Biodegradao e Biorremediao

Curso: Engenharia Sanitria e Ambiental

Disciplina: Microbiologia Aplicada

Introduo

Poluio Ambiental

Introduo
reas contaminadas: so locais que apresentam
substncias txicas distribudas de forma no
controlada nos diferentes compartimentos do
ambiente, que em funo do nvel de
concentrao, determinam riscos potenciais
sade dos seres vivos ou prejuzos qualidade
dos recursos naturais.

Introduo
Principais fontes de contaminao
Resduo (69)

Total: 2272

Exemplo de reas contaminadas no estado de So Paulo (CETESB, 2007)

Fonte: http://www.cetesb.sp.gov.br/Solo/areas_contaminadas/texto_areas_cont_nov_07.pdf

Introduo
Principais grupos de contaminantes encontrados nas reas
contaminadas

Introduo

Introduo

Perspectivas
Aplicao para o Brasil
No Brasil, a tcnica de biorremediao ainda
pouco utilizada, porm, pode ser promissora e
eficiente se utilizada nas reas contaminadas.
Este um mtodo que pode ser aproveitado no
mercado brasileiro, pois o pas apresenta solos e
temperaturas favorveis.
Gloeden, E. E. (2005)
Revista Meio Ambiente Industrial, 56, p.18, 2005.

Etapas de gerenciamento de reas

contaminadas
Definio da regio de interesse;
Identificao de reas potencialmente contaminadas;
Avaliao preliminar;
Investigao confirmatria (caso ainda no haja certeza da
contaminao);
Avaliao de risco;
Investigao para remediao;
Projeto de remediao;
Remediao propriamente dita; e
Monitoramento.

Caractersticas dos contaminantes

(Xenobiticos)

Definies
Xenobiticos:
As suas estruturas moleculares e sequncias de ligaes
qumicas no so reconhecidas pelas enzimas degradativas
existentes.

Persistentes x Recalcitrantes
Dissipao: frao do xenobitico que degradado ou que
permanece no solo em formas diferentes do original.

Definies
A recalcitrncia devido :
Estrutura qumica no
convencional;
Anis aromticos altamente
condensados;

Definies
A recalcitrncia devido :
Molculas com altssimo peso molecular;
No induo de enzimas degradadoras;
Falta de permeases: o composto no penetra na clula;
Indisponibilidade: insolubilidade e adsoro;
Toxicidade excessiva.

Fatores que afetam o comportamento dos xenobiticos no solo

Microbiota

D Degradabilidade

Densidade e Atividade
Diversidade
Metabolismo e
Co-metabolismo
Solo
Umidade e aerao
Temperatura
Matria Orgnica
Argila, pH, Eh

P Persistncia

Xenobitico

D
P

Estrutura
qumica
Concentrao
Toxicidade
Histrico de uso

Degradao abitica e bitica

Degradao de contaminantes
Qumica: Hidrlise, oxidao, reduo.
Fotoqumica: luz ultra-violeta.
Biolgica: metabolismo dos seres vivos.
- Microrganismos: bactrias, fungos, algas
Vias de Degradao: Catabolismo e Cometabolismo

Degradao biolgica
Degradao de contaminantes

Catabolismo: utiliza o composto como fonte de carbono e

energia.
Cometabolismo: processo de biodegradao de compostos
xenobiticos, sendo definido como a transformao de um
substrato sem contudo us-lo como fonte de carbono e energia.

Fatores ambientais que influenciam a

persistncia/degradao dos xenobiticos no solo
Fatores

Principais efeitos e comentrios

Adsoro e
Dessoro

Influencia a biodisponibilidade do xenobitico e nutrientes,

crescimento microbiano e atividade enzimtica

Matria Orgnica

Aumenta a populao microbiana, mas pode adsorver o

xenobitico.

Umidade e
Aerao

Controla a atividade e o tipo de metabolismo microbiano. Alta

umidade acelera degradao dos aromticos clorados.

Potencial redox

Determina a relao entre compostos oxidados e reduzidos no

solo.

