1.

VOLTAMETRIA
A voltametria compreende um grupo de mtodos eletroanalticos nos quais a
informao sobre o analito obtida atravs de medidas de correntes em funo do potencial
aplicado e em condies que estimulam a polarizao de um eletrodo indicador ou de
trabalho. Geralmente, para aumentar a polarizao, os eletrodos de trabalho na voltametria so
microeletrodos com reas superficiais mximas de alguns poucos milmetros quadrados e, em
algumas aplicaes, de poucos micrometros quadrados ou menos.
A voltametria est baseada na medida de uma corrente que se desenvolve em uma
clula eletroqumica sob condies de polarizao completa por concentrao. Ao contrrio,
as medias potenciomtricas so feitas com correntes que se aproximam de zero e nas quais a
polarizao est ausente. Na voltametria ocorre o consumo mnimo do analito.

1.1 FUNDAMENTOS
Historicamente, o campo da voltametria se desenvolveu a partir da polarografia, que
um tipo particular de voltametria que foi descoberto pelo qumico Jaroslav Heyrovsky no
incio dos anos 1920. A polarografia que ainda um ramo muito importante da voltametria
difere de outros tipos de voltametria porque o microeletrodo tem a forma de um eletrodo
gotejante de mercrio(DME).
A voltametria largamente usada pelos qumicos inorgnicos, fsico-qumicos e
bioqumicos para finalidades no-analticas, incluindo estudos fundamentais de processos de
reduo e oxidao em vrios meios, processos de adsoro em superfcies, mecanismo de
transferncia de eltrons em superfcie de eletrodos quimicamente modificada.
O advento dos amplificadores operacionais de baixo custo permitiu o desenvolvimento
comercial de equipamentos relativamente baratos que incorporaram muitas dessas
modificaes e as disponibilizaram para os qumicos. O resultados foi o ressurgimento recente
do interesse em aplicaes de mtodos voltamtricos para a determinao de muitas espcies,
particularmente de interesse farmacolgico, ambiental e biolgico. Alm disso, a voltametria
acoplada a cromatografia lquida de alta eficincia tornou-se uma poderosa ferramenta para a
anlise de misturas complexas de diferentes tipos. A voltametria moderna tambm continua a
ser uma potente ferramenta usada por qumicos interessados no estudo de processos de
oxidao e reduo, assim como em processos de adsoro.

1.2 INSTRUMENTAO
A clula constituda de trs eletrodos imersos em uma soluo contendo o analito e
tambm um excesso de eletrlito no-reativo chamado eletrlito suporte. Um dos trs
eletrodos o microeletrodo ou eletrodo de trabalho, cujo potencial varia linearmente com o
tempo. Suas dimenses so mantidas pequenas para aumentar sua tendncia a tornar-se
polarizado. O segundo eletrodo um eletrodo de referencia cujo potencial permanece
constante durante o experimento. O terceiro eletrodo um contra-eletrodo, que geralmente
um fio enrolado de platina ou um poo de mercrio que simplesmente serve para conduzir
eletricidade da fonte de sinal atravs da soluo para o microeletrodo. A fonte de sinal um
gerador de voltagem de varredura linear similar ao circuito integrado.

Figura 1 Sistema para voltametria potenciosttica de varredura linear com trs eletrodos.
No incio, a voltametria era feita com um sistema de dois eletrodos e no com trs,
como mostra a Figura 1. Com um sistema de dois eletrodos, o segundo eletrodo deve ser ou
um eletrodo metlico grande, como u poo de mercrio, ou um eletrodo de referncia grande
o suficiente para impedir sua polarizao durante um experimento. Quase todos os trabalhos
de voltametria so feitos agora com o sistema de trs eletrodos.

1.3 MICROELETRODOS
Os microeletrodos empregados em voltametria tm vrios formatos e tamanhos. Com
freqncia, so discos pequenos de um condutor que prensado em um cilindro de material
inerte, como Teflon ou Kel-F que tenha embebido em si um fio para contato, como mostrado
na Figura 2. O condutor pode ser um metal inerte como platina ou ouro, grafite piroltico ou
carbono vtreo, um semicondutor como xido de estanho ou xido de ndio, ou ainda um
metal recoberto com um filme de mercrio.

