41
Pela IN SDA n 18, de 27 de feveveiro de 2004 (Anexo 5), o Setor de Patologia
da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foi credenciado para realizar o exame de
imunoistoqumica para as EETs.
O PNCRH possui um comit Cientfico Consultivo sobre Encefalopatias
Espongiformes Transmissveis (CEET) formado pela instruo de Servio DDA n 07,
de 06 de maro de 2003 e substituda pela portaria DDA n. 69, de 17 de agosto de 2004
(Anexo 6). Esse comit constitudo pelos seguintes profissionais: Claudio Severo
Lombardo de Barros, profissional especializado do laboratrio de referncia nacional
para o diagnstico de EET (UFSM), Amauri Alcindo Alfieri, profissional especializado
em virologia e medicina veterinria preventiva (UEL), Antnio Carlos Alessi,
profissional especializado em diagnstico de EET (UNESP/Jaboticabal), Cleber
Oliveira Soares, profissional especializado em medicina veterinria preventiva
(EMBRAPA Gado de Corte/MS), Vicente Mateo Astudillo Calds, profissional
especializado em epidemiologia, (Centro Panamericano de Febre Aftosa/RJ), Edwiges
Maristela Pituco, profissional especializada em virologia (IB/SP) e Vitor Salvador Pico
Gonalves, profissional especializado em epidemiologia, (UNB/DF). O CEET tem
funo de assessorar o MAPA em assuntos relacionados s EETs. Os membros desse
comit renem-se periodicamente para discutir assuntos relacionados legislao
nacional das EETs e direes sugeridas por rgos internacionais como Escritrio
Internacional de Epizootias (OIE) e Comunidade Europia.

2.2.3 Recebimento do material nos laboratrios, protocolamento das amostras e


armazenamento dos dados
Os encfalos so provenientes de necropsias de ruminantes realizadas por (1)
docentes em hospitais veterinrios de cada universidade ou de visitas a fazendas, (2)
veterinrios dos servios oficiais (MAPA ou Secretaria de Agricultura), (3) veterinrios
do servio privado ou de cooperativas, e (4) de encfalos submetidos rede de
laboratrios de diagnstico de raiva. Aps o recebimento, o frasco contendo o material
etiquetado com o nmero do DX (ex. DX0097/05). O mesmo nmero anotado no
formulrio de encaminhamento do material onde constam todos os dados do ruminante
(espcie, sexo, idade, raa), e proprietrio, veterinrio remetente e procedncia (Anexo
II do Anexo 3). Aps o recebimento do nmero do DX, os dados do formulrio so

42
repassados para um livro Ata e para um programa de computador denominado DXSNC,
que um banco de dados construdo no programa Access do Office. O livro Ata deve
conter, no mnimo, as seguintes informaes: nmero do DXSNC, protocolo do
remetente, nome do veterinrio remetente e procedncia (municpio/estado), nome da
pessoa que recebeu o material no laboratrio, nome do proprietrio remetente e
procedncia (municpio/estado), espcie, sexo, idade e raa do ruminante, data de
recebimento, de encaminhamento do material, data de sada do diagnstico e o resultado
(Anexo III do Anexo 3). Essas informaes e outras informaes adicionais como
categoria da amostra, condies de recebimento da amostra, endereo completo do
proprietrio, nmero do SIF (servio de Inspeo Federal) remetente (se for o caso) e
encaminhamento ou no para imunoistoqumica so tambm preenchidos no programa
de computador. As categorias de amostras esto listadas no Quadro 6. A Figura 9
demonstra a pgina de abertura e os dados a serem preenchidos no programa DXNSC.
Quadro 6. Categorias de amostras recebidas pelos laboratrios credenciados como parte
do programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis
N da categoria
Caracterstica da categoria
Categoria 1
Encfalo de bovino com sinais clnicos de distrbios nervosos
que apresentaram resultado negativo para raiva em laboratrios
da rede oficial
Categoria 2
Encfalo de bovino com sinais clnicos de distrbios nervosos
Categoria 3
Encfalo de bovino com doena depauperante, crnica ou
caquetizante ou em decbito.
Categoria 4
Encfalo de animais importados de pases de risco para BSE
Categoria 5*
Encfalo de bovino proveniente de abatedouro
Categoria 6
Encfalo de bovino proveniente de abate de emergncia
Categoria 7
Encfalo de ovino com sinais clnicos de distrbios nervosos
Categoria 8
Encfalo de ovino proveniente de abatedouro
Categoria 9
Encfalo de caprino com sinais clnicos de distrbios nervosos
Categoria 0
Encfalo de caprino proveniente de abatedouro
* Categoria excluda no programa de vigilncia atual.

43

B
Figura 9. Programa de computador DXSNC. A. Pgina de tela de abertura do
programa. B. Pgina de cadastro da amostra.

44
Na categoria 1 so includos os bovinos que apresentaram resultado negativo
nas provas de imunofluorescncia direta e/ou prova biolgica para a raiva em
laboratrios da rede oficial. Nesse caso, os materiais provenientes desses laboratrios
so encaminhados para os laboratrios de patologia credenciados pelo MAPA, a fim de
tentar esclarecer a causa dos sinais neurolgicos do bovino. Os laboratrios de raiva da
rede oficial constam no Anexo 7. Na categoria 2 so includos os bovinos com sinais
clnicos de distrbios nervosos que so atendidos na rea de abrangncia de cada
laboratrio ou material enviado por mdicos veterinrios da regio. Na categoria 3 so
includos bovinos que apresentam doena caquetizante ou depauperante ou que esto
em decbito, mas sem sinais clnicos prvios de distrbios nervosos. Exemplos de
bovinos nessa categoria na rea de abragncia do LPV/UFSM so os afetados por
intoxicao crnica por samambaia (Pteridium aquilinum) e bovinos que apresentam
emagrecimento progressivo por diversas causas. Na maioria das vezes, o exame
histolgico do encfalo desses bovinos no revela alteraes. Na categoria 4 so
includos todos os ruminantes importados (bovinos, ovinos ou caprinos). Essa categoria
tem prioridade sobre as outras categorias, pois mesmo que tenham sido feitas as provas
de IFD e/ou biolgica para a raiva e mesmo que esses animais apresentem alguma
doena caquetizante ou neurolgica, eles devem sempre ser inseridos na categoria 4 e
no na 1, 2 ou 3, 7 ou 9. O cumprimento dessa norma importante, pois todos os
animais importados de pases onde houve diagnstico de BSE em animais nativos,
devem, no final da vida reprodutiva, ser sacrificados e os proprietrios, indenizados; sob
hiptese alguma qualquer animal dessa categoria pode ser enviado para abate e
consumo. Essa conduta facilita a rastreabilidade dos ruminantes importados no pas, ou
seja, garante que o ruminante importado no entrou na cadeia alimentar e, atravs do
exame histolgico, pode-se comprovar de que esse animal no tinha leses de EET. H
uma rea especfica no formulrio de envio do material que deve ser preenchida para o
caso de ruminante importado; os dados dessa rea incluem nome e nmero (geralmente
o nmero de registro ou nmero do Sistema Brasileira e Identificao e Certificao de
Origem Bovina e Bubalina - SISBOV) do animal, se o animal apresenta sinais clnicos
nervosos e se o proprietrio recebe ou no indenizao (Anexo II do Anexo 3). A
indenizao s ocorre quando o animal est vivo e o proprietrio solicita sua destruio.
Os dados referentes ao ruminante importado tambm so transcritos para o laudo
histopatolgico (Anexo 13). A IN n 8, de 13 de fevereiro de 2001, que regia as normas
para animais importados no pas, foi revogada. Vigora a Instruo Normativa n 18, de

45
15 de dezembro de 2003 (Anexo 8). Na categoria 5 eram includos os encfalos de
bovinos provenientes de matadouro com mais de 30 meses e que tinham sido
alimentados com rao de origem animal em algum perodo de sua vida. Essa categoria
foi excluda do programa devido proibio da protena animal na alimentao de
ruminantes de acordo a vigente IN n 8, de 25 de maro de 2004 (Anexo 9) e porque
no era, sob o ponto de vista do MAPA, uma amostra epidemiologicamente adequada
para pesquisa de possveis casos de BSE. Na categoria 6 so includos encfalos de
bovinos provenientes do abate de emergncia. A Instruo de Servio N
002/2003/DOI/DIPOA rege as normas e procedimentos para animais encaminhados ao
abate de emergncia (Anexo 10). Os motivos do abate de emergncia desses bovinos
so geralmente fratura em membros plvicos ou torcicos ou contuses generalizadas.
Alguns desses bovinos j chegam mortos ao frigorfico, e mesmo assim, o encfalo
retirado para exame histopatolgico. O formulrio que acompanha esse material consta
no Anexo 11. Na categoria 7 so includos ovinos com sinais clnicos nervosos; na
categoria 8, ovinos provenientes de abatedouros. A categoria 9 composta por
caprinos com sinais clnicos nervosos e a categoria 0 composta por caprinos
provenientes de abatedouros. Na rotina diagnstica do LPV/UFSM, o nmero de
encfalos de ovinos e caprinos bem menor que o de bovinos. Isso se reflete, em parte,
pelo nmero total de caprinos e ovinos no Brasil estimado respectivamente em
9.581.653 e 14.556.484 de cabeas, em comparao s 195 milhes de cabeas de
bovinos no pas1.
Os encfalos tambm so analisados em relao condio da amostra e devem
ser alocados em uma das seguintes categorias listadas a seguir: (1) autolisado, (2)
congelado, (3) partes anatmicas pertinentes no includas, (4) danificao durante o
transporte, (5) amostras no identificadas, (6) encfalo inadequadamente retirado e (7)
no se aplica (quando adequado). Esse dado importante para o MAPA e para o
laboratrio que est processando o material, pois permitem que os tcnicos do MAPA
verifiquem a eficcia da coleta de encfalos no campo e avaliem a necessidade da
realizao de cursos de treinamento para os mdicos veterinrios. O curso de
treinamento de coleta do encfalo para mdicos veterinrios oficiais do MAPA, bem
como para os da iniciativa privada so realizados nos cursos de Treinamento em
Mtodos de Diagnstico e Controle de Brucelose e Tuberculose Animal e Noes de

IBGE, 2003.

46
Encefalopatias Espongiformes Transmissveis. Esses cursos so ministrados em
diversas Universidades do pas e tm durao de 5 dias. Para habilitao de novos
ministrantes, o MAPA promove cursos em Braslia, DF, geralmente ministrados pelo
Prof. Claudio Barros ou pelo Prof. David Driemeier. O curso em Braslia geralmente
dura dois dias e consiste de uma parte terica com palestras visando noes gerais sobre
as encefalopatias espongiformes transmissveis, e uma parte prtica que consiste na
retirada do encfalo de cabeas de bovinos provenientes de abatedouro e
reconhecimento das principais reas anatmicas do encfalo para correto envio do
material ao laboratrio. Na ocasio dos cursos, os mdicos veterinrios recebem o
Manual de Procedimentos para o Diagnstico das Doenas do Sistema Nervoso Central
de Bovinos, que conforme mencionado anteriormente, contm todas as informaes
bsicas para a coleta e remessa do material para os laboratrios.
A condio da amostra de encfalo importante para o laboratrio, porque
decide as partes anatmicas a serem processadas. Por exemplo, materiais provenientes
de frigorfico geralmente consistem apenas do tronco enceflico. Muitas vezes, esse
material est coberto por cogulos de sangue, devido ao mtodo de eutansia (pistola
pneumtica), e isso dificulta a fixao em formol. Materiais provenientes de
laboratrios que realizam exames para raiva, geralmente no apresentavam amostras em
boas condies (Figura 10), mas medida que os cursos de habilitao tm sido
ministrados pelo MAPA, a qualidade da condio da amostra tende a melhorar. A
integridade do encfalo muito importante para o exame histopatolgico. Quanto maior
a manipulao, maior a possibilidade da introduo de artefatos no tecido nervoso.

47

Figura 10. Condio da amostra que chega ao laboratrio para o exame histolgico.
Essa amostra catalogada como partes anatmicas pertinentes no includas devido
ausncia do bulbo na altura do bex, local anatmico onde se realiza o diagnstico de
BSE.

2.2.4 Encaminhamento e processamento das amostras


Os cortes realizados no encfalo dependem da condio da amostra. Os cortes a
serem processados e analisados histologicamente constam na Figura 13 da seo 3 que
trata das alteraes macroscpicas e microscpicas do sistema nervoso central de
bovinos. Geralmente, cada seo do encfalo encaminhada em um cassete. A ficha de
encaminhamento utilizada no LPV/UFSM consta no Anexo 12. Essa ficha facilita o
controle interno do material que est sendo processado e auxilia no arquivamento de
blocos e lminas. O processamento do material realizado de acordo com o Anexo I da
IN n. 15, de 15 de fevereiro de 2002 (Anexo 3). Todo o material encaminhado com o
nmero do DXSNC (Ex.: DX0097/05), independente se proveniente da rotina do
laboratrio ou de rgos oficiais.

48
2.2.5 Resultado da amostra
Durante a leitura das lminas, so anotados os achados incidentais bem como os
associados a doenas em cada seo de encfalo examinada. Esses achados so
descritos na seo histopatologia do laudo histopatolgico (Anexo 13). No
diagnstico vai o nome da doena em questo ou sem alteraes histopatolgicas.
Mesmo quando se descrevem vrios achados incidentais, como alteraes associadas
idade, o diagnstico continua sendo sem alteraes histopatolgicas. Um exemplo
comum so os encfalos provenientes de frigorficos. Geralmente, macro e
microscopicamente observa-se hemorragia subdural e intracerebral, mas o diagnstico
no hemorragia traumtica, pois essa leso foi infligida em um encfalo
previamente normal. O mesmo acontece com animais que apresentam raros manguitos
perivasculares no encfalo. Esse um achado incidental, pode ser descrito na seo
histopatologia do laudo, e o diagnstico no ser dado como meningoencefalite nosupurativa, mas como sem alteraes histopatolgicas.
A importncia de se cadastrar laboratrios de diagnstico para a vigilncia
epidemiolgica da BSE se deve possibilidade de se aliar epidemiologia e sinais
clnicos aos achados macro e microscpicos, e dessa forma, realizar a correta
interpretao das leses e escolha do diagnstico mais apropriado. Alguns diagnsticos
dependem de dados epidemiolgicos (ex.: intoxicao por plantas, intoxicao por
carbamato, ttano). No Quadro 7, observa-se a lista de diagnsticos utilizada no
programa DXSNC. O nmero de casos de cada doena pode variar dependendo da
regio do pas, mas todos os laboratrios devem ter a mesma lista de diagnsticos. Um
diagnstico inserido em um laboratrio deve ser imediatamente comunicado ao MAPA
e aos outros laboratrios para a adio ao programa DXSNC.

49
Quadro 7 Lista de diagnsticos de doenas ou leses do sistema nervoso central de
ruminantes utilizada no programa DXSNC.
Abscessos cerebrais
Intoxicao por Halimium braziliensis
Artrite encefalite caprina
Intoxicao por organofosforados
Babesiose cerebral
Intoxicao por Prosopis juliflora
Botulismo (por outros mtodos)*
Intoxicao por Sida carpinifolia
Cenurose
Intoxicao por Solanum fastigiatum
Cetose (por outros mtodos)
Leucose enzotica
Compresso medular
Listeriose
Encefalomalacia focal simtrica
Maedi-Visna
Encefalopatia heptica
Meningite bacteriana
Febre catarral maligna
Meningoencefalite no-purulenta
inespecfica
Febre vitular (por outros mtodos)
Meningoencefalite por herpesvrus
Hemorragia traumtica
Meningoencefalite purulenta inespecfica
Hipomagnesemia (por outros mtodos)
Neoplasia
Intoxicao por Aspergillus clavatus
Polioencefalomalacia
Intoxicao por Ateleia glazioviana
Raiva
Intoxicao por carbamatos
Scrapie
Intoxicao por Claviceps paspali
Sem alteraes histopatolgicas
Intoxicao por Cynodon dactilon
Ttano (por outros mtodos)
Intoxicao por Dyplodia maydis
Em andamento**
* Por outros mtodos significa que o diagnstico foi realizado pelo exame de outros rgos, pelos sinais
clnicos e dados epidemiolgicos.
**Quando o diagnstico ainda est pendente.

Alguns diagnsticos permanecem pendentes e o resultado no programa de


computador permanece em andamento. Isso ocorre quando um dos fragmentos do
encfalo enviado para realizao da tcnica de imunoistoqumica para PrPsc no SPVUFRGS. No acompanhamento da rotina do DXSNC em 5 anos (2001-2005), casos de
ovinos e bovinos com vacuolizao neuronal intracitoplasmtica no tronco enceflico
foram enviados para a realizao de imunoistoqumica. Na maioria das vezes, o
diagnstico de scrapie em ovinos foi confirmado. Todos os materiais de bovinos
enviados foram negativos, demonstrando que normal a presena de vacolos
espordicos em neurnios do tronco enceflico (principalmente ncleos vermelho e
oculomotor do mesencfalo) e que a histopatologia um mtodo de diagnstico
confivel.

2.2.6 Envio dos resultados

50
Os laudos (Anexo 13) so remetidos ao laboratrio que enviou o material fixado
em formol (geralmente os laboratrios da rede oficial), para a Coordenao Geral de
Apoio Laboratorial (CGAL) e uma cpia permanece no laboratrio que gerou o
resultado, para futuras auditorias. A partir de 2004, os laudos so gerados pelo programa
de computador DXSNC. Os laboratrios devem encaminhar o relatrio das atividades
mensais ao Departamento de Sade Animal, at o 10 dia til do ms subseqente.

2.2.7 Arquivamento dos tecidos fixados, blocos e lminas


O MAPA estabelece que blocos e lminas devem ser guardados durante 7 anos
no laboratrio credenciado, para verificao em futuras auditorias tanto do MAPA
quanto de rgos internacionais. O armazenamento de tecidos fixados no laboratrio
credenciado opcional. No LPV-UFSM so guardados encfalos em formol para
interesse didtico ou que sero utilizados em projetos futuros, sem a realizao de
imunoistoqumica, j que o longo perodo de fixao um fator limitante para a tcnica.

2.2.8 Arquivamento dos documentos


Os formulrios que acompanham os materiais fixados em formol e os laudos
histopatolgicos so arquivados em pastas anuais. Documentos referentes legislao,
livros Ata, procedimentos operacionais padro e referentes ao programa DXSNC so
tambm arquivados.

2.2.9 Procedimentos operacionais padro (POPs)


Cada laboratrio regido por procedimentos operacionais padro (POPs). Esses
POPs determinam regras a serem utilizadas para recebimento de material, erros de
registros em cadernos de anotaes, e descarte dos materiais que foram analisados. No
Quadro 8, podem ser visualizadas as regras a serem utilizadas quando ocorrem erros no
livro Ata. Esse POP deve ser fixado no livro Ata para fcil consulta. Quando se comete
um erro no livro Ata, este deve ser riscado com apenas uma linha, rubricado, datado, e

51
um dos nmeros apresentados no Quadro 8 ser colocado ao lado da rubrica com um
crculo em volta.

Quadro 8. Procedimentos para explicar erros de registros em cadernos de anotaes, de


acordo com listagem numrica.
Nmero
Motivo para utilizao
1
Erro de ortografia
2
Erro matemtico
3
Registro errado (data, nmero de amostra, palavra, etc)
4
Erro de transposio
5
Mudana de procedimento
6
Concluso errada
7
Registro ilegvel
8
Registro desnecessrio
9
Explicao com nota de rodap
10
Informaes adicionais

52

Anexo 1 Portaria ministerial n 516, de 9 de dezembro de 1997


MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
GABINETE DO MINISTRO
PORTARIA N 516, DE 9 DE DEZEMBRO DE 1997
O MINISTRO DE ESTADO DA AGRICULTURA, PECURIA E
ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o Art. 87, Pargrafo nico, inciso
II, da Constituio da Repblica, tendo em vista o disposto no Art. 71 do Regulamento do
Servio de Defesa Sanitria Animal, aprovado pelo Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934,
considerando a deciso da 65 Assemblia Geral do Comit Internacional do Escritrio
Internacional de Epizootias - OIE que alterou o captulo 3.2.13 - Encefalopatia Espongiforme
Bovina, do Cdigo Zoossanitrio Internacional, resolve:
Art. 1 Declarar o Brasil livre de encefalopatia espongiforme bovina, de acordo com o
que estabelece o artigo 3.2.13.2 do Cdigo Zoossanitrio Internacional.
Art. 2 Incluir a encefalopatia espongiforme bovina e a paraplexia enzotica dos
ovinos (scrapie) na relao de doenas passveis de aplicao de medidas de defesa sanitria
animal constante do artigo 61 do Regulamento do Servio de Defesa Sanitria Animal,
aprovado pelo Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934.
Pargrafo nico - A encefalopatia espongiforme bovina e a paraplexia enzotica dos
ovinos (scrapie) so doenas de notificao obrigatria e suas ocorrncias ou suspeies
devem ser imediatamente informadas autoridade de defesa sanitria animal da jurisdio.
Art.3 Determinar a aplicao a partir de 1 de janeiro de 1998 das recomendaes
para preveno da encefalopatia espongiforme bovina e outras encefalopatias espongiformes
transmissveis dos animais, constantes do artigo 3.2.13.1 do Cdigo Zoossanitrio
Internacional, especialmente:
a) a identificao dos perigos potenciais de introduo da doena mediante anlise de
risco que inclua a importao de animais vivos e produtos e sub-produtos de origem animal;
b) a incorporao da encefalopatia espongiforme bovina, da paraplexia enzotica dos
ovinos (scrapie) e outras doenas com sintomatologia nervosa de carter progressivo no
sistema de vigilncia da raiva dos herbvoros domsticos, na forma a ser estabelecida em ato
do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento".
c) a proibio do uso de qualquer fonte de protena de ruminantes na alimentao dos
mesmos, com exceo das protenas lcteas.
Art. 4 Delegar competncia Secretaria de Defesa Agropecuria para baixar as
instrues complementares necessrias implementao do disposto nesta Portaria.
Art. 5 O ingresso no Brasil de animais e produtos e sub-produtos de origem animal
originrios de terceiros pases fica condicionado comprovao do atendimento s medidas
de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis e que so recomendadas no
Captulo 3.2.13 do Cdigo Zoossanitrio Internacional.
Art. 6 Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao.
MARCUS VINICIUS PRATINI DE MORAES

53

Anexo 2 Instruo Normativa n 005, de 1 de maro de 2002


MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
GABINETE DO MINISTRO
INSTRUO NORMATIVA N 005, DE 1 DE MARO DE 2002
O MINISTRO DE ESTADO DA AGRICULTURA, PECURIA E
ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 87, pargrafo nico, da
Constituio, tendo em vista o disposto no art. 86, do Regulamento de Defesa Sanitria
Animal, aprovado pelo Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, e o que consta do Processo
n 21000.009298/2001-82, resolve:
Art. 1 Aprovar as Normas Tcnicas para o controle da raiva dos herbvoros
domsticos, em conformidade com o Anexo a esta Instruo Normativa.
Art. 2 O item b, do art. 3, da Portaria n 516, de 9 de dezembro de 1997, passa a
vigorar com a seguinte redao:
b) a incorporao da encefalopatia espongiforme bovina, da paraplexia enzotica dos
ovinos (scrapie) e outras doenas com sintomatologia nervosa de carter progressivo no
sistema de vigilncia da raiva dos herbvoros domsticos, na forma a ser estabelecida em ato
do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento.
Art. 3 Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao.
Art. 4 Fica revogada a Portaria n 126, de 18 de maro de 1976.
MARCUS VINICIUS PRATINI DE MORAES

ANEXO
NORMAS TCNICAS PARA O CONTROLE DA RAIVA DOS HERBVOROS
DOMSTICOS
CAPTULO I
DAS DISPOSIES PRELIMINARES

Art. 1 Para efeito destas Normas, considera-se como proprietrio aquele que seja
possuidor, depositrio ou a qualquer ttulo mantenha em seu poder animais susceptveis
raiva.
Art. 2 O proprietrio dever notificar de imediato, ao Servio Veterinrio Oficial, a
ocorrncia ou a suspeita de casos de raiva, assim como a presena de animais atacados por
morcegos hematfagos ou a existncia de abrigos de tal espcie.
Art. 3 O Servio Veterinrio Oficial dever tomar as providncias necessrias ao
atendimento dos animais e coleta de material para diagnstico da raiva e de outras
encefalites diferenciais.
Art. 4 Os servidores que trabalham em laboratrio ou em atividades de controle da
doena devem estar protegidos mediante imunizao preventiva, segundo esquema
recomendado pela Organizao Mundial da Sade.

54

CAPTULO II
DO OBJETIVO E DA ESTRATGIA DE ATUAO DO PROGRAMA
Art. 5 O Programa Nacional de Controle da Raiva dos Herbvoros tem como objetivo
baixar a prevalncia da doena na populao de herbvoros domsticos.
Art. 6 A estratgia de atuao do Programa baseada na adoo da vacinao dos
herbvoros domsticos, do controle de transmissores e de outros procedimentos de defesa
sanitria animal que visam proteo da sade pblica e o desenvolvimento de fundamentos
de aes futuras para o controle dessa enfermidade.
CAPTULO III
DA VACINAO
Art. 7 Na profilaxia da raiva dos herbvoros, ser utilizada vacina inativada, na
dosagem de 2 (dois) ml, administrada pelo proprietrio, atravs da via subcutnea ou
intramuscular.
Art. 8 Nas reas de ocorrncia de raiva, a vacinao ser adotada sistematicamente,
em bovdeos e eqdeos com idade igual ou superior a 3 (trs) meses, sob a superviso do
mdico veterinrio.
1 A vacinao de bovdeos e eqdeos com idade inferior a 3 (trs) meses e a de
outras espcies poder ser realizada a critrio do mdico veterinrio.
2 Animais primovacinados devero ser revacinados aps 30 (trinta) dias.
Art. 9 O atestado de vacinao anti-rbica ser expedido por mdico veterinrio,
sendo vlido pelo perodo de proteo conferido pela vacina usada.
Pargrafo nico. Para complementar a comprovao da vacinao, poder ser
solicitado ao proprietrio dos animais:
I - a nota fiscal de aquisio da vacina, a qual deve constar o nmero da partida, a
validade e o laboratrio produtor;
II - a anotao da data da vacinao, o nmero de animais vacinados por espcie e a
respectiva identificao dos animais.
Art. 10. A durao da imunidade das vacinas para uso em herbvoros, para efeito de
revacinao, ser de no mximo 12 (doze) meses.
CAPTULO IV
DA PRODUO, CONTROLE E COMERCIALIZAO DE VACINAS
Art. 11. A produo e o controle de todas as partidas de vacina obedecero s normas
do Departamento de Defesa Animal, junto ao qual todas as vacinas devero estar previamente
licenciadas.
Art. 12. S ser aprovada vacina com prazo de validade igual ou superior a 1 (um)
ano.
Art. 13. Desde a produo at seu uso, a vacina anti-rbica dever ser mantida em
temperatura entre dois e oito graus centgrados.
Art. 14. Sempre que exigido pelo Servio Veterinrio Oficial, o estabelecimento
responsvel pela comercializao da vacina fica obrigado a comunicar a compra, a venda e o
estoque de vacina.
Art. 15. Sempre que necessrio, ser procedida a coleta, para anlise fiscal, de vacinas
anti-rbicas, elaboradas no pas ou importadas, onde quer que se encontrem, visando
avaliao da sua eficcia.
CAPTULO V
DO CONTROLE DE TRANSMISSORES

55

Art. 16. As equipes que atuam em focos de raiva devero realizar inquritos para
determinao de outras espcies que no a dos morcegos, que possam atuar como
transmissores.
Art. 17. O mtodo escolhido para controle de transmissores depender da espcie
animal, da topografia da regio e das possveis restries legais.
Art. 18. At que sejam realizados estudos a respeito de outros produtos, o mtodo para
o controle de morcegos hematfagos basear-se- na utilizao de substncias anticoagulantes.
Art. 19. A aplicao de substncias anti-coagulantes em morcegos hematfagos dever
ser realizada sob a superviso de mdico veterinrio.
Art. 20. A aplicao de substncias anti-coagulantes, ao redor das leses recentes
provocadas por morcegos hematfagos em herbvoros, dever ser feita pelo produtor, sob
orientao de mdico veterinrio.
Art. 21. As substncias anti-coagulantes e as redes de nylon empregados no controle
de morcegos hematfagos constituem materiais de uso exclusivo do programa.
Art. 22. Em refgios, recomenda-se a utilizao de outros mtodos de controle de
morcegos hematfagos, desde que os locais sejam de fcil acesso e apresentem condies
para os trabalhos, a critrio do mdico veterinrio.
Art. 23. Os refgios de morcegos hematfagos, notadamente os da espcie Desmodus
rotundus, notificados ao Servio Veterinrio Oficial, devero ser cadastrados e revisados
periodicamente, visando a manter o efetivo controle das populaes de morcegos neles
existentes.
Art. 24. Ocorrendo raiva em carnvoro silvestre, dever ser realizado levantamento
epidemiolgico, a fim de verificar a origem do caso e, se existir um surto atingindo uma ou
mais espcies, promover-se- o controle dessa populao, por meio de capturas sistemticas,
para determinar a atividade viral e a extenso do surto.
CAPTULO VI
DAS OUTRAS MEDIDAS DE VIGILNCIA EPIDEMIOLGICA
Art. 25. Na vigilncia epidemiolgica da doena, ser estabelecido um sistema de
informaes que compreender a notificao obrigatria de casos e informaes contnuas.
Art. 26. Ser efetuado um diagnstico permanente da situao epidemiolgica, bem
como a anlise dos fatores condicionantes, a magnitude, a distribuio e a propagao da
raiva.
Art. 27. Ser considerada rea de ocorrncia de raiva aquela onde a doena tenha sido
confirmada durante os 2 (dois) anos precedentes.
Art. 28. Ser considerada zona ou rea controlada aquela na qual o controle da raiva
tenha alcanado nveis satisfatrios, com os bovdeos e eqdeos devidamente vacinados e a
populao de transmissores reduzida.
Art. 29. Ser considerada rea de atuao imediata aquela na qual seja reconhecido
estado endmico de raiva, bem como a que requeira pronta interveno.
Art. 30. A realizao de vacinaes focais e perifocais compreender todas as
propriedades existentes na rea infectada, abrangendo um raio de at 12 (doze) km, devendo
ser procedida do mesmo modo com relao ao combate aos transmissores.
Art. 31. A vigilncia dos transmissores dever ser constantemente mantida por meio
da verificao do coeficiente de mordeduras e da dinmica de suas populaes.
CAPTULO VII
DA COLETA DE MATERIAL E DOS EXAMES DE LABORATRIO

56

Art. 32. A coleta de material de animais suspeitos de raiva ser orientada por mdico
veterinrio e efetuada por este ou por auxiliar que tenha recebido treinamento adequado e que
esteja devidamente imunizado.
Art. 33. Do animal suspeito de raiva devero ser coletadas amostras do sistema
nervoso central aps o bito, ou quando sacrificado na fase adiantada da doena (fase
paraltica).
Art. 34. Ao laboratrio devero ser remetidas amostras do sistema nervoso central do
animal suspeito, bem como 10% (dez por cento) dos morcegos hematfagos capturados.
Art. 35. Os exames dos materiais coletados sero processados por meio da tcnica de
imunofluorescncia direta e prova biolgica (inoculao em camundongos ou clulas), ou
outra tcnica que venha a ser recomendada pela Organizao Mundial da Sade, em
laboratrio oficial ou privado, credenciado pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento MAPA.
CAPTULO VIII
DA EDUCAO SANITRIA E DIVULGAO
Art. 36. Na educao sanitria e divulgao, devero ser utilizados todos os meios e
informaes disponveis, assim como representantes dos nveis polticos, eclesisticos e
educacionais, visando a atingir o maior nmero possvel de criadores e outros membros da
comunidade rural.
Art. 37. A organizao dos diferentes atores sociais da comunidade em Conselhos
Municipais ou Intermunicipais de Sanidade Animal, integrados a um Conselho Estadual de
Sanidade Animal, determina uma condio fundamental para a efetiva soluo do problema
raiva dos herbvoros domsticos.
CAPTULO IX
DISPOSIES GERAIS
Art. 38. O pessoal tcnico e auxiliar encarregado do controle da raiva dever receber
treinamento especializado contnuo nos setores de controle de vacina, epidemiologia,
estatstica, planejamento e administrao de campanhas sanitrias, diagnstico de laboratrio,
bioecolgia e controle de morcegos hematfagos, manejo de no-hematfagos e educao
sanitria.
Art. 39. As atividades de combate raiva tero carter nacional e as unidades da
federao devero estabelecer legislao especfica baseada nas presentes Normas.
Art. 40. Os laboratrios produtores de vacinas tero o prazo de 180 (cento e oitenta)
dias, aps a publicao da presente Instruo Normativa, para as adequaes necessrias ao
atendimento pleno da mesma.
Art. 41. Incorporar a vigilncia da encefalopatia espongiforme bovina, da paraplexia
enzotica dos ovinos (scrapie) e de outras doenas que apresentem sintomatologia nervosa de
carter progressivo, ao sistema de vigilncia da raiva dos herbvoros domsticos.
Art. 42. A Secretaria de Defesa Agropecuria - SDA, do Ministrio da Agricultura,
Pecuria e Abastecimento, baixar instrues complementares sobre a matria e resolver os
casos omissos.

