Pesquisa

Glicerol de biodiesel

Estratgias biotecnolgicas para o aproveitamento do glicerol gerado da produo de biodiesel

Ilustraes cedidas pelos autores

Juan Daniel Rivaldi*

Engenheiro Qumico, Mestre em
Biotecnologia Industrial
Escola de Engenharia de Lorena
(EEL), Universidade de So
Paulo(USP)
*Autor para correspondncia:
danielrivaldi@gmail.com
Boutros Fouad Sarrouh
Licenciado em Qumica;
Mestre em Anlise de Processos na
Indstria Qumica;
Doutor em Biotecnologia
Industrial
Escola de Engenharia de Lorena
(EEL), Universidade de So Paulo
(USP)
Rodolfo Fiorilo
Engenheiro Qumico
Gerente Industrial DAFFER
Qumica Ltda.
Silvio Silvrio da Silva
Engenheiro de Alimentos;
Mestre em Cincia e Tecnologia de
Alimentos;
Doutor em Tecnologia
Bioqumico- Farmacutico
Escola de Engenharia de Lorena
(EEL), Universidade de So Paulo
(USP)
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RESUMO

INTRODUO

A intensiva busca por fontes alternativas de energia e processos sustentveis visando a reduo
da poluio ambiental e o aquecimento global
do planeta tem estimulado o mercado mundial
de combustveis limpos. Os biocombustveis,
como o biodiesel, representam uma alternativa
renovvel e ambientalmente segura aos combustveis fsseis. Sua produo encontra-se em
crescimento acelerado, e como conseqncia,
a quantidade de subprodutos gerados de sua
produo, principalmente o glicerol bruto. Com
o objetivo reduzir os futuros problemas ambientais por acumulao de glicerol e tornar a
produo de biodiesel mais rentvel, a implementao de estratgias biotecnolgicas que utilizam o glicerol como nica fonte de carbono
para obteno de produtos de maior valor agregado, vem sendo estudado como uma promissora alternativa e soluo. Este trabalho descreve estudos bem documentados sobre o mecanismo metablico de glicerol por microrganismos e pertinentes com a proposta de utilizao do glicerol em processos microbianos. Da
mesma forma so apresentadas novas estratgias que podem ser exploradas visando o aproveitamento deste material e sua bioconverso
em bioprodutos de alto valor agregado.

A utilizao de fontes alternativas de energia

umas das grandes prioridades atuais, que
vem contribuir significativamente para contornar os graves problemas ocasionados pelo
desenvolvimento tecnolgico. A preocupao
atual pela reduo da poluio e a crise energtica tm estimulado o mercado mundial de
biocombustveis. A economia global mantmse em crescimento e a demanda por energia
limpa e recursos renovveis encontra-se em
contnuo aumento (BILGEN et al., 2006).
Neste sentido, a busca intensiva por combustveis alternativos ao petrleo, como o biodiesel, apresenta grande importncia principalmente para os pases emergentes, uma vez
que sua produo auxilia conservao do
meio ambiente, mediante a reduo dos gases responsveis pelo aquecimento global, e
contribui para o desenvolvimento social mediante a gerao de empregos (OLIVEIRA et
al., 2006). No Brasil, a produo e comercializao de biodiesel possui importantes vantagens devido grande disponibilidade de
matria-prima para sua produo e ao crescimento contnuo da indstria de leos vegetais e etanol (OLIVEIRA et al. 2006, OISTI,
2006).
A produo de biodiesel est significativamente
acelerada, uma vez que o governo brasileiro
estabeleceu a obrigatoriedade da adio de
biodiesel ao combustvel de petrleo mediante a lei 11097/2005. No ano 2013, a quantidade de biodiesel a ser adicionado dever
alcanar 5 % do volume total de diesel utilizado (ANP, 2007). O glicerol o principal
subproduto gerado na produo de biodiesel, sendo que aproximadamente 10 % do
volume total de biodiesel produzido correspondem a glicerol (DASARI et al., 2005). Estima-se que com o incremento do volume de
biodiesel, o glicerol co-produzido aumentar
de 83 para 330 milhes L/ano at o ano 2010
(MME, 2007). Com o intuito de evitar futuros
problemas derivados da acumulao de glicerol e para tornar a produo de biodiesel
mais competitiva, torna-se necessrio a busca
de alternativas para o uso do glicerol bruto
gerado nesta produo. Este subproduto, na
forma pura, possui inmeras aplicaes industriais (aditivos para a indstria de alimentos,
qumica e farmacutica). O glicerol obtido resultante da transesterificao de triglicerdios
com lcool apresenta impurezas como gua,
sais, steres, lcool e leo residual, que lhe
conferem um baixo custo (OOI et al.,2004).
A rentabilidade de vrios processos qumicos

Palavras-chave: glicerol, fermentao,

bioproduto.
Biotechnological strategies for glycerol
utilization derived from biodiesel production
ABSTRACT
The claim for reducing environment pollution
stimulates the world market of clean fuels. Biofuels as biodiesel, represents a renewable and
environmentally safety alternative to fossil fuel.
Nonetheless, its production is increasing considerably, and as a consequence, the amount of
raw glycerol (byproduct) generated is growing
exponentially. With the aim to reduce environment problems due to accumulation of glycerol, biotechnological strategies for its bioconversion in value-added products are being implementing. This work presents detailed arguments on the metabolic mechanisms of glycerol assimilation by microorganisms, as well as,
a description of the most recent biotechnological processes applied to obtain bioproducts from
glycerol.
Keywords: glycerol; fermentation; bioproduct.