Figura 2 Eletrodo em disco.

Os microeletrodos de mercrio tm sido amplamente empregados em voltametria por
vrias razes. Uma delas a faixa de potencial negativo relativamente ampla. Alm disso,
uma nova superfcie metlica formada rapidamente, simplesmente pela produo de uma
nova gota, e isso importante porque as correntes medidas em voltametria so bastante
sensveis limpeza e a ausncia de irregularidades. Uma vantagem adicional dos eletrodos de
mercrio que muitos ons metlicos so reduzidos reversivelmente a amlgamas na
superfcie de um eletrodo de mercrio, o que simplifica a qumica do processo.
Microeletrodos de mercrio podem ter vrias formas. O mais simples um filme de mercrio
formado pela eletrodeposio do metal sobre um eletrodo cilndrico, como mostrado na
Figura 2, ou tambm o eletrodo de gota pendente de mercrio, ilustrado na Figura 3.

Figura 3 Eletrodo gotejante de mercrio.

O eletrodo gotejante de mercrio(DME) - Figura 3 - tpico usado em primeiros
experimentos de polarografia, consiste em um tubo capilar fino(dimetro interno de
aproximadamente 0,05 mm) de uns 10 cm de comprimento, colocado na base de uma coluna
de mercrio de uns 50 cm de altura. O dimetro do capilar tal que uma nova gota se forma e
solta em intervalos de 2 a 6 segundos. O dimetro da gota varia de 0,5 a 1 mm e altamente
reprodutvel. Em algumas aplicaes, o tempo do gotejamento controlado por um martelo
mecnico que desaloja a gota a um determinado tempo aps o incio da sua formao.
O eletrodo que est disponvel comercialmente consiste de um tubo capilar muito fino
conectado a um reservatrio de mercrio, como ilustrado na Figura 4. O metal formado para
fora do capilar por um pisto controlado por uma rosca micromtrica. Esse micrmetro
permite a formao de gotas com reas que so reprodutveis em cinco por cento ou ainda
melhor.

Figura 4 Eletrodo de mercrio de gota pendente.

A Figura 5 mostra um eletrodo de mercrio disponvel comercialmente que pode ser
operado como eletrodo gotejante ou como eletrodo de gota pendente. O mercrio gotejante ou

como eletrodo de gota pendente. O mercrio est contido em um reservatrio de plstico de

25cm acima da extremidade do capilar. Uma mola de compresso fora o mbolo com a ponta
de poliuretano contra a cabea do capilar, impedindo assim o fluxo de mercrio. Esse mbolo
levantado por ativao do solenide por um sinal do sistema de controle. O capilar tem
dimetro muito maior do que capilares tpicos, por isso a formao da gota extremamente
rpida.

Figura 5 Eletrodo de mercrio de gota esttica.

1.4 VOLTAMETRIA HIDRODINMICA
A voltametria hidrodinmica realizada de vrios modos. Um mtodo envolve
agitao vigorosa da soluo em contato com um microeletrodo fixo. A agitao feita com
agitador magntico comum. Alternativamente, o microeletrodo sofre rotao com uma
velocidade alta e constante na soluo, propiciando a agitao como mostra a Figura 6a. Um
outro modo de realizar a voltametria hidrodinmica envolve fazer com que a soluo do
analito flua atravs de um tubo no qual esteja montado o microeletrodo (Figura 7). Essa
tcnica est sendo muito usada para a deteco de analitos oxidveis ou redutveis medida
que saem de uma coluna de cromatografia lquida.

Figura 6 (a) vista lateral de um eletrodo rotatrio na forma de disco, mostrando o padro de
fluxo da soluo. (b) Vista da base de um eletrodo com forma de disco. (c) Vista da base de
um eletrodo do tipo anel-disco.