57
Anexo 3 Instruo Normativa n 15, de 15 de fevereiro de 2002
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA
INSTRUO NORMATIVA SDA N. 15, de 15 de fevereiro de 2002
O SECRETARIO DE DEFESA AGROPECURIA DO MINISTRIO DA
AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere
o art. 83, inciso IV do Regimento Interno da Secretaria, aprovado pela Portaria Ministerial n.
574, de 8 de dezembro de 1998, a Instruo Normativa n 24, da Secretaria de Defesa
Agropecuria, de 07 de junho de 2001 e a necessidade da instituio de Normas de
Credenciamento de Laboratrios para o diagnstico de Encefalopatia Espongiforme
Transmissveis e o que consta do Processo n. 21000.000109/2002-97, resolve:
Art. 1 Aprovar as Normas de Credenciamento e Monitoramento de Laboratrios de
Diagnstico das Encefalopatias Espongiforme Transmissveis em ruminantes EET.
Art. 2 - O credenciamento a que se refere o artigo anterior estar limitado s
necessidades do Departamento de Defesa Animal no que se refere ao nmero e localizao
geogrfica.
Art. 3 - Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao.
LUIZ CARLOS DE OLIVEIRA
ANEXO
REQUISITOS DE QUALIDADE PARA O CREDENCIAMENTO E MONITORAMENTO DE
LABORATRIOS DE DIAGNSTICO DAS ENCEFALOPATIAS ESPONGIFORMES
TRANSMISSVEIS EM RUMINATES EET

1 - Objetivos
Estabelecer os requisitos de qualidade no diagnstico das encefalopatias espongiformes
transmissveis visando o credenciamento de laboratrios pelo Departamento de Defesa
Animal - DDA.
2 - Aplicao
2.1- A presente Norma aplica-se ao laboratrio que disponha de mdico veterinrio com
especializao em patologia veterinria.
2.2- O credenciamento a que se refere a presente Norma est vinculado diretamente ao
Mdico Veterinrio patologista, que ser nomeado responsvel tcnico pelo diagnstico de
EET, mediante avaliao pelo DDA.
3 - Definies
3.1- Para efeito da presente Norma define-se:

58
3.1.1- ENCFALO: a parte do sistema nervoso central, exceto a medula espinhal, incluindo
mielencfalo, metencfalo, mesencfalo, diencfalo e telencfalo.
3.1.2- TRONCO ENCEFLICO: a parte compreendida pelo mielencfalo (bulbo) e
metencfalo (com exceo do cerebelo) e diencfalo. o que resta do encfalo quando se
exclui o telencfalo e o cerebelo.
4 - Amostras
4.1- Amostra a ser colhida: material enceflico devidamente coletado, conforme est
estabelecido no manual de procedimentos especfico, aprovado pelo DDA.
4.2- Amostra a ser testada: fragmentos do encfalo juntamente com a rede admirvel
carotdea, o gnglio do nervo trigmeo e a hipfise devero ser fixados em formol a 10% e
processados conforme descrito no ANEXO I.
5 - Recebimento das Amostras
5.1- As amostras devero estar acompanhadas de Formulrio de Requisio, conforme
modelo estabelecido no ANEXO II.
5.2 - No devero ser recebidas amostras congeladas para exame histolgico.
5.3- As amostras sero registradas em livro prprio contendo as seguintes informaes: n do
protocolo; remetente e endereo; responsvel pelo recebimento; proprietrio e endereo;
espcie; sexo; idade; raa; data de encaminhamento; data de entrada; data de sada e resultado,
conforme modelo indicado no ANEXO III.
6 - Conservao e Estocagem
6.1- A amostra a ser analisada dever ser conservada em formol a 10%, at a montagem dos
blocos de parafina e a confeco das lminas.
6.2- Os blocos de parafina e as preparaes histolgicas devero ser arquivados por pelo
menos sete anos.
7- Segurana biolgica
7.1- Devero ser respeitadas as normas de segurana biolgica em todos os procedimentos
realizados com o material do exame.
7.2- As amostras quando descartadas devero ser incineradas.
8 - Mtodos de Diagnstico
8.1- O exame histolgico um dos indicados para o diagnstico da encefalopatias
espongiformes transmissveis, conforme descrito no ANEXO I.
8.2- O DDA baixar os requisitos necessrios ao credenciamento de laboratrios de
diagnstico de EETs, atravs de outras metodologias analticas, conforme a necessidade.
8.3- Qualquer alterao na metodologia analtica dever ser previamente aprovada pelo DDA.
8.4- Quando houver um caso suspeito, a amostra dever ser encaminhada ao Laboratrio de
Referncia das EET para anlise.
9 - Resultados e Relatrios
9.1- O resultados dos exames devero ser emitidos em formulrios prprios, conforme
modelo proposto pelo DDA e de acordo com o seguinte fluxograma:
9.1.1- Resultado NEGATIVO: Ser encaminhado ao rgo requisitante e ao DDA;
9.1.2- O Resultado SUSPEITO ou DUVIDOSO deve ser imediata e obrigatoriamente
comunicado ao DDA e ao Laboratrio de Referncia para o diagnstico das EET no Brasil;
9.1.3- Todo laboratrio credenciado dever encaminhar ao DDA, at o dcimo dia til do ms
subseqente, relatrio das atividades mensais, em formulrios prprios.

59
10 - Do Laboratrio
10.1- O laboratrio deve possuir instalaes e equipamentos aprovados para a realizao do
exame histolgico.
10.1.1- Protocolo: sala destinada ao recebimento das amostras, registro, expedio dos
resultados e arquivo dos mesmos.
10.1.2- Sala de Exame: Local onde as amostras sero processadas. Dever estar provido de
bancada impermevel e resistente desinfeco, fontes de eletricidade suficientes e
adequadas ao perfeito funcionamento dos equipamentos, fonte de gs quando necessria, e
paredes com superfcie lavvel.
10.1.3- Esterilizao e lavagem: Dever estar provido de fontes de eletricidade, tanques ou
pias que permitam a esterilizao e a lavagem de todo material utilizado na realizao da
anlise.
10.2- As instalaes devem atender s normas de segurana biolgica.
10.3- O laboratrio deve possuir instalaes, equipamentos e fluxos operacionais, aprovados
para realizao de exame histolgico.
10.4- O laboratrio deve designar um responsvel tcnico, com experincia especfica
comprovada, que realizar os exames.
10.5- Os laudos laboratoriais e o relatrio mensal, devero ser obrigatoriamente, assinados
pelo responsvel tcnico ou seu substituto.
11 - Do responsvel tcnico e substituto
Para efeito de credenciamento e monitoramento, o responsvel tcnico e seu eventual
substituto, sero submetidos a auditorias tcnicas com acompanhamento do ensaio no prprio
laboratrio, realizadas por auditores designados pelo DDA.

ANEXO I
PROCESSAMENTO HISTOLGICO PARA DIAGNSTICO DAS ENCEFALOPATIAS
ESPONGIFORMES TRANSMISSVEIS EET
PROGRAMAO DE PROCESSAMENTO DO MATERIAL

O material aps clivado dever ser processado rotineiramente para exame histolgico.
Isso poder ser feito em processador de tecidos automtico (histotcnico) regulado conforme
as convenincias do laboratrio, mas obedecendo, em geral, os tempos abaixo discriminados.
Esse processamento poder ser feito manualmente.
CUBAS
Copo becker 1 (formol)
Copo becker 2
Copo becker 3
Copo becker 4
Copo becker 5
Copo becker 6
Copo becker 7
Copo becker 8
Estufa 1
Estufa 2

REAGENTES
lcool 95%
lcool 95%
lcool 95%
lcool absoluto
lcool absoluto
Xilol
Xilol
Xilol
Parafina
Parafina

TEMPO DE IMERSO
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:30 horas
1:30 horas

Aps o processamento descrito acima feita a incluso do material em parafina. O


material nos blocos de parafina cortado em 5 m de espessura e corado pela tcnica de
hematoxilina e eosina, conforme descrito abaixo.

60
1- Xilol ....................... 5 minutos
2- Xilol ....................... 5 minutos
3- lcool absoluto ...... 2 minutos
4- lcool 95% ............ 2 minutos
5- lcool 80% ............ 2 minutos
6- lcool 70% ............ 1 minuto
7- gua corrente ......... lavar
8- Hematoxilina .......... 20-40 segundos
9- gua corrente ......... lavar
10- gua de amnia .... imergir at azular
11- gua corrente ........ lavar
12- Eosina ................... 1-2 minutos
13- lcool 70% ........... rapidamente
14- lcool 80% ........... rapidamente
15- lcool 90% ........... rapidamente
16- lcool absoluto .... 5 minutos
17- lcool absoluto .... 5 minutos
18- Xilol ...................... 5 minutos
19- Xilol ...................... 5 minutos
20-Montar as lminas utilizando blsamo do Canad (ou Entelan) para fixar a lamnula.

61
ANEXO II
Formulrio de requisio de exames
Material n: Laboratrio / n do protocolo / ano Municpio:_______________ UF:_________
Veterinrio Remetente:_______________________________CRMV-UF n: _____________
Endereo:_________________________________________ Telefone: ( )_______________
Email:____________________________________________ Fax: ( )___________________
Para preenchimento exclusivo quando for bovino importado ( IN n 08, de 13/02/2001)
Nome do animal: _____________________________ Nmero do animal: _______________
Com sintomatologia nervosa? Sim
No
Para indenizao? Sim
No
Proprietrio:_________________________________ Propriedade: _____________________
Endereo:____________________________________Municpio:______________UF:_____
Email: ___________________ Telefone: ( )________________ Fax: ( ) _________________
Espcie: Bovina ( ) Ovina ( ) Caprina ( ) Raa:_______________________ Idade: ___ meses
Havia outras espcies afetadas? Sim ( ) No ( ) Categoria afetada: Macho ( ) Fmea ( )
Nmero de animais: no rebanho (_____) doentes (_____) mortos (_____)
O animal morto j foi vacinado para: Raiva ( ) Clostridiose ( ) Outras ___________________
O animal consumia concentrado? Sim ( ) No ( )
Data do incio do surto/doena: __/__/____ Durao do surto/doena: ________________
Tipos de sinais clnicos apresentados:
Morte sbita ( )
Cegueira
()
Torneio
( ) Paralisia flcida dos
Depresso
()
Incoordenao ( )
Convulses ( ) membros posteriores ( )
Ataxia
()
Ttano
()
Dismetria
()
Com paralisia, mas Agressividade ( )
Tremores
( ) Paralisia flcida dos
ainda alerta
()
Opisttono
()
Nistagmo
( ) membros anteriores ( )
Durao dos sinais clnicos (desde o incio at a morte): ______________________horas
Havia animais que se recuperaram dos sinais clnicos? Sim ( ) No ( ) Que percentual? ____%
Dia e hora da morte: _____/_____/_____ s _________:__________
Tempo decorrido entre a morte e a coleta do material: ______________ horas
Tempo decorrido entre a morte e a fixao do material: _____________ horas minuto
Material conservado em: _______________________________________________________
Veterinrio responsvel pela coleta:______________________CRMV-UF n :____________
Endereo:__________________________________________ Telefone: ( ) ______________
Email:____________________________________________ Fax: ( ) ___________________
Observaes:
Local / Data:_______________________, _____/_____/______

62
ANEXO III
MODELO PARA LIVRO DE REGISTRO DE AMOSTRAS PARA O DIAGNSTICO DE EET EM RUMINANTES
Nprotocolo

Remetente/
Endereo

Responsvel
Proprietrio/
pelo recebimento
Endereo

Espcie Sexo

Idade

Raa

Data de
entrada

Data de
Data de
encaminhamento sada

Resultado

63
Anexo 4 Rede de laboratrios credenciados pelo MAPA para o diagnstico das
encefalopatias espongiformes transmissveis de ruminantes no Brasil
1. DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA
MARIA UFSM
Resp.: Dr. Claudio Severo Lombardo de Barros
CEP.:97105-900- Santa Maria/RS
Fone: 55 (55) 3220.8168 Fax: 55 (55) 3220.8284
e-mail: claudioslbarros@uol.com.br
2. LABORATRIO DE PATOLOGIA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DO MATO
GROSSO DO SUL UFMS
Resp.: Dr. Eurpedes Batista Guimares
Av. Senador Felinto Muller, 2443 Caixa Postal 549 - CEP.: 79070-900 - Campo Grande/MS
Tel.: 55 (67) 345.3615 Fax: 55 (67) 345.3600
e-mail: ebg@nin.ufms.br
3. LABORATRIO DE PATOLOGIA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO
GRANDE DO SUL UFRGS
Resp.: Dr. David Driemeier
Av. Bento Gonalves, 9090 Caixa Postal 15094 - CEP.: 91540-000 - Porto Alegre/RS
Telefone: 55 (51) 3316.6107 Fax: 55 (51) 3316.7305
e-mail: davetpat@ufrgs.br
4. LABORATRIO NACIONAL AGROPECURIO LANAGRO/ RECIFE- PE
Resp.: Dra. Ana Karina Cunha Callado
Rua Manoel de Medeiros, s/n - Dois Irmos
CEP: 52171-030 Recife/PE
Tel.: 55 (81) 3441-6311 e 3441-6024
e-mail: anakarina@agricultura.gov.br
5. LABORATRIO DO INSTITUTO MINEIRO DE AGROPECURIA - IMA/MG
Resp: Dr. Anilton Csar Vasconcelos
Avenida do Contorno n 1707 A Floresta - CEP 30110-070 - Belo Horizonte /MG
Tel.:55 (31) 3213-4263 , 3499-2887 Fax 55 (31) 3213-4263
e-mail: laboratorioanimalima@bhsol.com.br; anilton@icb.ufmg.br
6. LABORATRIO DE ANATOMIA PATOLGICA DO INSTITUTO BIOLGICO
DE SO PAULO SP
Resp.: Dra Claudia del Fava
Avenida Conselheiro Rodrigues Alves n 1252, Vila Mariana - CEP 04014-002-So Paulo/SP
Tel: 55 (11) 5087 1779 Fax 55 (11) 5087-1779
e-mail: lara@biologico.sp.gov.br

64
Anexo 5 Instruo Normativa n 18, de 27 de fevereiro de 2004

MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO


SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA
INSTRUO NORMATIVA N 18, DE 27 DE FEVEREIRO DE 2004
O SECRETRIO DE DEFESA AGROPECURIA DO MINISTRIO DA
AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso das atribuies que lhe
conferem o inciso II, Art. 15, do Decreto n 4.629, de 21 de maro de 2003 e o art. 4, da
Portaria Ministerial n 516, de 9 de dezembro de 1997, e tendo em vista o que consta do
Processo n 21000.012718/2003-70, resolve:
Art. 1 Estabelecer as normas sobre os requisitos de qualidade para efeito de
credenciamento e monitoramento de laboratrio pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento (MAPA) com vistas a procederem a diagnsticos das Encefalopatias
Espongiformes Transmissveis (EET) em ruminantes pela tcnica de imunoistoqumica
(IHQ), conforme disposto no Anexo I, bem como, aprovar os modelos de formulrios para
requisio e laudo de resultado de exames e registro de amostras, nas formas constantes dos
anexos II a IV desta Instruo.
Pargrafo nico. Para o credenciamento e monitoramento previstos no caput deste
artigo sero observadas as normas sobre os requisitos de qualidade constantes do Anexo I
desta Instruo Normativa e as da Instruo Normativa n 51, de 27 de junho de 2003.
Art. 2 O laboratrio a ser credenciado dever dispor de Responsvel Tcnico (RT)
com formao profissional de Mdico Veterinrio, experincia comprovada em patologia
veterinria e domnio da tcnica de IHQ.
Art. 3 Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao.
MAAO TADANO

ANEXO
REQUISITOS DE QUALIDADE PARA O CREDENCIAMENTO E MONITORAMENTO DE
LABORATRIOS DE DIAGNSTICO DAS ENCEFALOPATIAS ESPONGIFORMES
TRANSMISSVEIS (EET) EM RUMINANTES, PELA TCNICA DE IMUNOHISTOQUMICA (IHQ)

1. Objetivo
Estabelecer os requisitos de qualidade no diagnstico das EET, pela IHQ, visando o
credenciamento de laboratrios pelo MAPA.
2. Aplicao
2.1. A presente Norma aplica-se ao laboratrio que disponha de Responsvel Tcnico (RT)
Mdico Veterinrio com experincia comprovada em patologia veterinria e domine a tcnica
de IHQ.

65
3. Definies
3.1. BULBO: poro do tronco enceflico que inicia aproximadamente na altura da
insero do primeiro par de nervos cervicais e se estende rostralmente at o bordo caudal da
ponte
3.2. BEX: marcao anatmica no tronco enceflico que consiste na juno das tnias do
IV ventrculo no ngulo posterior
3.3. CEREBELO: poro do metencfalo localizada caudalmente aos lobos occipitais do
telencfalo e sobre a ponte e o bulbo (medula oblonga), formando a maior parte do teto do
quarto ventrculo
3.4. RGOS LINFIDES: locais de produo de clulas linfides, como timo, bao e
linfonodos e, agregados linfides: tonsilas, placas de Peyer e 3 plpebra.
4. Amostras
4.1. A amostra de eleio a ser testada constituda por fragmento de tecido devidamente
fixado em formol a 10% e est discriminada conforme a espcie:
4.1.1. Bovinos - bulbo na altura do bex
4.1.2. Ovinos e Caprinos - bulbo na altura do bex, cerebelo e rgos linfides
5. Recebimento das Amostras
5.1. As amostras devero estar acompanhadas de Formulrio de Requisio de Exame,
devidamente preenchido, conforme modelo estabelecido no ANEXO III.
5.2. As amostras sero registradas em livro prprio conforme modelo estabelecido no
ANEXO IV.
6. Conservao e Estocagem
6.1. A amostra a ser analisada dever ser conservada em formol a 10%, at a incluso em
blocos de parafina e a confeco das lminas.
6.2. Os blocos de parafina e as preparaes histolgicas devero ser arquivados por, pelo
menos, sete anos.
7. Segurana biolgica
7.1. O laboratrio dever seguir os procedimentos de biossegurana preconizados para
doenas prinicas.
7.2. Na ocorrncia de amostra positiva devero ser adotados os seguintes procedimentos:
7.2.1. O material utilizado para o diagnstico, no dia, dever ser submetido a um
processo de desinfeco com Hidrxido de Sdio a 2N por 2 horas e, aps bem enxaguado,
autoclavado a 134 C, por 1 hora.
7.2.2. O material a ser descartado dever ser duplamente embalado em sacos
adequados para lixos infecciosos e incinerado posteriormente.
8. Mtodo de Diagnstico
8.1. A tcnica de IHQ, descrita no ANEXO I, um dos mtodos indicados para o
diagnstico das EET
8.2. Procedimentos no manejo de reativos utilizados na tcnica de IHQ so descritos no
ANEXO II
8.3. Qualquer alterao na metodologia analtica dever ser previamente aprovada pelo
MAPA
9. Resultados e Relatrios

66
9.1. O resultado dos exames dever ser emitido em formulrio prprio conforme modelo
proposto pelo MAPA no anexo V, em duas vias, uma para arquivo do laboratrio e outra para
o rgo requisitante, de acordo com o seguinte fluxo:
9.1.1. Resultado NEGATIVO: Ser encaminhado ao rgo requisitante e ao setor
competente do MAPA;
9.1.2. Resultado SUSPEITO ou DUVIDOSO: deve ser imediata e obrigatoriamente
comunicado ao setor competente do MAPA e ao Laboratrio de Referncia para o diagnstico
das EET no Brasil;
9.1.3. Todo laboratrio credenciado dever encaminhar ao setor competente do
MAPA, at o dcimo dia til do ms subseqente, relatrio das atividades mensais, por
sistema especfico.
10. Do Laboratrio
10.1. O laboratrio deve possuir instalaes e equipamentos adequados para a realizao
do exame de IHQ
10.2. As instalaes devero obedecer a um fluxo operacional coerente com a tcnica
desenvolvida.
11. Instalaes e equipamentos
11.1. Instalaes
11.1.1. Protocolo: ambiente destinado ao recebimento das amostras, registro,
expedio dos resultados e arquivo dos mesmos.
11.1.2. Exame: ambiente onde as amostras sero processadas. Dever estar provido
de bancada impermevel e resistente desinfeco, fontes de eletricidade suficientes e
adequadas ao perfeito funcionamento dos equipamentos e paredes com superfcie lavvel.
11.1.3. Esterilizao e lavagem: dever estar provido de fontes de eletricidade,
tanques ou pias que permitam a esterilizao e a lavagem de todo material utilizado na
realizao da anlise.
11.2. Equipamentos
11.2.1. Arquivo
11.2.2. Microcomputador
11.2.3. Caixas para arquivo das lminas e blocos de tecidos
11.2.4. Micrtomo
11.2.5. Processador automtico de tecidos (opcional)
11.2.6. Autoinclusor de parafina (opcional)
11.2.7. Banho Maria histolgico
11.2.8. Refrigerador/ freezer -20C (vinte graus Celsius negativos)
11.2.9. Capela de fluxo contnuo
11.2.10. Capela de fluxo laminar
11.2.11. Estufa
11.2.12. Agitador de tubos (opcional)
11.2.13. Pipetas monocanais de 1-10 l, 10-100 l e 200-1000 l, ou similares
11.2.14. Vidraria de laboratrio
11.2.15. Armrio para estoque dos reagentes e solues
11.2.16. Microscpio ptico
11.2.17. Medidor de pH
11.2.18. Balana analtica
11.2.19. Autoclave
11.2.20. Destilador
11.2.21. Deionizador (opcional)

67
12. Do responsvel tcnico titular e substituto
12.1. O RT titular e seu eventual substituto, designado(s) pelo laboratrio, dever(o) ser
submetido(s) a treinamento, no laboratrio de referncia, na tcnica utilizada.
12.2. Aps o treinamento, e para efeito de credenciamento ou monitoramento, o RT titular
e seu eventual substituto, ser(o) submetido(s) a auditorias tcnicas com acompanhamento
do ensaio no prprio laboratrio, realizadas por auditores designados pelo MAPA.
12.3. Os laudos laboratoriais e o relatrio mensal devero ser, obrigatoriamente, assinados
pelo responsvel tcnico titular ou seu substituto.

ANEXO I
PROTOCOLO PARA O DIAGNSTICO DAS EET EM RUMINANTES PELA
TCNICA DE IHQ
1. Fixao e Descontaminao do material
1.1. Os tecidos frescos devem ser fixados em formalina a 10%, preferencialmente tamponada.
O crebro e linfonodos inteiros necessitam de, pelo menos, 3 a 5 dias de fixao antes de
serem clivados. Bipsias de linfonodos requerem, pelo menos, 2 dias de fixao. Fragmentos
de tecidos que tenham espessura em torno de 7 milmetros podem ser fixados em 1 dia.
1.2. Aps o tempo necessrio fixao, os tecidos so clivados em fragmentos de
aproximadamente 2 milmetros de espessura e colocados em cassetes para incluso.
1.3. Os tecidos so descontaminados em uma soluo de cido frmico a 95-98% por 1 hora,
em uma cabine de fluxo contnuo. Os cassetes devem estar totalmente imersos na soluo.
1.4. Enxaguar rapidamente os tecidos por 3 vezes em 10 volumes de gua e, em seguida,
submet-los a lavagem contnua em gua corrente at a total eliminao do odor do cido.
1.5. Enxaguar em gua bidestilada ou deionizada por 10 minutos.
1.6. Colocar os cassetes em soluo de formalina fresca tamponada a 10%, por 24 horas.
2. Processamento e incluso dos tecidos em parafina.
2.1. O material, depois de clivado, dever ser processado rotineiramente para exame
histolgico. Este poder ser feito em processador automtico de tecidos (histotcnico) ou
manualmente, regulado conforme as convenincias do laboratrio, mas obedecendo, em geral,
os tempos abaixo discriminados.
CUBAS
Copo becker 1 (formol)
Copo becker 2
Copo becker 3
Copo becker 4
Copo becker 5
Copo becker 6
Copo becker 7
Copo becker 8
Estufa 1
Estufa 2

REAGENTES
lcool 95%
lcool 95%
lcool 95%
lcool absoluto
lcool absoluto
Xilol
Xilol
Xilol
Parafina
Parafina

TEMPO DE IMERSO
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:00 hora
1:30 horas
1:30 horas

2.2. Aps o processamento descrito acima feita a incluso do material em parafina a 5865C.

68
3. Preparao dos cortes histolgicos e lminas
3.1. A amostra a ser testada e os controles da prova, nos blocos de parafina, so cortados
em 4 a 6 micrmetros de espessura e colocados em lminas especiais com carga eltrica (tipo
Probe On Plus), seguindo as orientaes de uso do fabricante. Devem ser utilizadas 2 lminas
controle positivo e 2 lminas controle negativo.
3.1.1. Como controle positivo devem ser usados tecidos de animais comprovadamente
positivos para Scrapie, inativados com cido Frmico a 95-98% por 1 hora.
3.1.2. No caso de utilizar o sistema do tipo MicroProbe as lminas devem ser pareadas
de maneira que forme um espao capilar, com as partes pintadas fazendo contato, e colocadas
no suporte prprio para lminas (tipo Slide Holder.).
3.2. Para remoo da parafina as lminas podem ser colocadas na estufa a 65C por 20
minutos.
3.2.1. No caso de utilizar o sistema do tipo MicroProbe, aps este perodo, as lminas
so imersas em xilol, por 10 minutos a 65C, trocar o xilol e imergi-las por mais 3 minutos a
65C, realizar 3 enxages rpidos.
4. Reidratao dos tecidos
4.1. Lavar em xilol por 5 minutos
4.2. Lavar em xilol por 5 minutos
4.3. Lavar em lcool absoluto por 2 minutos
4.4. Lavar em lcool 95% por 2 minutos
4.5. Lavar em lcool 80% por 2 minutos
4.6. Lavar em lcool 70% por 1 minuto
5. Bloqueio da Peroxidase endgena
5.1. Enxaguar as lminas com uma soluo de gua oxigenada (H2O2) e metanol a 3% (1ml
de H2O2 a 30% em 30ml de metanol) preparada antes do uso.
5.2. Incubar por 10 minutos a 22-25C com a mesma soluo.
5.3. Enxaguar as lminas submergindo-as 4 vezes em gua deionizada ou bidestilada. Se
necessrio, as lminas podem ficar algumas horas submersas em gua.
6. Ativao do antgeno
6.1. Incubar os tecidos em uma soluo de cido frmico 95% por 5 minutos a 22-25C, em
um recipiente resistente ao cido.
6.2. Lavar cuidadosamente e neutralizar em tampo Tris-HCl, usando 3 enxges rpidos,
seguido de incubao por 1 minuto em tampo fresco. O pH do lavado final deve ficar entre 7
e 8.
6.2.1. Para o controle do pH, colocar as lminas sobre um papel medidor de pH e continuar
as lavagens at atingir o pH adequado.
6.3. Transferir o suporte com as lminas para um recipiente resistente ao calor, contendo
soluo tampo adequada.
6.4. Tampar o recipiente, envolv-lo em papel alumnio e autoclavar a 121C por 20
minutos. A contagem do tempo iniciada quando a temperatura atinge 121C.
6.5. Transferir as lminas para o tampo Tris com tween20 (TBST) por 10 minutos. Se
necessrio, as lminas podem ser mantidas em tampo por algumas horas.
7. Colorao Imunoistoqumica
7.1. Nesta etapa a temperatura ambiente (22-25C) deve ser mantida.
7.2. Agregar a soluo de proteinase K sobre o corte do tecido na lmina e incubar por 1
minuto. Enxaguar por 3 vezes, 20 segundos, em TBST.