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 37

depende em parte, da venda dos subprodutos, permitindo a reduo dos custos de

produo e conseqentemente, do preo
final do produto. Dessa forma, existe um
grande interesse na purificao do glicerol
ou no seu reaproveitamento direto, sem
tratamento, o que proporcionar viabilizao do processo de produo de biodiesel, permitindo que este se torne competitivo no crescente mercado de biocombustveis. Os processos para sua purificao
incluem filtrao, destilao a vcuo, descolorao e troca de ons para a remoo
principalmente de K+ e Na+ utilizados como
catalisadores (YONG et al. 2001). No entanto, os tratamentos de purificao so de
custo excessivamente elevados para pequenos e mdios produtores nacionais de biodiesel. Devido a este fato, uma maior quantidade de efluentes contendo glicerol poder ser descartada no meio ambiente sem
nenhum tratamento, aumentando conseqentemente os problemas e riscos ambientais.
A converso microbiana de glicerol por processos biotecnolgicos em produtos de
maior valor agregado como biomassa e biomolculas, uma alternativa relevante para
a maior valorizao da produo de biodiesel (ITO et al., 2005). Neste sentido, a
biotecnologia moderna, com todo seu avano trar grandes contribuies e permitir
a obteno de biomolculas e produtos com
importantes propriedades.
NATUREZA E CARACTERSTICAS
DO GLICEROL
Glicerol o nome comum do composto
orgnico 1,2,3-propanotriol, descoberto por
Carl W. Scheele em 1779 durante a separao de uma mistura aquecida de PbO preparada com leo de oliva. Os seus sinnimos so glicerina, trihidroxipropano, glicil
lcool, gliceril e 1,2,3-trihidroxipropano.
Na natureza, o glicerol existe em vegetais
(soja, mamona, babau, girassol, palma, algodo, coco, dend, pinho manso) e animais em formas combinadas de glicerina
com cidos graxos. O glicerol tambm
um composto considerado fundamental dentro do sistema metablico de microrganismos; onde atua como precursor de numerosos compostos; e como regulador de vrios mecanismos bioqumicos intracelulares
(LAGES, SILVA-GRAA, LUCAS, 1999).
Em microrganismos eucariticos, o glicerol
constitui o principal composto formado para
regular as variaes de atividade de gua
em ambientes altamente osmoflicos
(WANG et al., 2001).
Em humanos, o glicerol participa na termo-regulao do corpo, resistncia a altas
temperaturas, na resistncia dos msculos
em atividades fsicas e na resposta neural
da variao da glicemia (YANG et al., 1999).
O glicerol na sua forma pura apresenta-se
como um lquido viscoso, incolor, inodoro
e higroscpico, com sabor doce, solvel
em gua e lcool, insolvel em ter e em
clorofrmio.
Devido s suas caractersticas fsicas e qu-

micas e ao fato de ser incuo, o glicerol

puro apresenta diferentes aplicaes na indstria de cosmticos, farmacutica, detergentes, na fabricao de resinas e aditivos
e na indstria de alimentos. Apesar de o
glicerol apresentar estas aplicaes na forma pura, poucos estudos esto sendo direcionados para a utilizao de glicerol bruto
na forma direta.
OBTENO E TRATAMENTO
DO GLICEROL BRUTO
Subproduto natural do processamento de
leos e gorduras, o glicerol pode ser obtido mediante reao de saponificao de cidos graxos (leos, azeites ou sebo) com
hidrxido de sdio ou hidrxido de potssio, como co-produto da fabricao de biodiesel e em menor proporo, mediante
sntese microbiana. A produo sinttica de
glicerina a partir de cloreto de alil via epicloridrina encontra-se em declnio devido
ao excesso no mercado de glicerol do processo de biodiesel. Dentro deste contexto,
o glicerol constitui o maior subproduto gerado no processo de produo do biodiesel
via esterificao de cidos graxos vegetais
ou gordura animal com lcool (metanol ou
etanol) para produzir steres e glicerol na
presena de catalisador (KOH ou NaOH)
(DIECKELMANN e HEINZ, 1988)
A equao global de transesterificao
apresentada na Figura 1a, onde so necessrios trs moles de lcool por cada mol de
triglicerdeo utilizado. Esta reao global
conseqncia de um nmero de reaes
reversveis e consecutivas mostradas na Figura 1b. A primeira consiste na converso
de triglicerdeos em diglicerdeos, seguida
da converso destes diglicerdeos em monoglicerdeos, e finalmente de glicerdeos
a glicerol, rendendo uma molcula de s-

ter de lcool por cada glicerdeo em cada

etapa da reao.
No final da etapa de transesterificao, o
glicerol e steres formam uma massa lquida de duas fases, que so facilmente separveis por decantao ou centrifugao. A
fase superior, a mais leve ou menos densa,
contm os steres metlicos ou etlicos constituintes do biodiesel. A fase inferior ou
pesada encontra-se composta de glicerol
bruto e impurezas.
O valor do glicerol bruto obtido da produo de biodiesel encontra-se entre 0,2 a
0,4 R$/kg. Este baixo valor atribudo ao
contedo de aproximadamente 30 % (p/p)
de impurezas e ao grande volume deste
co-produto gerado pelas indstrias. O glicerol bruto apresenta-se na forma de lquido viscoso pardo escuro, que contm quantidades variveis de sabo, lcool (metanol
ou etanol), monoacilglicerol, diacilglicerol,
oligmeros de glicerol, polmeros e gua
(OOI et al., 2004). A porcentagem de glicerol na mistura varia entre 65 a 70 % (p/
p), sendo a maior parte das impurezas sabo formado pela reao dos cidos graxos
livres com excesso de catalisador (saponificao). Dessa forma, o aspecto do glicerol bruto encontra-se estreitamente relacionado ao contedo de sabo, que proporciona aparncia de viscoso e escuro. Para
reduzir o sabo gerado, recomenda-se conduzir a reao de transesterificao com
matrias primas (triglicerdeos) com baixo
contedo em cidos graxos livres e gua,
ao mesmo tempo de reduzir a quantidade
de catalisador (OOI et al., 2004).
A mistura residual resultante submetido
ao processo de acidulao com cido concentrado (HCl, H2SO4, ou H3PO4) para a separao de glicerol e cidos graxos do sabo (Figura 2a). No entanto, a maior parte
dos processos de tratamento de glicerol
conduzida utilizando HCl ou H2SO4, sendo

