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ManualMonitorizacao PDF
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ndice
Parte 1. Noes bsicas de microbiologia prtica
Conceitos .................................................................................................................................... 6
O que uma clula?................................................................................................................ 6
Microbiologia e microrganismos............................................................................................ 7
Esterilizao e assepsia .......................................................................................................... 7
Meios de cultura ..................................................................................................................... 8
Observao de clulas microbianas ....................................................................................... 9
Cultura e isolamento de microrganismos ............................................................................ 10
Mtodo das estrias ou de riscado em placa ......................................................................................... 10
Mtodo das diluies decimais sucessivas .......................................................................................... 10
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Procedimento........................................................................................................................................ 16
guas para produo de gua para consumo humano, para suporte de vida aqucola e
guas de rega ........................................................................................................................ 36
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Protocolo 3.5 ..... Deteo e enumerao de enterococos intestinais pelo mtodo da filtrao
por membrana ....................................................................................................................... 51
Norma: EN ISO 7899-2 | ISO 7899-2:2000 ....................................................................................... 51
Material para uma amostra ................................................................................................................. 51
Primeiro tempo: elaborao dos meios de cultura Slanetz e Bartley, soluo TTT e agar blis-
esculina-azida ...................................................................................................................................... 52
Segundo tempo: recolha, filtrao e incubao das amostras ........................................................... 52
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Conceitos
Figura 1. Esquema de uma clula procariota (esquerda) e de uma clula eucariota (direita).
[modificado de http://www.phschool.com/science/biology_place/biocoach/images/cells/allcell.jpg].
A unidade de medida micrmetro (m1) demonstra o tamanho microscpico das clulas e dos
microrganismos.
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Microbiologia e microrganismos
A microbiologia a cincia que estuda os microrganismos, isto , todas as formas de vida
microscpicas. Os microrganismos incluem seres procariotas (bactrias e rqueas) e seres
eucariotas (fungos, leveduras, microalgas e protozorios).
Esterilizao e assepsia
Para a cultura de microrganismos em laboratrio deve utilizar-se material e meios de
cultura estreis. Para efetuar a esterilizao2 existem vrios mtodos, que devem ser
utilizados de acordo com o tipo de material a esterilizar. Para a esterilizao de
materiais resistentes a altas temperaturas, como o vidro, utiliza-se o calor seco,
recorrendo a estufas que atingem temperaturas de 160-180C. Outro tipo de calor
seco consiste na incinerao ou queima direta pelo fogo e utiliza-se por exemplo para
esterilizar ansas no bico de Bunsen, assim como para a eliminao de lixos slidos
dos hospitais (Alcntara et al., 1996). Os materiais como os meios de cultura, ricos
em humidade, no podem ser esterilizados pelo calor seco. Para esterilizar meios de
cultura e outros lquidos resistentes ao calor utiliza-se o calor hmido recorrendo a
um aparelho denominado autoclave. O calor hmido destri rapidamente os
microrganismos por coagulao das suas protenas. O tempo de morte trmica, i.e., o
intervalo de tempo necessrio para destruir clulas vegetativas ou esporos at ao
nvel pretendido inversamente proporcional temperatura. A conjugao dos
fatores tempo-temperatura depende das caractersticas do produto a esterilizar e da
sua estabilidade trmica. Nos autoclaves desenvolve-se uma atmosfera de vapor que
permite a subida da temperatura a valores superiores a 100C e portanto a rpida
esterilizao de materiais. O calor hmido evita a evaporao excessiva quando se
trata de meios lquidos e solues, pelo que o mtodo de mais adequado para a
esterilizao destes materiais. O tempo de tratamento trmico est relacionado com a
temperatura mas tambm com o volume a esterilizar, i.e., com o tempo de penetrao
do calor no interior do material. Para a mesma temperatura os tempos de tratamento
trmico aumentam com o aumento do volume a esterilizar (Alcntara et al., 1996).