69
7.2.1. No caso de utilizar o sistema do tipo MicroProbe agregar 150 microlitros de
soluo de proteinase K em um pocinho dosificador tipo Isolon e incubar por 1 minuto.
7.3. Enxaguar por 3 vezes, 20 segundos, em TBST.
7.4. Agregar o anticorpo monoclonal F99/97.6.1 diludo conforme recomendaes do
fabricante, em diluente de anticorpo e preparado no dia do uso, incubando por 10 minutos.
7.5. Enxaguar com TBST, 3 vezes por 20 segundos.
7.6. Agregar o complexo Biotina-IgG anti-camundongo e incubar por 10 minutos, a 2225C.
7.7. Enxaguar com TBST, 3 vezes por 20 segundos.
7.8. Agregar a Peroxidase-Estreptavidina ou Peroxidase-Avidina e incubar por 10 minutos a
22-25C.
7.9. Enxaguar com TBST, 3 vezes por 20 segundos.
7.10. Agregar substrato DAB cromgeno e incubar por 4 a 5 minutos.
7.11. Enxaguar com gua destilada, 2 vezes por 20 segundos.
7.12. Contracorar com hematoxilina
7.13. Enxaguar com gua corrente, 3 vezes por 20 segundos.
7.14. Deixar em gua corrente por 2-5 minutos at atingir a colorao azulada.
7.14.1. Este processo pode ser substitudo submergindo as lminas 5 vezes em banho
contendo uma soluo de hidrxido de amnio ou Scotts Water Substitute.
7.15. Enxaguar com gua corrente, 2 vezes por 20 segundos.
7.16. Deixar as lminas na gua at comear a montagem com lamnula.
8. Desidratao dos tecidos
8.1. Lavar em lcool 70% por 2 minutos
8.2. Lavar em lcool 80% por 2 minutos
8.3. Lavar em lcool 95% por 2 minutos
8.4. Lavar em lcool absoluto por 2 minutos
8.5. Lavar em xilol por 5 minutos
8.6. Lavar em xilol por 5 minutos
9. Montar as lminas utilizando blsamo do Canad natural ou sinttico para fixar a lamnula.
10. Ler em microscpio ptico.
11. Registrar o resultado.

70
ANEXO II
MANEJO DOS REATIVOS
ANTICORPOS:
- A soluo Estoque de anticorpos, em uso, deve ser armazenada entre 2 e 7C.
- No so recomendados o congelamento e o descongelamento repetidos.
- Os anticorpos so diludos no dia do uso e mantidos sob refrigerao.
- O congelamento de anticorpos pr-diludos, especialmente quando esto combinados, no
recomendado.
SUBSTRATO CROMGENO DAB:
- Utilizar conforme recomendaes do fabricante.
- Deve ser mantido sob refrigerao at o seu uso.
- Se apresentar um precipitado deve ser bem agitado antes do uso.
TAMPO TRIS-HCl A 0.1 M
- Dissolver 12,1 gramas de Tris base em 800ml de gua bidestilada.
- Ajustar o pH para 7,6 com HCl concentrado e completar para 1 litro.
- Pode ser mantido em temperatura de 22-25C.
TAMPO TRIS COM TWEEN20 (TBST)
- Adicionar 6,06 gramas de Tris base e 17,5 gramas de Cloreto de Sdio (NaCl) em 800ml de
gua bidestilada.
- Ajustar o pH para 7,6 com cido Clordrico (HCl) concentrado e completar para 1 litro de
gua, homogeneizando bem.
- Adicionar 1ml de Tween20 e homogeneizar evitando formar espuma.
- Conservar em temperatura de 22-25C.
SOLUO DE HIDRXIDO DE AMNIA
- Adicionar 2,5ml de Hidrxido de amnia 14,8 N em 1 litro de gua bidestilada.
- Conservar em temperatura de 22-25C num frasco com tampa para evitar a evaporao.
SCOTTS WATER SUBSTITUTE
- Diluir 10 gramas de Sulfato de Magnsio em 1 litro de gua bidestilada.
- Conservar em temperatura de 22-25C.

71
ANEXO III
Modelo para Formulrio de requisio de exames
Material n: Laboratrio / n do protocolo / ano Municpio:_______________ UF:_________
Veterinrio Remetente:_______________________________CRMV-UF n: _____________
Endereo:_________________________________________ Telefone: ( )_______________
Email:____________________________________________ Fax: ( )___________________
Para preenchimento exclusivo quando for bovino importado ( IN n 08, de 13/02/2001)
Nome do animal: _____________________________ Nmero do animal: _______________
Com sintomatologia nervosa? Sim
No
Para indenizao? Sim
No
Proprietrio:_________________________________ Propriedade: _____________________
Endereo:____________________________________Municpio:______________UF:_____
Email: ___________________ Telefone: ( )________________ Fax: ( ) _________________
Espcie: Bovina ( ) Ovina ( ) Caprina ( ) Raa:_______________________ Idade: ___ meses
Havia outras espcies afetadas? Sim ( ) No ( ) Categoria afetada: Macho ( ) Fmea ( )
Nmero de animais: no rebanho (_____) doentes (_____) mortos (_____)
O animal morto j foi vacinado para: Raiva ( ) Clostridiose ( ) Outras ___________________
O animal consumia concentrado? Sim ( ) No ( )
Data do incio do surto/doena: __/__/____ Durao do surto/doena: ___________________
Tipos de sinais clnicos apresentados:
Morte sbita
()
Agressividade ( )
Paralisia flcida dos posteriores
()
Depresso
( ) Opisttono ( )
Paralisia flcida dos anteriores
()
Ataxia
( ) Torneio
()
Paralisia facial
()
Com paralisia, mas alerta ( ) Convulses ( )
Paralisia da lngua
()
Cegueira
()
Dismetria
()
Ranger de dentes
()
Incoordenao
( ) Tremores
()
Tetania
( ) Nistagmo
()
Durao dos sinais clnicos (desde o incio at a morte): ______________________horas
Havia animais que se recuperaram dos sinais clnicos? Sim ( ) No ( ) Que percentual? ____%
Dia e hora da morte: _____/_____/_____ s _________:__________
Tempo decorrido entre a morte e a coleta do material: ______________ horas
Tempo decorrido entre a morte e a fixao do material: _____________ horas minuto
Material conservado em: _______________________________________________________
Veterinrio responsvel pela coleta:______________________CRMV-UF n :____________
Endereo:__________________________________________ Telefone: ( ) ______________
Email:____________________________________________ Fax: ( ) ___________________
Observaes:
Local / Data:_______________________, _____/_____/______

72
ANEXO IV
MODELO PARA LIVRO DE REGISTRO DE AMOSTRAS PARA O DIAGNSTICO DE EET EM RUMINANTES
N
no IHQ

N no
DXSNC

N
protocolo

Remetente
Endereo

Responsvel
pelo
recebimento

Proprietrio
Endereo

N do
animal

Espcie

Sexo

Idade

Raa

Data de
entrada

Data de
encaminha
mento

Data
de
sada

Resultado

73
ANEXO V

MODELO PARA LAUDO DE RESULTADO DE EXAME EM IMUNOISTOQUMICA

Credenciamento junto ao MAPA:

Identificao do laboratrio:

Protocolo remetente:

Categoria de exame:

Espcie:

Raa:

Sexo:

Proprietrio:

Data de entrada:

Idade:

Procedncia:

Data enc.:

Nmero de blocos:

Remetente e endereo do rgo requisitante:

Histrico:

Diagnstico:

Assinatura:

Responsvel Tcnico:

Data:

Data de Sada:

74
Anexo 6 Portaria N 69, de 17 de agosto de 2004
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA
DEPARTAMENTO DE DEFESA ANIMAL
PORTARIA N 69, DE 17 DE AGOSTO DE 2004
O DIRETOR DO DEPARTAMENTO DE DEFESA ANIMAL, DA SECRETARIA
DE DEFESA AGROPECURIA, DO MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E
ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 84, inciso VIII do Regimento
Interno da Secretaria, aprovado pela Portaria Ministerial n 574, de 8 de dezembro de 1998,
tendo em vista o disposto no Regulamento de Defesa Sanitria Animal, aprovado pelo
Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, e a Portaria SDA n 14, de 15 de maro de 2002,
resolve:
Art. 1 Estabelecer a composio do Comit Cientfico Consultivo sobre
Encefalopatias Espongiformes Transmissveis - CEET, especificando a rea de atuao de
cada um dos membros constituintes:
I - Claudio Severo Lombardo Barros, profissional especializado do laboratrio de
referncia nacional para o diagnstico de EET, lotado no departamento de patologia
veterinria da Universidade Federal de Santa Maria, em Santa Maria - RS;
II - Amauri Alcindo Alfieri, profissional especializado em virologia e medicina
veterinria preventiva, lotado no departamento de medicina veterinria preventiva da
Universidade Estadual de Londrina, em Londrina - PR;
III - Antnio Carlos Alessi, profissional especializado em diagnstico de EET, lotado
no departamento de patologia veterinria da Universidade Estadual Paulista, em Jaboticabal SP;
IV - Cleber Oliveira Soares, profissional especializado em medicina veterinria
preventiva, lotado no centro nacional de pesquisa de gado de corte da Empresa Brasileira de
Pesquisa Agropecuria - EMBRAPA, em Campo Grande - MS;
V - Vicente Mateo Astudillo Calds, profissional especializado em epidemiologia,
lotado no Centro Panamericano de Febre Aftosa, no Rio de Janeiro - RJ;
VI - Edwiges Maristela Pituco, profissional especializada em virologia, lotada no
laboratrio de viroses de bovdeos do Instituto Biolgico de So Paulo, em So Paulo - SP;
VII - Vitor Salvador Pico Gonalves, profissional especializado em epidemiologia,
lotado no departamento de medicina veterinria preventiva da Universidade de Braslia, em
Braslia - DF;
Art. 2 Este Comit Cientfico Consultivo ser coordenado pelo Departamento de
Defesa Animal.
Art. 3 O Coordenador do CEET poder, se necessrio, solicitar pessoal tcnico dos
setores pblico ou privado para prestar-lhe assessoramento.
Art. 4 Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao, ficando revogada a
Instruo de Servio DDA n 07, de 06 de maro de 2003.
JORGE CAETANO JUNIOR

75
Anexo 7 Laboratrios de diagnstico de raiva (verso de 27 de outubro de 2006)

1) REGIO NORTE
AMAZONAS
INSTITUIO: Laboratrio Central de Sade Pblica (LACEN/AM)
DIRETOR: Tirza Peixoto Mattos
ENDEREO: Rua Emlio Moreira, 510 Centro - CEP: 69.020-040 - Manaus /AM
TELEFONE: (92) 3233-0595 FAX: (92) 2129-4000
TCNICO RESPONSVEL: Luiz Mario Fernandes
E-mail: lacenam@bol.com.br
ACRE
INSTITUIO: Laboratrio de Diagnstico da Raiva - Superintendncia Federal de Agricultura no
Acre SFA /AC - Convnio SFA / Secretaria de Estado da Sade / Secretaria Municipal de Sade /
UFAC/ IDAF-AC
ENDEREO: Rodovia AC 40, n 793 - CEP: 69.910-490 - Rio Branco/AC
TELEFONE: (68) 3212-1333/1335 FAX: (68) 3212- 1313/1318
TCNICO RESPONSVEL: Dra Selucia Wanderley da Nbrega
E-mail: mlira@mdnet.com.br
AMAP
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Par.
PAR
INSTITUIO: Lanagro/PA
DIRETOR: Dr. Francisco Airton Nogueira
ENDEREO: Av. Almirante Barroso, 1234 - Bairro do Marco Belm - CEP:66095-000 Belm/PA
TELEFONE: (91) 3226.4233 /4310 /8814 FAX: (91) 3236-2682
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Ofir de Sales Ramos
INSTITUIO: Instituto Evandro Chagas IEC/FUNASA
DIRETOR: Jorge Fernando Soares Travassos da Rosa
ENDEREO: Av Almirante Barroso 492 - CEP: 66090-000 - Belm/PA
TELEFONE: (91) 3226-7732/ 3211-4407 FAX: (91) 3226-1284
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Elizabeth Salb Travassos da Rosa
RONDNIA
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Par.
RORAIMA
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Par.
TOCANTINS
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Par.

76
2) REGIO NORDESTE
ALAGOAS
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado de Pernambuco.
BAHIA
INSTITUIO: Laboratrio Central de Sade Pblica - LACEN
DIRETORA: Ayda Maria da Silva Costa
ENDEREO: Rua Waldemar Falco, 123 Brotas - CEP: 40.295-001 Salvador/BA
TELEFONE: (71) 3356-1414 / 3356-2299 FAX: (71) 3356-0139
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Conceio Aparecida Nagata
E-mail: lacen.diretoria@bahia.ba.gov.br
CEAR
INSTITUIO: Unidade de Laboratrio Animal UNILAN Secretaria de Agricultura do Cear.
DIRETOR: Dra. Amalia Augusto
ENDEREO: Av. Jorge Dummar 1.703 Montese - Fortaleza /CE - CEP: 60410-300
TELEFONE: (85) 3494-7700 FAX: (85) 3494-8108
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Humberto Hugo Matos Chaves
INSTITUIO: Secretaria de Sade do Estado - Centro de Controle de Zoonose
DIRETOR: Jos Eldon Menezes Linhares
ENDEREO: Av Toms Osterne de Alencar s/n Bairro So Miguel - Crato/CE CEP: 63.122-020
TELEFONE: (88) 3521-2698
TCNICO RESPONSVEL: Jos Eldon Menezes Linhares
MARANHO
INSTITUIO: Universidade Estadual do Maranho UEMA
DIRETOR: Jos Gomes Pereira
ENDEREO: Cidade Universitria Paulo VI, Tirirical So Lus/MA
TELEFONE: (98) 3245 2688, 3257 3676
FAX: 3276 9451
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Hamilton Pereira Santos

CEP: 65.057.630

PERNAMBUCO
INSTITUIO: Laboratrio de Apoio Animal - LAPA/RECIFE
DIRETORIA: Dra. Diana Sione Barbosa Pinheiro
ENDEREO: Rua Dom Manuel de Medeiros s/n - Bairro Dois Irmos Recife/PE -CEP: 52.171-030
TELEFONE: (81) 3441- 6024/6311 RAMAL: 224 Fax (81) 3441-6477
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Jos Lindembergue M. Machado
E-mail: rai-lanagro-pe@agricultura.gov.br
PIAU
INSTITUIO: Laboratrio de Patologia Animal LAPAN - Secretaria de Desenvolvimento Rural
DIRETOR: Jos Antonio Filho
ENDEREO: Av. Joo Cabral, s/n - Granja do Piraj - CEP: 64000-000 - Teresina?PI
TELEFONE:(86) 3226-2150, ramal 244
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Rosangela Cavalcante de Carvalho

77
INSTITUIO: Laboratrio de Controle de Zoonose - SMS
DIRETORIA: Lina Vera de Oliveira Arago
ENDEREO: Rua Minas Gerais 909 Matadouro - CEP: 64003-850 - Teresina/PI
TELEFONE: (86) 3213-2006 441- 6024/6311 RAMAL: 224 Fax (81) 3441-6477
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Jos Lindembergue M. Machado
SERGIPE
INSTITUIO: HEMOLACEN
DIRETOR: Edvar Freire Caetano
ENDEREO: Rua Campo de Brito, 551 Bairro So Jos Aracaju/SE
TELEFONE: (79) 3234 6016/12 FAX: (79) 3214 1863
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Lauro Abud Mdico
RIO GRANDE DO NORTE
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Cear ou Pernambuco.
PARABA
Encaminham as amostras para os laboratrios do estado do Cear ou Pernambuco.

3) REGIO CENTRO-OESTE
DISTRITO FEDERAL
INSTITUIO: Gerncia de Controle de Reservatrios e Zoonoses
ENDEREO: SAIN, rea Especial, LOTE 4 Braslia/DF
TELEFONE: (61) 3326-4023/ 3344-0784/ 3341-2084
TCNICO RESPONSVEL: Pricles Nonimitisu Teixeira Massunaga
GOIS
INSTITUIO: Laboratrio de Anlise e Diagnstico Veterinrio LABVET - Agncia Goiana de
Defesa Agropecuria Pecuria - AGRODEFESA
DIRETOR: Marli Francisca Cndida Santos
ENDEREO: Rodovia R2 s/n Saida para Nova Veneza Campus II - Goinia/GO
CEP: 74001-970 Caixa Postal: 963
TELEFONE: (62) 3205.1254
FAX: (62) 3205.1254
TCNICO(S): Dra. Rosely Mendes de Resende
Dra. Marlia da Silva Aguiar
MATO GROSSO
INSTITUIO: Laboratrio de Apoio Sade Animal - LASA/INDEA/MT
DIRETOR: Dra. Rosane Marini Melo
ENDEREO: Avenida Jurumurim s/n Bairro Carumb - CEP: 78.005-970 - Cuiab/MT
TELEFONE/FAX: (65) 3653-1711
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Giovana Campos de Almeida - CRMV-MT 2195
MATO GROSSO DO SUL
INSTITUIO: Agncia Estadual de Defesa Sanitria Animal e Vegetal de MS - IAGRO
DIRETOR: Dr. Joo Crisostomo Mauad Cavallero

78
ENDEREO: Avenida Senador Filinto Mller, 1146 - Bairro Universitrio - CEP: 79.074-902
Campo Grande/MS
TELEFONE: (67) 3346.2788 FAX: 3346.2898
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Veronique Micheline Claude Louvet Cortada

4) REGIO SUDESTE
ESPRITO SANTO
INSTITUIO: Instituto de Defesa Agropecuria e Florestal do Esprito Santo IDAF - Instituto
Biolgico do Estado do Esprito Santo - IBEES
DIRETOR: Paulo Sgio de Azevedo
ENDEREO: Fazenda Santana - Vila Osis, Santana Cariacica/ES - CEP: 29153-520
TELEFONE / FAX: (27) 3336.4538 -3286.2649
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Luz Carlos Barbosa
MINAS GERAIS
INSTITUIO: Laboratrio de Sade Animal - IMA/SEAPA/MG - Instituto Mineiro de
Agropecuria IMA Sec. de Agricultura, Pecuria e Abastecimento
DIRETOR: Dr. Altino Rodriges Neto
ENDEREO: Av. Raja Gabaglia, 245 - Cidade Jardim CEP: 30430-090 - Belo Horizonte/MG
TELEFONE: (31) 3213.8209 FAX: (31) 3213.4263
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Marilda Ferreira Martins
E-mail: laboratorioanimalima@bhsol.com.br
INSTITUIO: Laboratrio de Zoonose - SMS
DIRETOR: Eliane Golalves Paiva Lopes
ENDEREO: Rua Edna Quintel 173 Bairro So Bernardo - CEP: 31750-030
TELEFONE: (31) 3277-7410 / 3277-7411 (canil) FAX: (31) 3277-7368
TCNICO RESPONSVEL: Francisco Elias Nogueira da Gama
E-MAIL: paiva@pbh.gov.br - lazops@pbh.gov.br
RIO DE JANEIRO
INSTITUIO: PESAGRO
DIRETOR: Helena Magalhes
ENDEREO: Alameda So Boa Ventura,770 - Fonseca - Niteri/RJ - CEP: 24120-19
TELEFONE: (21) 3603-9651 FAX:2627-143
TCNICO RESPONSVEL: Cludio de Moraes Andrade
E-MAIL: lba@pesagro.gov.br
INSTITUIO: Laboratrio do Instituto Municipal de Medicina Veterinria "JORGE VAITSMAN"
DIRETOR: Tatiana Vieira Rezende
ENDEREO: Av. Bartolomeu de Gusmo, 1120- CEP: 20941-160
TELEFONE: (21) 2568-0189
TCNICO RESPONSVEL: Marlon Vicente da Silva
E-MAIL: marlonsilva@perj.rj.gov.br
SO PAULO
INSTITUIO: Instituto Biolgico de So Paulo - Secretaria de Agricultura e Abastecimento
DIRETOR: Dr. Silivio Marci Santos

79
ENDEREO: Av. Conselheiro Rodrigues Alves, 1252 - Vila Mariana CEP: 04014-002 So Paulo/SP
TELEFONE: (11) 5087-1779
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Elenice Maria Sequetin Cunha
E-mail: cunha@biologico.sp.gov.br
INSTITUIO: Laboratrio Regional de Presidente Prudente - APA
ENDEREO: Rodovia Raposo Tavares, Km 563 CEP: 19100-000 Presidente Prudente/SP
TELEFONE: (18) 3222-8688
TCNICO RESPONSVEL: Avelino Albas
E-mail: aalbas@bol.com.br
INSTITUIO: Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia - Universidade de So Paulo - USP
DIRETOR: Cssio Xavier de Mendona Jnior
ENDEREO: Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva, 87, Cid. Universitria No. 87 - CEP: 05508900, So Paulo/SP.
TELEFONE: (11) 3031-3074 (Secretaria direto, FMVZ-USP), (11) 3091-7653 Depto. VPS
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Fumio Honma Ito, Dr. Paulo Eduardo Brando, Rosana Paick
Utiama (Tcnica laboratrio), Antonio da Costa Neto (Encarregado biotrio)
INSTITUIO: Universidade de Medicina Veterinria - UNESP/Campus Araatuba
DIRETOR: Dr. Paulo Roberto Botacin
ENDEREO: Rua Clvis Pestana 793 J. Amlia - CEP: 16050-680 Araatuba/SP
TELEFONE: (18) 3636-3200 (R231)
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Luzia Helena de Queirz Silva
E-mail: lhqsilva@fmva.unesp.br
INSTITUIO: Universidade de Medicina Veterinria e Zootecnia - UNESP/Campus Botucatu
DIRETOR: Dr. Edson Ramos de Siqueira
ENDEREO: Distrito Rubio Jnior, s/n - CEP: 18618-000 - Botucatu/SP
TELEFONE: (14) 3811-6115
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Hlio Langoni
INSTITUIO: Instituto Pasteur de So Paulo
DIRETOR: Neide Yume Takaoka
ENDEREO: Av. Paulista 393 Paraso - CEP: 01311-000 - So Paulo/SP
TELEFONE: (11) 3288-0088 RAMAL: 126 FAX: (11) 3289-0831

5) REGIO SUL
PARAN
INSTITUIO: Centro de Diagnstico Marcos Enrietti - Secretaria de Estado da Agricultura e do
Abastecimento
DIRETOR: Dra. Ana Beatriz de Oliveira
ENDEREO: Rua Jaime Balo, 575 Juvev CEP: 80040-340 Curitiba/PR
TELEFONE: (41) 3352-2499 FAX: (41) 3352-2499
TCNICO RESPONSVEL: Dra. Maria Aparecida de Carvalho
E-mail: seabcdme@pr.gov.br
INSTITUIO: Centro Laboratrio Central de Sade Pblica
DIRETOR: Ana Luiza Conter Borges
ENDEREO: Rua Ubaldino do Amaral, 545 Centro - CEP: 80060-190 Curitiba/PR
TELEFONE: (41) 3264-4111 FAX: (41) 3264-4448
TCNICO RESPONSVEL: Anaclete Fellini

80
E-mail: lacen@lepus.celepar.br
RIO GRANDE DO SUL
INSTITUIO: Universidade Federal de Pelotas - UFPEL
DIRETOR: Reitor Prof Antonio Csar Borges
ENDEREO: Campus Universitrio, Prdio 42, Municpio Capo Leo Centro de Zoonose
TELEFONE / FAX: (53) 3275-7424
TCNICO RESPONSVEL: Prof Alexandre da Rocha Gonalves
INSTITUIO: Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
DIRETOR: Reitor Prof Clovis da Silva Lima
ENDEREO: Campus Universitrio - Bairro Camobi - CEP: 97105-900 - Setor de Virologia - Prdio
20, sala 4200 - Santa Maria/RS
TELEFONE / FAX: (55) 3220-8034
TCNICO RESPONSVEL: Prof Rudi Weiblen
INSTITUIO: Centro de Pesquisas Veterinrias Desidrio Finamour - IPVDF
DIRETOR: Augusto Csar da Cunha
ENDEREO: Estrada Municipal do Conde, n 6000 Eldorado do Sul - CEP: 92990-000
TELEFONE: (51) 3481.3711
TCNICO RESPONSVEL: Prof Jlio Csar de Almeida Rosa
SANTA CATARINA
INSTITUIO: Laboratrio de Diagnostico Animal / Diviso Tcnica Avanada em Santa Catarina
LANAGRO/RS
DIRETOR: Dr. Eduardo Mazoni Gonzles
ENDEREO: Rua Joo Grumiche s/n - CEP: 88102-650 - So Jos/SC
TELEFONE: (48) 3247-0177 / 3247-0977 FAX: 3234-4332
TCNICO RESPONSVEL: Dr. Jaime Salvatierra Oporto
E-mail: labsaojose@cidasc.sc.gov.br

81
Anexo 8 Instruo Normativa N 18, de 15 de dezembro de 2003
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
GABINETE DO MINISTRO
INSTRUO NORMATIVA N 18, DE 15 DE DEZEMBRO DE 2003
O MINISTRO DE ESTADO DA AGRICULTURA, PECURIA E
ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 87, Pargrafo nico, inciso
II, da Constituio, tendo em vista o disposto no Regulamento de Defesa Sanitria Animal,
aprovado pelo Decreto n. 24.548, de 3 de julho de 1934, e Considerando a no ocorrncia da
Encefalopatia Espongiforme Bovina - EEB no Brasil, condio que deve ser mantida e
preservada, em benefcio do patrimnio pecurio nacional, e o que consta do Processo n.
21000.010302/2003-17, resolve:
Art. 1 Proibir o abate de bovino e bubalino importados de pas onde houve ocorrncia
de caso autctone da EEB ou de pas considerado de risco para esta doena.
Art. 2 Proibir o comrcio e a transferncia para outro estabelecimento de criao, de
bovino e bubalino citados no artigo anterior, sem prvia autorizao do servio oficial de
defesa sanitria animal.
Art. 3 Ocorrendo a morte dos animais mencionados no art.1, somente podero ser
enterrados ou destrudos aps comunicao ao servio oficial de defesa sanitria animal e com
prvia autorizao deste, que realizar os procedimentos tcnicos recomendados nos anexos
desta Instruo Normativa.
Art. 4 Todo bovino e bubalino importados, cujo pas de origem tenha registrado a
ocorrncia de caso autctone da EEB ou seja considerado de risco, quando perder os atributos
que justificam a sua destinao, dever ser sacrificado e destrudo com acompanhamento do
servio oficial de defesa sanitria animal.
Art. 5 Caber indenizao, pelo Governo Federal, ao proprietrio de bovino ou
bubalino importados anteriormente publicao desta Instruo Normativa, sacrificado nos
termos do art. 4.
Pargrafo nico. Aps a publicao desta Instruo Normativa, no caber
indenizao, quando o pas de origem do bovino ou bubalino importados venha apresentar
caso autctone da EEB ou seja considerado de risco para essa doena.
Art. 6 Aprovar os Procedimentos Tcnicos a serem adotados, quando da instruo do
processo de sacrifcio ou sacrifcio e indenizao, de bovino ou bubalino importados de pas
considerado de risco para EEB, constantes do Anexo I desta Instruo Normativa.
Art. 7 Caber ao Departamento de Defesa Animal - DDA, da Secretaria de Defesa
Agropecuria - SDA, a implementao dos procedimentos aprovados por este Ato.
Art.8 O descumprimento total ou parcial desta Instruo Normativa sujeitar o
infrator s sanes previstas no Cdigo Penal Brasileiro.
Art. 9 Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao.
Art. 10 Ficam revogadas a Instruo Normativa n 08, de 13 de fevereiro de 2001, e a
Instruo de Servio DDA n 01, de 7 de janeiro de 2002.
ROBERTO RODRIGUES

82
ANEXO I
PROCEDIMENTOS TCNICOS PARA A INSTRUO DO PROCESSO DE SACRIFCIO E
INDENIZAO OU SACRIFCIO DE BOVINO OU BUBALINO IMPORTADOS DE PAS
DE RISCO PARA ENCEFALOPATIA ESPONGIFORME BOVINA EEB

O processo de sacrifcio ou indenizao de bovino ou bubalino importados de pas


considerado de risco para EEB, obedecer aos seguintes procedimentos tcnicos:
I - o proprietrio de bovino ou bubalino importados de pas onde foi registrada a
ocorrncia da EEB ou considerado de risco para essa enfermidade dever comunicar, por
escrito, ao servio veterinrio oficial do Estado onde o animal se encontra, o desejo de
descart-lo (anexo II) para dar incio ao processo de descarte e, quando pertinente, posterior
indenizao, juntando cpia do documento comprobatrio da propriedade do respectivo
animal;
II - o bovino ou bubalino a ser sacrificado, passvel de pagamento indenizatrio,
dever ser previamente avaliado por uma comisso estadual constituda para esse fim.
a) Essa comisso ser instituda por meio de Portaria do Delegado Federal de
Agricultura no Estado e constituda por Mdicos Veterinrios ou Zootecnistas da
Delegacia Federal da Agricultura, por Mdicos Veterinrios ou Zootecnistas do rgo
executor das atividades de defesa sanitria animal do Estado e de representantes
designados pela associao de criadores ou da federao da agricultura do Estado.
b) A comisso ter como finalidade inspecionar, avaliar e sacrificar o(s) animal(is) e,
de acordo com o preo mdio da arroba na regio, definir o valor a ser pago pelo(s)
animal(is) sacrificado(s).
c) A comisso dever anexar ao processo o documento que comprove o meio pelo qual
foi obtida a cotao da arroba.
d) A comisso emitir um Auto de Avaliao e Sacrifcio (anexo III), cabendo ainda a
concordncia do proprietrio com o valor a ser pago (anexo IV);
III - quando no couber indenizao, somente dever ser emitido o Auto de Sacrifcio
(anexo V), que ser assinado por dois funcionrios do servio oficial de Defesa Sanitria
Animal no Estado, sendo que um dever ser Mdico Veterinrio;
IV - cabendo ou no indenizao, o servio oficial do Estado coordenar os trabalhos
de sacrifcio, incinerao e enterrio do animal, bem como o acondicionamento e o envio do
tronco enceflico coletado para o laboratrio indicado pelo DDA para diagnstico da EEB;
V - o Chefe do Servio ou da Seo de Sanidade Animal - SSA atestar a regularidade
de todos os atos processuais constante dos autos, por meio de nota tcnica circunstanciada.
VI - cabendo indenizao, o Delegado Federal da Agricultura no Estado, aps analisar
o processo e receber o parecer da Assessoria Jurdica local ou do Ncleo de Assessoramento
Jurdico no Estado, encaminhar o processo ao Departamento de Defesa Animal, em Braslia,
para solicitar os recursos financeiros necessrios.
VII - A SDA dever, aps anlise e parecer conclusivo do processo pelo DDA,
encaminh-lo Consultoria Jurdica do MAPA para manifestao.
VIII - Finalizado o processo, passvel ou no de indenizao, e tendo sido esgotado
todo o rito processual, dever ser arquivado na DFA, aps a incluso das informaes no
Banco Nacional de Dados do Sistema Brasileiro de Identificao e Certificao de Bovinos e
Bubalinos - SISBOV, inclusive para efeitos de auditoria.