Figura 7 Um sistema voltamtrico para deteco de espcies eletroativas medida que elas
saem de uma coluna.
1.4.1 Aplicaes de Voltametria Hidrodinmica
Atualmente, as aplicaes mais importantes de voltametria hidrodinmica incluem: (1)
deteco e determinao de espcies qumicas medida que elas saem de colunas
cromatogrficas ou de equipamentos para anlise por injeo em fluxo: (2) determinao
rotineira de oxignio e de certas espcies de interesse bioqumico, como glicose, lactose e
sacarose; (3) deteco do ponto final em titulaes coutomtricas e volumtricas; (4) estudos
fundamentais de processos eletroqumicos.

1.5 VOLTAMETRIA CCLICA

O principal uso de voltametria cclica como ferramenta para estudos fundamentais e
de diagnstico que fornecem informao qualitativa sobre processos eletroqumicos em vrias
condies.
A voltametria cclica, mesmo quando no usada em anlises quantitativas rotineiras,
tornou-se uma ferramenta importante para o estudo de mecanismos e velocidades de
processos de oxidao/reduo, particularmente em sistemas orgnicos e metalorgnicos. Esse
mtodo normalmente a primeira tcnica selecionada para a investigao de um sistema que
pode ser tratado eletroquimicamente. Freqentemente, os voltamogramas cclicos revelaro a
presena de intermedirios em reaes de oxidao/reduo(veja Figura 8). Geralmente usa-se
platina na construo de microeletrodos para essa tcnica.

Figura 8 Voltamograma cclico do inseticida parathion em tampo pH 5 de acetato de sdio

0,5 M, 50% em etanol. Eletrodo de mercrio de gota pendente. Velocidade de varredura:
200mV/s

1.6 POLAROGRAFIA
A polarografia foi o primeiro tipo de voltametria inventado e usado. Ela difere da
voltametria hidrodinmica em dois aspectos. Primeiro evita a conveco e segundo, um
eletrodo gotejante de mercrio, como o mostrado na Figura 6c, usado como eletrodo de
trabalho. Uma conseqncia da primeira diferena que as correntes limites polarogrficas
so controladas comente por difuso, em vez de difuso e conveco. Como a conveco est

ausente, as correntes limites polarogrficas so geralmente uma ou mais ordens de grandeza

menores dos que as correntes limites hidrodinmicas.
Inicialmente, os mtodos polarogrficos estavam baseados em medidas de corrente em
funo do potencial aplicado a um eletrodo gotejante de mercrio.
A corrente em uma clula contendo um eletrodo gotejante sofre flutuaes peridicas
correspondentes, em freqncia, velocidade de gotejamento.
Na maioria dos experimentos, esse eletrodo era preso ao terminal negativo de uma
fonte contnua e o potencial dessa fonte era aumentado linearmente at que a corrente
aumentasse exponencialmente em conseqncia da reduo do solvente ou do eletrlito
suporte.
A Figura 9 ilustra um aparelho de polarografia.

Figura 9 Aparelho de polarografia.

1.16.1 Aplicaes da Polarografia
A polarografia de varredura linear foi usada para a determinao quantitativa de uma
ampla variedade de espcies orgnicas e inorgnicas, inclusive molculas de interesse
bioqumico e biolgico. Atualmente, os mtodos de pulso suplantaram o mtodo clssico
quase completamente devido maior sensibilidade, convenincia e seletividade. Geralmente,
aplicaes quantitativas esto baseadas em curvas de calibrao nas quais as alturas dos
mximos so lanadas em grfico em funo da concentrao do analito. Em algumas
situaes, emprega-se o mtodo de adio de padro no lugar de curvas de calibrao. Em
ambos os casos, essencial que a composio dos padres seja o mais prxima possvel da
composio da amostra, com relao s concentraes de eletrlitos e pH. Quando isso
feito, podem ser atingidas precises e exatide3s relativas no intervalo de 1 a 3%.