Acidez

Afeta crescimento microbiano. Influencia disponibilidade e

absoro do composto.

Temperatura

Influencia o metabolismo celular e processo qumicos dos

xenobiticos.

Aplicao do
xenobitico

Dose, frequncia de aplicao, formulao, mistura com

outros produtos

Principais tcnicas de remediao

Principais tcnicas de remediao

Encapsulamento Geotcnico (Imobilizao In situ):
consiste no confinamento de um local contaminado
usando barreiras de baixa permeabilidade.

Barreiras Verticais:

Principais tcnicas de remediao

Encapsulamento Geotcnico
Barreiras Horizontais :

Principais tcnicas de remediao

Bombeamento e Tratamento (pump-and-treat): tem o
objetivo de capturar a pluma de contaminao, tratando
as guas subterrneas, para depois descart-las ou
reintroduz-las no aqfero.

Principais tcnicas de remediao

Remoo de Fase Livre: remoo de fase livre
por bombeamento direto e separao dos lquidos
atravs de um separador gua-leo;
Pode no ser efetivo para remediao das guas
subterrneas, uma vez que uma grande porcentagem do
contaminante permanece adsorvido ao solo, atuando
como uma fonte contnua de contaminao em fase
dissolvida.

Principais tcnicas de remediao

Barreiras hidrulicas: tem o objetivo de impedir o avano da
pluma de contaminao. Consiste em executar poos ou
trincheiras no caminho do fluxo e bombear a gua
subterrnea contaminada, direcionando-a a tratamento.

Principais tcnicas de remediao

Extrao de vapores: utilizada para retirar compostos
orgnicos volteis (Volatile Organic Compound VOC) da zona
no saturada do subsolo.
Lavagem do solo: os solos contaminados so encaminhados
para a unidade mvel de lavagem de slidos, reciclador /
lavador. Procede-se a lavagem a quente, com forte agitao
hidromecnica.
Utiliza-se nesta fase um surfactante biodegradvel para
transferncia dos compostos orgnicos da matriz slida
para a fase lquida.

Principais tcnicas de remediao

Biorremediao
Tecnologia de remediao de locais impactados
por compostos qumicos de alto risco que se baseia
na utilizao de populaes microbianas que
possuem a habilidade de modificar, decompor ou
acumular determinados poluentes.

Perspectivas
Necessidade de remediao do ambiente
Proteo dos ecossistemas

Tecnologia de Biorremediao

Vantagens da biorremediao
Baixo custo em relao a outras tcnicas (13 a 1500 dlares por
tonelada de solo tratado);
Soluo permanente de descontaminao, pois promove a degradao;
Fundamentada em processos naturais sem interferncias adicionais ao
ambiente;
Aplicvel a uma grande variedade de contaminantes e situaes do
solo;
Grande aceitao pblica.

Tcnicas de aplicao da biorremediao

Tcnicas de aplicao da biorremediao

BIORREMEDIAO
Bioestimulao
Adio de nutrientes (N e P) para
estimular a populao microbiana natural
Adio de O2
Correo do pH
Temperatura

Bioenriqueciment
o
Adio de culturas puras ou
mistas de microrganismos que
apresentam a via metablica para a
degradao do contaminante

Isolamento de microrganismos
Local impactado: microrganismos previamente adaptados
induo de enzimas especficas;
crescimento de uma sub-populao especfica;
seleo de mutantes que adquiriram capacidade
enzimtica de degradao.

Isolamento de microrganismos

Ambientes impactados

Tcnicas de isolamento

Isolamento direto:
Solo, gua, sedimento.

Tcnicas de enriquecimento:
Populao microbiana de interesse ocorre em baixa
densidade.

Tcnicas de isolamento

250 g de solo
de landfarming

Tcnica de isolamento de
microrganismos
degradadores de petrleo
segundo Kataoka (1999).

Tcnica de enriquecimento

250 g de
borra de
leo

250 g of
solo de
jardim

Mistura

Tubos de PVC perfurados e enterrados por 20

dias em solo de jardim

Tcnica de isolamento de
microrganismos
degradadores de petrleo
segundo Kataoka (1999).