83
ANEXO II
AO ILMO SR. ..............................................................................................................................
Eu,............................................................................, de nacionalidade ......................................,
estado civil .........................................., profisso. ......................................................................,
residente.......................................................................................................................................,
Municpio ..................................., UF..............., portador do CPF n.........................................
e do RG n.........................................................., venho respeitosamente solicitar a V. S. o
descarte de..............(n) bovino(s) ou bubalino(s) importado(s) de pases considerados de risco
para a Encefalopatia Espongiforme Bovina (EEB) pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento, discriminado(s) abaixo, de que sou proprietrio e que se o(s) mesmo(s)
encontra(m)-se na propriedade.....................................................................................................,
municpio...................................................................................., UF..........................................,
com base no art. 4 da Instruo Normativa n____, de ___ de _____________de 2003.
Cdigo de identificao Espcie Sexo Raa Pas de Origem
individual (SISBOV)
________________, ___ de ___________ de _____
____________________________________
Assinatura do proprietrio ou do seu representante legal

84
ANEXO III
AUTO DE AVALIAO E SACRIFCIO N____/ UF
(quando couber indenizao)
Aos ____dias do ms de __________ de ______ , a Comisso de Avaliao e Sacrifcio,
designada pela Portaria n________ , de _____ de __________ de _______ , do Delegado
Federal da Agricultura no Estado de _________________________, procedeu avaliao e
ao sacrifcio de ___________(n) bovdeo(s) importado(s) de pases considerados de risco
para a Encefalopatia Espongiforme Bovina (EEB) pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento, na forma do item II do anexo I da Instruo Normativa n _____________, de
________de ___________ de 2003, existente(s) na propriedade a seguir caracterizada:
LOCALIZAO E IDENTIFICAO DA PROPRIEDADE / PROPRIETRIO:
Nome da Propriedade:
Localizao:
Municpio: CEP: Unidade da Federao:
Cdigo da Propriedade no SISBOV:
Nome do Proprietrio:
CPF: Nacionalidade: Profisso:
Endereo do Proprietrio:
Municpio: UF: CEP:
ANIMAL(IS) A SER(EM) INDENIZADO(S):
Cdigo de Espcie Sexo Raa Pas de Origem
identificao
individual
(SISBOV)

Total de
Arrobas

TOTAL
GERAL
Nome / rgo
Nome / rgo
Nome / rgo

MEMBROS DA COMISSO
Assinatura:
Assinatura:
Assinatura:

Valor
Arroba
(R$)

Valor
Total
(R$)

85
ANEXO IV
DECLARAO DO PROPRIETRIO
___________________________________(proprietrio), _______________(nacionalidade),
________________________(estado
civil),______________(profisso),
________________(n do RG), ______________________________________(n do CPF) e
____________________________ (endereo), declara que est de pleno acordo com o Auto
de Avaliao n /_____(UF),de ___/___/__ referente a _________(n) animal(is) importado(s)
de pases considerados de risco para a Encefalopatia Espongiforme Bovina (EEB) pelo
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento, de sua propriedade, efetuado pela
Comisso de Avaliao, designada pela Portaria n _________ do Delegado Federal da
Agricultura no Estado de ______________________, cujo montante foi calculado em R$
_____________________________(____________________________________________).
_______________ , ____ de ___________ de _______
_______________________________________________
Assinatura do proprietrio ou representante legal

86
ANEXO V
AUTO DE SACRIFCIO
(quando no couber indenizao)
Aos _____ dias do ms de __________ de _______ , os abaixo firmados, em cumprimento ao
item III do Anexo I da Instruo Normativa n __________________, de __________ de
___________ de 2003, procederam ao sacrifcio e destruio do(s) animal (is) abaixo
especificado(s).
LOCALIZAO E IDENTIFICAO DA PROPRIEDADE / PROPRIETRIO:
Nome da Propriedade:
Localizao:
Municpio: CEP: Unidade da Federao:
Cdigo da Propriedade no SISBOV:
Nome do Proprietrio:
CPF: Nacionalidade: Profisso:
Endereo do Proprietrio:
Municpio: UF: CEP:
ESPCIE A SER SACRIFICADA: BOVINA / BUBALINA
Sexo
Cdigo
de
identificao
individual do animal (SISBOV)
Macho

Nmero de cabeas

Fmea
Total de animais
sacrificados

) _________________________________________

RESPONSVEIS PELO SACRIFCIO E DESTRUIO


Nome/ RG/ rgo
Nome/ RG/ rgo

Assinatura:
Assinatura:

TESTEMUNHAS:
Nome/ RG
Nome/ RG

Assinatura:
Assinatura:

87
Anexo 9 Instruo Normativa N 8, de 25 de maro de 2004
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO.
GABINETE DO MINISTRO
INSTRUO NORMATIVA N 8, DE 25 DE MARO DE 2004 (*)
O MINISTRO DE ESTADO DA AGRICULTURA, PECURIA E
ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 87, Pargrafo nico, inciso
II, da Constituio, tendo em vista o disposto no art. 71 do Regulamento do Servio de Defesa
Animal, aprovado pelo Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, nos artigos 1 e 2 da Lei n
6.198, de 26 de dezembro de 1974, e o que consta do processo n 21000.008269/2003-65, e
considerando a epidemiologia da Encefalopatia Espongiforme Bovina - EEB e a necessidade
de manuteno da situao sanitria do Brasil em relao a essa doena, resolve:
Art. 1 Proibir em todo o territrio nacional a produo, a comercializao e a
utilizao de produtos destinados alimentao de ruminantes que contenham em sua
composio protenas e gorduras de origem animal.
Pargrafo nico. Incluem-se nesta proibio a cama de avirio, os resduos da criao
de sunos, como tambm qualquer produto que contenha protenas e gorduras de origem
animal.
Art. 2 Fica tambm proibida a produo, a comercializao e a utilizao de produtos
para uso veterinrio, destinados a ruminantes, que contenham em sua formulao insumos
oriundos de ruminantes.
Art. 3 Excluem-se da proibio de que tratam os artigos anteriores, o leite e os
produtos lcteos, a farinha de ossos calcinados (sem protena e gorduras), e a gelatina e o
colgeno preparados exclusivamente a partir de couros e peles.
Pargrafo nico. A critrio da Secretaria de Defesa Agropecuria, mediante anlise de
risco, podero ser excludos outros produtos e insumos.
Art. 4 Os rtulos e as etiquetas dos produtos destinados alimentao de no
ruminantes, que contenham qualquer fonte de protenas e gorduras de origem animal, exceto
os produtos mencionados no art. 3 desta Instruo, devero conter no painel principal e em
destaque, a seguinte expresso: USO PROIBIDO NA ALIMENTAO DE
RUMINANTES.
Art. 5 Os produtos destinados alimentao de ruminantes esto sujeitos a anlises de
fiscalizao para a identificao dos ingredientes utilizados como fonte de protena.
Art. 6 As Secretarias de Defesa Agropecuria e de Apoio Rural e Cooperativismo, em
suas respectivas reas de competncia, expediro instrues complementares para os casos
que requeiram posterior regulamentao ou para os casos omissos.
Art. 7 Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao.
ROBERTO RODRIGUES
(*) Republicada por haver sado com incorreo, do original, no DOU de 26 de maro de 2004, Seo 1, p 5.

88
Anexo 10 Instruo de servio N 002/2003/DOI/DIPOA
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA
DEPARTAMENTO DE INSPEO DE PRODUTOS DE ORIGEM ANIMAL DIPOA
DIVISO DE OPERAES INDUSTRIAIS - DOI
INSTRUO DE SERVIO N 002/2003/DOI/DIPOA
ASSUNTO: procedimentos e normas necessrios para operacionalizao do sistema de
vigilncia epidemiolgica para deteco de Encefalopatias Espongiformes Transmissveis
EET em ruminantes.
REFERNCIAS: Instruo Normativa SDA n 18, de 15 de fevereiro de 2002, Instruo de
Servio Conjunta DDA/DIPOA, julho de 2003, Inspeo de Carnes-Padronizao de
Tcnicas, Instalaes e Equipamentos e Manual de procedimentos para Diagnstico
Histolgico Diferencial da Encefalopatia Espongiforme dos Bovinos (BSE).
HARMONIZAO DE PROCEDIMENTOS: a ser observada pela Inspeo Federal junto
aos estabelecimentos que abatem animais das espcies bovinas, ovinas e caprinas, na coleta
do tronco enceflico.
1. POPULAO ALVO
Todos os animais, destinados a MATANA DE EMERGNCIA (MEDIATA e
IMEDIATA), das espcies bovina, bubalina, ovina e caprina.
2. NA INSPEO ANTE-MORTEM
2.1. Na chegada dos animais, identific-los a partir dos dados contidos no documento
de identificao animal DIA (animais a serem abatidos em estabelecimentos habilitados ao
mercado internacional) e na GTA (procedncia, propriedade, sexo, nmero de animais,
idade);
2.2. Todos os animais, que foram retidos no Curral de Observao, (aps o exame
geral e destinados a MATANA DE EMERGNCIA junto com os animais que chegam ao
estabelecimento em precrias condies fsicas ou de sade, impossibilitados de atingir a Sala
de Matana por seus prprios meios), devero ser objeto de coleta do tronco enceflico.
3. NA INSPEO POST-MORTEM
3.1. Transportar, para o Departamento de Inspeo Final D.I.F. (Art.152 RIISPOA),
todas as carcaas-cabeas, previamente identificadas, dos animais citados acima,
independente das peas marcadas nas linhas de inspeo de cabeas e de vsceras.
4. NO DEPARTAMENTO DE INSPEO FINAL D.I.F. (ART. 152 RIISPOA)
4.1. Identificar o conjunto carcaa-cabea;
4.2. Fixar na cabea um lacre numerado, independentemente das peas terem sido
marcadas nas linhas de inspeo de cabeas e de vsceras, anotando no mapa de condenao o
nmero da carcaa, do lacre e a identificao do animal.
4.3 Encaminhar para a Seo respectiva, as cabeas que no apresentarem leses, para
a retirada em local parte das carnes (desossa) e desarticulao da mandbula.
4.4 Encaminhar para a Seo de Cabea, as cabeas da populao alvo, que tenham
sido identificadas pelo DIF, para retirada do tronco enceflico.

89
5. SEO DE CABEAS
5.1. Separar as cabeas que estejam com identificao (lacre) em continentes
apropriados.
5.2. Efetuar a abertura da cabea para retirada do tronco enceflico conforme Manual
de procedimentos para diagnstico histolgico diferencial da encefalopatia espongiforme dos
bovinos (BSE).
5.3. Aps a separao do tronco enceflico do crebro, dever este ser conservado em
formol a 10%.
6. ENVIO E COLETA DOS MATERIAIS
6.1. Conforme Instruo Normativa SDA n 18, de 15 de fevereiro de 2002 Art. 2 os
Servios de Sanidade Animal das Delegacias Federais da Agricultura, devero providenciar o
envio dos materiais coletados nos frigorficos aos laboratrios credenciados pelo DDA.
6.2. As orientaes sobre a forma de coletar, conservao e acondicionamento das
amostras, como tambm os respectivos materiais necessrios (formol e frasco) sero
fornecidos pelos Mdicos Veterinrios lotados no SSA/DFA em cada estado.
Esta Instruo de Servio estar sujeita aos procedimentos habituais de Superviso e
Auditoria.
Braslia/DF, 12 de agosto de 2003.

Paulo Ricardo Campani


Chefe da DOI/DIPOA

De acordo
Rui Saldanha Vargas

90
Anexo 11 Formulrio de colheita e envio de materiais para o programa de vigilncia
das Encefalopatias Espongiformes Transmissveis em frigorficos
EXCLUSIVO PARA VIGILNCIA EM FRIGORFICOS
Frigorfico: __________________________________________ SIF:___________ Municpio:__________________________________
Veterinrio Remetente: ____________________________________________________CRMV-UF n: __________________________
Endereo: ________________________________________________________________Telefone: (
)________________________
Email: _______________________________________________________________________ Fax: (
)________________________

AMOSTRA n:controle/SIF/UF/ano

Proprietrio:_______________________________________________________________________ UF:____________
Propriedade:__________________________________________Municpio:____________________________________

Animal na linha de matana


Animal encaminhado para abate de emergncia
Lote:___________________ N de animais:___________________ N da(s) GTA(s):___________________________
N de Identificao: _____________________________________ N da carcaa:______________________________
Motivo(s) para o abate de emergncia: ________________________________________________________________

Bovina
Ovina
Caprina
Espcie:
Sexo:
Macho
Fmea
Aptido leiteira
Categoria:

Raa:_____________________________ Idade:_____________meses
Corte (confinado)

Corte (semi-confinado)

AMOSTRA n: controle/SIF/UF/ano

Proprietrio: _______________________________________________________________________ UF:____________


Propriedade: _________________________________________Municpio:____________________________________

Animal na linha de matana


Animal encaminhado para abate de emergncia
Lote:___________________ N de animais:___________________ N da(s) GTA(s):___________________________
N de Identificao: _____________________________________ N da carcaa:______________________________
Motivo(s) para o abate de emergncia: ________________________________________________________________

Espcie:
Bovina
Ovina
Caprina
Fmea
Sexo:
Macho
Categoria:
Aptido leiteira

Raa:_____________________________ Idade:_____________meses
Corte (confinado)

Corte (semi-confinado

_________________________________________________
Assinatura e carimbo do Medico Veterinrio Responsvel
____

Data:_____/_____/_____

91
Anexo 12 Ficha de encaminhamento de encfalos no LPV-UFSM

Ficha de encaminhamento DXSNC


Programa de Vigilncia das Encefalopatias Espongiformes Transmissveis
Laboratrio de Patologia Veterinria UFSM

DX ______/____ - V __-______- ___

Data: ____/____/____

Professor/Ps-Graduando_________________________________
Bulbo _______________________________________________________
Ponte________________________________________________________
Mesencfalo __________________________________________________
Cerebelo _____________________________________________________
Tlamo ______________________________________________________
Crtex frontal (1) _____________________________________________
Crtex parietal (2) ____________________________________________
Crtex occipital (3) ____________________________________________
Hipocampo __________________________________________________
Ncleos da base _______________________________________________
Gnglio de Gasser + rete mirabile ________________________________
Fragmento adicional (________________) _________________________

Nmero de fragmentos encaminhados (______)

Preenchimento pelo tcnico do laboratrio:


Nmero de blocos: ______
Nmero de lminas:______
Obs.:

Diagnstico: ___________________________

Categoria: ____

92
Anexo 13 Modelo de laudo histopatolgico de material do programa DXSNC

DXSNC
0047/04
LAUDO HISTOPATOLGICO DE MATERIAL DO PROGRAMA DXSNC
Protocolo remetente
CAD -0034/04
Espcie
bovina

Categoria de exame:
4 (animal importado)

Raa:
Limousin

Proprietrio:
Jlio Loureno Golin
Data de entrada:
15.01.04

Sexo:
fmea

Idade:
11 anos

Procedncia:
Itapetininga, SP
Data Enc.:
22.01.04

Nmero de blocos:
3

Data de Sada:
16.02.04

Remetente e endereo para remessa do resultado:


Dra. Vera Lcia Nascimento Gonalves
Secretaria de Agricultura e Abastecimento
Coordenadoria da Defesa Agropecuria
Centro de Anlise e Diagnstico
Av. Brasil 2340, Caixa Postal 960, Jardim Chapado
13073-001, Campinas, SP
Histrico: bovino importado da Frana identificado pelo nome de HERODE, fmea,
Limousin, 11 anos. Sem sintomatologia nervosa. Material colhido segundo a instruo
normativa 18 de 15.12.2003.
Histopatologia: bulbo na altura do bex: pigmento marrom-amarelado no interior
do citoplasma dos neurnios (lipofuscina). Ponte na altura dos pednculos
cerebelares: manguito perivascular. Mesencfalo na altura dos colculos rostrais:
vacolos no citoplasma de neurnios do ncleo vermelho. Pigmento marromamarelado no citoplasma de neurnios (lipofuscina) e manguito perivascular.
A vacuolizao do citoplasma dos neurnios do ncleo vermelho do mesencfalo
encontrada em 64% dos encfalos de bovinos normais (ver Gavier-Widen et al.:
Histological observations on the brains symptomless 7-year-old cattle. J Comp Path
124:52-59, 2001). A lipofuscina uma alterao ligada ao envelhecimento e no tem
maior significado clnico. O manguito perivascular discreto e inespecfico.
Inflamaes desse tipo so encontradas em cerca de 30% dos bovinos adultos normais
(ver Gavier-Widen et al.: Histological observations on the brains of symptomless 7years-old cattle. J Comp Path 124:52-59, 2001).
Diagnstico: sem alteraes histopatolgicas
Claudio S. L. Barros
CRMV/RS 588

Santa Maria, 16 de fevereiro de 2004

Alteraes Macroscpicas e Microscpicas


do Sistema Nervoso Central de Bovinos
- Seo 3 -

Programa DXSNC 2001-2005

Exame macroscpico

94

1. Introduo
A identificao de artefatos, de estruturas normais que se assemelham a leses, de
leses no associadas a sinais clnicos e de achados postmortem um aspecto importante
no diagnstico de doenas do sistema nervoso central (SNC) e permite a identificao
correta dos achados antemortem significativos. Essas alteraes so divididas em quatro
grupos: no-leses, leses de pouco significado clnico, alteraes postmortem e artefatos.
Em no-leses so includos aspectos morfolgicos macro e microscpicos normais do
SNC que podem ser interpretados como leses quando no so conhecidos do patologista.
Leses de pouco significado clnico incluem aquelas que no contribuem para o quadro
clnico do animal e so apenas achados de necropsia ou histolgicos incidentais.
Alteraes postmortem no so verdadeiras leses, pois ocorrem aps a morte em virtude
de autlise ou putrefao. Artefatos podem ser produzidos pela colheita e mtodo de
conservao do SNC ou associados causa da morte do animal.
Esta seo demonstra, atravs de figuras e texto resumido, as alteraes macro e
microscpicas descritas acima, bem como alteraes ligadas a doenas, observadas em
encfalos de bovinos encaminhados ao Laboratrio de Patologia Veterinria da
Universidade Federal de Santa Maria (LPV/UFSM) durante o perodo de 2001 a 2005,
como parte do Programa Nacional de Vigilncia da Raiva dos Herbvoros e outras
Encefalopatias (PNCRH) do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
(MAPA).

2. Exame macroscpico
2.1 Alteraes ligadas a doenas
Em qualquer rgo examinado macroscopicamente, devem ser analisados os
seguintes parmetros: distribuio, cor, forma, tamanho, consistncia e aspectos especiais,
como peso, presena de lquido e odor. Alguns desses aspectos so muito importantes no
exame macroscpico do SNC, porque muitas vezes definem o diagnstico.
Distribuio o arranjo espacial das leses. um parmetro usado macro e
microscopicamente. As leses podem ser focais, multifocais (e suas subdivises), difusas,

Exame macroscpico

95

segmentares, simtricas e aleatrias. A cor e consistncia definem aspectos que enquadram


as leses em processos circulatrios, degenerativos, inflamatrios ou neoplsicos. A forma
e o tamanho so importantes em casos de defeitos congnitos e neoplasmas. Esses
aspectos so ilustrados nas Figuras 1 a 6.

Figura 1. Encfalo, superfcie de corte na altura do tlamo. Nestas figuras podem ser descritos trs aspectos:
distribuio (focal e multifocal a coalescente), cor (amarela) e consistncia (amolecida). Descrio: A. H
um abscesso no lado esquerdo do tlamo com aproximadamente 3 cm de dimetro. O complexo gnglio de
Gasser + rete mirabile carotdea + hipfise est aderido na base do encfalo. B. H trs abscessos
multifocais a coalescentes na regio ventral direita do tlamo. Comentrio: nos casos observados durante o
programa de vigilncia da BSE, esses abscessos foram comumente associados ao uso da tabuleta para
desmame em bezerros; ocorrem secundariamente leso da narina pela tabuleta e geralmente a hipfise e o
osso basisfenide esto afetados (Loretti et al. 2003). Em B a leso da cavidade nasal foi causada por miase
secundria a traumatismo em uma das narinas.

Figura 2. Encfalo. A.Vista dorsal. B. Superfcie de corte na altura dos ncleos basais. Nestas figuras
podem ser descritos dois aspectos: distribuio (difusa) e cor (vermelha). Descrio: A. Hiperemia difusa
das leptomeninges. B. Cor vermelho-cereja do crtex cerebral e dos ncleos basais. Comentrio: a
hiperemia dos vasos leptomenngeos ocorre em casos de leptomeningite, incluindo raiva (Rech et al. 2006a).
A cor vermelho-cereja em toda a substncia cinzenta do encfalo um achado patognomnico de babesiose
cerebral por Babesia bovis em bovinos (Rodrigues et al. 2005). As leses microscpicas dessas alteraes
esto ilustradas na Figura 58.

Exame macroscpico

96

Figura 3. Encfalo. Vista dorsal. Nestas figuras so descritos os seguintes aspectos: cor (vermelha),
distribuio (multifocal) e aspectos especiais como presena de lquido (hemorragia). Descrio: A. Abaixo
da dura-mter, a superfcie dorsal do telencfalo est parcialmente recoberta por cogulos de sangue. B.
Hemorragias multifocais so observados na superfcie dorsal do telencfalo e cerebelo e um cogulo de
sangue visto na superfcie dorsal da medula oblonga. Comentrio: hemorragias subdurais so geralmente
decorrentes de traumatismo. No primeiro caso a leso foi provocada porque o animal se debateu contra a
cerca. A hemorragia na cavidade craniana uma leso que ocupa espao. No segundo caso, a hemorragia foi
decorrente de sucessivas quedas devido intoxicao por Solanum fastigiatum, que causa leso nas clulas
de Purkinje e, conseqentemente, desequilbrio e quedas (Rech et al. 2006b). As leses microscpicas de
hemorragia traumtica esto ilustradas nas Figuras 38A e B. As leses microscpicas de intoxicao por S.
fastigiatum podem ser observadas nas Figuras 48 e 51.

Figura 4. Encfalo. Nestas figuras so descritas cor (vermelha) e consistncia (amolecida). Descrio: A.
Vista dorsal do crtex telenceflico. reas multifocais de malacia hemorrgica. B. Depresso do crtex
telenceflico e reas gelatinosas (malacia recente) no putmen. Comentrio: malacia o termo usado para
designar uma alterao macroscpica caracterizada por amolecimento do tecido nervoso. Essa leso
freqentemente observada em casos de meningoencefalite por herpesvrus bovino-5 (Rissi et al. 2006). A
leso microscpica de malacia pode ser observada na Figura 62.

Exame macroscpico

97

B
Figura 5. Cerebelo. Nestas figuras so descritas
distribuio (bilateral, simtrica e focal), forma e
aspectos especiais (presena de lquido, hipoplasia e
atrofia). Descrio: A. Simtrica e bilateralmente,
parte dos hemisfrios cerebelares esto hipoplsicos.
B. Na superfcie dorsal do hemisfrio cerebelar direito
h um cisto rompido de aproximadamente 2 cm de
dimetro que desloca o verme cerebelar para o lado
esquerdo da linha mdia. C. O cisto atrofiou parte do
tecido cerebelar. Comentrio: hipoplasia cerebelar
um defeito congnito que pode ser hereditrio ou
produzido por um agente ambiental. Em bovinos,
hipoplasia cerebelar relatada em infeces intrauterinas pelo vrus da diarria viral bovina.

Figura 6. Medula espinhal. Nestas figuras so descritos aspectos especiais (compresso). Descrio: A.
Vista lateral. Osteomielite das 9 e 10 vrtebras torcicas com compresso da medula espinhal adjacente. B.
Vista dorsal. Abscesso no assoalho do canal medular com compresso da medula espinhal adjacente.
Comentrio: abscessos vertebrais com conseqente compresso da medula espinhal so freqentemente
observados em bovinos jovens e so geralmente hematognicos e relacionados com onfaloflebite. A leso
microscpica decorrente da compresso pode ser observada na Figura 52.

Exame macroscpico

98

2.2 No-leses, leses de pouca importncia clnica e alteraes


postmortem
Melanose uma no-leso comum em bovinos e se caracteriza por reas pretas ou
marrom-escuras nas leptomeninges (pigmentao de melanina). Embora essa alterao
seja denominada melanose, um achado normal, freqente em encfalos de ovinos
Suffolk e Hampshire Down e em bovinos fortemente pigmentados. Ocorre principalmente
nas leptomeninges dos lobos frontais (Figura 7). Freqentemente, a melanose
erroneamente interpretada como necrose.

B
Figura 7. Encfalo. Melanose menngea. Descrio:
A. Vista dorsal do encfalo. reas pretas localizadas
na meninge das regies parietais e occipitais prximas
ao sulco. B. Vista ventral. A melanose se estende para
as reas lateroventrais do encfalo. C. Melanose
acentuada que se estende desde os lobos frontais at a
regio medial do crtex occipital. Comentrio: essa
no-leso observada macroscopicamente nas
leptomeninges. Microscopicamente, a melanose se
caracteriza pela distruibuio linear dos melancitos
nas leptomeninges (Figura 25).

Estruturas normais do encfalo podem ser confundidas com neoplasmas ou


malformaes (Figura 8). Uma delas o corpo pineal, epfise ou conarium que se situa
dorsalmente ao tronco enceflico entre os colculos rostrais do mesencfalo e o tlamo. O
corpo pineal uma estrutura glandular especializada na secreo de melatonina. Existe
variao no tamanho da pineal entre alguns bovinos. Outra formao anatmica que s

Exame macroscpico

99

vezes pode ficar presente na superfcie ventral do encfalo e o tber cinrio, estrutura que
prende a hipfise ao encfalo.

Figura 8. Corpo pineal e tber cinrio. Descrio: A. Vista dorsal do encfalo para visualizao da epfise,
dorsal e cranial aos colculos rostrais do mesencfalo (os hemisfrios cerebrais foram parcialmente
separados). B. Vista ventral do encfalo para visualizao do tber cinrio (estrutura no centro da ilustrao).
Comentrio: o tber cinrio o nome dado estrutura que fixa a hipfise ao encfalo. O aspecto
microscpico da epfise pode ser observada na Figura 24.

O mtodo de eutansia ou a remoo do encfalo do crnio provocam diversas


alteraes no encfalo de bovinos. Hemorragia subdural uma leso que pode resultar do
mtodo de eutansia e observada em encfalos de bovinos que foram mortos com dardo
cativo ou quando so dessensibilizados com a introduo da faca na medula cervical. O
histrico importante nesses casos porque fica difcil de diferenciar essas leses de outras
hemorragias de origem traumtica, como mostrado na Figura 3A. Muitas vezes, quando
se usa pistola pneumtica, podem ser observados fragmentos de ossos no tecido
enceflico. Outro achado comum em encfalos de bovinos provenientes de abatedouro, foi
a ausncia do cerebelo e/ou tronco enceflico. Isso pode ser atribudo forte presso
exercida pelo dardo cativo na hora da dessensibilizao do bovino (Figura 9). A forte
presso pode levar formao e disseminao de mbolos de tecido nervoso para os
pulmes (Garland et al. 1996). Isso particularmente importante quando se pensa na
disseminao da encefalopatia espongiforme bovina (BSE) no frigorfico. Devido
ausncia de testes pra detectar a doena no bovino vivo, h grande preocupao em
eliminar materiais de risco especfico da cadeia alimentar humana. Nesse sentido, esto
sendo desenvolvidos alguns testes para detectar tecido nervoso emblico no sangue
atravs da deteco de duas protenas do SNC: sintaxina 1B e protena glial fibrilar cida
(GFAP) (Love et al. 2000, Prendergast et al. 2003).