Figura 1. (a) Reao global e (b) Reaes consecutivas de

transesterificao de triglicerdeos. R1, R2, R3 e R representam grupos alquilas
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o H3PO4 restrito pelo alto custo. Durante a

acidulao, forma-se certa quantidade de
sal (reao do cido inorgnico com on do
sabo) que se deposita na fase inferior de
um lquido de trs fases, estando a fase superior constituda pelos cidos graxos livres, e a fase intermdia composta principalmente por glicerol e lcool (Figura 2b).
O glicerol recuperado alcana concentraes superiores a 80 % (p/p), com quantidades variveis de gua, corantes e lcool.
Posteriormente, o glicerol com excesso de
cido neutralizado com soluo de NaOH
e submetido a tratamento trmico (70 oC)
para eliminar os componentes volteis (recuperao de lcool)(OOI et al., 2004;
FUKUDA, KONDO, NODA, 2001). Nesta
forma, parcialmente livre de impurezas, o
glicerol pode ser utilizado como substrato
de fermentao por vrias espcies de microrganismos.
As caractersticas fsicas, qumicas e nutricionais do glicerol bruto dependem do tipo
de cido graxo (gordura animal ou leo
vegetal) e do tipo de catlise empregada
na produo de biodiesel. No entanto, a
procura pela glicerina purificada muito
maior, devida ao seu valor econmico. A

aplicao do glicerol na indstria est condicionada ao grau de pureza, que deve ser
igual ou superior a 95%. Para obter grau
de pureza superior a 95% (p/p)(grau alimentcio ou farmacutico), o glicerol deve
ser submetido a destilao, mas sob custo
elevado .
Por outro lado, de acordo com a Tabela 2,
o glicerol bruto contm elementos nutricionais, como, fsforo, enxofre, magnsio,
clcio, nitrognio e sdio, e que so factveis de serem utilizados por microrganismos para o seu crescimento durante processos fermentativos (THOMPSON, HE,
2006).
ASSIMILAO, METABOLISMO E
CONVERSO MICROBIOLGICA DO
GLICEROL.
O glicerol considerado uma fonte de carbono altamente reduzida e assimilvel por
bactrias e leveduras sob condies aerbicas e anaerbicas19 para a obteno de
energia metablica, como regulador do potencial redox e para a reciclagem de fosfato inorgnico dentro da clula (DILLIS et
al., 1980).

Vrios estudos foram desenvolvidos visando a utilizao de glicerol como fonte de

carbono por microrganismos, especialmente por bactrias. Muitos deles apontam principalmente a mecanismos de assimilao de
glicerol por estes microrganismos para a
produo de compostos intermedirios de
polmeros, resinas e aditivos para combustveis (PAPANIKOLAOU et al., 2002; ITO
et al., 2005; CHENG et al 2007).
O transporte do glicerol atravs da membrana celular constitui a primeira etapa para
o seu metabolismo. De uma forma geral, a
assimilao de glicerol por parte dos microrganismos envolve o transporte passivo
(GANCEDO, GANCEDO, 1968) e transporte
ativo (LAGES, SILVA-GRAA, LUCAS, 1999)
atravs da membrana plasmtica.
O transporte passivo inclui a difuso simples (permeao no especfica) e a difuso facilitada mediada por protenas localizadas nas camadas mais internas da membrana plasmtica (MIP), as permeases. A
difuso simples, sendo ATP no dependente, requer um gradiente de concentrao
para o transporte do substrato atravs da
membrana. Conseqentemente, a concentrao do substrato no interior da clula no

Figura 2.
(b)- Separao do glicerol aps
tratamento com cido concentrado,
a fase superior corresponde a
cidos graxos, fase intermdia:
glicerol, fase inferior: glicerol + sais

Figura 2.
(a) - Fluxograma de produo de biodiesel e tratamento de purificao do glicerol

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Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 37

supera aquela encontrada no meio de

cultura(MOAT, FOSTER, SPECTOR, 2002).
Na levedura Saccharomyces cerevisiae, estudos desenvolvidos por Luyten et al.
(1995), assinalaram a existncia de permeases FPS1, especficas para transporte de
glicerol (Figura 3).
O glicerol um dos poucos substratos que
atravessa a membrana celular por difuso
facilitada nas clulas procariticas. Em bactrias como Escherichia coli, a protena do