1.16.1.1 Aplicaes Inorgnicas

O mtodo polarogrfico amplamente aplicvel na anlise de substncias inorgnicas.
A maioria dos ctions metlicos, por exemplo, reduzida no eletrodo gotejante. Mesmo os
metais alcalinos e alcalino terrosos sofrem reduo, desde que o eletrlito suporte no reaja
nos altos potenciais necessrios.
O mtodo polarogrfico tambm aplicvel n a anlise de nions inorgnicos, como
bromato, iodato, dicromato, vanadato, seleneto e nitrito. Em geral, os polarogramas para essas
substncias so afetados pelo pH da soluo porque o on hidrognio participa das suas
redues. Conseqentemente, o pH deve ser fixado por tampes eficazes para que os dados
sejam reprodutveis.
1.16.1.2 Anlise Polarogrfica Orgnica
Praticamente desde o seu incio, o mtodo polarogrfico tem sido usado para estudar e
determinar compostos orgnicos com muitas publicaes sendo dedicadas a este assunto.
Vrios grupos funcionais comuns so reduzidos no eletrodo gotejante, tornando possvel a
determinao de muitos compostos orgnicos. Entretanto, o nmero de grupos funcionais que
podem ser oxidados em um eletrodo gotejante de mercrio relativamente limitado porque
potenciais andicos maiores do que +0,4 V (vs. SCE) no podem ser empregados devido
oxidao do mercrio. Todavia, grupos funcionais orgnicos oxidveis podem ser estudados
voltametricamente em microeletrodos de platina, ouro ou carbono.

2. ELETROFORESE
A eletroforese um mtodo de separao baseado na diferena de velocidade de
migrao de espcies carregadas em uma soluo-tampo atravs da qual tenha sido aplicado
um campo eltrico de corrente contnua.
A eletroforese foi aplicada a vrios problemas de separao analticos difceis: nions e
ctions inorgnicos, aminocidos, catecolaminas, drogas, vitaminas, carboidratos, peptdeos,
protenas, cidos nuclicos, nucleotdeos, polinucleotdeos e numerosas outras espcies.

2.1 FUNDAMENTOS
Uma caracterstica particular da eletroforese a sua habilidade nica de separar
macromolculas carregadas de interesse da indstria biotecnolgica e de pesquisas em
biologia e bioqumica. Por muitos anos, a eletroforese a sua habilidade nica de separar
macromolculas carregadas de interesse da indstria biotecnolgica e de pesquisas em
biologia e bioqumica. Por muitos anos, a eletroforese foi um poderoso mtodo de separao
de protenas (enzimas, hormnios, anticorpos) e de cidos nuclicos (DNA, RNA) para a qual
oferecia resoluo sem igual. Por exemplo, para seqenciar DNA, necessrio distinguir
entre polinucleotdeos de cadeia longa com massa molecular variando de 200 a 500 e
diferindo entre si por apenas um nucleotdeo. Apenas a eletroforese tem poder de resoluo
suficiente para lidar com este problema.
2.1.1 Tipos de Eletroforese
As separaes por eletroforese so feitas atualmente em dois formatos bastante
diferentes: um chamado eletroforese em placa e a outra eletroforese capilar. O primeiro
um mtodo clssico que foi usado por muitos anos para separar espcies complexas, de alta
massa molecular e de interesse bioqumico e biolgico. As separaes em placa so feitas
sobre uma fina camada plana ou placa de gel poroso semi-slido que contm uma soluotampo aquosa nos seus poros. Essa placa geralmente tem dimenses de uns poucos
centmetros de lado, como uma placa para cromatografia de camada delgada, e capaz de
separar vrias amostras simultaneamente. As amostras so introduzidas como manchas ou
faixas sobre a placa e um potencial de corrente contnua aplicado atravs da placa por um
certo tempo.
A eletroforese em placa , atualmente, a ferramenta de separao mais usada por
bilogos e bioqumicos. Monografias, livros-texto e revistas sobre cincias da vida
usualmente contm centenas de fotografias de placas de eletroforese. A eletroforese capilar,
que uma verso instrumental da eletroforese, foi desenvolvida e usada apenas a partir dos
anos 1980 e tornou-se um importante mtodo de separao usado por qumicos e profissionais
de cincias da vida. Em muitos casos, este novo mtodo parece ser um substituto satisfatrio
da eletroforese em placa, com algumas vantagens importantes que sero descritas a seguir.