Exame macroscpico

100

Figura 9. Alteraes observadas em abatedouros. Descrio: A. Vista dorsal do encfalo. Hemorragia


traumtica multifocal a coalescente B. Superfcie de corte do encfalo na altura do tlamo. No lado
esquerdo do telencfalo observa-se um grande fragmento sseo no interior do parnquima cerebral recoberto
por cogulo de sangue. C. Encfalo fixado em formol. Na superfcie dorsal e lateral do crtex telenceflico
observa-se hemorragia subdural difusa. D. Neste encfalo, o cerebelo e o tronco enceflico esto substitudos
por grande cogulo de sangue. Parte do encfalo foi expelido devido forte presso do dardo cativo.
Comentrio: muitas vezes, a excessiva quantidade de sangue na forma de cogulos ao redor do encfalo
pode prejudicar a adequada fixao do encfalo em formol.

Em casos de morte por sangria, em que ocorre seco da traquia e dos vasos do
pescoo, o esforo da inspirao pode introduzir ar sob presso pelas cartidas (ou via
retrgrada pela jugular); o ar ento atinge os vasos do encfalo, distende os espaos
perivasculares e confere um aspecto de esponja, principalmente substncia cinzenta
(Figura 10). Quando se retira o encfalo da caixa craniana com o auxlio de um machado,
um artefato comumente observado a presena de bolhas de ar que so introduzidas nos
vasos das leptomeninges durante os golpes do machado e que pode ser interpretado
erroneamente como embolia gasosa (Figura 11). Alteraes postmortem incluem o
amolecimento do encfalo como um todo ou o desenvolvimento de orifcios causados pela
distenso do tecido nervoso pelos gases produzidos pelas bactrias da putrefao, o que d
o chamado aspecto de queijo suo ao encfalo (Figura 12).

Exame macroscpico

101

Figura 10. Encfalo fixado em formol. Superfcie de corte na altura do crtex parietal (A) e na altura dos
ncleos basais (B). Descrio: A e B. A substncia cinzenta tem aspecto finamente espongiforme.
Comentrio: essa leso formada por embolia gasosa. O aspecto microscpico desta alterao encontra-se
na Figura 39.

Figura 11. Encfalo na caixa craniana. Descrio: as leptomeninges apresentam mltiplas bolhas de ar.
Comentrio: as batidas do machado na cavidade craniana podem incorporar ar nos vasos das leptomeninges.
Esse artefato desaparece aps a fixao e no observado em sees histolgicas.

Figura 12. Encfalo fixado em formol. Descrio: A. Superfcie de corte na altura dos ncleos basais. B.
Superfcie de corte na altura do bulbo ao nvel do bex. Bolhas de putrefao multifocais aleatrias.
Comentrio: bolhas de putrefao so achados infreqentes nos encfalos autolisados de bovinos e na
maioria das vezes encontradas na regio ventral do encfalo, principalmente nos ncleos basais. O aspecto
microscpico desse achado postmortem visto na Figura 44C.

Exame microscpico

102

3. Exame Microscpico
O exame microscpico do SNC deve ser realizado de forma padronizada e
sistemtica e com conhecimento bsico da neuroanatomia. Para anlise representativa das
diversas reas do encfalo, recomenda-se a realizao de cortes transversais seriados em
intervalos de 0,5-1 cm que so assim examinados em ambas as faces. Para o exame
histolgico, os cortes foram sistematicamente processados conforme descrito na Figura 13.

B
Figura 13. Regies do encfalo a serem colhidas para o diagnstico das doenas do sistema nervoso central.
A. Hemisfrio cerebral mostrando o local dos cortes; 1, bulbo na altura do bex (BO); 2, cerebelo (CE); 3,
ponte com pednculos cerebelares (PO); 4, mesencfalo na altura dos colculos rostrais (ME); 5, crtex
occipital (CO); 6, diencfalo atravs da aderncia intertalmica - crtex parietal (CP), hipocampo (HC) e
tlamo (TA) e 7, lobo frontal na altura do joelho do corpo caloso e dos ncleos da base (NB) crtex frontal
(CF). B. Sees obtidas dos 7 locais mostrados em A.

Exame microscpico

103

Essas sees histolgicas seguem o padro adotado pelos laboratrios credenciados


pelo MAPA para o exame do encfalo de bovinos para vigilncia da BSE no Brasil. Esse
mtodo tem as seguintes vantagens: permite o estudo detalhado de reas especficas do
encfalo, oferece maior facilidade para comparao com encfalos controles, facilita a
descrio da distribuio de leses e permite localizar facilmente os blocos no arquivo
para realizao de coloraes especiais ou imunoistoqumica.
Para a rotina da patologia diagnstica, o reconhecimento das maiores subdivises
anatmicas das seces transversais do SNC (medula espinhal, tronco enceflico,
cerebelo, diencfalo, hipocampo, crtex telenceflico e ncleos basais), macro e
microscopicamente (Figura 14), suficiente para determinar a localizao e extenso das
leses. Aps a identificao do local do encfalo a ser examinado, necessrio identificar
os seguintes constituintes celulares: neurnios (Figura 15), oligodendrcitos, astrcitos,
micrglia (Figura 16), vasos sangneos, epndima, plexo coride, (Figura 17), neurpila e
parnquima neural (Figura 18), e meninges (Figura 19). A deteco e a interpretao de
alteraes nesses constituintes celulares e em reas especficas do SNC freqentemente
permite o diagnstico de diversas doenas e artefatos, bem como a diferenciao de
estruturas normais do encfalo e estruturas associadas. Algumas doenas com sinais
clnicos de distrbios nervosos no produzem leses no SNC e o diagnstico feito
atravs da epidemiologia, sinais clnicos e realizao de outros exames complementares
(por ex., botulismo, ttano).

Exame microscpico

104

d
e
f

Figura 14. Identificao submacroscpica dos principais segmentos do sistema nervoso central (SNC). HE.
Descrio: A. Medula espinhal. Observe o H medular (substncia cinzenta) e a fissura ventral mdia. B.
Bulbo na altura do bex. Observe a rea postrema (a) simtrica e bilateral. C. Ponte na altura dos pednculos
cerebelares. HE. D. Mesencfalo na altura dos colculos rostrais. A estrutura marcada com a letra b o
aqueduto mesenceflico. E. Tlamo. A estrutura marcada com a letra c o terceiro ventrculo. F. Cerebelo.
A camada rosa-clara externa a camada molecular. A camada basoflica interna das folhas a camada de
clulas granulares. Entre essas duas camadas situa-se a camada de clulas de Purkinje (no observada neste
aumento). Essas trs camadas formam a substncia cinzenta do cerebelo. A camada mais interna (rosaescura) a substncia branca. G. Hipocampo. As diferentes partes do hipocampo podem ser visualizadas na
Figura 15C. H. Crtex telenceflico. A substncia rosa-escura interna uma poro da substncia branca
subcortical denominada coroa radiada. I. Ncleos da base. Observe a cpsula interna (d), o ncleo caudado
(e) e o ventrculo lateral (f). Comentrio: especialmente em fragmentos do SNC sempre importante
observar macroscopicamente a lmina com o fragmento de encfalo ou medula espinhal antes de analis-lo
microscopicamente. Essa observao til na identificao de reas especficas do SNC e tambm na
localizao das leses. Geralmente as leses do SNC so identificadas atravs de alteraes nas propriedades
tintoriais.

Exame microscpico

105

Figura 15. Tamanho e disposio dos neurnios em diversos segmentos do sistema nervoso central (SNC).
Descrio: A. Neurnio do tronco enceflico. A estrutura marcada com o asterisco o cone de implantao
do axnio. HE. 100x. B. Neurnios do cerebelo. Os neurnios marcados em 1 e 2 so respectivamente
denominados neurnio de Purkinje e neurnio de Golgi. Neurnios da camada de clulas granulares so
clulas pequenas (cerca de 7 m de dimetro) e esto rodeando o neurnio de Golgi. HE. 40x. C. Aspecto
microscpico das camadas do hipocampo. O hipocampo uma estrutura laminar dividida em trs partes:
subiculum, corno de Ammon e giro denteado. Na figura esto representados: stratum pyramidale (1),
camada de clulas moleculares (2) e stratum radiatum (3). HE. 2x. D. Neurnios do tlamo (diencfalo). E.
Disposio laminar dos neurnios do crtex telenceflico. HE. 10x. F. Neurnios do crtex telenceflico.
HE. 100x. Comentrio: A. Neurnios da medula espinhal e tronco enceflico contm abundante pericrio e
grande ncleo com proeminente nuclolo. Observe a substncia de Nissl no citoplasma. Neurnios do tronco
enceflico so geralmente dispostos em ncleos (agrupamentos de neurnios em meio substncia branca
do SNC) (Figura 18C). Neurnios do tlamo e crtex telenceflico so menores e possuem o citoplasma
reduzido.

Exame microscpico

106

Figura 16. Clulas da glia. HE. Descrio: A. Oligodendrcitos satlites. Essas clulas ficam justapostas
aos neurnios. HE. 100x. Como tm o citoplasma claro contra o citoplasma do neurnio, muitas vezes do a
impresso errnea qu fagocitam um pedao do pericrio neuronal. B. Oligodendrcito interfascicular.
Oligodendrcitos so clulas pequenas, arredondadas, com citoplasma hipercromtico semelhantes a
linfcitos. HE. 40x. C. Astrcitos. Observe o ncleo grande vesicular, com indistinto nuclolo e inaparente
citoplasma de dois astrcitos localizados entre os oligodendrcitos interfasciculares. HE. 100x. D. Micrglia.
Observe o ncleo pequeno, hipercromtico e em forma de vrgula ou bastonete (seta). Em encfalos normais,
essas clulas so praticamente imperceptveis. HE. 100x. Comentrio: Oligodendrcitos e astrcitos formam
a macrglia. Oligodendrcitos satlites regulam o microambiente perineuronal, por outro lado,
oligodendrcitos interfasciculares so responsveis por mielinizar os axnios no sistema nervoso central
(SNC). Astrcitos participam em processos de regulao, reparao, suporte e formao de barreiras no
SNC. Micrglia o termo dado aos macrfagos residentes do SNC. Essas clulas derivam dos moncitos e
migram para o SNC logo depois de ocorrer a sua vascularizao.

Exame microscpico

107

Figura 17. Vasos sangneos, epndima e plexo


coride. Descrio: A. Vaso sangneo. Observe as
clulas endoteliais. HE. 40x. B.
Clulas
ependimais. Observe a camada simples de clulas
epiteliais cuboidais ciliadas. HE. 100x. C. Plexo
coride. Clulas epiteliais do plexo coride so
clulas ependimais modificadas que circundam uma
rea rica em tecido conectivo altamente vascular.
HE. 40x. Comentrio: o sistema nervoso central
(SNC) no possui linfticos. H drenagem para os
espaos perivasculares, capilares, vnulas e para os
seios das leptomeninges. Clulas ependimais
revestem o sistema ventricular com a funo de
movimentar o lquido cefalorraquidiano (LCR)
atravs dos seus clios e regular o fluxo de
substncias entre o LCR e o SNC. O plexo coride
tem a funo de produzir o LCR.

Figura 18. Organizao do sistema nervoso central. Descrio: A. A substncia cinzenta consiste de corpos
neuronais e uma rede composta de axnios finamente mielinizados, dendritos, oligodendrcitos satlites,
astrcitos protoplasmticos e micrglia e seus processos. HE. 100x. B. A substncia branca consiste de
axnios bem mielinizados, oligodendrcitos interfasciculares e astrcitos fibrosos. HE. 100x. C. Ncleo do
tronco enceflico. HE. 10x. D. Ncleos basais. A substncia rsea proeminente a substnia branca. HE.
10x. Comentrio: neurpila definida como a rede de processos neuronais (dendritos e axnios) e de clulas
gliais que se localiza na substncia cinzenta. Em HE a substncia rosa finamente fibrilar que se observa
entre neurnios e clulas gliais (N). Parnquima neural o nome usado para definir a substncia rseaescura formada por axnios e processos das clulas gliais da substncia branca. No tronco encflico e
diencfalo muitas vezes difcil discernir entre a substncia cinzenta e substncia branca. Certas regies do
encfalo como ncleos basais, telencfalo e cerebelo possuem distinta diviso entre substncia cizenta e
branca. A substncia branca do telencfalo denominada coroa radiada.

Exame microscpico

108

Figura 19. Meninges. Descrio: A. Leptomeninge, tambm denominada de pia-aracnide, formada por
vasos sangneos e tecido fibrovascular e reveste o SNC. Nesta figura, abaixo das leptomeninges, observa-se
o crtex telenceflico. HE. 10x. B. Dura-mter, tambm denominada paquimeninge, composta por duas
camadas anelares densas de tecido conjuntivo fibroso. Nesta figura, abaixo da dura-mter, observam-se as
leptomeninges e a substncia branca da medula espinhal. HE. 10x. Comentrio: No encfalo, a dura-mter
permanece aderida ao crnio quando se retira o encfalo do crnio. Em sees histolgicas, possvel
visualizar a dura-mter somente em sees da medula espinhal.

Aps breve reviso dos principais constituintes do SNC, sero apresentados e


discutidos os principais achados microscpicos no ligados a doenas e os principais
achados histolgicos ligados a doenas e que podem definir o diagnstico das principais
enfermidades do SNC de bovinos no Brasil.

3.1 No-leses, leses de pouca importncia clnica, alteraes


postmortem

3.1.1 No-leses

Estruturas microscpicas normais do encfalo podem estar relacionadas com


resqucios de estruturas embrionrias (camada externa de clulas granulares do cerebelo,
placa subependimria e acmulo de neuroblastos nos ncleos basais), ou podem
representar rgos circumventriculares (rea postrema no bulbo na altura do bex, rgo
subcomissural na altura do tlamo, rgo pineal) ou so pigmentos normais presentes em
vasos ou nas leptomeninges (melanina produzida por melancitos leptomeningeais).
Clulas da camada de clulas granulares externa do crtex cerebelar so
encontradas em fetos, animais recm-nascidos ou com poucos meses de vida (Figura 20).

Exame microscpico

109

medida que o animal cresce, essas clulas migram para a camada interna de clulas
granulares (Fuller & Burger 1997).

Figura 20. Cerebelo. Bovino jovem. Descrio: A. Camada externa de clulas granulares que se localiza
entre a pia-mter e a camada molecular. Numerosas clulas migram para a camada de clulas granulares. B.
Maior aumento de A. Comentrio: a camada externa de clulas germinativas pode ser confundida com
meningite. A migrao dessas clulas pode ser confundida com arbustos gliais, leso que ocorre quando h
encefalite e clulas inflamatrias na camada molecular (Figura 55).

A placa subependimria se localiza nas pores laterais e ventrais dos ventrculos


laterais. Adjacente placa subependimria e no bulbo olfatrio podem se observados
acmulos de neuroblastos denominados glia residual (Figura 21) (Summers et al. 1995).

vl

Figura 21. Placa subependimria e acmulos focais de neuroblastos. Descrio: A. A placa subependimria
consiste em acmulo de clulas germinativas entre o epndima e o parnquima neural na altura dos
ventrculos laterais (vl). Em reas prximas aos ventrculos laterais, dentro do parnquima neural so
observados acmulos de neuroblastos. HE. 10x. B. As clulas germinativas esto dispostas em camadas de
trs a cinco clulas. HE. 40x. Comentrio: a placa subependimria persiste em bovinos adultos e pode ser
erroneamente interpretada como infiltrado inflamatrio linfoctico. Os acmulos focais de neuroblastos
podem ser confundidos com microgliose.

Exame microscpico

110

rgos circunventriculares so centros especializados do SNC que compartilham


dois aspectos morfolgicos: localizao periventricular e vasculatura em que falta a tpica
propriedade da barreira hematoenceflica. Essas estruturas incluem rgo subcomissural
(modificao local de clulas ependimrias abaixo da comissura caudal que se projeta para
o aqueduto mesenceflico) (Figura 22), a rea postrema (aglomerado de clulas gliais e
pequenos capilares) (Figura 23), que se localiza dorsalmente ao ncleo do vago no bulbo
na altura do bex, e o corpo pineal (Figura 24).

Figura 22. rgo subcomissural. Descrio: A. Observe as clulas colunares altas com citoplasma
levemente eosinoflico e ncleo basal, distribudas em estruturas acinares. HE. 20x. B. Estrutura semelhante
em maior aumento. HE. 40x. Comentrio: o rgo subcomissural uma estrutura especializada em secretar
aldosterona Devido estrutura glandular observada microscopicamente, o rgo sucomissural pode ser
interpretado erroneamente como neoplasma de origem epitelial, principalmente quando se realiza seo
oblqua do tlamo.

Figura 23. rea postrema. Descrio: A. Observe a localizao da rea postrema bilateral, simtrica e
caudodorsalmente ao ncleo dorsal do vago. Vista submacroscpica. B. O achado tpico dos rgos
circumventriculares inclui a neurpila frouxamente arranjada com proeminente vasculatura. HE. 20x.
Comentrio: a rea postrema situa-se na poro caudal do assoalho do quarto ventrculo. Essa estrutura pode
ser observada microscopicamente, quando se realiza o corte do encfalo no bulbo na altura do bex. Em
humanos sua funo fisiolgica tem sido apontada como regio quimioreceptora do encfalo para instigar a
resposta emtica, e regulao do controle cardiovascular devido a resposta sistmica angiotensina II (Leslie
& Osborne 1984). Em sees histolgicas, a rea postrema pode ser erroneamente confundida com gliose,
ou quando os capilares esto proeminentes pode ser confundida com neoplasma.

Exame microscpico

111

Como observado anteriormente na Figura 8, a epfise uma evaginao do aspecto


dorsocaudal do epitlamo do diencfalo, que se adere atravs de um prolongamento que
contm um pequeno recesso do terceiro ventrculo. Histologicamente, a epfise, o rgo
ou a glndula pineal, estrutura derivada do epitlio neural, constituda por pinealcitos,
clulas gliais, neurpila e vasos sangneos. Nos lbulos pineais, os pinealcitos so
arranjados ao redor de pequenos lmens. Especialistas preferem denomin-lo de corpo
pineal em vez de glndula pineal, porque pinealcitos so clulas neurosensoriais. A
cpsula e septos do rgo pineal so formados por pia-mter e aracnide, ou seja, a
continuao das leptomeninges do diencfalo, e por onde os vasos sangneos penetram na
pineal (Vigh et al. 1998) (Figura 24).

Figura 24. Corpo pineal. Descrio: A. O tecido nervoso (canto superior direito) est separado do corpo
pineal pelas leptomeninges. Nesta figura, as leptomeninges esto pigmentadas. Observe a hipercelularidade
da epfise. HE. 10x. B. Maior aumento de A. Comentrio: devido estrutura histolgica hipercelular o corpo
pineal pode ser facilmente confundido com neoplasma.

Deposio de melanina menngea uma no-leso que pode ser observada


macroscopicamente (Figura 7). Histologicamente, os melancitos so clulas achatadas
com o citoplasma dendrtico e preenchido com pigmento granular marrom-escuro
observados nas leptomeninges ou nos vasos dentro da neurpila, adjacentes s
leptomeninges (Figura 25). Em sees transversais podem ser confundidos com
macrfagos carregados com hemossiderina (Figura 28). Devem ser diferenciados de
clulas positivas na tcnica de imunoistoqumica quando se usa diaminobenzidina (DAB)
como cromgeno (Summers et al 1995).

Exame microscpico

112

Figura 25. Melancitos leptomeningeais. Descrio: A. Observe os melancitos nas leptomeninges


distribudos de forma linear. HE. 40x. B. Melancitos na adventcia de uma arterola cerebral. HE. 20x.
Comentrio: melancitos so distigveis de macrfagos carregados com hemossiderina pela colorao do
pigmento presente no citoplasma. Melancitos so alongados e dendrticos e possuem pigmento
intracitoplasmtico marrom-escuro ou preto, enquanto que os macrfagos carregados com hemossiderina so
preenchidos com pigmento amarelo-ouro ou marrom-claro. Na tcnica de imunoistoqumica, quando se usa
DAB como cromgeno, melanina aparece nas preparaes positivas e negativas.

Neurnios normais do tronco enceflico, principalmente dos ncleos do nervo


trigmeo e olivar podem ter aparncia cromatoltica ou necrtica (Figura 26) (Jubb &
Huxtable 1993).

B
Figura 26. Aparncia cromatoltica e necrtica dos
neurnios do tronco enceflico e do gnglio de
Gasser. Descrio: A. Observe que o citoplasma de
um grande neurnio do tronco enceflico apresenta
colorao rosa. HE. 40x. B. O citoplasma do
neurnio e o ncleo diminuem de tamanho e coramse intensamente. HE. 40x. C. Aspecto necrtico de
diversos neurnios do gnglio de Gasser. HE. 10x.
Comentrio: a aparncia necrtica de alguns
neurnios pode ser decorrente da intensa
manipulao do encfalo ou do gnglio de Gasser
na remoo da cavidade craniana antes da fixao
em formol. Esses neurnios tambm so chamados
de neurnios escuros.

Exame microscpico

113

3.1.2 Leses de pouca importncia clnica


Alm da melanina menngea, h outros pigmentos no SNC que so marrons na
colorao de H&E. Sua identificao depende muitas vezes da localizao. Lipofuscina
um pigmento marrom-amarelado que se acumula no citoplasma de neurnios de animais
velhos e que no deletria para a funo neuronal (Hirano 1985, Jubb & Huxtable 1993).
Observaes deste estudo indicam que h grande quantidade de lipofuscina nos neurnios
de ncleos do mesencfalo na altura dos colculos rostrais (Figura 27), semelhana da
localizao em sunos, onde foi observada em 75% dos neurnios do ncleo trigeminal do
mesencfalo (Jahns et al. 2006b).

Figura 27. Lipofuscina. Descrio: um pigmento granular amarelo-ouro que se acumula no pericrio dos
neurnios e em seus prolongamentos, bem como no citoplasma de macrfagos. A. Pigmento amarelo-ouro
que preenche parcialmente o pericrio do neurnio. HE. 40x. B. Ncleo vermelho do mesencfalo. Na
colorao de cido peridico de Schiff (PAS), lipofuscina aparece como pigmento granular magenta. C.
Agregados granulares no pericrio do neurnio. PAS. 100x. D. Lipofuscina na neurpila, provavelmente
dentro do citoplasma da micrglia. PAS. 100x Comentrio: lipofuscina caracteriza-se pela fuso de um
lisossomo primrio e uma vescula fagoctica e observada na microscopia de luz como pigmento granular
que se deposita no citoplasma das clulas medida que o animal vai envelhecendo. Geralmente se deposita
em um dos plos do pericrio dos neurnios, mas pode ser observado na neurpila ou no citoplasma de
clulas gliais. A presena desse pigmento na neurpila pode ocorrer pelo processo de exocitose; ou outra
teoria plausvel a morte das clulas gliais que contm esse pigmento, e aps certo tempo, lipofuscina pode
ser observada apenas extracelularmente (Jahns et al. 2006a).

Exame microscpico

114

Lipofuscina deve ser diferenciada de hemossiderina (Figura 28), que geralmente se


deposita no citoplasma dos macrfagos no espao perivascular da substncia branca.
Acredita-se que esse pigmento decorrente de micro-hemorragias.

Figura 28. Hemossiderina. Descrio: hemossiderina um pigmento intracitoplasmtico que se acumula


em macrfagos no espao perivascular. Observe o pigmento marrom-amarelado que preenche o citoplasma
de dois macrfagos no espao perivascular. HE. 40x. Comentrio: hemossiderina um pigmento que se
origina da degradao de hemoglobina dos eritrcitos e provavelmente seja decorrente de microhemorragias, apesar de no se observarem leses nos vasos (Jahns et al. 2006a). Hemossiderina foi
freqentemente encontrada na substncia branca do telencfalo ao redor de pequenos vasos sangneos.

Alm de lipofuscina, outras alteraes podem estar relacionadas idade, como


mineralizao (Figura 29) e hialinizao dos vasos do encfalo e das meninges, incluses
neuronais hialinas em grandes neurnios motores (Figura 30), e corpora amylacea em
processos astrocitrios (Figura 31) (Fuller & Burger 1997). A mineralizao dos vasos das
meninges de gatos e do encfalo ocorre em bovinos, eqinos velhos e afeta os vasos do
ncleo denteado, globo plido, cpsula interna e ncleo caudado sem associao com
doena vascular generalizada (Hurst 1934, Mandara 2003).

Exame microscpico

115

Figura 29. Calcificao dos vasos do encfalo. Descrio: mineralizao ou calcificao dos vasos do
encfalo aparece como depsitos basoflicos que substituem a parede normal dos vasos. A. Observe os
depsitos basoflicos na parede de vasos. Ocasionalmente, a mineralizao obstrui parcial ou totalmente a
luz do vaso e assume padro de corpora amylacea. HE. 20x. B. Maior aumento de leso semelhante. HE
40x. C. Na colorao de Von Kossa, a mineralizao aparece como depsitos pretos ou marrons. Observe a
fase incial de depsito de mineral, com depsitos multifocais na mdia dos vasos. Von Kossa. 20x. D. Maior
aumento de leso semelhante com obstruo parcial do lmen do vaso. Comentrio: na maioria das vezes, a
mineralizao dos vasos no provoca conseqncias clnicas, embora trombose ou isquemia podem ocorrer
associadas leso. Neste estudo, mineralizao dos vasos foi mais freqente na cpsula interna de bovinos
velhos e foi considerado um achado incidental relacionado idade.

Figura 30. Incluses hialinas em neurnios do gnglio de Gasser. Descrio: A. Incluses hialinas ou
colides circulares no citoplasma de neurnios. HE. 20x. B. Maior aumento de leso semelhante. HE. 40x.
Comentrio: essas incluses foram encontradas em um bovino de 16 anos de idade no gnglio de Gasser.
Em humanos, incluses hialinas eosinoflicas semelhantes so observadas no ncleo hipoglosso da medula.
Essas incluses consistem de cisternas dilatadas do retculo endoplasmtico e aumentam em nmero com a
idade. Podem ser confundidas com incluses virais (Fuller & Burger 1997) ou degenerao neuronal.

Exame microscpico

116

Figura 31. Corpora amylacea. Descrio: A. Estrutura circular lamelar basoflica de tamanho varivel (10
a 30 m de dimetro). HE. 100x. B. Estrutura lamelar circular magenta. PAS. 100x. Comentrio: corpora
amylacea so corpsculos poliglucosanos que esto nos processos astrocitrios. Devem ser diferenciados de
corpsculos de Lafora que tambm esto relacionados idade, mas se localizam no interior dos neurnios,
tanto no pericrio quanto nos axnios (Summers et al. 1995). Os que se localizam no axnio so difceis de
diferenciar de corpora amylacea, porque ambos parecem estar livres na neurpila. Algumas vezes podem ser
erroneamente interpretados como fungos, j que tem afinidade pelas mesmas coloraes especiais usadas
para detectar esses patgenos (Fuller & Burger 1997).

Concrees do corpo pineal podem estar presentes em humanos, bovinos, eqinos,


ovinos, asininos e podem variar de alguns micrmetros at alguns milmetros de dimetro.
Essas concrees so chamadas de areia cerebral ou corpora arenacea. So formados por
laminaes concntricas e escuras ricas em protena intercaladas com camadas claras ricas
em clcio (Figura 32) (Vigh et al. 1998).

Figura 32. Concrees do rgo pineal. Descrio: A. Concrees laminares redondas a ovais, fortemente
basoflicas de tamanhos variveis. HE. 40x. B. Concrees multifocais coradas em preto. Von Kossa. 40x.
Comentrio: as laminaes podem corresponder a atividade flutuante da pineal influenciada pela mudana
circadiana da intensidade solar. A estrutura mineral constituda morfologicamente por hidroxiapatita e
carbonato de apatita, sendo clcio e fsforo os principais constituintes. As concrees geralmente localizamse entre as fibras nervosas (axnios), e ocasionalmente dentro de clulas gliais (Vigh et al. 1998).

Exame microscpico

117

Leses de pouco significado clnico podem criar confuso com leses especficas
de certas doenas importantes do SNC. Uma delas a vacuolizao do citoplasma dos
neurnios do ncleo vermelho do mesencfalo (Figura 33) que pode ser confundida com
leso de BSE. Deve ser lembrado que apenas a vacuolizao neuronal no diagnstica
para BSE (Wells et al. 1991). As alteraes espongiformes da BSE ocorrem na neurpila e
no pericrio de neurnios em lugares especficos do tronco enceflico (Wells et al. 1991).
No entanto, alteraes espongiformes afetando a neurpila e os corpos neuronais so
descritas em casos naturais e experimentais de raiva em gambs, raposas (Charlton et al.
1987), e em um bovino (Foley & Zachary 1995), em filhotes atxicos de Rottweiler
(Jardim et al. 1999), e em cabras com paresia progressiva (Lancaster et al. 1987).
Vacuolizao neuronal rica em lipdios observada em guaxinin (Procyon lotor) (Hamir
& Fischer 1999).
A vacuolizao incidental dos neurnios do ncleo vermelho do mesencfalo
encontrada em 64% dos encfalos de bovinos adultos normais, mas j foi encontrada em
bovinos com 12 meses de idade (Gavier-Widen et al. 2001). Em nosso estudo, a
vacuolizao desses neurnios foi encontrada em bovinos de oito meses de idade.

B
Figura 33. Vacuolizao dos neurnios do ncleo
vermelho do mesencfalo. Descrio: A.
Vacuolizao intracitoplasmtica de mltiplos
neurnios. HE. 4x. B. Vacolo intracitoplasmtico
solitrio em um neurnio. HE. 40x. C. Mltiplos
vacolos no pericrio do neurnio separados por
fina margem de citoplasma e deslocamento do
ncleo para a periferia. HE. 40x. Comentrio:
vacolos do pericrio e neuritos so leses
caractersticas da BSE, mas a localizao dessas
leses no SNC muito importante para o
diagnstico. Alm disso, as leses esto geralmente
associadas a sinais clnicos.