tipo poro-canal-G1pF atua por sensibilidade mecnica sem gasto energtico na presena de glicerol. Este facilitador permite a
assimilao, alm de glicerol, de pequenas
molculas de polihidroxi lcoois, uria e
glicina, mas exclui molculas carregadas
como gliceraldedo-3-fosfato e dihidroxiacetona fosfato(HOLST et al., 2000).
Em
quanto aos mecanismos genticos, foram
descritos trs genes responsveis pela assimilao e regulao do contedo intercelular de glicerol em Saccharomyces cerevisiae, o GUP1 e GUP2 (HOLST et al., 2000)
e FPS1(LUYTEN et al.,1995) associados diretamente com o transporte facilitado e que
so expressas conforme estmulos provocados nas clulas, como o estresse osmtico.
Por outro lado, mecanismos de transporte
ativo simporte glicerol/H+ e simporte glicerol/Na+ (dependentes de ATP) foram descritos em numerosas espcies de leveduras, entre elas Debaryomyces hansenii, Pichia sorbitophila, Saccharomyces cerevisiae, Zygosaccharomyces rouxii (LAGES, SILVA-GRAA, LUCAS, 1999). Tanto as acumulaes de glicerol por estresse, como a
existncia de mecanismos ativos, so comuns em grande variedade de leveduras
(LAGES, LUCAS, 1997).
Aps a passagem do glicerol atravs da
membrana plasmtica pelos possveis mecanismos, o glicerol pode ser catabolisado
por vrias rotas metablicas independentes, apresentado na Figura 4.
Uma das rotas, provavelmente a principal
para a oxidao de glicerol por leveduras,
consiste na fosforilao do glicerol pela enzima glicerol-quinase para formar glicerol3-fosfato, que reduzido a dihidroxiacetona fosfato pela enzima mitocondrial glicerol fosfo-ubiquinona oxidoreductase (FAD
dependente)(GANCEDO, SERRANO, 1989).

Figura 3. Tipos de transporte para a

assimilao de glicerol pela levedura
Saccharomyces cerevisiae. FPS1 e
YFLO54c so protenas de transporte,
GUT1 e GUT2 so genes para expresso
de enzimas de assimilao de glicerol.
(Baseado em: NEVES, LAGES, LUCAS,
2004)
Estudos demonstraram que, os genes que
controlam a sntese das enzimas glicerolquinase e fosfo-ubiquinona oxidoreductase
so GUT1 e GUT2, respectivamente (GRAUSLUND, LOPES, RONNOW, 1999). A expresso dessas enzimas reprimida durante o crescimento celular em substratos fermentescveis como glicose, mas desregulado quando glicerol ou etanol utilizado
como a principal fonte de carbono (GRAUSLUND, RONNOW, 2000).

Outra possvel via catablica do glicerol corresponde oxidao de glicerol e conseqente

formao de dihidroxiacetona pela enzima
glicerol desidrogenase. Aps, a dihidroxiacetona fosforilada a dihidroxiacetona fosfato
pela enzima dihidroxiacetona quinase dependente de Adenosina Trifosfato (ATP). Gancedo e Gancedo (1968) reportaram que leveduras da espcie Schizosaccharomyces pombe, por exemplo, oxida glicerol mediante essa
via sob condies de stress osmtico.
A dihidroxiacetona fosfato considerada uma
importante molcula intermediria para a gliconeognese (sntese de hexoses), assim como
para a obteno de numerosos compostos atravs das vias oxidativas, incluindo, cido ctrico, cido succnico, cido actico, cido frmico, cido ltico, etanol e outros compostos
de interesse comercial (MOAT, FOSTER, SPECTOR, 2002). O crescimento de microrganismos em fontes de carbono alternativas aos
carboidratos, como L-malato, acetato, ou glicerol, requer a capacidade de sintetizar hexoses necessrias para a produo de mucopeptideos da parede celular, armazenagem de
glicognio, e outros compostos derivados de
hexoses, como as pentoses, envolvidos na biosntese de cidos nuclicos (MOAT, FOSTER,
SPECTOR, 2002).
Tambm, Hauge, King e Cheldelin (1955),
fazem referncia sobre a capacidade de algumas bactrias, entre elas Acetobacter suboxydans, de oxidar a molcula de dihidroxiacetona fosfato pela via pentose-fosfato, incrementando o nmero de bioprodutos possveis
de serem obtidos por via biotecnolgica a partir de glicerol.
Em espcies de leveduras do gnero Yarrowia sp., e em bactrias como Klebsiella pneumoniae, Clostridium pasteurianum, Citrobacter freundii, Klebsiella pneumoniae, Clostridium pasteurianum, Clostridium butyricum,
Enterobacter agglomerans, Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri and Bacillus welchii (ZHAO, CHEN, YAO, 2006; GONZLEZ
PAJUELO et al., 2006; CHENG et al., 2007),
observa-se que sob condies de anaerobiose, o glicerol sofre desidratao pela enzima
glicerol desidratase para produzir 3-dihidroxipropionaldedo.
Posteriormente, este intermedirio transformado pela enzima NADH dependente 1,3propanodiol oxido-reductase para gerar 1,3propanodiol, principal intermedirio para produo de polmeros, resinas e aditivos de importantes aplicaes industriais (GONZLEZ
PAJUELO et al., 2006; CHENG et al., 2007).
Uma vez que o glicerol assimilado no interior da clula, numerosos compostos so produzidos como conseqncia do seu metabolismo.
BIOPRODUTOS OBTIDOS POR
FERMENTAO MICROBIANA
DO GLICEROL

Tabela 1. Composio do glicerol bruto obtido durante a produo de biodiesel

em funo de diferentes matrias prima. (Adaptado de: THOMPSON, HE ,2006)

A extraordinria expanso da indstria de biodiesel no Brasil e no mundo vem originando grandes volumes do principal co-produto,
o glicerol. A superproduo de glicerol afeta
negativamente o preo do biodiesel no mercado, tornando imperiosa a busca de novas
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 37