2.2 ELETROFORESE CAPILAR

Mesmo sendo to til quanto a eletroforese convencional em placa tem sido e continua a
ser, este tipo de separao por eletroforese tipicamente lenta, trabalhosa, difcil de ser
automatizada e no produz informao quantitativa muito precisa. Durante meados e final dos
anos 1980, houve um crescimento explosivo da pesquisa e da aplicao de eletroforese feita
em tubos capilares e tambm do aparecimento de numerosos equipamentos comerciais. A
eletroforese capilar (em ingls, CE capillary electrophoresis) faz separaes com alta
resoluo e alta velocidade, em volumes de amostra excepcionalmente pequenos (0,1 a 10nL,
ao contrrio da eletroforese em placa que requer amostras na faixa de L). Adicionalmente, na
sada do capilar, as espcies separadas so eluidas, de modo que detectores, como os de
HPLC, podem ser usados, em vez da pouco eficiente tcnica de manchas da eletroforese em
placa.
2.2.1 Instrumentao para Eletroforese Capilar
Como mostrado na Figura 10, a instrumentao para eletroforese capilar simples. Um
capilar de slica fundida preenchido com soluo-tampo, tipicamente com 10 a 100 m de
dimetro interno e 40 a 100 cm de comprimento, estende-se entre dois reservatrios de
soluo-tampo que tambm contm dois eletrodos de platina. A introduo da amostra feita
em uma extremidade e a deteco na outra. A polaridade da alta tenso pode ser como est
indicada ou invertida para permitir a separao de nions.

Figura 10 Esquema de um sistema para eletroforese capilar por zona.

Embora a instrumentao seja conceitualmente simples, h grandes dificuldades
experimentais na introduo da amostra e na deteco, devido aos volumes muito pequenos
envolvidos. Uma vez que o volume de um capilar normal da ordem de 4 a 5L, os volumes
de injeo e deteco devem ser da ordem de alguns nanolitros ou menor.

2.3 APLICAES DE ELETROFORESE CAPILAR

Separaes por eletroforese capilar so feitas de vrias formas chamadas modos. Devese salientar que esses modos foram empregados primeiramente em eletroforese em placa e,
depois, adaptados para separaes por eletroforese capilar. Estes modos incluem eletroforese
capilar por zona (CZE), eletroforese capilar em gel (CGE), focalizao isoeltrica capilar
(CIEF) e isotacoforese capilar (CITP). As sees que se seguem ilustram aplicaes tpicas
de cada uma dessas tcnicas.
2.3.1 Eletroforese Capilar por Zona (CZE)
Na eletroforese capilar por zona, a composio do tampo constante na regio da
separao. O potencial aplicado faz com que os diferentes componentes inicos da mistrua
migrem de acordo com a sua prpria mobilidade e se separem emm zonas que podem ser
completamente resolvidas ou apresentar superposio parcial.
2.3.1.1 Separao de ons Pequenos
Na maioria das separaes de ons pequenos por eletroforese, verificou-se que, para
diminuir o tempo, o melhor deslocar os ons do analito na mesma direo, do fluxo
eletroosmtico. Assim, em separaes de ctions, as paredes do capilar no so tratadas e o
fluxo eletroosmtico e o movimento dos ctions vo em direo ao ctodo. Em separao de
nions, por outro lado, o fluxo eletroosmtico usualmente invertido, tratando-se as paredes
do capilar com um sal de alquilamnio, como brometo de cetil-trimetilamnio. Os ons de
amnio positivamente carregados ligam-se superfcie carregada negativamente da slica e,
por sua vez, criam uma dupla camada de soluo carregada negativamente, que atrada para
o nodo, revertendo assim o fluxo eletroosmtico.
Vrias razes importantes para a adoo de mtodos de eletroforese foram identificadas:
baixo custo dos equipamentos, menores tamanhos de amostras, velocidade muito maior e
melhor resoluo.
Os tamanhos de amostras para eletroforese esto no intervalo de nanolitros enquanto
que amostras de microlitros ou maiores usualmente so necessrias em outros tipos de anlise
de ons pequenos. Assim, os mtodos de eletroforese so mais sensveis que os outros
mtodos baseados em massa (mas comumente no-baseados em concentrao).