Exame microscpico

118

Vacuolizao do pericrio de neurnios do ncleo habenular pode ser encontrada


em 50% dos encfalos de bovinos normais (Gavier-Widen et al. 2001). Vacuolizao nos
neurnios do gnglio de Gasser foi um achado freqente, tanto em bovinos clinicamente
normais (Figura 34) quanto em animais com raiva, no entanto, em maior nmero (Figura
46). Vacuolizao neuronal espordica observada em ovinos e caprinos (Hooper 1999),
eqinos (Jahns et al. 2006a) e sunos (Jahns et al. 2006b), geralmente em neurnios do
tronco enceflico. Vacuolizao neuronal intracitoplasmtica idioptica disseminada foi
observada em um bovino recm-nascido nos EUA. Numerosos vacolos foram observados
nos ncleos do cerebelo, tronco enceflico e medula espinhal cervical (Hamir et al. 2001).

Figura 34. Vacolos intracitoplasmticos. Descrio: A. Ncleo habenular.


Mltiplos vacolos
coalescentes no pericrio de neurnios que deslocam o ncleo para a periferia. HE. 40x. B. Gnglio de
Gasser. Neurnios com vacuolizaes intracitoplasmticas separadas por fina margem de citoplasma. HE.
20x. Comentrio: neurnios do ncleo habenular so pequenos e a percepo dos vacolos pode se tornar
difcil.

Sarcocystis spp. so geralmente encontrados distorcendo miofibras do corao e


msculo esqueltico e fibras de Purkinje, mas geralmente no incitam qualquer resposta
inflamatria. Neste estudo, exemplares de Sarcocystis sp. foram encontrados em poucos
encfalos de bovinos analisados (Figura 35). Bovinos se tornam infectados pela ingesto
de esporocistos excretados nas fezes dos hospedeiros definitivos (carnvoros, ornvoros)
que so infectados pela ingesto de cistos maduros (sarcocistos), geralmente encontrados
nos msculos dos hospedeiros intermedirios. A infeco por Sarcocystis spp. comum
em bovinos e geralmente no produz leses. Bovinos so hospedeiros intermedirios para
trs espcies: S. cruzi, S. hirsuta e S. hominis (Dubey et al. 1988). S. cruzi altamente
patognico e pode induzir meningoencefalite necrosante com vasculite; S. hirsuta e S.
hominis so levemente patognicos (Van der Lugt et al. 1994).

Exame microscpico

119

Figura 35. Exemplar de Sarcocystis sp. Descrio: Cisto de Sarcocystis sp. na camada de clulas granulares
do cerebelo medindo 100 x 60 m com numerosos zotos. Comentrio: Sarcocystis sp. no incitam resposta
inflamatria porque se localizam dentro de clulas endoteliais. A ruptura desses cistos pode provocar a
formao de pequenos granulomas.

Esferides axonais podem ser achados incidentais e em bovinos so encontrados


nos ncleos vestibular, cuneato e cuneato acessrio (Gavier-Widen et al. 2001). Em ces,
os esferides axonais esto relacionados idade e so encontrados em 50% dos ces com
mais de 12 anos (Borras et al. 1999). Manguitos perivasculares podem ser discretos e
inespecficos. Inflamaes desse tipo so encontradas em cerca de 30% dos bovinos
adultos normais (Gavier-Widen et al. 2001). A causa dessas inflamaes controversa,
mas seu significado clnico nulo (Figura 36).

Figura 36. Esferides axonais e manguitos perivasculares. Descrio: A. Esferide axonal no parnquima
neural. HE. 40x. B. Manguito perivascular linfoplasmocitrio composto por uma a trs camadas de clulas
inflamatrias HE. 10x. Comentrio: a deteco de poucos esferides axonais no encfalo tambm um
achado incidental comum em ces (Borras et al. 1999), ovinos e caprinos (Hooper 1999), eqinos (Jahns et
al. 2006a) e sunos (Jahns et al. 2006b).

Exame microscpico

120

Achados incidentais em estruturas associadas (complexo gnglio de Gasser + rete


mirabile carotdea + hipfise) tambm foram observados neste estudo (Rech et al. 2006c).
Alm de vacolos espordicos em neurnios do gnglio de Gasser (Figura 34B), cistos na
hipfise e sangue no seio cavernoso da rete mirabile carotdea com fibrina e neutrfilos
foram outras alteraes observadas (Figura 37).

Figura 37. Alteraes incidentais na hipfise e rete mirabile carotdea. Descrio: A. Cistos multifocais
preenchidos por material eosinoflico homogneo (colide) na adenoipfise. HE. 20x. B. Sangue no seio
cavernoso com fibrina e neutrfilos. HE. 20x. Comentrio: cistos na hipfise so achados incidentais em
bovinos e eqinos velhos (Innes & Saunders 1962) e se ocorre acentuada dilatao da cavidade hipofisria
ou coalescncia dos cistos, eles podem ser observados macroscopicamente. Os agregados de eritrcitos,
neutrfilos e fibrina no seio cavernoso ao redor da rete mirabile carotdea de bovinos sem leses no sistema
nervoso podem ser explicados pelo fato da lenta dinmica vascular desse local. Essa alterao deve ser
diferenciada de abscessos de pituitria, onde as leses so mais extensas, rompem a arquitetura normal e
atingem o sistema nervoso central.

3.1.3 Artefatos decorrentes do mtodo de eutansia, da colheita e fixao do encfalo

Artefatos decorrentes do mtodo de eutansia, da colheita e do manuseio do tecido


nervoso fresco e do armazenamento inadequado tambm podem ocorrer e ser interpretados
erroneamente como alteraes antemortem significativas. Na maioria das vezes, essas
alteraes no so observadas macroscopicamente. Artefatos decorrentes do mtodo de
eutansia incluem hemorragia subdural e no parnquima e estase sangnea no seio
cavernoso da rete mirabile carotdea (Figura 38) e acentuada distenso perivascular
causada por aspirao de ar (Figura 39). Essas duas alteraes j foram mencionadas no
exame macroscpico desta seo (Figuras 9 e 10 respectivamente).

Exame microscpico

121

B
Figura 38. Hemorragia traumtica. Descrio: A.
Hemorragia subdural moderada. As leptomeninges
esto expandidas por eritrcitos. HE. 4x. B.
Hemorragia ao redor de vaso de mdio calibre no
parnquima cerebral. HE. 10x. C. Estase acentuada
de sangue no seio cavernoso da rete mirabile
carotdea. HE. 10x. Comentrio: o uso do dardo
cativo para dessensibilizao nos frigorficos produz
hemorragia acentuada no encfalo dos bovinos.
Essas leses devem ser corretamente interpretadas
pois foram infligidas em um encfalo previamente
normal. Grande quantidade de sangue no seio
cavernoso da rete mirabile carotdea observado
quando os bovinos so dessensibilizados com a
introduo da faca na medula oblonga.

Figura 39. Distenso dos espaos perivasculares causada por aspirao de ar. Descrio: A. Crtex
telenceflico. Acentuada distenso dos espaos perivasculares. HE. 4x. B. Maior aumento de A. HE. 20x.
Comentrio: apesar de em menor aumento essa leso ser caracterizada por alterao espongiforme, a
vacuolizao localizada ao redor dos espaos de Virchow-Robin. O aspecto macroscpico desta alterao
pode ser observado na Figura 10.

Exame microscpico

122

Artefatos relacionados colheita e manuseio do encfalo antes da fixao e durante


a fixao incluem partculas sseas que contaminam o tecido nervoso quando se retira a
calota craniana com serra e que podem mimetizar mineralizao patolgica, neurnios
escuros (neurnios de Cammermeyer) que se formam pelo excessivo manuseio do
encfalo antes da fixao (Figura 40), e aglomerados de microrganismos contaminantes
por ocasio da fixao do material ou confeco de lminas que podem causar
complicao quando so sobrepostos ao tecido nervoso (Figura 41), principalmente em
reaes inflamatrias. Fendas lineares no tecido nervoso so produzidas por cristais que se
formam pelo congelamento do tecido nervoso (Figura 42) (Summers et al. 1995).

Figura 40. Artefatos relacionados colheita e manuseio do encfalo. Descrio: A. Acmulo focal de
fragmentos sseos no tecido nervoso. HE. 10x. B. Crtex telenceflico. Mltiplos neurnios esto
encolhidos com o citoplasma basoflico e ncleo levemente picntico. HE. 40x. Comentrio: neurnios de
Cammermeyer devem ser diferenciados de neurnios vermelhos (Figura 47) que apresentam o citoplasma
eosinoflico.

Figura 41. Microrganismos ectpicos no tecido nervoso. Descrio: A. Protozorio do rmen na superfcie
do telencfalo. HE. 20x. B. Crtex telenceflico. Corte transversal de fragmento de plo. HE. 40x.
Comentrio: microrganismos ectpicos so adquiridos no momento da fixao do encfalo ou na hora da
confeco da lmina. No h reao inflamatria associada a essas estruturas.

Exame microscpico

123

Figura 42. Artefatos relacionados fixao do encfalo. Descrio: A. Aspecto linear finamente vacuolar
da superfcie do telencfalo logo abaixo das leptomeninges. HE. 20x. B. Cerebelo. O tecido nervoso
apresenta aspecto quebradio com fendas lineares entrecruzadas. HE. 10x. Comentrio: o aspecto linear nas
margens do encfalo um artefato normalmente encontrado em encfalos corretamente fixados e
decorrente de diferenas de presso osmtica entre o formol e o tecido nervoso. Fendas lineares so
provocadas pela congelao do encfalo antes de fix-lo em formol.

3.1.4 Autlise

Quando o patologista recebe o encfalo para ser examinado no laboratrio, na


maioria das vezes no h dados sobre o tempo decorrido entre a morte do bovino e a
realizao da necropsia e fixao do material. O encfalo um rgo relativamente
resistente ao processo autoltico, quando comparado com rgos da cavidade abdominal.
A autlise no SNC pode simular leses associadas a doenas e confundir o patologista. No
entanto, alguns artefatos observados quando o encfalo no foi imediatamente fixado em
formol aps a morte, devem ser diferenciados de leses antemortem. A seguir sero
apresentados os artefatos relacionados autlise comumente observados no encfalo de
bovinos.
A autlise da substncia cinzenta pode simular leses de trauma, e alteraes
vacuolares na mielina podem mimetizar edema intramielnico ou degenerao walleriana
(Summers et al. 1995). Halos ao redor do pericrio de neurnios, oligodendrcitos e
pequenos vasos so achados comuns em encfalos autolisados (Figura 43). Em associao
com esses artefatos, as clulas gliais tornam-se pequenas e hipercromticas, e podem ser
observados bacilos da putrefao no interior dos vasos e dispersos no tecido nervoso.
Algumas vezes, essas bactrias produzem gases que distendem o tecido nervoso e formam
grandes vacolos multifocais aleatrios (Figura 44). Outro artefato relacionado com o

Exame microscpico

124

processo autoltico a clivagem das camadas do cerebelo, entre as camadas de clulas de


Purkinje e de clulas granulares (Summers et al. 1995).

Figura 43. Artefatos relacionados autlise. Descrio: A. Halos perineuronais. HE. 10x. B. Halos ao redor
de oligodendrcitos. HE. 40x. Comentrio: halos perineuronais, perivasculares e perigliais provocados por
autlise no devem ser confundidos com edema.

B
Figura 44. Artefatos relacionados autlise.
Descrio: A. Bacilos da putrefao dispersos na
neurpila. HE. 40x. B. Bacilos de putrefao
obliterando a luz de um vaso sangneo. HE. 20x. C.
Vacolos aleatrios. HE. 4x. Comentrio: esses
bacilos so do gnero Clostridium; logo aps a
morte do bovino proliferam no trato gastrointestinal,
invadem a corrente circulatria e colonizam diversos
rgos, inclusive o encfalo. Quando essas bactrias
produzem gases, formam-se bolhas e o aspecto
macroscpico dessa alterao chamado queijo
suo. Esse aspecto macroscpico pode ser
observado na Figura 12.

Exame microscpico

125

A autlise da camada de clulas granulares do cerebelo um artefato observado


somente em bovdeos e humanos (Summers et al. 1995, Fuller & Burger 1997). Tambm
chamada de conglutinao cerebelar ou tat glac e aparece como uma rea plida na
camada de clulas granulares; em maior aumento, percebe-se a dissoluo dos neurnios
granulares, com preservao das clulas de Purkinje (Figura 45). considerado um
fenmeno postmortem que est relacionado com pH baixo no tecido nervoso em autlise.
A acidez tecidual est diretamente relacionada durao do processo de morte
(Albrechtsen 1977).

Figura 45. Artefatos relacionados autlise. Cerebelo. Descrio: A. Aspecto macroscpico. A regio
perifrica das folhas cerebelares est fixada (amarela), ao contrrio da poro interna que est parcialmente
fixada (rsea-clara). B. Aspecto submacroscpico. Palidez das pores profundas das folhas cerebelares. HE.
C. Rarefao da camada de clulas granulares. HE. 10x. D. Dissoluo das clulas da camada de clulas
granulares com preservao das clulas de Purkinje. HE. 40x. Comentrio: conglutinao cerebelar j foi
descrita como leso antemortem significativa.

Neurocitopatologia

126

4. Neurocitopatologia
A correta descrio das leses observadas no SNC de bovinos exige o
conhecimento de termos especficos usados em neuropatologia. Alteraes a serem
reconhecidas incluem: cromatlise neuronal, neurnios vermelhos, vacuolizao do
pericrio associada com doenas de depsito lisossomal, incluses intracitoplasmticas ou
intranucleares, vacolos intracitoplasmticos, esferides axonais, degenerao walleriana,
gliose, astrocitose, astrogliose, astrcitos Alzheimer tipo 2, gemistcitos, microgliose,
ndulos gliais, satelitose, neuronofagia, clulas gitter, manguitos perivasculares,
congesto, vasculite, tumefao endotelial, edema, degenerao esponjosa ou status
spongiosus. Esses termos sero discutidos medida que fotos das leses especficas so
apresentadas.
A seguir sero ilustradas as leses microscpicas ligadas a doenas observadas
durante os 5 anos de vigilncia epidemiolgica para BSE em bovinos no LPV/UFSM. As
leses sero correlacionadas com as doenas do SNC diagnosticadas no Brasil.
importante salientar que o correto diagnstico de uma doena em um rebanho, depende
algumas vezes do conjunto de dados epidemiolgicos, dos sinais clnicos, dos achados de
necropsia e da histopatologia, algumas vezes associados com exames complementares
(toxicolgicos, virolgicos, bacteriolgicos). A descrio das doenas que afetam o SNC
de bovinos no Brasil pode ser encontrada em uma reviso recente sobre o assunto (Barros
et al. 2006a).

4.1 Reao dos neurnios leso


As clulas do SNC variam em susceptibilidade leso (neurnios >
oligodendrcitos > astrcitos > micrglia > vasos sangneos). Os neurnios so mais
sensveis leso porque tm pequena quantidade de energia e alta taxa metablica;
dependem de um fluxo sangneo intacto para supr-los com oxignio e nutrientes
(Zachary 2007). As reaes dos neurnios leso incluem degenerao e morte celular e
reaes associadas com a reparao depois da leso. As principais leses incluem:
cromatlise, alterao isqumica (neurnios vermelhos), aumento de volume e
vacuolizao do pericrio associada com doenas de depsito lisossomal, incluses

Neurocitopatologia

127

intracitoplasmticas ou intranucleares e vacolos intracitoplasmticos. Leses neuronais


geralmente so acompanhadas de outras alteraes no parnquima.
Cromatlise uma reao vista em neurnios caracterizada por aumento de
volume e arredondamento do citoplasma, deslocamento do ncleo para a periferia e
disperso da substncia de Nissl. A cromatlise pode ser central ou perifrica. Cromatlise
central a forma mais comum e caracteriza-se por disperso da substncia de Nissl do
centro para a periferia (Figura 46). Essa reao observada em neurnios secundria
leso axonal (reao retrgrada) ou por leso direta ao neurnio (como ocorre na raiva e
outras doenas).

Figura 46. Cromatlise central de neurnio do gnglio de Gasser. Raiva. Descrio: A. Observe o aumento
de volume e arredondamento do citoplasma do neurnio e a localizao da substncia de Nissl na periferia
do pericrio. HE. 20x. B. Leso semelhante em maior aumento. HE. 40x. Comentrio: cromatlise central
foi observada no gnglio de Gasser em casos de raiva. Foi considerada uma leso degenerativa que precede a
morte neuronal. Intoxicao por Aspergillus clavatus produz cromatlise dos neurnios do tronco enceflico,
geralmente associada com vacuolizao.

Neurnios vermelhos so considerados leso neuronal aguda e secundria


hipxia aguda do SNC de diversas causas. So evidentes em preparaes histolgicas
coradas por H&E, cerca de 12-24 horas aps um insulto hipxico irreversvel.
Histologicamente neurnios vermelhos so menores, angulares, hipereosinoflicos, e com
cariopicnose (Figura 47). Geralmente neurnios vermelhos localizam-se no crtex
telenceflico, pois so os neurnios mais suscetveis anxia. Como os neurnios no
crtex telenceflico dispem-se em lminas e como muitas vezes lminas de neurnios so
afetadas, enquanto outras so poupadas, esse padro denominado necrose laminar. O
padro de necrose laminar algumas vezes pode ajudar na determinao da etiologia. Por
exemplo, em casos de polioencefalomalacia, a leso ocorre em pores profundas do

Neurocitopatologia

128

crtex telenceflico. Mesmo assim, a epidemiologia e outros achados microscpicos so


essenciais para a realizao do diagnstico. Neurnios vermelhos esto associados a
outras alteraes na neurpila e incluem hipertrofia do endotlio e edema perivascular e
perineuronal (espongiose).

Figura 47. Neurnios vermelhos no crtex telenceflico. Meningoencefalite por herpesvrus bovino-5
(BoHV-5). Descrio: os neurnios desta rea apresentam o citoplasma angular, hipereosinoflico,
desaparecimento da substncia de Nissl e ncleo picntico. Observa-se tambm edema perivascular e
perineuronal (espongiose) e tumefao do endotlio vascular. HE. 10x. Comentrio: Doenas de bovinos no
Brasil em que neurnios vermelhos ocorrem caracteristicamente incluem casos agudos de
polioencefalomalacia por diversas causas como deficincia de tiamina, intoxicao por enxofre, intoxicao
por sal, mudanas bruscas na alimentao de pasto ruim para excelente e intoxicao por chumbo. Sem
dvida, a causa mais freqente dessa alterao meningoencefalite por BoHV-5. As causas de
polioencefalomalacia ainda esto sendo investigadas no Brasil, pois acredita-se que, na maioria das vezes,
difiram das causas dessa doena em outros pases.

Vacuolizao neuronal associada a depsitos citoplasmticos anormais ocorre


devido a alteraes subcelulares nas organelas neuronais. Em bovinos, as mais comuns
esto relacionadas ao acmulo de substratos no-metabolizados nos lisossomos, as
chamadas doenas de depsito lisossomal que podem ser hereditrias ou adquiridas (Jolly
& Wakley 1997). No Brasil, a forma mais comum em bovinos a adquirida e ocorre
devido ingesto de plantas txicas (Figura 48).

Neurocitopatologia

129

Figura 48. Vacuolizao neuronal. Intoxicao por Solanum fastigiatum. Descrio: A. Todos os neurnios
de Purkinje esto tumefeitos e com fina vacuolizao do pericrio e deslocamento do ncleo para a periferia.
HE. 20x. B. Leso semelhante em maior aumento. HE. 40x. Comentrio: Solanum fastigiatum uma planta
txica encontrada no sul do Brasil e induz neurolipidose em bovinos. A vacuolizao confinada s clulas
de Purkinje. Esferides axonais podem ser observados na camada de clulas granulares e na substncia
branca do cerebelo (Figura 51). No Brasil, doena de depsito lisossomal induzida pela ingesto de outras
plantas txicas em bovinos incluem as manosidoses causadas por Ipomoea carnea subsp. fistulosa (regio
Nordeste) e Sida carpinifolia (regio Sul) e lipofuscinose causada por Phalaris angusta (regio Sul). Com
exceo de Solanum fastigiatum, em todas as outras intoxicaes, vacuolizao ocorre em outras partes do
encfalo e em outros rgos. Prosopis juliflora (regio Nordeste) tambm provoca vacuolizao neuronal
em ncleos do tronco enceflico, mas essa planta no causa de doena de depsito lisossomal.

Incluses neuronais na maioria das vezes so caractersticas de infeces virais, e


podem definir o diagnstico de certas doenas. A mais conhecida das incluses virais o
corpsculo de Negri, caracterstico de casos de raiva; redondo ou oval, eosinoflico e
intracitoplasmtico com dimenses variveis. Incluses causadas por herpesvrus so
intranucleares basoflicas (Figura 49). Incluses intracitoplasmticas eosinoflicas novirais ocorrem como achado incidental (Figura 30) em encfalos normais e so bem
descritos em neurnios em humanos.

Neurocitopatologia

130

Figura 49. Incluses neuronais. Descrio: A.


Corpsculo de incluso (CI) intracitoplasmtico
eosinoflico com 10 m de dimetro no neurnio do
crtex telenceflico (corpsculo de Negri) em um
bovino com raiva. HE. 40x. H mais trs pequenos
CI com 1 m de dimetro ao lado dele. B.
Corpsculos de Negri nos neurnios do gnglio de
Gasser. Observe mltiplos CI intracitoplasmticos
eosinoflicos em contraste com a substncia de Nissl
que basoflica. C. CI intranuclear basoflico em
um caso de meningoencefalite por herpesvrus
bovino-5 (BoHV-5). Comentrio: CI eosinoflico
intracitoplasmtico e basoflico intranuclear definem
o diagnstico, respectivamente de raiva e
meningoencefalite por BoHV-5.

Vacolos intracitoplasmticos associados a doena so caractersticos das


encefalopatias espongiformes transmissveis (BSE, scrapie). Esses vacolos so
simtricos e bilaterais e localizam-se em certas regies da substncia cinzenta do tronco
enceflico e podem ser encontrados no pericrio ou neurpila. No ltimo caso, so
decorrentes da alterao espongiforme nos processos neuronais (Figura 50). No Brasil, no
h casos registrados de BSE, mas h 18 casos diagnosticados de scrapie e as fotografias
apresentadas a seguir so de casos de scrapie, devido similaridade das leses.

Figura 50. Vacuolizao neuronal em um caso de scrapie. Descrio: A. Vacuolizao no pericrio de dois
neurnios, que se tornaram balonosos e conservam apenas uma fina margem de citoplasma. HE. 40x. B.
Vacuolizao no pericrio de neurnios e na neurpila (alterao espongiforme). HE. 20x. Comentrio: a
distribuio das vacuolizaes na BSE bastante regular e ocorre principalmente no ncleo do trato
solitrio, no trato espinhal do nervo trigmeo, no ncleo vestibular, na formao reticular do bulbo, na
substncia cinzenta periaqueductal do mesencfalo, na rea paraventricular do tlamo e no septo talmico.
No Brasil, o diagnstico histolgico confirmado por imunoistoqumica.

Neste estudo, vacuolizao de neurnios do gnglio de Gasser foi um achado


freqente em casos de raiva (Rech et al. 2006c).

Neurocitopatologia

131

4.2 Alteraes nos axnios


O axnio a extenso eferente do neurnio; no possui ribossomos e depende do
pericrio para o transporte de materiais, que feito ativamente. Esse transporte ocorre
tanto do pericrio para a poro terminal do axnio, quanto no sentido contrrio. H dois
tipos principais de reaes injria observadas nos axnios: esferides e degenerao
walleriana.
Esferides so distenses axonais focais contendo organelas degeneradas,
caracterizadas microscopicamente por estruturas eosinoflicas, ovais ou circulares que
podem ser observados na periferia de infartos, em doenas com leso neuronal como
doenas de depsito lisossomal (Figura 51), na deficincia de vitamina E, em reas de
injria produzidos por parasitas, em locais de compresso da medula espinhal e com a
idade. Torpedo uma denominao especfica usada para esferides axonais localizados
na poro proximal dos axnios das clulas de Purkinje, na camada de clulas granulares.

Figura 51. Esferides axonais. Intoxicao por Solanum fastigiatum (doena de depsito lisossomal).
Descrio: A. Observam-se duas estruturas eosinoflicas ovais (esferides) no parnquima neural. HE. 40x.
B. Observe a presena de estrutura eosinoflica fusiforme na camada de clulas granulares, prximo aos
neurnios de Purkinje. Essa estrutura denominada torpedo. HE. 20x. Comentrio: em casos de intoxicao
por Solanum fastigiatum, esferides axonais ocorrem devido degenerao do pericrio que prejudica o
transporte de substncias entre o pericrio e o axnio. Esferides axonais podem ser observados tanto na
camada de clulas granulares quanto na substncia branca medular do cerebelo.

Quando um axnio interrompido, sua parte distal necrosa e o termo utilizado para
essa alterao chama-se degenerao walleriana. Em 1850, Augustus Volney Waller
descreveu esse processo em nervos perifricos; o termo degenerao walleriana tambm
usado para descrever necrose de fibras nervosas no SNC secundria leso axonal.
Quanto maior o dimetro do axnio, mais rapidamente ocorre degenerao walleriana.

Neurocitopatologia

132

Primeiramente, ocorre degenerao e fragmentao do axnio e da mielina. A mielina


condensa-se e forma elipsides. Aps, h remoo dos detritos axonais e da mielina por
macrfagos que formam cmaras de digesto caracterizadas por vacolos contendo
pequenos macrfagos em seu interior (Figura 52). Ao contrrio do sistema nervoso
perifrico, no SNC no ocorre regenerao do axnio.

Figura 52. Degenerao walleriana. Compresso medular por abscesso na vrtebra. Descrio: A. Seco
longitudinal da medula espinhal. A bainha de mielina periaxonal est distendida e, em alguns casos, contm
axnios tumefeitos. HE. 20x. B. Macrfago em espao periaxonal. HE. 40x. Comentrio: quando
macrfagos invadem a rea, formam as chamadas cmaras de digesto.

4.3 Reao das clulas gliais leso


Conforme mencionado anteriormente, clulas gliais so compostas por macrglia e
micrglia. Macrglia so os astrcitos e oligodendrcitos. A micrglia so os macrfagos
residentes no SNC. No passado essas clulas eram referidas como histicitos. Ao contrrio
de outras clulas da glia, que so embriologicamente derivadas do tubo neural, a micrglia
derivada de clulas precursoras da medula ssea. Algumas reaes dentro do SNC
envolvem mais de um tipo celular. Por exemplo, gliose uma resposta inespecfica das
clulas gliais a diversas formas de injria e geralmente envolve astrcitos e micrglia.
Oligodendrcitos podem sofrer tumefao, hipertrofia e degenerao. Apenas
oligodendrcitos

precursores

(localizados

nas

regies

periventriculares)

sofrem

proliferao. Quando neurnios so submetidos injria, oligodendrcitos satlites


proliferam ao redor do pericrio e esse processo denominado satelitose (Figura 53). A
degenerao de oligodendrcitos interfasciculares causa degenerao da bainha de mielina

Neurocitopatologia

133

e este processo referido como desmielinizao primria. Em bovinos, essa leso


geralmente associada com deficincia de cobre.

Figura 53. Reao dos oligodendrcitos leso. Descrio: Satelitose em um caso de raiva. Ao redor do
neurnio, h proliferao adjacente de oligondendrcitos satlites. HE. 40x. Comentrio: satelitose uma
das leses que caracterizam a inflamao no SNC e geralmente observada em infeces virais.

A reao dos astrcitos leso geralmente observada como uma resposta de


reparao no SNC. Os astrcitos respondem leso por hipertrofia (astrogliose) e
hiperplasia (astrocitose) (Figura 54). Quando astrcitos se tornam reativos, com
citoplasma visvel; so chamados gemistcitos ou astrcitos gemistocticos. Gemistcitos
so observados em doenas em que h alterao do fluido intra ou extracelular ou injria
ao parnquima, onde a reparao ocorrer por cicatriz glial (por exemplo, abscesso
intracerebral). Um tipo especfico de reao astrocitria tem sido observada em doenas
hepticas que produzem hiperamonemia. Essas clulas so denominadas astrcitos
Alzheimer tipo 2 e consistem de alteraes nucleares caracterizadas por tumefao do
ncleo, disperso da cromatina e presena de um ou dois nuclolos proeminentes, esses
astrcitos so dispostos em pares ou trios. Astrcitos Alzheimer tipo 2 no tm sido
descritos em bovinos, mas so freqentes na encefalopatia heptica de eqinos (Pilati &
Barros 2007). Morfologicamente a leso de encefalopatia heptica encontrada no encfalo
em bovinos consiste de status spongiosus (Figura 63B).

Neurocitopatologia

134

Figura 54. Astrocitose e astrogliose. Descrio: A. Camada molecular do cerebelo. Intoxicao por
Solanum fastigiatum. Aumento do nmero e tamanho dos astrcitos na camada molecular e conseqente
maior densidade de fibras astrocitrias (astrocitose e astrogliose). Imunoistoqumica para protena fibrilar
glial cida (GFAP). 20x. B. Cerebelo controle para comparao. Imunoistoqumica para GFAP. 20x.
Comentrio: intoxicao por Solanum fastigiatum induz degenerao e necrose das clulas de Purkinje de
cerebelo. O espao deixado pelas clulas de Purkinje substitudo por hipertrofia e hiperplasia dos astrcitos
de Bergmann. Essa leso pode ser visualizado na colorao de HE como astrocitose na camada molecular do
cerebelo. Nesse exemplo particular, a fibrose astrocitria denominada isomrfica pois segue a mesma
disposio das fibras do cerebelo normal (Innes & Saunders 1962).

As respostas da micrglia injria incluem hipertrofia, hiperplasia, fagocitose de


detritos celulares e mielnicos e neuronofagia. Quando a micrglia se torna reativa, ocorre
ocorre focalmente formando ndulos gliais ou microgliose focal, ou difusamente (Figura
55). Neuronofagia o termo utilizado para denominar o processo de fagocitose de
neurnios mortos (Figura 56). Neuronofagia juntamente com satelitose, gliose e manguitos
perivasculares mononucleares so marcas registradas da inflamao no-supurativa no
SNC, principalmente de infeces virais neurotrpicas.
Uma das funes da micrglia a fagocitose, ainda que essa funo seja reduzida
em alguns tipos de micrglia. O tipo de clulas que exerce a fagocitose no SNC depende
da natureza e extenso da leso. Quando o grau de leso restrito ao nvel celular, a
micrglia o principal fagcito. Quando ocorre a ruptura da barreira hematoenceflica,
ocorre o influxo de moncitos do sangue. Esses moncitos so as nicas clulas capazes
de, aps a fagocitose acentuada, assumir o aspecto de macrfagos espumosos (Dickson et
al. 1991), tambm conhecidos como clulas gitter (Figura 62). Micrglia no assume essa
caracterstica por ter menor poder de fagocitose.