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Existem outros mtodos de esterilizao que no utilizam calor e que devem ser
utilizados quando o material a esterilizar no resiste ao calor ou alterado por
temperaturas elevadas: filtrao, radiaes e compostos qumicos. A filtrao
utilizada principalmente para a esterilizao de antibiticos e vitaminas e tambm
para a esterilizao do ar. Neste processo, os microrganismos so removidos por
passagem do lquido ou do ar atravs de uma membrana filtrante de poro inferior ao
tamanho mais vulgar dos microrganismos mais pequenos, i.e., 0.2 m 3. As radiaes,
como os raios gama, os raios x e a radiao ultravioleta, so utilizadas para a
esterilizao de materiais sensveis ao calor. Os principais compostos qumicos (e.g.,
sabes, sais biliares, fenis, lcoois, cloro, ) normalmente utilizados na esterilizao
eliminam as clulas vegetativas mas no so eficazes sobre as formas esporuladas
(formas de resistncia) dos microrganismos.
Meios de cultura
Para cultivar microrganismos em laboratrio necessrio fornecer-lhes as condies
mais adequadas para o seu crescimento. Existem diversos tipos de meios de cultura,
que contm diferentes quantidades e tipos de nutrientes e que, slidos ou lquidos,
tornam possvel a multiplicao de diferentes tipos de microrganismos em
laboratrio.
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Massa celular
A avaliao da massa celular tambm uma forma de avaliao quantitativa de
populaes. Para isso necessrio, nas condies de observao, conhecer a funo
que relaciona a massa celular com o nmero de microrganismos presentes.
Nmero de clulas
A avaliao quantitativa de populaes atravs da contagem do nmero de clulas
pode ser efetuada por vrios mtodos, de contagem direta ou total (ex. cmaras de
contagem e mtodo de Breed) e de contagem indireta ou de clulas viveis (exemplo,
contagem em placas e mtodo do Nmero Mais Provvel - NMP).
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Protocolos bsicos
Material
Preparados comerciais de meios de cultura; gua destilada; provetas; bales Erlenmeyer com
tampas de algodo e papel craft/papel de alumnio ou frascos de vidro com tampa resistentes
ao calor; balana; caixas para pesar; colher ou esptula; magnetes; placa magntica de
aquecimento; autoclave; caixas de Petri estreis; tubos de ensaio com tampa.
Procedimento
1. Seguindo as instrues da embalagem, pesar a quantidade de p necessria para
preparar o volume indicado pelo docente;
2. Medir o volume necessrio de gua destilada numa proveta e transferir para um
Erlenmeyer (ou para um frasco prprio com tampa de enroscar) o p pesado e a
gua destilada;
3. Colocar um magnete dentro do Erlenmeyer/frasco e agitar numa placa de
aquecimento at obter uma soluo lmpida;
4. Ajustar o pH de acordo com as instrues da embalagem, adicionando gota a gota
as solues cida ou alcalina;
5. Tapar o Erlenmeyer com a rolha de algodo e papel de alumnio (ou enroscar
parcialmente a tampa do frasco);
6. Se for um meio de cultura lquido, em vez de executar o ponto 5, distribuir por
tubos de ensaio (10 mL/tubo) e colocar a tampa;
7. Colocar o Erlenmeyer/frasco ou os tubos de ensaio com o meio de cultura a
esterilizar no autoclave (121C durante 15- 20 minutos);
8. Esperar que a temperatura e a presso dentro do autoclave diminuam, retirar o
Erlenmeyer/frasco ou os tubos de ensaio da autoclave;
9. Se for um meio de cultura lquido, deixar arrefecer e utilizar ou guardar a 4C at
sua utilizao;
10. Se for um meio slido, deixar arrefecer at atingir uma temperatura que permita
o seu manuseamento, mas superior a 42C (a esta temperatura o agar solidifica);
11. Desembrulhar as caixas de Petri esterilizadas e identificar com o nome do meio
de cultura e a data da sua elaborao;
12. Verter o meio de cultura nas caixas de Petri em condies de assepsia, fazendo
uma camada de aproximadamente 5 mm;
13. Deixar solidificar e utilizar ou inverter e guardar a 4C at sua utilizao.
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Material necessrio
Bico de Bunsen, ansa; lminas de vidro, lamelas; microscpio.