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Figura 4. Vias metablicas de assimilao de glicerol por

microrganismos e seus possveis produtos. (Adaptado de: GANCEDO,
GANCEDO, 1968; HAUGE, KING, CHELDELIN, 1955; XIU et al., 2007)
aplicaes para este co-produto. Neste contexto, o glicerol vem sendo investigado
como a futura fonte de carbono em processos microbianos para a obteno de bioprodutos de alto valor agregado.
A continuao, detalham-se os recentes processos fermentativos aplicados nos laboratrios de pesquisa cientfica para a obteno de bioprodutos a partir do glicerol, independente do seu origem.
1,3-Propanodiol
O propanodiol um composto intermedirio para a sntese de compostos cclicos e
monmeros para polisteres, poliuretanos
48

e polipropileno tereftalato. conhecido que

os processos qumicos tradicionais de produo so altamente nocivos devido ao compostos txicos formados. As pesquisas mais
importantes na utilizao biotecnolgica do
glicerol bruto apontam principalmente
produo do composto intermedirio 1,3propanodiol (GONZALEZ-PAJUELO et al.,
2006; XIU et al., 2007). Atualmente, estes
compostos so produzidos quase exclusivamente a partir de um derivado do petrleo, o xido de propileno, mediante processos qumicos convencionais (SULLIVAN,
2003).
O campo de aplicao do composto 1,3propanodiol considerado amplamente

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 37

abrangente, diferentes setores comerciais, desde

a produo de polimeros, tintas, resinas de polister, lubrificantes, anti-cogelante, at produo
de cosmticos. Mediante fermentao de glicerol
bruto por Klebsiella pneumoniae foram obtidos
concentraes de at 56 g/L em escala de laboratrio. No entanto, a produo de 1,3-propanodiol
a escala industrial encontra-se limitado devido a
que os a maioria dos microrganismos produtores,
Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, Clostridium,
Propionibacterium and Anaerobiospirillum, so
considerados patognicos e requerem de condies estritas de anaerobiose e nutrientes especficos para seu desenvolvimento (BARBIRATO et al.,
1997). Uma soluo futura para o scale-up consistiria na utilizao de ferramentas da engenharia
gentica para inserir genes que expressem enzimas geradoras de 1,3-propanodiol em microrganismos mais adaptados a condies industriais, como
por exemplo, a bactria Escherichia coli (DHARMADI, MURARKA, GONZLEZ, 2006).
Notoriamente, muitas espcies apresentam a capacidade de fermentar o glicerol produzindo 1,3propandiol, entre elas podem ser citadas Citrobacter freundii, Klebsiella pneumoniae, Clostridium
pasteurianum, Clostridium butyricum, Enterobacter agglomerans, Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri and Bacillus welchii (BARBIRATO et
al., 1997; GONZALEZ-PAJUELO et al., 2006; XIU
et al., 2007) . Atualmente, as bacterias Clostridium butyricum e Klebsiella pneumoniae so consideradas as de maior utilizao e provavelmente
sejam as melhores produtoras deste composto (XIU
et al., 2007). Recentemente, Gonzlez-Pajuelo et
al. (2005) comparando uma espcie natural de
Clostridium butyricum VPI 3266 com outra geneticamente modificada Clostridium acetobutylicum
DG1(pSPD5) (contendo genes para produo de
1,3-propanodiol), observaram que no tempo de
47 h de fermentao em batelada alimentada, a
cepa modificada alcanou maior produtividade
(0,65 mol/mol de glicerol, 1,7 g/L h) que a cepa
natural (0,69 mol/mol, 1,21 g/L.h). Em fermentao contnua de glicerol bruto e comercial (pureza: 80-90% ) em uma taxa de diluio (D) de 0,05
h-1 (pH 6,5; 35 oC) com a mesma cepa modificada,
foram obtidos valores de rendimento e produtividade similares aos observados em batelada alimentada (0,61-0,64 mol/mol glicerol, 1,49-1,56
g/L.h). Os mesmos autores reportaram alta produtividade em 1,3-propanodiol (10,3 g/L.h) em cultivo contnuo da bactria Clostridium butyricum
(GONZLEZ-PAJUELO, ANDRADE, VASCONCELOS, 2005).
Outro aspecto considerado de importncia a
imobilizao de clulas em diferentes polmeros
para sua re-utilizao em fermentaes consecutivas. O encapsulamento de clulas de Klebsiella
pneumoniae em celulose-sulfato de sdio e policloreto de metil dialil amnia desenvolvido por
Zhao, Chen e Yao (2006), permitiu executar fermentaes em batelada repetida, batelada alimentada e processo contnuo para a obteno de 1,3propanodiol sob concentraes de glicerol to elevadas quanto 120 g/L. A quantidade de produto
obtido foi de 63,1 g/L (5,7 g/L.h), 51,86 g/L(1,08
g/L.h) e 13,6 g/L (4,5 g/L h) para fermentao em
batelada simples, batelada alimentada e fermentao contnua, respectivamente. Apesar dos valores de produtividade na fermentao por batelada
alimentada serem menores que na batelada simples, os resultados sugerem a potencialidade da

reutilizao de clulas imobilizadas, principalmente por fornecer um ambiente estvel para