10 g mistura dos solos e borra de leo

+
100 ml gua destilada esterelizada
Agitao: 15 min
Repouso: 5 min

2 ml

Sobrenadante

Incubao:
28C 15 dias

100 ml meio BHS

+
1% borra de leo
1 ml

100 ml meio BHS

+
1% borra de leo
1 ml
Meio com microrganismos
degradadores de
hidrocarbonetos de
petrleo

Mtodos de investigao
Testes respiromtricos
Verificar, de forma rpida, o potencial de degradao do
microrganismo em estudos sobre mineralizao;
Testar o efeito da adio de nutrientes;
O desenvolvimento de um protocolo experimental com
estudos laboratoriais pode fornecer informaes importantes
sobre as medidas a serem adotadas em programas de
biorremediao.

Respirmetro de Bartha

ABNT NBR 14283 Resduos em

solo Determinao da biodegradao
pelo mtodo respiromtrico
(ABNT, 1999).

Mtodo respiromtrico de Bartha

Clculo do CO2 produzido

mg CO2 = (A B) x 50 x fHCl x 0,044

A = volume de HCl 0,1N gasto para titular o branco, em mL.
B = volume de HCl 0,1N gasto para titular a amostra , em mL.
50 = fator para transformar equivalente em mol de CO2.
f

(HCl)

= fator de correo HCl 0,1N.

0,044 = fator para transformar mmol em mg de CO2.

Mtodo respiromtrico de Bartha

Admitindo que 50% do carbono biodegradado se transforma
em CO2 e que os 50% remanescentes se incorporam ao solo sob
a forma de hmus e biomassa, calcula-se a quantidade de
carbono biodegradado pela frmula:

Cb = 2 x (CO2)
EFICINCIA DA BIODEGRADAO

EB% = C(Biodegradado) x 100

C(inicial)

Exemplo Teste Respiromtrico

Estudo da biodegradao de resduos oleosos de refinaria de petrleo.

Solo
Solo + Resduo
Inculo
Inc.+ Fertil.

CO 2 (mg/50g solo)

CO2 Acumulado
300
250
200
150
100
50
0
3

10

21

37

49

67

84

102

122

Periodo (Dias)

Exemplo Teste Respiromtrico

Estudo da biodegradao de resduos oleosos de refinaria de petrleo.

Eficincia da Biodegradao
40,00

35,00
30,00

26,04

26,56

27,61

25,00

ANOVA
F = 0,107
p = 0,899

20,00
15,00
10,00
5,00
0,00

Tratamentos
Solo + Resduo Oleoso

Inculo

Inculo + Fertilizantes

Mtodos de investigao
Mtodo de leitura automatizada: Bioscreen

Bioscreen: aparelho que

monitora automaticamente o
crescimento de
microrganismos atravs da
leitura da absorbncia da
cultura.

Microrganismos na Biorremediao

Crescimento de bactrias isoladas de solos em gasolina

Absobncia

0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1

6
4

2
4

8
3

4
3

0
3

6
2

2
2

8
1

4
1

0
1

Horas
Gasolina 5%

Gasolina 10%

Gasolina 15%

Crescimento de Acinetobacter baumanii em diferentes concentraes de gasolina

Microrganismos na Biorremediao

Crescimento de bactrias isoladas de solos em gasolina

0.4

Absorbncia

0.3
0.2
0.1

46

42

38

34

30

26

22

18

14

10

0
-0.1
Horas

Gasolina 5%

Gasolina 10%

Gasolina 15%

Crescimento de Ochrobactrum anthropi em diferentes concentraes de gasolina.

Mtodos de investigao
Teste de solo em microcosmo
Busca de informaes para a biorremediao do solo impactado.
- Concentrao do poluente,
- Toxicidade e mutagenicidade;
- Contagem de microrganismos;
- Atividade enzimtica;
- Etc...