Procedimento
1. Retirar com a pina uma lmina de vidro do recipiente e inflamar chama;
2. Colocar uma gota de gua destilada esterilizada na lmina;
3. Esterilizar uma ansa chama e deixar arrefecer;
4. Tocar na colnia com a ansa e suspender o material na gota de gua;
5. Espalhar o lquido numa rea de aproximadamente 1 cm2, esfregando bem de
forma a separar a massa de clulas;
6. Colocar uma lamela, pressionar ligeiramente e observar ao microscpio
Material
Bico de Bunsen, ansa; lminas de vidro, lamelas; pinas, corante cristal de violeta; corante
safranina; soluto de lugol; lcool iodado; gua corrente; microscpio.
Procedimento
1. Depositar a amostra sobre uma lmina de vidro, fazer um esfregao e fixar pelo
calor da seguinte forma:
2. Retirar com a pina uma lmina de vidro do recipiente e inflamar chama;
3. Colocar uma gota de gua destilada esterilizada na lmina;
4. Esterilizar uma ansa chama e deixar arrefecer;
5. Tocar na colnia com a ansa e suspender o material na gota de gua;
6. Espalhar o lquido numa rea de aproximadamente 1 cm2, esfregando bem de
forma a separar a massa de clulas;
7. Segurar a lmina com uma pina e passar rapidamente sobre a chama at toda a
gua evaporar para fixar o material;
8. Realizar uma colorao de Gram das diferentes colnias (Figura 2), da seguinte
forma:
9. Inundar o esfregao fixado com cristal de violeta (corante primrio) agitando
suavemente durante 60 segundos;
10. Lavar com gua corrente, comeando na extremidade da lmina e deixando
escorrer por cima do material fixado;
11. Inundar o esfregao com soluo de Lugol, deixando atuar durante 60 segundos
(vai formar um complexo com o cristal de violeta);
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12. Lavar com gua corrente e secar com papel de filtro, pressionando suavemente o
papel contra a preparao;
13. Inundar o esfregao com lcool iodado (agente descolorante), agitando
suavemente durante 60 segundos;
14. Inundar com corante vermelho safranina durante 30 segundos, lavar e secar com
papel de filtro;
15. Observar ao microscpio, verificando se as clulas so Gram-positivas ou Gram-
negativas e registando a sua forma e a sua dimenso.
Material
Bico de Bunsen, 1 suspenso de microrganismos; pipetas estreis de 1 mL; tubos de ensaio
com 9 mL de soluto de Ringer estril; vrtex; caixas de Petri estreis e meio se cultura
liquefeito (para sementeira por incorporao, ver Protocolo 1.5) ou caixas de Petri com meio
de cultura slido e espalhador (para sementeira por espalhamento, ver Protocolo 1.6).
Procedimento
1. Identificar os tubos de ensaio, com as referncias 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, ;
2. Com uma pipeta esterilizada retirar em assepsia 1 ml da amostra da populao
fornecida;
3. Introduzir a alquota de 1 ml no primeiro tubo de diluio (tubo com soro
fisiolgico);
4. Homogeneizar a suspenso por agitao (vrtex), segurando a rolha para que no
salte;
5. Com outra pipeta esterilizada retirar 1 ml da diluio do primeiro tubo (diluio
10-1) e introduzir num segundo tubo de diluio, para obteno da diluio 10-2;
6. Proceder de igual modo at ltima diluio, seguindo o esquema da Figura 3;
7. Semear imediatamente, de acordo com os mtodos indicados nos pontos
seguintes, seguindo a ordem decrescente das diluies e utilizando uma s pipeta
para todas as sementeiras da mesma amostra.
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Figura 3. O mtodo das diluies decimais sucessivas. Fonte: Madigan et al. (2006).
Material
Meio de cultura slido mantido a 45C; caixas de Petri estreis; suspenso de
microrganismos; pipetas estreis de 1 mL; bico de Bunsen.