A Figura 11 ilustra a rapidez e a resoluo insuperveis das separaes por eletroforese

para nions pequenos. Neste caso, 30 nions foram separados em exatos 3 minutos.
Tipicamente, uma separao por troca inica de apenas trs ou quatro nions seria feita neste
mesmo breve tempo. A Figura 30-11 ainda ilustra a velocidade na qual as separaes podem
ser feitas. Neste caso, 19 ctions foram separados em menos de dois minutos.

Figura 11 Eletrograma mostrando a separao de 30 nions. Dimetro interno do capilar:

50micrmetros(slica fundida). Deteco: UV indireta, 254 nm.
2.3.1.2 Separao de Espcies Moleculares
Muitos herbicidas, pesticidas e frmacos sintticos pequenos que so inicos ou cujos
derivados podem ser inicos, podem ser separados e analisados por CZE. Protenas,
aminocidos e carboidratos so separados em tempos mnimos por CZE. No caso de
carboidratos neutros, as separaes so precedidas pela formao de complexos de borato
carregados negativamente. Esses complexos so formados se um tampo de borato for usado
como meio de separao.
2.3.2 Eletroforese Capilar em Gel (CGE)
A eletroforese capilar em gel comumente realizada em uma matriz polimrica porosa
de gel, cujos poros contm uma mistura tamponada na qual a separao feita. Nos primeiros
estudos de eletroforese em placa(veja Figura 12), a finalidade primria do meio polimrico
era reduzir a disperso do analito por conveco e difuso e propiciar um meio que pudesse
ser usado convenientemente para deteco e varredura.

Figura 12 Aparelho de eletroforese capilar em gel(CGE).

Verificou-se depois que esse tipo de meio gera uma ao de peneira molecular que
retarda a migrao das espcies em diferentes graus, dependendo do tamanho do poro do
polmero e do tamanho dos ons do analito. Esse tipo de ao de peneira particularmente til
na separao de macromolculas, como protenas, fragmentos de DNA e oligonucleotdeos
que tm substancialmente a mesma carga, mas diferem no tamanho. Atualmente, a maioria
das separaes por eletroforese em macroescala feita em placa de gel. Algumas separaes
por eletroforese capilar de espcies que diferem em tamanho tambm so feitas em gis
contidos em tubos capilares.
O tipo mais comum de gel usado em eletroforese um polmetro de poliacrilamida
formado pela polimerizao de acrilamida (CH 2CHCONH2) na presena de um agente
de cruzamento. O tamanho de poro do polmetro depende da relao entre o monmero e o
agente de cruzamento (agente de ligaes cruzadas). Quanto maior a quantidade de agente de
cruzamento, menor o tamanho do poro. Outros gis usados so: agarose, um polissacardeo
extrado de uma alga marinha, metilcelulose e polietileno-glicol.
2.3.3 Isotacoforese Capilar (CITP)
Em isotacoforese capilar, todas as bandas de analito migram na mesma velocidade. Da
o nome isso para igual e taco para velocidade. Em uma aplicao particular, tanto ctions
como nions podem ser separados, mas no ambos ao mesmo tempo. Em uma separao, a
amostra injetada entre duas solues-tampo: a primeira contendo ons de maior mobilidade
do que qualquer dos ons presentes no analito e a final com ons de mobilidade mais baixa do
que a dos ons da amostra. Por exemplo, na separao de nions os ons cloreto que se movem
muito rapidamente devem estar contidos na primeira soluo-tampo e os ons heptanoato que

se movem lentamente devem estar no tampo final. Para uma separao de nions, a primeira
soluo de eletrlito est conectada ao nodo e a outra, final, ao ctodo.
Quando o potencial aplicado em uma separao isotacofortica, os ons do analito
migram como em eletroforese por zona, cada on com sua velocidade nica, dada pelo
produto eE.
2.3.4 Focalizao Isoeltrica Capilar (CIEF)
A focalizao isoeltrica capilar usada para separar espcies anfiprticas, como
aminocidos e protenas, que contm um grupo carboxlico fraco e um grupo amina que
uma base fraca.
2.3.4.1 Propriedades de Compostos Anfiprticos
Um composto anfiprtico uma espcie que, em soluo, capaz de doar e receber
prtons.