Mtodos de investigao
Outros exemplos

Degradadores de hidrocarbonetos:
Meio mineral + 2,6 diclorofenol indofenol (DCPIP)
- Mudana da cor do meio de azul para incolor devido a
degradao de hidrocarbonetos.

Mtodos de investigao
Outros exemplos
Adio de indicadores cidos-bases aos meios minerais:
- Vermelho de bromocresol, azul de bromotimol, eosina-azul
de metileno Viragem de cor devido a degradao do xenobitico.

Halo ao redor das colnias:

- Isolamento de celulolticos: meio adicionado de
carboximetilcelulose

Biorremediao
A biorremediao pode ser realizada por
processos:

In situ: a remediao biolgica aplicado

diretamente no local impactado.
Ex situ: o meio impactado removido e tratado em
outro local.

Biorremediao de Aqferos: in situ

Sistema passivo de biorremediao in situ

Biorremediao de Aqferos: in situ

Sistema dinmico de biorremediao in situ

Caractersticas do contaminante e
do local

Caractersticas do contaminante e
do local

Caractersticas do contaminante e
do local

Landfarming
Landfarming: mtodo de tratamento onde o resduo
(poluente) degradado biologicamente na camada
superior do solo e os ons metlicos, liberados nessa
degradao, ou presentes nos resduos, seriam
incorporados nessa mesma camada de forma a no haver
contaminao das guas do lenol fretico. um mtodo
bastante comum, em se tratando da rea petroqumica.

Biorremediao de Solos: in situ

Tratamento em leito preparado - landfarming

Biorremediao: ex situ
Tcnicas ex situ:
produzem resultados mais rpidos;
so mais fceis de controlar;
maior versatilidade para o tratamento de
diferentes tipos de contaminantes e solo;
custo maior.

Biopilhas

Biopilhas: aerao ativa

Injeo ou suco de ar

Biopilhas: aerao passiva

Aerao passiva

serragem, palha e cascas de origem vegetal

Bulking agents

aumentam a porosidade e difuso do oxignio no solo

Alguns exemplos de
microrganismos degradadores de
xenobiticos

Microrganismos X Agrotxicos
cido 2,4-diclorofenoxiacetico

Acinetobacter sp
Stenothrophomonas maltophilia
Flavobacterium sp
Serratia marcescens
2,4-D

Penicillium sp.

Tais linhagens foram isoladas de solo contaminado por este

herbicida (Silva, 2007).

Microrganismos X Agrotxicos

Metolacloro

(2-cloro-N-(2-etil-6-metilfenil)-N-(2-metoxi-1-metiletil) acetamida)

Klebsiella pneumoniae pneumoniae

Pseudomonas alcaligenes
Enterobacter aerogenes

Microrganismos X Agrotxicos
Atrazina
(6-cloro-N-etil-N-(1-metiletil)-1,3,5-triazina-2,4-diamina)

Molcula de difcil degradao anel aromtico

heterocclico clorado e N-alquilado
Cepas de Aspergillus fumigatus e Rhizopus stolonifer
tm a capacidade de degradar parcialmente tais
molculas.

Microrganismos X Agrotxicos
Estudo realizado por Dellamatrice e Monteiro (2004).
Diuron
3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea

Solo

Sem contato com o diuron

Contato com o diuron h trs anos

Bactrias isoladas:
Acinetobacter johnsonii
Bacillus amyloliquefaciens
Bacillus vallismortis

Taxa de degradao
sete vezes maior do
diuron.