Procedimento
1. Manter um meio de cultura (slido) liquefeito num banho a 45C (o agar comea
a solidificar a 42C);
2. Identificar 5 caixas de Petri esterilizadas com a data, turma e n de aluno e
diluio respetiva e marcar uma caixa de Petri extra com a letra C (controlo);
3. Seguindo a ordem decrescente das diluies, retirar 1 ml de cada uma das
diluies com uma pipeta esterilizada, depois de a ter enchido e esvaziado pelo
menos 6 vezes na suspenso de microrganismos;
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Material
Caixas de Petri estreis com meio de cultura slido; espalhador; copo de vidro; lcool etlico a
96%; suspenso de microrganismos; pipetas estreis de 1 mL; bico de Bunsen.
Procedimento
1. Identificar convenientemente o material a inocular;
2. A partir de cada uma das diluies pipetar 0.1 ml para a superfcie do meio de
cultura solidificado;
3. Com um espalhador de vidro estril espalhar o inculo por toda a superfcie da
caixa semeada, rodando-a simultaneamente;
4. Identificar as caixas, colocar em posio invertida e incubar a 25C durante dois
dias.
Material
Caixas de Petri estreis com meio de cultura slido; ansa; bico de Bunsen.
Procedimento
1. Com uma ansa esterilizada e arrefecida tocar numa colnia isolada;
2. Riscar com a ansa a superfcie do agar, de acordo com um esquema que vise
esgotar completamente o material contido na ansa (Figura 4);
3. Identificar e colocar a caixa de Petri em posio invertida a incubar a 25C
durante uma semana.
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Material
Caixas de Petri inoculadas pelo mtodo do espalhamento ou da incorporao.
Procedimento
1. Observar as caixas de Petri inoculadas, selecionar apenas as que permitam contar
entre 30 a 300 colnias e contar as colnias nas placas selecionadas;
2. Calcular o nmero mdio das diversas repeties;
3. Calcular o nmero de clulas viveis presentes na suspenso original (UFC/ml),
i.e., a abundncia de microrganismos cultivveis.
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Decreto-Lei 279/2007 |
http://dre.pt/pdf1sdip/2007/08/15000/0504005042.pdf
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Ar interior
A qualidade do ar no interior dos edifcios um dos fatores bsicos no conforto dos
utilizadores e tambm influencia a sua sade, bem como o rendimento e durao do
equipamento e maquinaria existentes na rea de tratamento do ar. A qualidade do ar
interior deve, assim, ser avaliada peridica e sistematicamente, com o objetivo de
garantir nveis mnimos de qualidade (SGS, 2011).
Microrganismos no ar interior
Alm das partculas poluentes no biolgicas, o ar contm bio aerossis, que
correspondem a material biolgico transmitido pelo ar. Os contaminantes biolgicos
incluem microrganismos (bactrias, fungos, vrus), caros, plen, traas, pelo e fezes
de animais. As bactrias (e.g., Staphylococcus spp. e Micrococcus spp.) e fungos (e.g.,
Penicillium spp., Aspergillus spp. e Cladosporium spp.) so os mais frequentemente
associados com biocontaminantes e com queixas quanto qualidade de ar de
interiores. Entre as principais fontes de contaminao fngica esto os sistemas de
ventilao mecnica, em funo do seu funcionamento deficiente e de misturar ar
filtrado externo com ar reciclado (Filho et al., 2000). A quantidade e o tipo de
microrganismos existentes dentro de um espao fechado esto diretamente
relacionados com a existncia de suspenses orgnicas e minerais no ar, a
temperatura e a humidade relativa, as condies de manuteno dos sistemas de
climatizao existentes, a higiene das instalaes, o nmero e o nvel de higiene dos
seus ocupantes.
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NUFC/m3
Bactrias 500
Fungos 500
Legionella4 100
Bactrias
Grupo muito grande de microrganismos (organismos microscpicos) composto por
seres procariotas (i.e., sem ncleo individualizado e sem organelos intracelulares)
unicelulares. Podem ter a forma de esferas (i.e., cocos) ou de bastonetes (i.e., bacilos),
ou outras formas menos frequentes. O grupo muito diversificado em termos de
metabolismo, mas a quantificao do total de bactrias transportadas pelo ar dirige-
se apenas s bactrias heterotrficas, isto , aquelas cuja fonte de carbono, de energia
e de eletres a matria orgnica.