a clula frente a altas concentraes de substrato. A co-fermentao de glicerol e glicose
foi avaliada por Xiu et al. (2007) para a produo de 1,3-propanodiol por Klebsiella pneumoniae DSM2026. Na relao glicose-glicerol igual a 0,2 e sob condies de microaerao foram alcanados valores de produtividade igual a 1,95 g/L.h.
Os primeiros estudos tecnolgicos para o aumento de escala foram desenvolvidos por
Cheng et al. (2007), utilizando reator em processo por batelada alimentada de 5000 L de
volume total. Sob condies de baixo potencial de oxidao, alcanado mediante fluxo
de nitrognio gs (0,15 vvm), foram fermentados 4000 L de meio contendo 40 g/L de
glicerol a pH 6,8 ; 90 rpm e 37oC. A
concentrao mxima de produto foi de 58,8
g/L, mas com uma produtividade ainda baixa
de 0,92 g/L.h. Estes resultados iniciais demonstram a factibilidade da produo de 1,3propanodiol a escala piloto, mas novas tentativas devero ser conduzidas para a sua otimizao visando a projeo industrial.
Etanol
Etanol, butanol, e outros compostos so coproduzidos durante a fermentao de glicerol
(DABROCK, BAHL, GOTTSCHALK, 1992). Ito
et al. (2005) demonstraram a possibilidade
de produzir etanol e hidrognio por Enterobacter aerogenes HU-101 utilizando efluentes
da indstria de biodiesel contendo ate 41%
(p/p) de glicerol. Convenientemente diludo
(7,3 g/L), o efluente foi fermentado em forma
descontnua em frascos anaerbicos e em forma contnua utilizando reator de coluna empacotada. Na fermentao descontnua, os rendimentos em hidrognio e etanol foram de
0,89 mol/mol de glicerol e 1 mol/mol glicerol, respectivamente. Rendimentos acima de
10 g/L foram obtidos em processo contnuo
empregando cermica porosa como suporte
de microrganismos. Neste processo, comparando meios contendo efluente de biodiesel
e glicerol comercial, os mesmos autores observaram que produo de hidrognio foi
maior naquele meio com glicerol parcialmente
purificado (60 mmol/L.h) que utilizando efluente (30 mmol/L h). Aparentemente, as impurezas que acompanham o efluente aumentaram a fragilidade dos flocos de microrganismos, facilitando o wash- out das clulas do
reator na mesma taxa de diluio.
Em outros trabalhos, etanol e cido frmico
foram os principais produtos da fermentao
de glicerol pela bactria Klebsiella planticola, em concentraes equimolar acima de 2
g/L (JARVIS, MOORE, THIELE, 1997). Estes
resultados estimulam a procura de novos microrganismos para a fermentao de glicerol
visando a produo de etanol e hidrognio.
cidos orgnicos
Tambm, existem numerosos trabalhos direcionados para a produo de cido ctrico e
cido succnico por fermentao de glicerol.
Estes compostos so de ampla aplicao na

indstria de alimentos e constituem importantes intermedirios para a indstria de polmeros e produo de compostos qumicos
como o 1,2-butanodiol e 2,4-butanodiol.
Papanikolaou et al. (2002) obtiveram considervel quantidade de cido ctrico, de
ordem de 35 g/L, mediante fermentao
de glicerol por Yarrowia lypolitica. Por sua
parte, Rymowicz et al. (2006) publicaram
estudos de assimilao de glicerol desenvolvidos com trs cepas mutantes de Yarrowia lypolitica, obtendo concentraes de
at 124,5 g/L de cido ctrico. A produo
de cido succnico e cido actico a partir
de glicerol por Anaerobiospirillum succiniciproducens resultou em concentraes
6,5 vezes superiores a aquelas obtidas utilizando glicose como nica fonte de carbono (LEE et al., 2001).
A sntese de cido propinico por clulas
de Propionibacteria acidipropionici e Propionibacteria freudenreichii ssp. shermanii
imobilizadas em alginato de clcio foi reportado por Bories et al. (2004). Sob condies de alta concentrao de glicerol obtiveram-se concentraes de cido propionico de at 42 g/L.
Polihidroxialcanoatos
A preocupao pela reduo dos contaminantes ambientais vem acelerando novas
pesquisas para a produo de polmeros
biodegradveis. Espcies de Pseudomonas
produzem naturalmente polihidroxialcanoatos (PHA), polisteres lineares de compatvel com uma ampla faixa de potenciais
aplicaes devido a suas propriedades fsicas e biodegradabilidade (ASHBY, SOLAIMAN, FOGLIA, 2005).
Muitos microrganismos acumulam PHA sob
condies de estresse, principalmente quando submetidos falta de nitrognio, fsforo ou oxignio, e utilizam esse polmero
quando a fonte externa de carbono limitada. Historicamente, os cidos graxos foram utilizados extensivamente para a sntese de PHA (ASHBY, SOLAIMAN, FOGLIA, 2005). Glicerol proveniente da produo de biodiesel apresenta-se como uma
opo de substrato econmico para a produo deste tipo de biopolmeros. Borman
e Roth (1999) utilizaram Methylobacterium
rhodesianum para produzir polihidroxibutirato (PHB) na concentrao de 10,5 g/L
em fermentao por batelada com meio contendo 5 g/L de glicerol e casena peptona.
Koller et al. (2005) obtiveram polihidroxialcanoatos numa concentrao mxima de
16,2 g/L, mediante fermentao em batelada alimentada de soro de queijo e glicerol
bruto por uma cepa selvagem de levedura.
Para estressar as clulas, o cultivo foi conduzido sob tenso de oxignio (taxa de 10
mL/min) e sem outra fonte de fsforo alm
daquela fornecida pelos 2,5 g/L de extrato
de levedura. Um ponto interessante nesta
pesquisa foi a capacidade da cepa selvagem de produzir simultaneamente 3-hidroxivalerato (8-10 % do total de PHA) sem
necessidade dos precursores cido propinico ou cido valrico.