Neurocitopatologia

135

B
Figura 55. Reao da micrglia leso. Raiva.
Descrio: A. Gliose focal. HE. 40x. B. Microgliose
difusa. Observe o aumento do nmero de clulas
dispersas difusamente na neurpila. HE. 10x. C.
Arbustos gliais na camada molecular do cerebelo.
HE. 10x. Comentrio: esses focos podem estar
infiltrados com outras clulas inflamatrias e
astrcitos. As leses observadas acima so
caractersticas de encefalites causadas por vrus. Em
enfermidades de bovinos no Brasil, microgliose
difusa e focal so observadas em casos de raiva e
meningoencefalite por herpesvrus bovino-5.
Arbustos gliais o termo especfico dado
microgliose observada a camada molecular do
cerebelo.

Figura 56. Neuronofagia. Raiva. Descrio: A. Crtex telenceflico. Observe as clulas da glia ao redor de
um neurnio necrtico. HE. 40x. B. Gnglio de Gasser. Partes de um neurnio necrtico so fagocitados por
clulas da glia. HE. 20x. Aps a fagocitose total, esse espao preenchido por clulas gliais ou clulas
satlites que formam os chamados ndulos de Babes. Comentrio: essas figuras ilustram a fase inicial (A) e
final (B) de neuronofagia. Neuronofagia tambm uma leso caracterstica de outros tipos de inflamao no
SNC. freqentemente vista em casos de meningoencefalite por herpesvrus bovino-5.

Neurocitopatologia

136

4.4 Reao das meninges leso


As meninges esto em ntimo contato com o SNC e alguma leso que ocorra nas
meninges, principalmente leptomeninges invade o SNC e vice-versa. A mais comum das
leses a leptomeningite (Figura 57) e as clulas inflamatrias localizam-se
primariamente no espao subaracnide. Freqentemente em casos de meningite, os
agentes infecciosos (principalmente as bactrias) invadem as meninges por via
hematgena. Quando o infiltrado inflamatrio invade tanto as meninges quanto o SNC, a
leso referida como meningoencefalite. Alguns tumores podem invadir diretamente o
SNC atravs da bainha dos nervos cranianos, e atingir os espaos subpiais e perivasculares
de Virchow-Robin, pois esses so extenses dos espaos perineurais (Figura 60).

Figura 57. Leptomeningite. Descrio: A. Crtex telenceflico. Exsudato purulento nas leptomeninges. HE.
20x. B. Tronco enceflico. Exsudato histiolinfoplasmocitrio expandindo as leptomeninges. HE. 10x.
Comentrio: em enfermidades de bovinos do Brasil, leptomeningites ocorrem freqentemente em bezerros
jovens, secundrias a onfaloflebites, so predominantemente causadas por bactrias (Escherichia coli,
Arcanobacterium pyogenes e Streptococcus spp.) e cursam com exsudato purulento. A exceo tuberculose
e intoxicao por Vicia spp. que produz exsudato granulomatoso e listeriose que produz infiltrado
mononuclear. Meningoencefalite no-supurativa um achado caracterstico das infeces virais como raiva,
meningoencefalite por herpesvrus bovino-5 e febre catarral maligna.

4.5 Reao dos vasos leso


Os vasos do SNC realizam a manuteno do barreira hematoenceflica. Leso nos
vasos e espaos perivasculares, tambm denominada espao de Virchow-Robin uma das
alteraes mais freqentes em resposta injria no SNC. Vrias etiologias,
independentemente da porta de entrada (hematgena, neurgena) induzem leso nos
vasos, seja por infiltrao de clulas ao redor dos vasos (manguitos perivasculares),

Neurocitopatologia

137

inflamao da parede (vasculite), obstruo, invaso direta, ou infeco das clulas


endoteliais.

Leses

recentes

ou

focais

so

freqentemente

perceptveis

microscopicamente, pois os vasos so mais proeminentes que as reas no afetadas. As


principais reaes associadas aos vasos incluem: congesto, hemorragia (Figura 58),
tumefao endotelial, vasculite (Figura 59), manguitos perivasculares (Figura 60) e
trombose.

Figura 58. Congesto vascular e hemorragia. Descrio: A. Crtex telenceflico. Raiva. Congesto vascular
dos vasos das leptomeninges e do tecido nervoso. HE. 4x. B. Maior aumento de A. Observe que os capilares
esto mais proeminentes. HE. 20x. C. Crtex telenceflico. Babesiose. Congesto difusa dos capilares e
edema perivascular e perineuronal. Em alguns eritrcitos possvel observar microrganismos basoflicos que
correspondem s formas de B. bovis. HE. 100x. C. Crtex telenceflico. Intoxicao por Solanum
fastigiatum. Hemorragia nas leptomeninges. Comentrio: congesto vascular uma alterao inespecfica
que ocorre no SNC geralmente em resposta a agentes infecciosos, mas pode ser til em casos de babesiose
cerebral, quando no possvel a observao macroscpica do encfalo (Figura 2B). A anlise criteriosa dos
eritrcitos numa proporo histolgica adequadamente delgada (5 m) e corada pode revelar a presena do
microrganismo em seces coradas por HE. Apesar da cor vermelho-cereja na substncia cinzenta do
encfalo ser leso caracterstica de babesiose cerebral, o esfregao do crtex telenceflico corado com
pantico rpido evidencia numerosos capilares parasitados por Babesia bovis. Hemorragias no SNC
geralmente so de origem traumtica, mas podem ser decorrentes de acentuada leso vascular, como em
casos de meningoencefalite por herpesvrus bovino-5.

Neurocitopatologia

138

Figura 59. Tumefao endotelial e vasculite. Descrio: A. Tlamo. Raiva. Tumefao das clulas
endoteliais e manguito perivascular constitudo de linfcitos, plasmcitos e macrfagos. HE. 100x. B.
Cerebelo. Febre catarral maligna (FCM). O infiltrado inflamatrio mononuclear infiltra a parede dos vasos
da meninge. H necrose fibrinide da parede do vaso. HE. 20x . Comentrio: vasculite no SNC em casos de
FCM melhor visualizada em artrias de pequeno e mdio calibre. O melhor lugar para se observar
vasculite em casos de FCM na rete mirabile carotdea.

B
Figura 60. Manguito perivascular. Descrio: A.
Tlamo.
Raiva.
Manguito
perivascular
linfoplasmocitrio composto por 2-4 camadas de
clulas. HE. 10x. B. Mesencfalo. Carcinoma de
clulas escamosas. Manguito perivascular composto
por clulas epiteliais neoplsicas que comprime a
luz do vaso. HE. 20x. C. Mesencfalo. Intoxicao
por Vicia spp. Espesso manguito perivascular
formado de linfcitos, plasmcitos, macrfagos
epiteliides e eosinfilos. HE. 20x (Rech et al.
2004). Comentrio: manguitos perivasculares
geralmente
so
compostos
por
infiltrado
inflamatrio, mas podem ser formados por clulas
neoplsicas. Neste caso, as clulas tumorais so
originrias de carcinoma do olho com extenso ao
longo da bainha de nervos (Barros et al. 2006c).

Neurocitopatologia

139

4.6 Clulas mesodrmicas no SNC


Alm das leses causadas por alteraes nas estruturas que pertencem ao SNC,
clulas de origem mesodrmica (por ex., manguitos perivasculares mononucleares,
granulomas, microabscessos, neutrfilos na neurpila e parnquima neural, clulas gitter),
e clulas tumorais em neoplasmas metastticos podem invadir o SNC. Algumas dessas
leses so caractersticas de doenas distintas quando apresentam distribuio especfica
(por ex., microabscessos em casos de listeriose); outras ocorrem em diversas doenas e
resultam da formao de extensas leses no SNC com ruptura da barreira
hematoenceflica (por ex., clulas gitter).
Microabscessos caracterizam-se por acmulo focal de neutrfilos viveis e
degenerados na neurpila ou parnquima neural, algumas vezes com bactrias
intralesionais. Infiltrao difusa de neutrfilos no parnquima neural e neurpila tambm
pode ser observada (Figura 61).

B
Figura 61. Neutrfilos no sistema nervoso central
(SNC). Descrio: A. Abscesso focal caracterizado
por neutrfilos viveis e degenerados e colees de
bactrias intralesionais nas margens do abscesso.
HE. 10x. B. Ponte. Listeriose. Microabscesso na
neurpila. HE. 40x. C. Crtex telenceflico.
Meningoencefalite por herpesvrus bovino-5
(BoHV-5). Difuso infiltrado inflamatrio composto
por neutrfilos na neurpila. HE. 10x. Comentrio:
abscessos no SNC tm origem bacteriana e no Brasil
so associados ao uso da tabuleta para desmame
interrompido. Microabscessos associados com
infiltrado inflamatrio perivascular mononuclear
localizados no tronco enceflico so achados
microscpicos caractersticos de listeriose. Infiltrado
difuso de neutrfilos comum em casos de
meningoencefalite por BoHV-5 e freqentemente
essa leso precede a malacia.

Neurocitopatologia

140

Quando h necrose do tecido nervoso, moncitos provenientes da corrente


circulatria, migram para o SNC e fagocitam os detritos celulares e transformam-se em
macrfagos carregados de lipdios; devido aparncia do citoplasma, so denominados
macrfagos espumosos ou clulas gitter (do alemo, aspecto reticulado). Aps realizar a
fagocitose dos detritos celulares, os macrfagos espumosos so drenados do tecido
nervoso atravs dos vasos sangneos e a rea afetada, na maioria das vezes, torna-se
cstica e caracterizada microscopicamente pela ausncia do tecido nervoso normal e a
presena de vasos sangneos remanescentes e clulas gitter frouxamente arranjados
(Figura 62). Fibrose s ocorre se a leso for localizada prxima s meninges.

B
Figura 62. Clulas gitter. Descrio: A. Malacia.
Intoxicao por Ramaria flavo-brunnescens (Barros
et al. 2006b). Observe o tecido necrtico do lado
esquerdo da figura e numerosas clulas gitter do
lado direito. HE. 20x. B. Numerosas clulas gitter
esto ao redor de um grande vaso. HE. 20x. C.
Leso residual. O tecido necrtico foi removido
pelas clulas gitter com permanncia de poucas
clulas gitter e vasos. HE. 20x. Comentrio: Apesar
de malacia ser um termo macroscpico para
descrever amolecimento do parnquima do sistema
nervoso central, o termo empregado quando h
necrose do componente neuroectodrmico com
manuteno do componente vascular e infiltrao de
moncitos que se transformam em clulas gitter. Em
qualquer outro tecido, esse mesmo tipo de clula
referido como macrfago espumoso.

4.7 Edema no SNC


O parnquima do SNC no possui vasos linfticos e o espao intersticial entre as
clulas muito menor que em tecidos extraneurais. Quando ocorre a formao de edema,

Neurocitopatologia

141

h acmulo de lquidos dentro das clulas primeiramente, e aps, para o espao


intersticial. Edema cerebral ocorre de certa forma em todas as situaes patolgicas
(leses degenerativas, inflamatrias, traumticas ou neoplasmas). H 4 tipos de edema no
SNC. Edema vasognico o tipo mais comum e ocorre em conseqncia de leso vascular
e se caracteriza por acmulo extracelular de fluido (Figura 63A). Edema citotxico
caracterizado por acmulo de fluido intracelular em neurnios, astrcitos e clulas
endoteliais. Edema intersticial ou hidrosttico causado por elevada presso ventricular
(hidrocefalia) com acmulo extracelular de fluido na substncia branca perivascular.
Edema hiposmtico ocorre por desequilbrio osmtico e o fluido se acumula no espao
intra e extracelular.
Status spongiosus ou degenerao esponjosa um termo usado para descrever
alterao microvacuolar geralmente na substncia branca semelhante a uma peneira no
tecido neural que pode ser detectvel atravs da microscopia ptica. As bases anatmicas
podem ser tumefao das bainhas de mielina, do citoplasma dos astrcitos ou
oligodendrcitos (Figura 63B) e a diferenciao s pode ser realizada atravs de
microscopia eletrnica. A degenerao esponjosa pode ser primria ou secundria.
Quando primria o agente atua diretamente no SNC; quando secundria o agente atua
sobre um outro rgo.

Figura 63. Edema. Descrio: A. Crtex telenceflico. Babesiose cerebral. Edema perivascular. HE. 100x.
B. Degenerao esponjosa na interface da coroa radiada com o crtex telenceflico. Intoxicao por Senecio
brasiliensis. Vacolos ovais ou alongados de 5-40 m em dimetro, com ocasional coalescncia, na interface
do parnquima neural da corona radiada e neurpila do crtex telenceflico. HE. 10x. Comentrio: Em
enfermidades de bovinos no Brasil, degenerao esponjosa primria ocorre em casos de intoxicao por
Ateleia glazioviana (regio Sul) e intoxicao por Tetrapterys spp. (regio Centro-Oeste). Degenerao
esponjosa secundria ocorre em decorrncia de leses hepticas crnicas como intoxicao por Senecio spp.
(regio Sul).

Neurocitopatologia

142

5. Literatura consultada
a) Livros-texto
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Rech R.R., Rissi D.R., Rodrigues A., Pierezan F., Piazer J.V.M., Kommers G.D. & Barros C.S.L. 2006b.
Intoxicao por Solanum fastigiatum (Solanaceae) em bovinos: epidemiologia, sinais clnicos e
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Neurocitopatologia

144

Rech R.R., Rissi D.R., Silva M.C., Inkelmann M.A. & Barros C.S.L. 2006c. Histomorfologia do gnglio de
Gasser, da rete mirabile carotdea e da hipfise de bovinos: estudo de 199 casos. Pesq. Vet. Bras. 26:105111.
Rissi D.R., Oliveira F.N., Rech R.R., Pierezan F., Lemos R.A.A. & Barros C.S.L. 2006. Epidemiologia,
sinais clnicos e distribuio das leses enceflicas em bovinos afetados por meningoencefalite por
herpesvrus bovino-5. Pesq. Vet. Bras. 26:123-132.
Rodrigues A., Rech R.R., Barros R.R., Fighera R.A. & Barros C.S.L. 2005. Babesiose cerebral em bovinos:
20 casos. Cincia Rural 35:121-125.
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145

4 TRABALHOS E RESUMO PUBLICADOS

Esta seo apresenta os trabalhos publicados com material analisado no programa


DXSNC entre 2001-2005. Alguns deles so assuntos revisitados com nfase em aspectos
antes no descritos em determinada enfermidade, ou so descries de leses que ainda no
tinham sido observadas em certas enfermidades j conhecidas de bovinos no Brasil. A
primeira parte refere-se a trabalhos publicados como primeiro autor e incluem:
1) Rech R.R., Fighera R.A., Oliveira F.N. & Barros C.S.L. 2004. Meningoencefalite granulomatosa em bovinos
em pastoreio de ervilhaca (Vicia spp). Pesq. Vet. Bras. 24:169-172.
2) Rech R.R., Schild A.L., Driemeier D., Garmatz S.L., Oliveira F.N., Riet-Correa F. & Barros C.S.L. 2005.
Febre catarral maligna em bovinos no Rio Grande do Sul: epidemiologia, sinais clnicos e patologia. Pesq.
Vet. Bras. 25:97-105.
3) Rech R.R., Rissi D.R., Silva M.C., Inkelmann M.A. & Barros C.S.L. 2006. Histomorfologia do gnglio de
Gasser, da rete mirabile carotdea e da hipfise de bovinos: estudo de 199 casos. Pesq. Vet. Bras. 26:105111.
4) Rech R.R., Rissi D.R., Rodrigues A., Pierezan F., Piazer J.V.M., Kommers G.D. & Barros C.S.L. 2006.
Intoxicao por Solanum fastigiatum (Solanaceae) em bovinos: epidemiologia, sinais clnicos e morfometria
das leses cerebelares. Pesq. Vet. Bras. 26:183-189.
5) Rech R.R., Rodrigues A., Rissi D.R., Riet-Correa F. & Barros C.S.L. 2007. Poisonous plants affecting the
central nervous system (CNS) of cattle in Brazil. p. 238-243. In: Panter K.E.; Wierenga T.L. & Pfister J.A.
(ed.). Poisonous Plants: Global Research and Solutions. Wallingford: CAB International.

Alm dos trabalhos acima mencionados, foi publicado um resumo (Rech R.R., Rissi
D.R., Pierezan F., Inkelmann M.A. & Barros C.S.L. 2006. Raiva em herbvoros: 27 casos.
Encontro Nacional de Laboratrios de Diagnstico Veterinrio, Campo Grande, p. 43-44) que
relatam os dados preliminares de um estudo de raiva ainda em andamento. Aps o resumo
foram inseridos a impresso do pster deste resumo, a descrio da tcnica de
imunoistoqumica para raiva com anticorpo policlonal, padronizada na The University of
Georgia, sob a orientao da professora Corrie Brown, no perodo de maro a dezembro de
2006. Fotografias ilustram os resultados deste experimento.
A segunda parte dos trabalhos publicados inclui co-autoria em trabalhos de outros
autores principais, mas que tambm foram elaborados com material do programa DXSNC
durante o perodo de realizao da tese e incluem:
1) Rodrigues A., Rech R.R., Barros R.R., Fighera R.A. & Barros C.S.L. 2005. Babesiose cerebral em bovinos:
20 casos. Cincia Rural 35:121-125.
2) Barros R.R., Irigoyen L.F., Kommers G.D., Rech R.R., Fighera R.A. & Barros C.S.L. 2006. Intoxicao por
Ramaria flavo-brunnescens (Clavariaceae) em bovinos. Pesq. Vet. Bras. 26:87-96.

146

3) Rissi D.R., Oliveira F.N., Rech R.R., Pierezan F., Lemos R.A.A. & Barros C.S.L. 2006. Epidemiologia,
sinais clnicos e distribuio das leses enceflicas em bovinos afetados por meningoencefalite por
herpesvrus bovino-5. Pesq. Vet. Bras. 26:123-132.
4) Barros R.R., Rech R.R., Viott A.M. & Barros C.S.L. 2006. Carcinoma de clulas escamosas no olho de
bovino com invaso cerebral atravs dos nervos cranianos. Cincia Rural 36:1651-1654.

Chapter
Poisonous Plants Affecting the Central
Nervous System (CNS) of Cattle in Brazil
R.R. Rech1, A. Rodrigues1, D.R. Rissi1, F. Riet-Correa2, and C.S.L.
Barros1
1

Laboratrio de Patologia Veterinria, Universidade Federal de Santa Maria,


Santa Maria, RS, 97105-900, Brazil; 2Centro de Sade e Tecnologia Rural,
Universidade Federal de Campina Grande, Patos, PB, 58700-000, Brazil

Introduction
With the growing importance of surveillance for BSE (bovine spongiform
encephalopathy), pursuing and accurately diagnosing CNS (central nervous
system) disease in cattle has increased substantially. In Brazil, there are many
plants that will induce CNS disease in cattle, including those plants causing
lysosomal storage disease (Ipomoea carnea sub. fistulosa, Phalaris angusta,
Sida carpinifolia and Solanum fastigiatum var. fastigiatum), primary neuronal
degeneration (Ipomoea asarifolia, Prosopis juliflora) and plants causing spongy
degeneration of the CNS white matter (Ateleia glazioviana, Tetrapterys spp. and
Senecio spp.). In addition, recently Marsdenia sp. was described causing CNS
disease in cattle but no morphological changes could be associated with the
disease.

Ipomoea carnea sub. fistulosa


Poisoning by Ipomoea fistulosa (Convolvulaceae) causes lysosomal storage
of glycoprotein-derived oligosaccharides (mannosidosis) due to swainsonine
inhibition of -mannosidase in neurons and visceral cells of cattle, sheep and
goats from the Amazon, Pantanal and Northeast regions of the country. Cattle

Rech et al.

need to consume large amounts of the plant for several weeks to develop the
disease which runs a protracted course. Clinical signs are nonspecific and
include lethargy, slow movements and rough hair coat (Tokarnia et al. 1960).
No gross lesions are found; microscopically there is cytoplasmic vacuolation of
neurons (mainly Purkinje cells) and several other cells, (e.g. tubular epithelium,
hepatocytes and thyroid cells). Toxic substances in Ipomoea fistulosa include
the indolizidine alkaloid swainsonine, 2-epi-lentiginosine, calystegines and Nmetyl-trans-4-hydroxi-1-proline (Haraguchi et al. 2003).

Phalaris angusta
Phalaris spp. (Gramineae) poisoning in ruminants occurs in three forms: a
sudden death syndrome; acute Phalaris poisoning associated with transient
nervous signs; and a chronic form referred to as Phalaris staggers, characterized
by gradual development of neurological signs and characteristic lesions in the
CNS. Outbreaks of Phalaris staggers, a neuronal lipofuscinosis, have been
described in cattle in Southern Brazil associated with the consumption of P.
angusta (Gava et al. 1999). Morbidity and mortality rates are 5% and 50%
respectively. Cattle poisoned by P. angusta present constant movement of the
ears, apprehension, hypersensitivity to external stimuli such as touch and noise,
spasticity, convulsive seizures and lateral recumbency with paddling (Gava et al.
1999). In the chronic form there are diffuse brown-green bilateral symmetrical
areas of discoloration of the thalamus, brain stem and cerebellar gray matter.
Microscopically pigmented neurons, usually involving specific nuclei, are
evident. The pigment is loosely dispersed in the perykarion as golden or dark
brown pigment granules of lipofuscin (Sousa and Irigoyen 1999) which are
strongly positive using the PAS stain but negative for hemosiderin (Prussian
blue stain). Tryptamine and -carboline are active principles extracted from
Phalaris spp. but the toxic principle and pathogenesis remain to be fully
clarified. While the observation of the pigment in neurons is diagnostically
useful in suspected cases of toxicity, especially in young animals, the
accumulation of lipofuscin seems insufficient to explain the clinical signs and
mortality. Some have proposed that central nervous system signs result from
serotonergic effects of toxins on upper motor neurons. The principal differential
diagnoses for neuronal pigmentation include old age lipofuscinosis and
poisoning by other plants such as Trachyandra laxa and T. divaricata, which is
not reported in Brazil.

Sida carpinifolia
The consumption of S. carpinifolia (Malvaceae) induces a chronic
degenerative disease in goats (Driemeier et al. 2000), horses (Loretti et al.

Poisonous plants affecting the CNS

2003), sheep (Seitz et al. 2005) and cattle (Gava 2003, personal communication)
in Southern Brazil. The plant is palatable to livestock but morbidity and
mortality rates are low; the toxic principle of S. carpinifolia (swainsonine)
inhibits the degradation of oligosaccharides. Cattle seem less susceptible than
goats, but there was one as yet unpublished outbreak where five out of twenty
cattle were affected. Clinical signs include tremors and ataxia which deteriorate
if the animal is disturbed. There are no gross changes. Microscopically there is
fine vacuolation of the cytoplasm of neurons of the CNS and peripheral ganglia
and of several other cells of other organs. These lesions are reversible if the
ingestion of the plant is discontinued. Neuronal lesions caused by the ingestion
of S. carpinifolia were observed as incidental lesions in two cows that died of
rabies (Driemeier 2003, personal communication).

Solanum fastigiatum var. fastigiatum


The ingestion of large amounts of Solanum fastigiatum (Solanaceae) for
long periods causes a neurological disease in cattle of Southern Brazil
characterized by transient convulsive seizures with low to moderate morbidity
(1%-20%) and very low mortality (Riet-Correa et al. 1983). The consumption of
the plant occurs mostly due to dearth of forage and cattle of all breeds and both
sexes over one year of age can be affected. Clinical signs are those of cerebellar
ataxia and include transient seizures with loss of balance, hypermetria,
nystagmus, opisthonous and falling. The frequency of crises is variable but they
usually occur when cattle are disturbed. The disease is chronic and the clinical
signs may persist for several years after cattle are withdraw from infested
pastures. Death is rare but may result from acquired trauma or drowning during
the seizures. There are no specific lesions at necropsy but those related to trauma
can be found. Histologically there is fine vacuolation of the cytoplasm of the
Purkinje cells with progressive loss of these cells and depopulation of Purkinje
layer and reactive Bergman glia proliferation; spheroids are found within the
granule cell layer and in the white matter of the cerebellum (Riet-Correa et al.
1983; Barros et al. 1987). In severely affected cows there is thinning of the
molecular layer of the cerebellum (unpublished observations). The vacuolation
of the cytoplasm of the Purkinje cell neurons decreases if the ingestion of plant
is discontinued (Zambrano et al. 1985). The active principle is unknown but
ultrastructural (Barros et al. 1987) and lectin histochemical studies (Paulovich et
al. 2002) indicate that S. fastigiatum induces glycolipid lysosomal deposits in
the cytoplasm of Purkinje cells. The reason that the lesions are restricted to
Purkinje neurons is unclear.

Rech et al.

Ipomoea asarifolia
Ipomoea asarifolia (Convolvulaceae) is a tremorgenic plant with an
unknown active principle. The intoxication occurs in the Northeast (Dbereiner
et al. 1960) and affects mainly young sheep, but goats and cattle are also
affected (Medeiros et al. 2003). Ingestion occurs during the dry season due to
lack of more suitable forage. Clinical signs include muscle tremors, hypermetria
and hypersensitivity to noise. When the bovine is left alone the clinical signs
subside but a wide base stance is maintained. If the ingestion of the plant is
discontinued, clinical signs gradually abate. Histologically there are
degeneration and loss of Purkinje cells, axonal spheroids in the granular layer
and foci of demyelination in the white matter of the cerebellum.

Prosopis juliflora
The intoxication by the pods of Prosopis juliflora is a chronic neurological
disease frequent in cattle in the semi-arid region of Northeastern Brazil and is
characterized by atrophy of the masseter muscle, protusion and involuntary
movements of the tongue, decreased tonus of mandibular muscles, head tilt
during rumination, abundant drooling, yawning, dysphagia and continuing
mastigatory movements (Tabosa et al. 2000a). The pods are used as feed for
cattle in the dry season and when ingested for long periods cause degeneration
of neurons of motor (trigeminal) nuclei in the brainstem which result in atrophy
and paralysis of masticatory muscles leading to starvation due to difficulty in
apprehension and maintenance of food in the mouth. Piperidinic alkaloids were
isolated from the plant (Tabosa et al. 2000b) but their role in the intoxication is
uncertain. Necropsy findings include changes related to starvation and atrophy
of masticatory muscles. Microscopically there is chromatolysis and fine
perikaryal vacuolation in neurons of the trigeminal motor nuclei with eventual
loss of these cells. Ultrastructurally the neuronal lesion consists of mitochondrial
swelling with disorientation and fragmentation of mitochondrial cristae.

Ateleia glazioviana, Tetrapterys spp. and Senecio spp.


These plants induce a condition in cattle which was referred to as
spongiform myelinopathies (Van der Lugt 2002) in which the dominant
pathological feature is vacuolation of myelin in the absence of a significant
degree of myelin breakdown or phagocytosis. All of the plants listed are causes
of prominent vacuolation in the white matter of the CNS by splitting of myelin
lamellae (Raffi et al. 2005), a condition known as spongy degeneration. Spongy
degeneration associated with Ateleia glazioviana and Tetrapterys spp. is caused

Poisonous plants affecting the CNS

by the primary action of an unknown toxic principle(s) in the CNS (Tokarnia et


al. 2000; Gava and Barros 2001) whereas the same lesion found in Senecio spp.
affected cattle is secondary to liver failure due to cirrhosis (hepatic
encephalopathy). Senecio spp. and Ateleia glazioviana are important causes of
death in cattle in Southern Brazil, and Tetrapterys spp. affects cattle in the
Southeastern region.
The ingestion of the roots of Marsdenia sp. was recently described as
causing neurological disease in cattle from Northeastern Brazil (Riet-Correa et
al. 2004). Within a few hours after ingestion, cattle were recumbent. Clinical
signs included muscular tremors, muscle fasciculations, hyperesthesia, marked
salivation, continuous masticatory movements, opisthotonus, clonic convulsions,
and dyspnea. No gross or microscopic lesions were found and the toxic active
principle in the plant is unknown.

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183

Protocolo de imunoistoqumica para raiva


A imunoistoqumica para raiva foi realizada usando o kit universal de fosfatase
alcalina DAKO LSAB2 (DAKO cat# K0674). Os resultados esto ilustrados na Figura 1.
Os seguintes passos foram usados no procedimento:

1. Rotular as lminas com lpis


2. Colocar as lminas na estufa a 60C por 30 minutos (ou na estufa a 80C por 10
minutos).
3. Desparafinar as sees por meio de 2 mudanas no xilol por 5 minutos cada e reidratlas passando por lcoois em graduaes decrescentes (i., absoluto, 95% e 70%) por trs
minutos cada um e depois em gua destilada.
4. Recuperao antignica (RA)
a. Pr-aquecer a panela de vapor (steamer)
b. Ferver no microondas a soluo de recuperao antignica [Biogenex AR Citra
Concentrated (10X), Cat # HK086-9K] sem as lminas
c. Colocar o recipiente com a soluo de RA na panela de vapor, colocar as
lminas dentro da soluo de RA, fechar a panela de vapor e deixar por 15 minutos.
d. Lavar as lminas algumas vezes em gua destilada em temperatura ambiente.
5. Lavar em soluo salina Tris-salina-tween 20 (TST) 2 vezes por 3 minutos cada e
circular os cortes com caneta hidrofbica.
6. Bloqueio
a. Preparar uma soluo de casena 1X (Power block - BioGenex universal
blocking reagent 10X cat#HK085-5K) com gua destilada.
b. Colocar as lminas em cmara mida com a soluo de bloqueio por 10
minutos em temperatura ambiente.
c. Lavar em PBS duas vezes por 5 minutos cada.
7. Aplicar o anticorpo primrio (policlonal de raiva produzido em cabras marcado com
FITC anticorpo conjugado de isotiocianato de fluorescena - [Chemicon #5199] na
diluio 1:500 em TST e incubar por 60 minutos em temperatura ambiente.