Fungos
Grupo muito grande de organismos heterotrficos que inclui as leveduras, os bolores,
os cogumelos, etc. As suas clulas so eucariotas (i.e., tm ncleo individualizado e
organelos intracelulares). Os bolores so fungos pluricelulares filamentosos (Figura 5)
e as leveduras so fungos unicelulares. Nos fungos pluricelulares, as clulas formam
longos filamentos chamados hifas (Figura 5, direita) que crescem formando um
emaranhado chamado miclio (Figura 5, esquerda).
4 Em edifcios com sistemas de climatizao em que haja produo de aerossis (e.g., torres
de arrefecimento ou humidificadores por gua lquida), ou com sistemas de gua quente
para chuveiros onde a temperatura de armazenamento seja inferior a 60C. Pesquisa em
amostras de gua recolhidas nos locais de maior risco (e.g., tanques das torres de
arrefecimento, depsitos de gua quente e tabuleiros de condensao).
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Legionella
uma bactria Gram-negativa, mvel, com forma de bastonete (Figura 6). Pode
causar pneumonia (doena dos legionrios) ou uma doena semelhante gripe
(doena de Pontiac). Ao contrrio de outras bactrias, pode sobreviver com baixos
nveis de oxignio dissolvido e parcialmente resistente desinfeo com cloro.
Existem pelo menos 48 espcies de Legionella, das quais 18 podem causar doenas.
Pensa-se que a maioria das infees devida espcie Legionella pneumophila.
Figura 6. Fotografia de Legionella pneumophila, mostrando a forma de bastonete e o flagelo que lhe
permite mobilidade. Fonte: MicrobLog (2006).
Procedimentos gerais
Para a amostragem dos microrganismos do ar pode utilizar-se a monitorizao
passiva e a monitorizao ou amostragem ativa. A monitorizao passiva levada a
cabo por sedimentao do ar em caixas de Petri standarde com meio de cultura
generalista, abertas e expostas ao ar durante um perodo de tempo conhecido. Este
mtodo pode ser limitante porque no permite, pelo menos diretamente, a
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Superfcies
A amostragem e a anlise dos microrganismos presentes em superfcies permitem
determinar se os mtodos de limpeza e desinfeo utilizados so eficazes. Este tipo de
anlise est normalmente relacionado com a produo de alimentos e o controlo
microbiolgico um dos passos exigidos no sistema HACCP (Hazard Analysis and
Critical Control Point, que se traduz por Anlise de Perigos e Controlo de Pontos
Crticos), um sistema de controlo da segurana alimentar. Na legislao no esto
previstos valores-limite, mas no controlo da segurana alimentar utilizam-se os
valores indicados na Tabela 2 para bactrias aerbias5 mesfilas6 totais (Downes &
Ito, 2001).
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Tabela 2. Valores limite para bactrias aerbias mesfilas totais em superfcies na indstria alimentar
(Downes & Ito, 2001).
NUFC/cm2
Satisfatrio <1
Aceitvel 2-10
No satisfatrio >10
Procedimentos gerais
Para a determinao de bactrias aerbias mesfilas totais utiliza-se o mtodo da
zaragatoa (objeto semelhante a um cotonete gigante) seguido por inoculao por
incorporao.
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Equao 1
Para calcular a rea (A) de uma caixa de Petri, mede-se o seu dimetro (cm),
divide-se por 2 para obter o raio (r) e aplica-se a Equao 2. Para transformar o
resultado obtido (cm2) em m2, divide-se por 10 000 (1 m2 tem 10 000 cm2). Existem
caixas de Petri de vrios tamanhos. As mais comuns tm dimetro de 8 cm, pelo que
a sua rea aproximadamente 50 cm2 ou seja, 0.0050 m2.
Material
Caixas de Petri com meio de cultura PDA (Potato Dextrose Agar); caixas de Petri com meio
de cultura PCA (Plate Count Agar).