Ashby, Solaiman e Foglia (2005) utilizaram

duas cepas, Pseudomonas oleovorans B-14682
e Pseudomonas corrugata 388 para a produo de PHA. Partindo de concentraes mximas de 50 g/L glicerol, as cepas P. oleovorans e P.corrugata produziram 0,97 g/L de
Poli 3-hidroxibutirato (P3HB) e 0,67 g/L de
acido hidroxidodecenico, respectivamente.
De igual forma, foi observada a capacidade
de produo de blend de P3HB and PHA em
diferentes propores por cultura mista dos
microrganismos estudados.
cido graxo poliinsaturado mega-3
De conhecidas propriedades teraputicas contra numerosas enfermidades cardiovasculares,
cncer e Alzheimer, os cidos graxos poliinsaturados mega-3 (AGPI -3) so geralmente obtido a partir de fontes naturais como leos vegetais ou de peixes.
Recentemente foram desenvolvidos trabalhos
para a produo de AGPI-3 a partir da microalga heterotrfica Schizochytrium limacinum que possui capacidade produzir altos nveis de cido docosahexaenico (DHA). Pyle
e Wen (2007) observaram que aps 5 dias de
crescimento em frascos Erlenmeyer (pH 8,
20 oC, 170 rpm), aproximadamente 18 g/L de
clulas da microalga se formavam em meios
independentes contendo glicose, glicerol puro
e glicerol bruto na concentrao de 90 g/L.
Foram analisados alguns parmetros cinticos
como a velocidade especfica de crescimento
, 0,685/ h; rendimento em biomassa, 0,284
g/g glicerol bruto; rendimento de DHA, 171,27
mg/g glicerol bruto e rendimento volumtrico de 3,08 g/L. Tambm, foi estudado o efeito de diferentes concentraes de glicerol
bruto contendo sabo sobre o crescimento da
microalga. Concentraes superiores a 40 g/L
deste glicerol, influenciaram negativamente
no crescimento da microalga, sendo que na
concentrao de 90 g/L observou-se a morte
das clulas aps 2 dias de cultivo. Estes resultados podem ser considerados timos, desde
que no se necessitaria de uma etapa de prtratamento do glicerol para a separao do
sabo, etapa geralmente longa e de custo elevado. O trabalho demonstra que um leque de
oportunidades pode ser aberto com pesquisas
utilizando exclusivamente algas heterotrficas e glicerol como fonte de carbono.
Avanos tecnolgicos no
aproveitamento do glicerol no Brasil
Recentemente, no XVI Simpsio Nacional de
Bioprocessos (SINAFERM 2007) foram apresentados numerosos trabalhos na busca de
solues biotecnolgicas para a utilizao de
glicerol originado da produo de biodiesel.
Por exemplo, Meinicke, Vendruscolo e Ninow (2007) compararam diferentes meios
contendo concentraes variveis de glicerol
e glicose como fonte de carbono para a produo de corantes naturais pelo fungo filmamentoso Monascus ruber. A mxima produo de pigmentos vermelhos em frascos Erlenmeyer foi de 5,2 UDO480 nm (1 unidade UDO
(Abs) corresponde a 15 mg/L de pigmento) e
produtividade de (0,0596 UDO480nm./h) utili-

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 37

49

zando fonte de carbono mista (5 g/L de

glicose e 15 g/L de glicerol). Os autores
observaram que variaes no valor de pH
podem regular a proporo do tipo de pigmentos encontrado no meio. Valores de pH
inferiores a 5,5 encontram-se associados
formao de pigmentos amarelos, sendo que
os valores superiores favorecem a produo de pigmentos vermelhos.
Tambm, o glicerol resultante da transesterificao de leo de mamona demonstrou ser uma fonte de carbono apropriada
para produo de biosurfactante ramnolipdeo (uma ou duas molculas de ramnose e
cido graxo de cadeia longa) por Pseudomona aeruginosa59. A concentrao da fonte de nitrognio (NaCO3) representou ser
um fator preponderante na produo do biosurfactante, comprovado pela reduo da
tenso superficial da gua maior a 45,7 % e
ndice emulsificao s 24 h superior a 56,1
% para os diferentes hidrocarbonetos testados (querosene, hexadecano e isso-octano). Prieto et al 2007 obtiveram resultados
similares na produo de ramnolipdeos,
comprovando a maior influncia do NaNO3
na produo de biosurfactante pela mesma
espcie de microrganismo, seguido por
NH4NO3, uria e NH4SO4.
Recentemente, em trabalhos de pesquisa
visando a seleo de leveduras aptas para
a assimilao e crescimento em glicerol comercial, verificamos que algumas espcies, incluindo Kluyveromyces marxianus e
Candida batistae, apresentaram elevada capacidade de crescimento neste substrato.
Dentre as leveduras estudadas, Hansenula
anomala e Candida tropicalis mostraram
capacidade de produzir etanol em concentraes de 3,5 e 6,1 g/L, respectivamente61. Estes resultados, ainda preliminares, so
promissores para produo de etanol a partir de glicerol por esses microrganismos.
Por outro lado, Volpato et al (2007) isolaram de ambientes amaznicos diferentes
cepas de Bacillus com capacidade de produzir lpases utilizando glicerol como fonte
de carbono. A mxima atividade lipoltica
em glicerol (24,3 U/L) foi obtida com o
isolado BL74.
Destaca-se tambm a possibilidade da fermentao de glicerol de biodiesel por Streptomyces clavuligerus para a produo de
cido clavulnico, potente inibidor de betalactamases, que junto com a penicilina e
cefalosporina so utilizados contra infecciones bacterianas. O trabalho desenvolvido
por Gutierrez e Costa Arajo (2007) comparou a suplementao continua de meios
de cultura contendo concentraes variveis de fonte de aminocidos e glicerol para
a produo de cido clavulnico. Aps 120
h de fermentao, a mxima concentrao
de cido clavulnico obtido foi de 60 mg/
L.
Na busca de novas cepas fermentadoras de
glicerol, Silva e Contiero (2007) isolaram a
bactria GLC29 produtora de 10,8 g/L de
1,3-propanodiol a partir de 20 g/L de glicerol. Este estudo soma-se s numerosas
pesquisas desenvolvidas em outros pases
para a produo deste glicol com impor50

tantes aplicaes industriais (GONZALEZPAJUELO et al., 2006; XIU et al., 2007).