2.4 ELETROCROMATOGRAFIA CAPILAR (CEC)

A eletrocromatografia capilar (em ingls, CEC capillary electrochromatography)
um hbrido da eletroforese capilar com HPLC e oferece algumas das melhores caractersticas
de cada uma das duas tcnicas.
A eletrocromatografia capilar (CEC) parece oferecer vrias vantagens sobre as tcnicas
que a originaram. Primeiro, assim como a HPLC, pode ser aplicada na separao de espcies
no-carregadas. Segundo, como a eletroforese capilar, permite separaes altamente eficientes
de microvolumes de soluo de amostra sem a necessidade de sistema de bombeamento a alta
presso. Na eletrocromatografia, uma fase mvel transportada atravs de uma fase
estacionria pelo bombeamento eletrosmtico do fluxo em vez de bombeamento mecnico,
simplificando de modo significativo o sistema.
2.4.1 Eletrocromatografia em Coluna Empacotada

A eletrocromatografia baseada em colunas empacotadas a menos amadurecida entre as

vrias tcnicas de eletrosseparao. Neste mtodo, um solvente polar dirigido pelo fluxo
eletrosmtico atravs de um capilar empacotado com uma fase estacionria do tipo HPLC em
fase reversa. As separaes dependem da distribuio das espcies do analito entre a fase
mvel e a fase estacionria lquida mantida no empacotamento.

3. LIMITE DE DETECO
A definio qualitativa mais aceita de limite de deteco da concentrao ou da
massa mnima de analito que pode ser detectada em um nvel conhecido confivel. Este limite
depende da razo entre a magnitude do sinal do analtico e o tamanho das flutuaes
estatsticas no sinal do branco. Insto , a menos que o sinal analtico seja maior do que branco
por um fator mltiplo de k da variao no branco devido aos erros aleatrios, impossvel
detectar o sinal analtico com certeza. Ento, assim que o limite de deteco for atingido, o
sinal do branco e de seu desvio-padro. O sinal analtico mnimo distinguvel ento tomado
como a soma do sinal mdio do branco mais um mltiplo de k do desvio-padro do branco.

4. CALIBRAO DE MTODOS INSTRUMENTAIS

Com duas excees, todos os mtodos analticos requerem calibrao, um processo
que relaciona o sinal analtico medido com a concentrao do analito. Os trs tipos mais
comuns de calibrao incluem a preparao e o uso de uma curva de calibrao, o mtodo de
adio de padro e o mtodo todo de padro interno.
4.1 Curvas de Calibrao
Para o uso da tcnica de curva de calibrao, vrios padres que contm concentraes
do analito conhecidas exatamente so introduzidas no instrumento, e a resposta instrumental
registrada. Normalmente, essa resposta corrigida para o valor obtido com o branco no
instrumento. Idealmente, o branco contm todos os componentes da amostra original exceto o
analito. Os dados resultantes so ento colocados em um grfico com a resposta do
instrumento corrigida versus concentrao do analito, como mostra a Figura 13.

Figura 13 Grfico de calibrao linear para mtodo de adio de padro. A concentrao da

soluo desconhecida pode ser calculada a partir da inclinao m e o intercepto b.
Na Figura 13, mostrada uma curva de calibrao tpica. Grficos, tais como este, que
so lineares em um intervalo de concentrao significativo(a faixa dinmica) geralmente so
obtidos e almejados porque esto menos sujeitos a erros do que curvas no-lineares.
Entretanto, de modo no raro so observados grficos no-lineares que requerem um grande
nmero de dados de calibrao para estabelecer grande nmero de dados de calibrao para
estabelecer exatamente a relao entre a resposta do instrumento e a concentrao.
Usualmente, a equao ajustada curva de calibrao pela tcnica de mnimos quadrados de
forma que as concentraes da amostra possam ser calculadas diretamente.
O sucesso do mtodo da curva de calibrao muito dependente da exatido com que
so conhecidas as concentraes dos padres e quo prxima a matriz dos padres est da
matriz das amostras a serem analisadas. Infelizmente, estabelecer esta similaridade de matriz
entre amostras complexas e padres geralmente difcil ou impossvel de ser feita, e os
efeitos da matriz levam a erros de interferncia. Para minimizar os efeitos da matriz,
normalmente necessrio separar analito do interference antes de obter a resposta medida do
instrumento.