Procedimento
1. Identificar as caixas com o nome do meio de cultura e a data de elaborao;
2. Deitar o meio nas caixas de Petri, deixar arrefecer e solidificar;
3. Abrir as caixas ao ar no local desejado, tendo o cuidado de utilizar pelo menos
duas repeties para cada um dos tipos de microrganismo;
4. Deixar em exposio durante 30 minutos;
5. Fechar as caixas, inverter, identificar e colocar na estufa (30C para as bactrias e
25C para os fungos);
6. Deixar incubar durante 24-48 horas e contabilizar o nmero de UFC em cada
caixa;
7. Calcular o nmero de UFC de fungos e de bactrias por m3 do ar da sala (
Equao 1)
;
8. Comparar o resultado obtido com a legislao e concluir.
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Material
Caixas de Petri com meio de cultura PDA (Potato Dextrose Agar); caixas de Petri com meio
de cultura PCA (Plate Count Agar); filtros estreis de 0.45 m; aparelho de filtrao; bico de
Bunsen; pinas.
Procedimento
1. Ligar a bomba de vcuo ao aparelho de filtrao, colocar uma membrana e
cronometrar o tempo que o aparelho demora a filtrar um volume conhecido de
gua. Utilizar este resultado para fazer uma estimativa do ar filtrado pelo
aparelho durante um dado perodo de tempo;
2. Com uma pina estril, colocar uma membrana estril no aparelho de filtrao,
ligar a bomba de vcuo e cronometrar o tempo necessrio para filtrar o volume de
ar pretendido;
3. Desligar a bomba de vcuo e, em condies de assepsia, retirar o filtro com uma
pina estril, colocar sobre o meio de cultura;
4. Em condies de assepsia e utilizando a pina estril, colocar o filtro sobre o meio
de cultura na caixa de Petri;
5. Fazer pelo menos duas repeties para cada um dos tipos de microrganismo;
6. Fechar as caixas, inverter, identificar e colocar na estufa (30C para as bactrias e
25C para os fungos);
7. Deixar incubar durante 24-48 horas e contabilizar o nmero de UFC em cada
caixa;
8. Calcular o nmero de UFC de fungos e de bactrias por m3 do ar da sala;
9. Comparar o resultado obtido com a legislao e concluir.
Material
Caixas de Petri estreis; meio de cultura PCA mantido a 45C; zaragatoas estreis; tubos de
ensaio com 10 mL de soluto de Ringer estril; pipetas estreis de 1 mL; bico de Bunsen.
Procedimento
1. Humedecer uma zaragatoa estril com gua destilada;
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2. Percorrer com a zaragatoa uma rea de tamanho conhecido, no mnimo 100 cm2
(por exemplo um quadrado de 10 cm 10 cm);
3. Em condies de assepsia, imergir a zaragatoa num tubo com 10 mL de soluto de
Ringer, espremendo vrias vexes contra a parede interior do tubo;
4. Homogeneizar o contedo do tubo de ensaio e, em condies de assepsia, retirar
1 mL para uma caixa de Petri estril;
5. Deitar na caixa de Petri cerca de 15 mL de meio de cultura e homogeneizar (ver
ConceitosProtocolo 1.5 - Sementeira por incorporao, pgina 15);
6. Esperar que solidifique, identificar a caixa de Petri, inverter e incubar a 30C
durante 24-48 h;
7. Contar o nmero de UFC;
8. Comparar o resultado obtido com a legislao e concluir.
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adequadas sua utilizao para determinado uso. Para cada uso da gua pois
necessrio estabelecer as exigncias relativas sua qualidade, isto , definir
parmetros de qualidade e estabelecer os seus valores-limite (Mendes, 2010). O
Decreto-Lei 236/98, de 1 de Agosto define quatro tipos principais de utilizao da
gua: guas para consumo humano, guas para suporte de vida aqucola, guas
balneares e guas de rega.