Estes e outros estudos demonstraram a potencialidade da utilizao do glicerol, proveniente da produo de biodiesel, como
fonte de carbono para a produo de compostos qumicos de interesse comercial.
Embora, em etapas iniciais, novas linhas de
pesquisas esto sendo definidas para obter
compostos de maior valor agregado, que
incluam principalmente molculas bioativas, como protenas e ribonucleotdeos, para
a indstria alimentcia e farmacutica.
A utilizao de biorefinarias para converso de glicerol bruto apresenta-se como uma
estratgia promissora para evitar futuros problemas de acumulao deste subproduto,
ao tempo de aumentar a rentabilidade da
produo de biodiesel.
Aspectos econmicos
O excesso de glicerol proveniente da produo de biodiesel associado baixa demanda mundial (0,5 bilhes ton/ano) e baixo
custo, projetam um desequilbrio econmico nas indstrias oleoqumicas e de refino
de glicerol, ao tempo de pr em risco a
sustentabilidade econmica de usinas de biodiesel no mundo (HGCA, 2007). No Brasil, a maioria das plantas industriais de biodiesel no valoriza efetivamente o glicerol. A projeo do volume de glicerol no
pas para o ano 2013 de 488 milhes e
as perspectivas, nesse sentido, no so auspiciosas, devido a que poucas apresentam
planos futuros para sua converso em produtos de maior valor agregado.
O uso intensivo deste co-produto essencial para a sustentabilidade econmica da
indstria de biodiesel no pas. A queda brusca do preo do glicerol no cenrio internacional nos ltimos 5 anos tem obrigado
paralisao da produo da glicerina sinttica a partir de propileno. O excesso de
volume de glicerol, o alto preo do propileno e as vantagens de produzir compostos
derivados da indstria petroqumica de
maior valor, conspiraram para o severo
declnio das indstrias de glicerina sinttica (HGCA, 2007). Nos Estados Unidos, o
valor do glicerol diminuiu de 1048 R$/t
em 2004 para aproximadamente 125 R$/t
no ano 2006 (YAZDANI, GONZALEZ,
2007). No Brasil, atualmente o preo FOB
(Free on Board) do glicerol bruto varia de
200 a 400 R$/t, sendo o valor do glicerol
loiro (parcialmente tratado para remoo
de impurezas) de 600 a 800 R$/t. Estimase que na prxima dcada, sempre que se
mantenha a tendncia favorvel para o biodiesel, o preo do glicerol co-produzido
poderia diminuir ainda mais.
Considerando a situao e a projeo para os prximos anos, a utilizao do
glicerol como substrato para fermentao
poderia torna-se vantajoso em relao ao
preo de outros resduos tradicionalmente
utilizados como fonte de carbono para a
obteno de bioprodutos. Por exemplo, o
preo do melao de cana de acar no mercado internacional varia entre os 120 e 170

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 37

R$/t, outro exemplo corresponde ao valor do bagao de cana que oscila entre
9,5 e 24 R$/t. Neste ltimo caso, o bagao deve ser submetido a tratamentos fsicos, qumicos ou enzimticos para disponibilizar a glicose, o que elevaria o preo
final do substrato. A produo industrial
de biomolculas por fermentao de glicerol economizaria custos de processos tradicionais que requerem etapas de elevado consumo energtico para extrao e
acondicionamento do substrato (sacarose
de cana de acar ou glicose de amido de
milho).
O grande desafio no Brasil ser
incentivar as pesquisas biotecnolgicas que,
timidamente, vem sendo desenvolvidas no
pas. Alem disso, facilitar a imediata transferncia tecnolgica dessas descobertas na
prpria usina de biodiesel, permitindo reduzir custos de transporte para converter
o biodiesel em um biocombustvel de alta
rentabilidade econmica.
CONCLUSO
Desde que alguns governos estipularam
normativas que obriga a adio de biodiesel ao combustvel de petrleo, grande
quantidade de glicerol vem sendo gerada, tornando-se necessria a busca de alternativas para sua utilizao. Numerosas
pesquisas esto sendo desenvolvidas nesse sentido, no entanto, os esforos ainda
constituem uma soluo em longo prazo
para a acumulao de glicerol. A biotecnologia apresenta alternativas para a obteno de produtos de alto valor agregado como bio-pesticidas, pigmentos, aromas, polmeros, antibiticos e protenas recombinantes. No entanto, preciso estudar com maior detalhe aspectos de engenharia bioqumica como agitao, aerao,
cintica de crescimento e obteno de produtos, e transferncia de massa e energia.
Estes parmetros so considerados essenciais para entender os mecanismos de utilizao de microrganismos assim como para
a otimizao de processos, objetivando a
futura ampliao de escala. Estratgias mais
detalhadas para a utilizao biotecnolgica do glicerol so esperadas em poucos
anos, de forma a reduzir os impactos ambientais e tornar o biodiesel um produto
altamente competitivo no mercado mundial de biocombustveis.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem o apoio financeiro
da CAPES e o CNPq para o desenvolvimento de projetos de pesquisas.
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