Aula Clculos de PCR

Construa uma bateria de reaes de PCR baseado nas informaes abaixo:

Tabela 1:

Componente [Inicial] [Final] Controle + Controle - Teste

Tampo 10x 1x 5 5 5
dNTP 10 mM 0,25 mM 1,25 1,25 1,25
Primer FW 10 uM 0,4 uM 2 2 2
Primer RV 10 uM 0,4 uM 2 2 2
MgCl 50 mM 2 mM 2 2 2
Taq polimerase 10 U/ul 1,5U 0,15 0,15 0,15
DNA 125 ng/ul 375 ng 3 - 3
gua - QSP 34,6 37,6 34,6
50ul

Contas da tabela 1:

Tampo: C1.V1 = C2.V2 10.V1 = 1.50 - V1=50/10 V1= 5

dNTP: C1.V1 = C2.V2 10.V1= 0,25.50 V1=1,25

Primer FW: C1.V1 = C2.V2 10.V1= 0,4.50 V1=2

Primer RV: C1.V1 = C2.V2 V1=2

MgCl: C1.V1 = C2.V2 50.V1= 2.50 V1=2

Taq Polimerase: 10 100

X 1,5

X = 0,15

DNA: 1125

X 375

X=3
Tabela 2:

Componente [Inicial] [Final] Controle + Controle - Teste

Tampo 10x 1x 5 5 5
dNTP 10 mM 0,2 mM 1 1 1
Primer FW 10 uM 0,5 uM 2,5 2,5 2,5
Primer RV 10 uM 0,5 uM 2,5 2,5 2,5
MgCl 50 mM 1,75 mM 1,75 1,75 1,75
Taq polimerase 10 U/ul 2U 0,2 0,2 0,2
DNA 125 ng/ul 375 ng 3 - 3
gua - QSP 34,05 37,05 34,05
50ul

Contas da tabela 2:

Tampo: C1.V1 = C2.V2 10.V1 = 1.50 - V1=50/10 V1= 5

dNTP: C1.V1 = C2.V2 V1=10/10 V1=1

Primer FW: C1.V1 = C2.V2 V1=25/10 V1=2,5

Primer RV: C1.V1 = C2.V2 V1=2,5

MgCl: C1.V1 = C2.V2 50.V1=1,75.50 V1=1,75

Taq Polimerase: 10 1

2X

X = 0,2

DNA: 1 125

X 375

X=3
Tabela 3

Componente [Inicial] [Final] Controle + Controle - Teste

Tampo 10x 1x 5 5 5
dNTP 10 mM 0,25 mM 1,25 1,25 1,25
Primer FW 10 uM 0,4 uM 2,5 2,5 2,5
Primer RV 10 uM 0,4 uM 2,5 2,5 2,5
MgCl 50 mM 2 mM 1,75 1,75 1,75
Taq polimerase 10 U/ul 1,5U 0,17 0,17 0,17
DNA 125 ng/ul 375 ng 0,4 - 0,4
gua - QSP 36,43 36,86 36,43
50ul

Contas da Tabela 3:

Tampo: C1.V1 = C2.V2 10.V1 = 1.50 - V1=50/10 V1= 5

dNTP: C1.V1 = C2.V2 10.V1= 0,25.50 V1=1,25

Primer FW: C1.V1 = C2.V2 V1=2,5

Primer RV: C1.V1 = C2.V2 V1=2

MgCl: C1.V1 = C2.V2 V1=1,75

Taq Polimerase: 10 100

1,75 X

X = 0,17

DNA: 120 1

300 X

X = 0,4
Tabela 4

Componente [Inicial] [Final] Controle + Controle - Teste

Tampo 10x 1x 5 5 5
dNTP 10 mM 0,25 mM 1,25 1,25 1,25
Primer FW 10 uM 0,4 uM 2,5 2,5 2,5
Primer RV 10 uM 0,4 uM 2,5 2,5 2,5
MgCl 50 mM 2 mM 2 2 2
Taq polimerase 10 U/ul 1,5U 0,2 0,2 0,2
DNA 125 ng/ul 375 ng 3,5 - 3,5
gua - QSP 33,05 36,55 33,05
50ul

Contas da Tabela 4:

Tampo: C1.V1 = C2.V2 V1=5

dNTP: C1.V1 = C2.V2 V1=1,25

Primer FW: C1.V1 = C2.V2 V1=2,5

Primer RV: C1.V1 = C2.V2 V1=2,5

MgCl: C1.V1 = C2.V2 V1=2

Taq Polimerase: C1.V1 = C2.V2 V1=0,2

DNA: 100 -----1

350----- X

X= 3,5