Aula 1

BIOLOGIA
Botnica - Prticas
2012/2013
Departamento de Biologia Vegetal
Francisco Carrapio e Isabel Caador
http://azolla.fc.ul.pt/aulas/BiologiaBotanica.html

Biologia (Botnica) Prticas

Ano lectivo 2012/13

Normas de segurana no laboratrio

O laboratrio um local de trabalho a que est associado a manipulao de
equipamentos cientficos e produtos qumicos que, se indevidamente manipulados,
podem conter riscos para a sade e mesmo em casos extremos pr em causa a
prpria vida.
Usar sempre bata. Esta deve ser de algodo, evitando o uso de fibras sintticas.
Prender os cabelos com um elstico quando estes so compridos.
Usar calado adequado. Evitar o uso de calado aberto que exponha o p.
No beber ou comer no seu interior, incluindo mascar pastilhas elsticas.

Usar material de vidro que no esteja danificado para evitar cortes ou ferimentos.
Manter limpa a sua rea de trabalho e separar o lixo produzido, utilizando os
recipientes existentes para o efeito.
Lavar as mos antes e depois de utilizar os reagentes e ou em experincias a
efectuar.
No abandonar o local de trabalho sem deixar tudo devidamente arrumado, no
esquecendo de desligar os equipamentos que foram utilizados.
Saber onde est o equipamento de primeiros socorros.
Em caso de acidente, procurar ajuda rapidamente junto do professor.

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Microscpio ptico

Ano lectivo 2012/13

cutcula

http://microscopy.fsu.edu/primer/museum/hooke.html

1665

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Ano lectivo 2012/13

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Parte Mecnica

Ano lectivo 2012/13

P ou base
Brao
Tubo ou canho
Platina ou porta objectos
Revlver ou porta-objectivas
Parafuso macromtrico
Parafuso micromtrico

Fonte Luminosa

Sistema de Iluminao

Condensador

Parte ptica
Sistema de Ampliao

Objectivas
Oculares

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Ano lectivo 2012/13

Ampliao obtida pelos microscpios pticos e electrnicos. Os microscpios pticos incluem contraste
de fase e fluorescncia. O ME inclui a transmisso (TEM) e varrimento (SEM)

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Ano lectivo 2012/13

Adaptado de Figueiredo, A.C. et al., 1996

Quadro comparativo da microscopia ptica e electrnica

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Ano lectivo 2012/13

Abertura numrica da objectiva e limite de resoluo

Abertura numrica da objectiva

NA= n(sin )

Frmula de Abbe
Limite de resoluo

=0,6/n(sin )

n= ndice de refraco do meio entre a lente frontal da objectiva e a lamela

Ar= 1,00; leo de imerso= 1,51
= metade da abertura angular, ie, semi-ngulo com vrtice no cone formado pelos raios que,
saindo da preparao, atingem a lente frontal da objectiva
= comprimento de onda

O limite de resoluo definido como sendo a distncia mnima existente entre

dois pontos de modo a ser ainda possvel distingui-los como entidades separadas.
Depende do comprimento de onda da luz utilizada e da abertura numrica, e dado
pela frmula de Abbe.

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Microscopia de contraste de fase

Microscopia de contraste de
Interferncia (DIC) ou Nomarski

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Ano lectivo 2011/12

Microscopia de fluorescncia

Principle of Fluorescence
1. Energy is absorbed by the atom which
becomes excited.
2. The electron jumps to a higher energy level.
3. Soon, the electron drops back to the ground
state, emitting a photon (or a packet of light) the atom is fluorescing.

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Ano lectivo 2012/13

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Micrografias ou fotografias de microscopia electrnica

Chlamydomonas alga verde (Phylum Chlorophyta)

Observada em MO e TEM

Estruturas duma folha de angiosprmica observadas

em TEM e SEM

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Unidades de medida utilizadas em microscopia

Unidade

Smbolo

Factor de
converso

milmetro

mm

1 mm = 1000 m
ou 0,001 m

micrmetro

1 m = 1000 nm

nanmetro

nm

1 nm = 10

ngstrm

1 = 0,1 nm
ou 10-10 m

Como saber o valor final da ampliao da imagem do objecto em estudo?