As guas para consumo humano so guas doces que podem ter origem em
guas superficiais, em guas subterrneas ou em guas de abastecimento. As guas
para suporte de vida aqucola so guas superficiais, doces ou salobras, continentais
ou litorais, destinadas produo de peixe (guas pisccolas) ou de bivalves (guas
conqucolas). As guas balneares so guas doces lticas e lnticas, comummente
designadas de correntes e paradas, assim como a gua do mar e as guas estuarinas,
que se encontrem classificadas como guas balneares ou, no estando classificadas,
onde o banho no esteja interdito e seja habitualmente praticado por um nmero
considervel de banhistas (aproximadamente 100/dia, durante a poca balnear). A
gua de rega gua superficial ou subterrnea ou gua residual, que vise satisfazer ou
complementar as necessidades hdricas das culturas agrcolas ou florestais (artigo 3
do Decreto-Lei 236/98).
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dos recursos naturais de tal modo que traga perigo para a sade pblica, diminua a
sua adequabilidade ou eficincia e o bem-estar do Homem e das suas comunidades,
ou (iii) a alterao da composio ou do estado da gua de tal forma que se torne
menos adequada para todas ou algumas das funes e fins a que pode ser adequada
no seu estado natural. O conceito de contaminao definido como a introduo ou
descarga na gua de organismos patognicos ou de substncias txicas que a tornem
imprpria para consumo pblico e/ou usos domsticos, ou seja, a contaminao pode
ser considerada um aspecto especfico da poluio.
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Legislao aplicvel
(i) Toda a gua no seu estado original, ou aps tratamento, destinada a ser
bebida, a cozinhar, preparao de alimentos, higiene pessoal ou a
outros fins domsticos, independentemente da sua origem e de ser
fornecida a partir de uma rede de distribuio, de um camio ou navio-
cisterna, em garrafas ou outros recipientes, com ou sem fins comerciais;
(ii) Toda a gua utilizada numa empresa da indstria alimentar para fabrico,
transformao, conservao ou comercializao de produtos ou substncias
destinados ao consumo humano, assim como a utilizada na limpeza de
superfcies, objetos e materiais que podem estar em contacto com os
alimentos, exceto quando a utilizao dessa gua no afeta a salubridade do
gnero alimentcio na sua forma acabada.
Define os mtodos de controlo da qualidade da gua, estabelecendo a localizao
dos pontos de amostragem, as frequncias mnimas de amostragem (variveis
consoante o volume de gua fornecida; Anexo II do Decreto-Lei 306/2007),
estabelecendo um controlo de rotina e um controlo de inspeo da qualidade da gua.
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Controlo da qualidade
Os parmetros microbiolgicos a analisar nos controlos de rotina so os constantes
da Tabela 5. No controlo de inspeco devem ser analisados os parmetros constantes
da Tabela 3 ou Tabela 4, consoante a provenincia da gua.
Tabela 5. Parmetros microbiolgicos a analisar nos controlos de rotina (Decreto-Lei 306/2007,
anexo II).
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Para confirmao, repicagem das colnias que necessitam de confirmao para meio
agar nutritivo durante 222 horas a 362C. Teste da oxidase a todas as colnias que
eram inicialmente avermelhadas. Repicagem das colnias com reao oxidase-
positiva para meio B King agar durante 213 horas (mas o perodo de incubao pode
prolongar-se por um mximo de 5 dias) a 362C. O crescimento das colnias
observado diariamente sob radiao ultravioleta (UV). A presena de colnias de
Pseudomonas aeruginosa revela-se, sob a radiao UV, pela emisso de
fluorescncia.
guas para produo de gua para consumo humano, para suporte de vida aqucola
e guas de rega
Legislao aplicvel
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humano e (iii) guas de abastecimento para consumo humano (que passaram a ser
regulamentadas pelo Decreto-Lei 306/2007).
Consideram-se aptas para poderem ser utilizadas como origem de gua para a
produo de gua para consumo humano as guas subterrneas que apresentem
qualidade superior ou igual da categoria A1 (Tabela 6) das guas doces superficiais
destinadas produo de gua para consumo humano, correspondendo-lhes o
esquema de tratamento indicado no anexo II do Decreto-Lei 236/98 para aquela
categoria de guas, com as devidas adaptaes.