Microrganismos X Metais pesados

A indstria coureiro-caladista responsvel pela gerao de

resduos com alto poder poluidor Cromo.
Cromo hexavalente - Cr(VI) e Cromo trivalente Cr(III)

Reduo do Cr(VI) a Cr(III):

Processos qumicos e fsico-qumicos
Ao microbiolgica
Adio de enzimas redutoras de cromato produzidas a partir de
microrganismos

Microrganismos X Metais pesados

Aeromonas

Aureobacterium
Xanthobacter

Agrobacterium
Agrobacterium
Bacillus

Microrganismos X Metais pesados

Resduos de biomassa gerados em indstrias de fermentao

Remoo de metais pesados de efluentes

Saccharomyces cerevisiae: Cu, Ni, Zn, Cd e Cr (Machado et al. 2008)

Microrganismos X Metais pesados

Bacillus jotgali: remoo de Cd e Zn de meio aquoso (Prasanna,
2008).
Thiobacillus ferrooxidans e Thiobacillus thiooxidans: reduo do
cromo(VI) para cromo(III)

Cunninghamella elegans polissacardeo

Quitina
Quitosana

(Franco et al. 2004)

Remoo de metais como Cu, Pb e Fe em soluo aquosa Biosoro

Microrganismos x Hidrocarbonetos
A habilidade em degradar hidrocarbonetos no restrita a apenas
a alguns gneros de microrganismos, sendo vrios os grupos de
bactrias, fungos, leveduras e actinomicetos que demostram esta
capacidade.

Microrganismos na Biorremediao

Fungos degradadores de hidrocarbonetos

Amorphoteca resinae

Paecilomyces sp.

Cunninghamella sp.

Fusarium sp.

Graphium sp.

Microrganismos na Biorremediao

Fungos degradadores de hidrocarbonetos

Trichoderma sp.
Candida sp
Mortierella sp.

Os fungos de certa maneira resistem a

condies extremas de pH, limitao de
nutrientes, e baixo teor de umidade.
Rhodotorula sp.

Microrganismos na Biorremediao

Leveduras negras
Degradao de gases poluentes com hidrocarbonetos em
biofiltros de ar.
Degradao de compostos monoaromticos - BTEX (benzeno,
tolueno, etilbenzeno e xileno).
Cladophialophora arxii

Cladophialophora devriesii

Cladophialophora saturnica

Exophiala xenobiotica

Microrganismos na Biorremediao

Outras leveduras
Candida parapsilosis
Candida tropicalis
Rhodotorula glutinis
Linhagens capazes de utilizar hidrocarbonetos de petrleo
como nica fonte de carbono e energia (Saono e Gandjar, 1972).

Microrganismos na Biorremediao

Fungos degradadores de hidrocarbonetos

Basidiomicetos
Produo de enzimas extracelulares
de baixa especificidade
Trametes sp.

(peroxidases) responsveis pela

despolimerizao oxidativa da

Phanerochaete sp.

lignina

Bjerkandera sp.

Atacam compostos orgnicos

poluentes que apresentam
composio qumica semelhante
Yateem et al. (1998); Baldrian (2008)

Pleurotus sp.

Microrganismos na Biorremediao

Enzimas ligninolticas e Compostos orgnicos perigosos

Entretanto, metais pesados como Hg, Cd e Pb podem afetar a atividade das

enzimas ligninolticas (Baldrian, 2008)

Microrganismos na Biorremediao

Outras aplicaes

Microrganismo

Aplicao

Aspergillus niger
Chaetomium globosum

Diminuio de taninos em
efluentes

Penicillium sp.

Degradao de resduos do
leo de oliva

Leveduras

Degradao de corantes

Giberellla sp.

Degradao de cianeto

Basidiomicetos degradadores da
podrido branca

Diminuio de pentaclorofenol

Microrganismos na Biorremediao

Bactrias degradadoras de hidrocarbonetos

Austin et al. (1977)
Klebsiella aerogenes
Micrococcus sp.
Pseudomonas sp.
Sphaerotillus natans

Schaeffer et al. (1979)

Brevibacterium
Corybacterium
Mycobacterium.
Nocardia

Microrganismos na Biorremediao

Bactrias degradadoras de hidrocarbonetos

Ururahy et al. (1998)
Pseudomonas
Flavobacterium
Xanthomonas
Ochrobactrum

Outros gneros
Hyphomicrobium

Acinetobacter

Paracoccus

Rhodococcus

Gordonia

Brevundimonas

Aeromicrobium

Sphingomonas

Referncias
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