Ampliao final = ampliao da ocular x ampliao da objectiva

exemplo: 10 x 40 = 400x

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Preparaes microscpicas temporrias e definitivas

Preparao definitiva- preparao efectuada mediante um processo em que o

material submetido a um tratamento (fixao, desidratao , incluso, microtomia)
que o torna no altervel.
Preparao temporria- preparao efectuada na altura e que se destina a uma
observao rpida, aps o que, o material se altera.
(Sevinate-Pinto, I. & Antunes, T., 2005)

Uma preparao microscpica constituda por:

Objecto ou material biolgico.

Lmina de vidro, onde colocado o material a
observar.
Lamela, igualmente de vidro, mas muito mais fina
que a lmina e que se coloca sobre o material a
observar.
Meio de montagem, lquido que pode ser incolor
ou no e que colocado entre a lmina e a
lamela e que embebe o material a observar. Um
exemplo de meio de montagem a gua ou a
soluo de Ringer.

lamela

lmina

material biolgico
no meio de montagem

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Ano lectivo 2012/13

Cuidados a ter na utilizao do microscpio ptico

1. Comear a focagem sempre com a objectiva de menor ampliao.
2. Manter o microscpio numa posio confortvel para que o utilizador possa
observar, e simultneamente desenhar, o objecto que est a observar.
3. Aps a utilizao da objectiva de imerso, limpar convenientemente a lente
frontal da objectiva.

4. No caso de se tratar duma preparao temporria, retir-la do microscpio e

separar a lamela da lmina, colocando-as nos recipientes de lavagem.
5. Quando der por terminada a sua observao deixar no enfiamento do tubo a
objectiva de menor ampliao. Desligar a fonte luminosa e tapar o microscpio.
Tcnica para efectuar uma preparao temporria
1. Colocar sobre uma lmina de vidro uma gota de gua (meio de montagem).
2. Fazer uma seco tranversal de um caule ou destacar uma epiderme do
material que lhe for fornecido e colocar esse material sobre a gota de gua.
3. Com cuidado, para no se formarem bolhas de ar, colocar a lamela e observar
ao microscpio. As impresses digitais, quer na lmina quer na lamela, devem
ser evitadas.
(Adaptado de Sevinate-Pinto, I. & Antunes, T., 2005)

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Ano lectivo 2012/13

Como proceder para focar com a objectiva de imerso

Colocar a preparao na platina do microscpio
e ligar a fonte luminosa.
Colocar no alinhamento do tubo a objectiva de
menor ampliao.
Obter uma imagem ntida rodando o parafuso
macromtrico.
Ajustar com o parafuso micromtrico.
Rodar as objectivas at da ampliao de 40x
e focar.
Rodar a objectiva de 40x e colocar o revlver
na posio intermdia entre a objectiva de 40x e
100x
Colocar uma gota de leo de imerso sobre a
preparao (lamela).
Rodar a objectiva de 100x de maneira que a
lente frontal fique em contacto com o leo de
imerso. Ajustar a focagem apenas com o
parafuso micromtrico.

Efeito do leo de imerso na transmisso da luz para

a lente frontal da objectiva (a). Com o ar entre o
espcime e a lente frontal da objectiva alguma luz
refractada transmitida para a objectiva, mas a
maior parte perde-se. (b) Com o leo de imerso, a
maior parte da luz refractada captada pela lente
frontal da objectiva devido ao alto indce de
refraco do leo de imerso que de 1,51, idntico
ao do vidro. O indce de refraco do ar de 1,0.
(Adaptado de Sevinate-Pinto, I. & Antunes, T., 2005)

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Ano lectivo 2012/13

Observao de clulas da epiderme interna da escama do bolbo de Allium cepa,

utilizando como meio de montagem o vermelho neutro