4.2 Mtodos de adio de Padro

Os mtodos de adio de padro so particularmente teis na anlise de amostrar
complexas, nas quais a probabilidade de efeitos de matriz alta. Um mtodo de adio de
padres pode ser implementado de diversas formas. Uma das mais comuns envolve a adio
de um ou mais incrementos de uma soluo-padro a alquota da amostra de mesmo volume.
Esse processo freqentemente denominado de spiking. Deve ser observado que, quando a
quantidade de amostra limitada, as adies podem ser feitas por sucessivas introdues de
incrementos do padro a um nico volume medido da amostra. As medidas so realizadas
com a amostra original e depois com a amostra mais o padro, aps cada adio. Na maioria
das verses do mtodo de adio de padro, a matriz da amostra permanece quase inalterada
aps cada adio, a nica diferena a concentrao do analito ou, em casos que envolvem a
adio de um excesso de um reagente analtico, a concentrao do reagente. Todos os outros
constituintes da mistura reacional deveriam ser idnticos porque os padres preparados em
alquotas da amostra.
4.3 Mtodo de Padro Interno
Um padro interno uma substancia que adicionada em quantidade constante a todas
as amostras, aos brancos e os padres de calibrao em uma anlise. Alternativamente, pode
ser um componente principal das amostras e padres que est presente em uma quantidade
suficientemente grande de modo geral que sua concentrao pode ser considerada constante
para todos os casos. A calibrao envolve, ento colocar em m grfico a razo entre o sinal do
analito e o sinal do padro interno em funo da concentrao do analito para obter as
concentraes de analito a partir da curva de calibrao.
Uma grande dificuldade da aplicao do mtodo do padro interno a de encontrar
uma substancia adequada para servir como padro interno e introduzir essa substancia tanto
na amostra como nos padres de modo reprodutvel. O padro do analito em vrios aspectos,
mas suficientemente diferente para ser facilmente distinguvel pelo instrumento. O padro
interno deve estar ausente da matriz da amostra de forma que a nica fonte de padro seja a
quantidade adicionada. Por exemplo, o ltio um bom interno para a determinao de sdio
ou potssio em soro sanguneo porque o comportamento qumico do ltio similar a ambos os
analitos, mas no ocorre naturalmente no sangue.

Como exemplo, o mtodo do padro interno freqentemente usado na determinao

de traos de elementos em metais por espectroscopia de emisso. Assim, em determinaes de
partes por milho de antimnio e estanho em chumbo para ser usado por fabricantes de
baterias, a intensidade relativa de uma linha forte de cada um dos componentes minoritrios
pode ser comparada cm a intensidade de uma linha fraca para o chumbo.
Para que tal procedimento seja bem-sucedido, muito tempo e esforo so necessrios
na preparao de um conjunto de amostras de chumbo puro que contenham concentraes de
antimnio e estanho exatamente conhecidas.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
SKOOG, D.A. et. al. Princpios de anlise instrumental. 5 ed. Porto Alegre: Bookman,
2002. p. 27-31, p. 567-595, p. 687-702.

UNIVERSIDADE PARANAENSE UNIPAR

RECONHECIDA PELA PORTARIA MEC N 1580, DE 09/11/93 DOU 10/11/93.
MANTENEDORA ASSOCIAO PARANAENSE DE ENSINO E CULTURA APEC

Introduo, Fundamentao e
Aplicao de Mtodos Analticos:
1. Voltametria;
2. Eletroforese;
3. Conceitos de Limites de Deteco; e
4. Calibrao de Mtodos Instrumentais.

Curso: Qumica 4 Ano.

Disciplina: Anlise Instrumental.
Acadmicas: Jos Luiz Banhara Jnior
Regiane da Silva Gomes
Alaine de Moura Lino

RA: 33875.
RA: 33890.
RA: 34229.

Professor: Jos Gaspar Ferrarezi.

NOVEMBRO - 2007