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guas de rega
Os critrios e normas de qualidade das guas de rega visam proteger a sade pblica,
a qualidade das guas superficiais e subterrneas, as culturas que podem ser afetadas
pela m qualidade das guas de rega e os solos cuja aptido para a agricultura pode
ser degradada pelo uso sistemtico de guas de rega de m qualidade. Nas guas de
rega, os parmetros microbiolgicos a considerar so os indicados na Tabela 8.
Tabela 8. Parmetros microbiolgicos e valores mximos recomendveis para a gua de rega
(Decreto-Lei 236/98, anexo XVI).
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Salmonelas
O mtodo geral consiste na concentrao por filtrao (atravs de membrana ou filtro
apropriado) seguida de sementeira em meio de pr-enriquecimento, enriquecimento,
subcultura em meio de isolamento e identificao.
guas balneares
Legislao aplicvel
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risco para a sade dos banhistas. A monitorizao deve ser efetuada com a frequncia
especificada no anexo II do Decreto-Lei 135/2009, sendo os resultados dessa
monitorizao utilizados na constituio dos conjuntos de dados sobre a qualidade
das guas balneares.
Qualidade
Parmetro Unidade Excelente Boa Aceitvel
Enterococos intestinais Nmero/100 mL 200 330 400
Escherichia coli Nmero/100 mL 500 900 1000
NOTA: No Decreto-Lei 135/2009, os valores da coluna Qualidade Boa e Qualidade aceitvel esto
trocados
Tabela 10. Valores paramtricos microbiolgicos a observar na avaliao da qualidade das guas
balneares costeiras e de transio (Decreto-Lei 135/2009, anexo I).
Qualidade
Parmetro Unidade Excelente Boa Aceitvel
Enterococos intestinais Nmero/100 mL 100 185 200
Escherichia coli Nmero/100 mL 250 500 500
NOTA: No Decreto-Lei 135/2009, os valores da coluna Qualidade Boa e Qualidade aceitvel esto
trocados
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A amostra de gua deve ser colhida obedecendo aos cuidados de assepsia, deve
ser representativa das caractersticas microbiolgicas do material a analisar e deve ter
volume suficiente para permitir, se necessrio, a repetio dos testes. O recipiente
para a colheita da amostra deve permanecer fechado at ao momento da colheita;
nessa altura enche-se sem enxaguar com a gua a analisar e fecha-se imediatamente,
tendo cuidado para no contaminar durante estas operaes as superfcies interiores
da rolha ou tampa. O frasco no deve ficar completamente cheio, pois algum espao
vazio no seu interior facilitar a agitao e mistura da amostra antes de se efectuarem
as anlises.
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2. Retirar qualquer filtro e deixar correr o tempo necessrio (1-2 minutos) para
esgotar a gua que tenha estado parada na canalizao;
3. Fechar a torneira e desinfetar o interior e o exterior com lcool;
4. Abrir a torneira com cuidado e deixar a gua correr um pouco;
5. Abrir o frasco esterilizado s neste momento e colher a gua mantendo-o
inclinado para evitar a sua contaminao pelo ar. Manter a rolha na mo
esquerda virada para baixo e nunca tocar no interior da rolha ou no gargalo do
frasco;
6. Recolher a amostra de gua mantendo o frasco inclinado para evitar a sua
contaminao pelo ar e sem encher completamente o frasco;
7. Fechar imediatamente o frasco;
8. Identificar a amostra;
9. Transportar as amostras em caixa isotrmica com placas acumuladoras trmicas
congeladas (4C) e realizar a anlise nas 4 horas seguintes colheita.
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Primeiro tempo: elaborao dos meios de cultura agar de lactose TTT com
heptadecilsulfato de sdio, caldo de triptofano e agar triptonado de soja (TSA)
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Primeiro tempo: elaborao dos meios de cultura caldo blis verde brilhante e
caldo peptonado
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3. Colocar tubos Durham invertidos12 dentro dos tubos de ensaio pequenos (meio de
concentrao simples) e grandes (meio de concentrao dupla);
4. Distribuir 10 mL de meio em cada tubo de ensaio;
5. Esterilizar em autoclave e guardar no frio at sua utilizao.
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Primeiro tempo: elaborao dos meios de cultura Slanetz e Bartley, soluo TTT
e agar blis-esculina-azida
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