DAKO, www.dako.com

184
8. Lavar em TST duas vezes por 3 minutos cada (agitar bem a cada vez).
9. Aplicar o anticorpo secundrio (monoclonal anti-FITC SIGMA F5636) na diluio de
1:5000 em PBS e incubar por 60 minutos em temperatura ambiente.
10. Lavar em TST duas vezes por 3 minutos cada vez.
11. Aplicar o anticorpo biotinilado de ligao (anti-camundongo e anti-coelho do kit
LSAB2) e incubar por 15 minutos.
12. Lavar em TST duas vezes por 3 minutos cada vez.
13. Aplicar o conjugado fosfatase alcalina estreptavidina do kit LSAB2 e incubar por 15
minutos em temperatura ambiente.
14. Lavar em TST duas vezes por 3 minutos cada vez.
15. Aplicar o reagente cromgeno fast red (diluir 1 tablete em 2 ml de soluo tamponada
0,1M Tris pH 8,3) e incubar por 20 minutos em temperatura ambiente.
16. Lavar em gua destilada duas vezes por trs minutos.
17. Contracorar com hematoxilina de Meyer (Biomeda cat#M10) por 6 minutos.
18. Lavar em gua corrente por 1 minuto.
19. Colocar as lminas em soluo tampo (2ml Tris tamponado 2,0M, pH 7,5 em 198ml
de gua destilada) por 10 segundos.
20. Enxgar em gua destilada por 1 minuto.
21. Montar a lmina usando meio de montagem aquoso (Faramount: DAKO cat# S3025).

Frmula para 4 litros de Tris-salina-tween 20 (TST)


- 200 ml 2M Tris, pH 7,5
- 80 ml 5M NaCl
- 8 ml MgCl2 51%
- 2 ml Tween 20

Frmula para o reagente cromgeno fast red (Dako # K0699)


Dissolver um tablete do substrato fast red (estocado a -20C ) levado temperatura
ambiente antes de abrir (30 minutos) em 2 ml de soluo tamponada (utilizar a soluo
fornecida pelo fabricante ou 2 ml de soluo tamponada 0,1M Tris pH 8,2). Filtrar a
soluo com o tablete dissolvido atravs de um filtro (seringa Millipore).

185

Figura 01 - Imunomarcao para raiva bovina. A. Crtex telenceflico. B. Hipocampo. C.


Cerebelo. D. Gnglio de Gasser. Pericrio dos neurnios e seus processos fortemente positivos
para o antgeno da raiva. IHQ, LSAB2 fosfatase alcalina, contracolorao pela hematoxilina
de Meyer.

Raiva em herbvoros: 27 casos


Raquel R. Rech, Daniel R. Rissi, Felipe Pierezan, Maria A. Inkelmann, Claudio S.L. Barros*
Laboratrio de Patologia Veterinria (LPV), Universidade Federal de Santa Maria (UFSM),
97105-900, Santa Maria, RS. *E-mail: claudioslbarros@uol.com.br

Introduo
A raiva uma encefalite viral aguda, progressiva, causada por um vrus RNA
neurotrpico da famlia Rhabdoviridae, gnero Lyssavirus. Os principais
reservatrios mamferos incluem carnvoros e quirpteros. Descrevem-se 5
surtos e 2 casos isolados de raiva em bovinos, dois em ovinos e um em eqino
diagnosticados entre 2002 e 2005 no LPV-UFSM.

Relato dos casos


Quatro surtos ocorreram no Rio Grande do Sul (RS) e um no Paran. Os dois
casos isolados ocorreram nos municpios de So Pedro do Sul e So Pedro do
Buti, RS. Os dados constam no Quadro 1. A maioria das propriedades
localizava-se prxima a encostas de morros (Fig.1). A taxa de mortalidade em
bovinos e em ovinos foi, respectivamente, de 4% (0,7 a 12,8%) e 14,8%. A
maioria dos casos (68%) ocorreu na primavera e vero. Os bovinos afetados
tinham idade mdia de 5 anos (3 meses a 15 anos) e a evoluo clnica foi de 2-8
dias. Os ovinos tinham, respectivamente, 2,5 e 3 meses de idade. Os sinais
clnicos foram: decbito (14/23) (Fig.2a), incoordenao motora (11/23), febre
que variou de 41 a 43C (7/23), sialorria (6/23) (Fig.2b), agressividade (5/23),
opisttono (4/23), hiperexcitabilidade (4/23), anorexia (3/23), taquicardia
(3/23), andar em crculos (2/23), fraqueza (2/23) (Fig.2c), quedas constantes
(2/23), tremores musculares (2/23), olhar alerta (2/23), dificuldade de apreenso
dos alimentos (1/23), cegueira (1/23), convulses, respirao ofegante (1/23),
movimentos de pedalagem (1/23), paralisia flcida da cauda (1/23) e conjuntiva
hipermica (1/23). Em 3 animais, o histrico clnico no foi informado.
Macroscopicamente, em 15 bovinos (62,5%), foi observada hiperemia da
leptomeninge do encfalo (Fig.3a). Em todos os encfalos de bovinos foi
observada meningoencefalite no supurativa (MENS) multifocal leve a
acentuada (Fig.3b). Em 20/24 bovinos (83,3% dos casos) e nos dois ovinos
examinados foram observados corpsculos de Negri (CN) (Fig.3c). Ganglionite
no supurativa (Fig.4a) com graus variveis de necrose neuronal e neuronofagia
(Fig.4b) associada a CN (Fig.4c) foi observada em 19/21 gnglios de Gasser de
bovinos (90,5% dos casos) e dos 2 ovinos (100%). Fragmentos de encfalo de 19
bovinos foram remetidos ao teste de imunofluorescncia direta (IFD) e 16 deles
foram positivos (61,5%); os que tiveram resultado negativo na IFD (26,6%) e
aqueles que no foram remetidos IFD foram confirmados histologicamente
pela MENS associada a CN no encfalo e gnglio de Gasser.

Fig. 1. Propriedades onde ocorreram os surtos de raiva no Rio Grande do Sul. Observe os terrenos acidentados e a proximidade com as encostas de morros.

Fig. 2. Sinais clnicos. A. Bovino em decbito na fase final da doena. As marcas no cho foram causadas por movimentos de pedalagem. B. Sialorria acentuada. C.
Bovino com a cabea e o pescoo apoiados no cho demonstrando fraqueza.

Discusso
Apesar de no terem sido observadas mordidas de morcegos nos animais
afetados, provvel que em todos os casos a transmisso tenha ocorrido por
morcegos hematfagos (Desmodus rotundus), devido ao relato de proprietrios
da presena de furnas com morcegos nos terrenos acidentados prximos s
propriedades acometidas. Achados pouco relatados por outros autores e
observados consistentemente neste estudo foram a hiperemia das leptomeninges
e a ganglionite no supurativa associada a CN, que pode otimizar o diagnstico
histopatolgico, principalmente quando h MENS sem a presena de CN e
quando a IFD negativa. A idade e os sinais clnicos de bovinos afetados por
raiva so muito variveis, por isso a raiva deve ser sempre considerada no
diagnstico diferencial das doenas do sistema nervoso central de bovinos no
Brasil.
Quadro 1. Dados epidemiolgicos dos casos de raiva em bovinos.
Surto
Municpio/Estado
Total de
Bovinos
bovinos
afetados
Surto 1
Garruchos (RS)
750
28
Surto 2
Itaara (RS)
179
27
Surto 3
Jlio de Castilhos e
1150
8
Val de Serra (RS)
Surto 4
So Joo do Polnise,
258
33
Silveira Martins e Faxinal
do Soturno (RS)
Surto 5
Coronel Vivida (PR)
426
20
Caso isolado 1
So Pedro do Sul (RS)
8
1
Caso isolado 2 So Pedro do Buti (RS)
16
1
Total
2787
118

Fig. 3. Leses no encfalo. A. Achado macroscpico. Hiperemia acentuada das leptomeninges. B. Achado histolgico. Encefalite no supurativa caracterizada por
manguito perivascular constitudo por linfcitos e plasmcitos. Hematoxilina-eosina. C. Achado histolgico. Corpsculos de incluso intracitoplasmticos eosinoflicos
em neurnios de Purkinje. Os corpsculos de Negri foram mais freqentes nos neurnios de Purkinje e nos grandes neurnios do tronco enceflico. Hematoxilina-eosina.

Bovinos
examinados
2
6
3
7

4
1
1
24

Fig. 4. Achados histolgicos no gnglio de Gasser. A. Ganglionite difusa acentuada (leso de van Gehuchten e Nelis). Hematoxilina-eosina. B. Neuronofagia.
Observam-se clulas da micrglia fagocitando restos neuronais. Hematoxilina-eosina. C. Corpsculo de Negri com 15 m de dimetro. Hematoxilina-eosina.

215

5 RESULTADOS DO PROGRAMA DXSNC


Durante 5 anos (2001-2005) foram examinados 3.338 encfalos de bovinos. A
distribuio por ano, a porcentagem de encfalos sem alteraes e com leses, e o
nmero de bovinos examinados em cada categoria da amostra so apresentadas nas
Figuras 11, 12 e 13, respectivamente.

2500

2182

2000

1500

1000

352
500

311

373

120

0
2001

2002

2003

2004

2005

Figura 11. Nmero de encfalos de bovinos examinados de 2001-2005 durante o


programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis, no Laboratrio
de Patologia Veterinria da Universidade Federal de Santa Maria.

8%

92%

Com alteraes
Sem alteraes

Figura 12. Porcentagem de encfalos com e sem alteraes histolgicas examinados


entre 2001-2005, durante o programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes
transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal de
Santa Maria.

216

2500
2022

2000
1500
1000
500

385

326

308
61

191

192

105

20

0
Cat. 1

Cat. 2

Cat. 3

Cat. 4

Cat. 5

Cat. 6

Figura 13. Nmero de encfalos de bovinos examinados em cada categoria da amostra


(em azul) e de encfalos com leses (em cor vinho), entre 2001-2005 durante o
programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes transmissveis no Laboratrio
de Patologia da Universidade Federal de Santa Maria.
As alteraes associadas a doenas deste perodo foram divididas em 5
categorias, como pode ser observado na Figura 14. As doenas diagnosticadas e as
respectivas freqncias esto descritas nas Tabelas 1 e 2.

0.7%
41.6%

46.2%

10.0%
Inflamatrias

Neoplsicas

1.4%

Circulatrias

Degenerativas

Congnitas

Figura 14. Categoria de leses encontradas em 279 encfalos de bovinos com alteraes
histolgicas examinados entre 2001-2005, durante o programa de vigilncia das
encefalopatias espongiformes transmissveis no Laboratrio de Patologia da
Universidade Federal de Santa Maria.

217
Tabela 1. Diagnsticos realizados em 279 encfalos de bovinos examinados entre 20012005, durante o programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes
transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal de
Santa Maria.
Diagnstico
Nmero de
%
bovinos
Abscessos cerebrais
10
3,6
Babesiose cerebral
19
6,8
Cetose (por outros mtodos)
1
0,3
Compresso medular
1
0,3
Encefalomalacia focal simtrica
6
2,1
Encefalopatia heptica
70
26,0
Febre catarral maligna
13
4,6
Hemorragias traumticas
9
3,2
Hidranencefalia
1
0,3
Hipoplasia cerebelar
1
0,3
Intoxicao por Ateleia glazioviana
3
1,0
Intoxicao por Claviceps paspali
1
0,3
Intoxicao por Solanum fastigiatum
22
7,8
Intoxicao por Vicia spp.
7
2,5
Listeriose
3
1,0
Meningite bacteriana
1
0,3
Meningoencefalite no-purulenta inespecfica
38
13,6
Meningoencefalite por herpesvrus bovino
26
9,3
Meningoencefalite purulenta inespecfica
4
1,4
Neoplasias
4
1,4
Polioencefalomalacia
11
3,9
Raiva
27
9,7
Ttano (por outros mtodos)
1
0,3
Total
279
100%
Tabela 2. Diagnsticos por categoria da amostra realizados em 3.338 encfalos de
bovinos examinados entre 2001-2005, durante o programa de vigilncia das
encefalopatias espongiformes transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da
Universidade Federal de Santa Maria.
Diagnstico
Nmero de bovinos
Categoria 1
326
Abscessos cerebrais
3
Babesiose cerebral
1
Encefalopatia heptica
4
Hemorragias traumticas
3
Intoxicao por Solanum fastigiatum
1
Listeriose
2
Meningoencefalite no-purulenta inespecfica
32
Meningoencefalite por herpesvrus
5
Meningoencefalite purulenta inespecfica
3
Polioencefalomalacia
4
Raiva
3
Sem alteraes histopatolgicas
265

218
Tabela 2. Continuao
Diagnstico
Categoria 2
Abscessos cerebrais
Babesiose cerebral
Cetose (por outros mtodos)
Compresso medular
Encefalite no-purulenta inespecfica
Encefalomalacia focal simtrica
Encefalopatia heptica
Febre catarral maligna
Hemorragia traumtica
Hidranencefalia
Hipoplasia cerebelar
Intoxicao por Ateleia glazioviana
Intoxicao por Claviceps paspali
Intoxicao por Solanum fastigiatum
Meningite bacteriana
Meningoencefalite no-purulenta inespecfica
Meningoencefalite por herpesvrus
Meningoencefalite purulenta inespecfica
Neoplasia
Polioencefalomalacia
Raiva
Sem alteraes histopatolgicas
Ttano (por outros mtodos)
Categoria 3
Encefalopatia heptica
Intoxicao por Solanum fastigiatum
Intoxicao por Vicia spp.
Neoplasia
Sem alteraes histopatolgicas
Categoria 4
Hemorragias traumticas
Listeriose
Meningoencefalite no-purulenta inespecfica
Sem alteraes histopatolgicas
Categoria 5
Sem alteraes histopatolgicas
Categoria 6
Sem alteraes histopatolgicas

Nmero de bovinos
308
7
18
1
1
1
6
57
13
2
1
1
3
1
20
1
3
21
1
1
7
24
117
1
105
9
1
7
3
85
385
4
1
2
378
2022
2022
192
192

As Figuras 15-17 mostram a condio das amostras de encfalos de bovinos


examinados entre 2001-2005. Na Figura 15 pode ser observada a condio da amostra
levando em conta o nmero total de encfalos examinados. Na Figura 16 a condio da
amostra distribuda em cada ano do perodo e na Figura 17, observa-se a condio da
amostra em cada categoria de bovino examinada.

219

3022

3500
3000
2500
2000
1500
1000

272

500

23

21

0
Autolisado

Congelado

Partes anatmicas
pertinentes noincludas

Adequado

Figura 15. Nmero de encfalos de bovinos examinados entre 2001-2005, em cada


categoria da condio da amostra, durante o programa de vigilncia das encefalopatias
espongiformes transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade
Federal de Santa Maria.

2500
2096

2000
1500
1000
500

312
4 3 40 73

70
0 16

37

80

314

227
13 1 45

0
2001
Autolisado

2002
Congelado

2003

2004

Partes anatmicas pertinentes no includas

2005
Adequado

Figura 16. Nmero de encfalos de bovinos examinados a cada ano (2001-2005), em


cada categoria da condio da amostra, durante o programa de vigilncia das
encefalopatias espongiformes transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da
Universidade Federal de Santa Maria.

220

2500
2004

2000
1500
1000
500

137 164

300

273

7 18

8 3 24

Cat. 1

Cat. 2

Cat. 3

7 96

80

185

0 0 18

1 06

Cat. 5

Cat. 6

0
Autolisado

Congelado

Cat. 4

Partes anatmicas pertinentes no includas

Adequado

Figura 17. Nmero de encfalos de bovinos examinados entre 2001-2005, por categoria
da amostra, durante o programa de vigilncia das encefalopatias espongiformes
transmissveis, no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal de
Santa Maria.

221

6 DISCUSSO
At 2001, o Brasil possua apenas a vigilncia passiva para BSE, i., baseada na
deteco e notificao compulsria de casos de bovinos com sinais clnicos de
distrbios nervosos observados em ruminantes. A partir de 2002, quando laboratrios de
patologia veterinria foram credenciados pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento (MAPA) (Quadro 5, Figura 8 e Anexo 3 da seo 2), o Brasil passou a
realizar a vigilncia ativa para BSE, que define e testa as populaes de risco (Quadro
6) para a doena. A partir da, gradativamente, maior nmero de encfalos de bovinos e
outros ruminantes foram examinados. Em 5 anos (2001-2005) foram examinados 3.338
encfalos de bovinos no Laboratrio de Patologia Veterinria da Universidade Federal
de Santa Maria (LPV/UFSM). Um estudo retrospectivo realizado no LPV/UFSM
mostrou que de 1964-1999 foram examinados 473 encfalos em 6.021 necropsias de
bovinos (Sanches et al. 2000). Esses nmeros indicam que at a implantao do
programa DXSNC, eram examinados cerca de 13 encfalos de bovinos/ano. Nos cinco
anos aps a implantao do programa, 667 encfalos de bovinos foram analisados a
cada ano, i. o nmero de encfalos examinados anualmente foi 51 vezes maior.
De 3.338 encfalos de bovinos examinados durante os 5 anos, 92% no
apresentaram alteraes histopatolgicas (Figura 12). Alguns desses bovinos
apresentavam sinais clnicos de distrbios nervosos ou tinham doena crnica ou
depauperante (Categorias 1, 2 e 3). Como observado na Figura 12, 81% dos encfalos
de bovinos das Categorias 1 e 3 e 38% dos encfalos do bovino da Categoria 2 no
apresentaram alteraes histopatolgicas. A baixa freqncia de leses histolgicas no
encfalo de bovinos da Categoria 3 compreensvel. Nessa categoria estavam includos
bovinos com doena crnica depauperante ou caquetizante que na grande maioria das
vezes no eram relacionadas com leses no encfalo. Exemplo disso so bovinos
afetados por neoplasmas do trato alimentar superior associados ao consumo de
samambaia, que apresentavam perda de peso progressiva (Moreira Souto et al. 2006).
Na Categoria 2, a ausncia de leses histolgicas em cerca de um tero dos encfalos
examinados, pode ser explicada de trs maneiras: 1) essa categoria inclua bovinos com
doenas que, apesar de produzir sinais clnicos de distrbios nervosos, no produzem
alteraes morfolgicas observveis no encfalo (por ex., ttano, cetose, botulismo); 2)
inclua doenas cujos sinais clnicos mimetizam distrbios nervosos como doenas
musculares (por ex., intoxicao por Senna occidentalis, intoxicao por ionforos) e 3)

222
inclua doenas que apesar de no apresentarem sinais clnicos de distrbios nervosos,
mesmo assim eram relatadas pelo clnico (por vrias razes) como casos neurolgicos.
Esses ltimos casos incluem aqueles em que o clnico sente a necessidade de eliminar
do diferencial doenas como raiva, e desse modo, mesmo que no existisse sinais
clnicos de distrbios nervosos eles seriam mencionados, para justificar o pedido de
exame para raiva. Embora por definio todos os bovinos da Categoria 1 apresentassem
sinais clnicos nervosos, a ausncia de leses histolgicas na maioria dos casos se deve
ao fato de que a inadequada colheita ou fixao do encfalo (Figura 10 da seo 2) torna
difcil a percepo e interpretao dos achados histolgicos. Quarenta e nove por cento
dos encfalos na Categoria 1 apresentavam mau acondicionamento da amostra
(autolisado, congelado ou partes anatmicas pertinentes no-includas). Isso pode
prejudicar o diagnstico de algumas enfermidades que possuem distribuio especfica
de leses no SNC.
Em todos os encfalos de todas as categorias de bovinos analisadas, achados de
pouco significado clnico, associados colheita ou fixao do material foram anotados
nos laudos histopatolgicos. Esses achados foram descritos na seo 3 deste estudo e
devem ser diferenciados de achados associados a doenas para evitar interpretao
errnea. Por exemplo, a conglutinao cerebelar mostrada na Figura 45 da seo 3 j foi
interpretada como leso cerebelar antemortem significativa. Nesse sentido, tambm
importante que os laboratrios adotem critrios de padronizao do diagnstico e
preenchimento dos laudos histopatolgicos.
As doenas diagnosticadas em cada laboratrio credenciado refletem a
prevalncia dessas doenas na regio. Essa afirmao verdadeira, mesmo que o
laboratrio credenciado receba material para exame histopatolgico oriundo de outros
estados do pas. Atualmente, o LPV/UFSM recebe material para anlise histolgica dos
seguintes Estados: Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paran e Gois. A maioria dos
materiais de outros Estados so provenientes de frigorficos (Categorias 5 e 6) e no
apresentam alteraes histopatolgicas (Figura 13).
Dos 2% (279 casos) de encfalos que apresentaram alteraes histopatolgicas,
as leses mais freqentemente observadas foram inflamatrias (46,2%) e degenerativas
(41,6%) (Figura 14). O diagnstico mais prevalente foi encefalopatia heptica (26%),
seguido por meningoencefalite no-purulenta inespecfica (13,6%) e raiva (9,7%)
(Tabela 1). A maior freqncia da encefalopatia heptica est relacionada com sua causa
primria. No Rio Grande do Sul, a causa mais freqente de morte em bovinos adultos

223
a intoxicao por Senecio spp. (Rissi et al. 2007) e a encefalopatia heptica em bovinos
secundria insuficincia heptica que ocorre na seneciose. Trinta e dois dos 38 casos
(84%) de meningoencefalite no-purulenta inespecfica (Tabela 2) so de encfalos
provenientes da Categoria 1, i., de laboratrios da rede oficial que testaram negativo
para raiva. Como foi mencionado anteriormente, 49,6% desses materiais no so
coletados ou fixados adequadamente. Trs principais enfermidades virais cursam com
meningoencefalite no-purulenta no Brasil: raiva, meningoencefalite por herpesvrus e
febre catarral maligna (FCM) (Langohr et al. 2003, Rech et al. 2005, Rech et al. 2006a,
Rissi et al. 2006). Leses histolgicas caractersticas so observadas em cada uma
dessas enfermidades (Barros et al. 2006a), no entanto, na maioria das vezes, essas leses
so observadas analisando diversos fragmentos de diferentes regies anatmicas do
SNC ou de estruturas associadas como o complexo gnglio de Gasser, rete mirabile
carotdea e hipfise (GRH) (Rech et al. 2006c).
A terceira enfermidade mais prevalente foi a raiva (9,7%) seguida por
meningoencefalite por herpesvrus (9,3%). Essa ordem de freqncia j havia sido
observada em levantamento anterior feito no LPV/UFSM (Sanches et al. 2000). No
entanto, no caso da raiva a prevalncia encontrada neste estudo foi 5 vezes menor
(9,7%) do que a observada no estudo anterior (49,5%). O nmero de casos das
alteraes degenerativas quase dobrou em relao ao estudo anterior (24,2% para 42%),
especificamente os de encefalopatia heptica (10,4% para 26%). A diferena na
prevalncia de casos de encefalopatia heptica nos dois estudos se deve ao aumento de
casos de intoxicao por Senecio spp. em bovinos no RS. Provavelmente fatores ligados
ao clima e diminuio do rebanho ovino podem ter contribudo para o o aumento da
incidncia de casos de seneciose bovina. Em um estudo realizado entre 2003 e 2004,
envolvendo casos de seneciose bovina no Rio Grande do Sul foi observada alta
freqncia de encefalopatia heptica nessa intoxicao (Masuda et al. 2005).
A predominncia das alteraes degenerativas sobre as alteraes inflamatrias
reflete, em grande parte, a crescente importncia da intoxicao por plantas em bovinos
na regio de influncia do LPV/UFSM (Rech et al. 2007, Rissi et al. 2007). Dos 279
diagnsticos com leses no encfalo de bovinos, 109 (39%) foram atribudos
intoxicao por plantas (Tabela 1). Dessas, a intoxicao por Vicia spp. (7 casos) foi
includa na categoria de alteraes inflamatrias (Rech et al. 2004). O segundo
diagnstico mais prevalente de intoxicao por plantas, foi a intoxicao por Solanum
fastigiatum (7,8% dos casos). Apesar de a intoxicao por Solanum fastigiatum

224
raramente causar a morte dos bovinos, uma enfermidade que causa acentuados sinais
clnicos de distrbios nervosos (Rech et al. 2006b). As doenas menos prevalentes
foram as alteraes neoplsicas e congnitas (1,4% e 0,7% dos diagnsticos
respectivamente). Nos neoplasmas foram considerados os multicntricos, como o
linfoma (Fighera & Barros 2004), metastticos como o carcinoma de clulas escamosas,
e a extenso direta de carcinoma de clulas escamosas do olho (Barros et al. 2006c) e de
osteossarcoma das fossas nasais. No foi observado neoplasma primrio do SNC. Das
alteraes congnitas (hidranencefalia e hipoplasia cerebelar) foram descritos os
aspectos morfolgicos, mas a causa no foi determinada.
Devido anlise sistemtica do SNC de bovinos, novos diagnsticos foram
adicionados ao programa, por exemplo, encefalomalacia focal simtrica em bovinos
intoxicados por Ramaria flavo-brunnescens (Barros et al. 2006b). Novas leses foram
descritas, por exemplo, diminuio da espessura da camada molecular do cerebelo em
bovinos intoxicados por Solanum fastigiatum (Rech et al. 2006b) e meningoencefalite
granulomatosa em bovinos intoxicados por Vicia spp. (Rech et al. 2004).
Em relao condio da amostra, existe sensvel diferena nos valores quando
se observam as diferentes categorias de bovinos (Figura 17). Como foi mencionado
anteriormente, o ndice de materiais no-adequados na Categoria 1 foi de 49,6% seguido
da Categoria 4 (22%), Categoria 2 (11,3%), Categoria 3 (8,5%), Categoria 6 (3,6%) e
Categoria 5 (0,9%). Esses ndices mostram que o material proveniente dos frigorficos
(Categoria 5 e 6) , em sua grande maioria, adequado para o diagnstico, apesar de
consistir apenas do tronco enceflico. Nos poucos casos em que o material no
adequado, ocorre pela perda de partes importantes do tronco enceflico devido presso
intracraniana provocada pela pistola pneumtica na hora da dessensibilizao. Os baixos
ndices de materiais no-adequados das Categorias 2 e 3 so explicados pelo fato de que
na maioria das vezes esses encfalos so coletados pela equipe do LPV/UFSM em
necropsias a campo. Muitas vezes, mdicos veterinrios da regio enviam a cabea do
bovino e a equipe do LPV/UFSM faz a retirada do encfalo e do complexo GRH. A
Categoria 4 apresenta ndice alto de materiais inadequados. Isso particularmente
preocupante por se tratar de uma das categorias mais visadas para a vigilncia da BSE,
pois esses bovinos so provenientes de pases de risco. Alm disso, o nmero total de
bovinos importados recebidos no perodo de 5 anos do estudo (n=385) muito pequeno.
Pelos dados oficiais do Brasil foram importados, a partir de 1992, 10.626 bovinos, e
pelos dados dos pases exportadores 12.545 bovinos foram exportados para o Brasil

225
(EFSA, Scientific Report 2005).
Quando se compara a condio da amostra em relao aos anos comprendidos
no estudo (Figura 16), observa-se que no houve melhora significativa na colheita
correta do encfalo. De 2003-2005, a percentagem de material no-adequado oscila
entre 11,4%, 37% e 15%, respectivamente. Esses dados indicam que o MAPA deve
continuar com os cursos de padronizao da colheita e remessa do material para exame
histopatolgico, visando a reduo desses nmeros.

226

7 CONCLUSES
Este estudo demonstra que o Brasil desenvolveu um programa de vigilncia
adequado para a BSE. A localizao geogrfica dos laboratrios credenciados, o
treinamento do pessoal desses laboratrios e os mtodos de diagnstico empregados
permitem afirmar, com razovel margem de segurana, que casos clnicos de BSE
seriam detectados caso aparecessem no pas. O estudo, no entanto apontou algumas
falhas nesse sistema de vigilncia. Uma delas a pouca afluncia de material para teste
originrio de bovinos que testaram negativo para raiva, de bovinos importados e de
bovinos de abate de emergncia em frigorficos com inspeo federal; outra so as ms
condies das amostras enviadas para diagnstico.
A partir do estudo sistemtico dos encfalos de bovinos submetidos ao
laboratrio no programa de vigilncia foi possvel estabelecer vrias concluses sobre
doenas comuns do sistema nervoso central (SNC) de bovinos, como raiva, intoxicao
por Solanum fastigiatum, intoxicao por Vicia spp., intoxicao por Ramaria flavobrunnescens, meningoencefalite por herpesvrus bovino, babesiose cerebral e febre
catarral maligna. Essas concluses esto mencionadas nos trabalhos especficos
publicados sobre cada um desses assuntos e includos nesta tese.
O sistema de vigilncia da BSE aumentou significativamente o nmero de
encfalos de bovinos examinados no Laboratrio de Patologia Veterinria (LPV) da
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Isso resultou em aumento de material
didtico, favorecendo o ensino de neuropatologia veterinria no LPV/UFSM ao mesmo
tempo em que apontou linhas de pesquisa para outros ps-graduandos do laboratrio
com interesse nessa rea.
Durante o exame de rotina do SNC de bovinos neste estudo foram observados,
anotados e ilustrados vrios artefatos, alteraes de pouco significado clnico e
alteraes postmortem que distraem o patologista das leses realmente importantes
durante o exame de rotina. Conclumos que a catalogao ilustrada desses achados
contribui para que se evitem essas distraes.
Em nosso meio, as enfermidades inflamatrias que produzem leses no encfalo
de bovinos com maior freqncia so raiva, meningoencefalite por herpesvrus bovino e
febre catarral maligna. As enfermidades degenerativas que produzem leses no encfalo
de bovinos com maior freqncia so encefalopatia heptica e intoxicao por Solanum
fastigiatum. Neoplasmas so alteraes de ocorrncia rara no SNC de bovinos.

227

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